目的:评价富氢液对创伤性颅脑损伤(TBI)大鼠急性肺损伤的影响及核因子E2相关因子2/血红素氧合酶-1(Nrf2/HO-1)信号通路在其中的作用。方法:成年雄性SD大鼠48只，体重220~250 g，采用随机数字表法分为4组( n＝12)：假手术组(S组)、TBI组(T组)、TBI+富氢液组(T+H组)和TBI +富氢液+鸦胆子苦醇组(T+H+B组)。采用控制型皮质撞击损伤法制备TBI模型。T+H+B组于造模前10 d开始隔天腹腔注射Nrf2抑制剂鸦胆子苦醇0.4 mg/kg；T+H组和T+H+B组于造模后1和6 h时腹腔注射富氢液10 ml/kg。造模后24 h时，收集支气管肺泡灌洗液(BLAF)测定蛋白浓度，取右颈总动脉血和肺组织，采用ELISA法测定血清和肺组织TNF-α、IL-10和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的水平，测定肺组织湿重/干重(W/D)比值，HE染色后观察肺组织病理学结果并进行评分，采用Western blot法检测肺组织核Nrf2、总Nrf2和HO-1表达，RT-PCR法检测肺组织HO-1 mRNA表达。 结果:与S组相比，T组和T+H组BALF蛋白浓度、肺组织W/D比值和肺组织病理评分升高，血清和肺组织TNF-α、HMGB1和IL-10水平升高，肺组织核Nrf2、总Nrf2、HO-1及其mRNA表达上调( P<0.05)；与T组相比，T+H组BALF蛋白浓度、肺组织W/D比值和肺组织病理评分降低，血清和肺组织TNF-α和HMGB1水平降低，IL-10水平升高，肺组织核Nrf2、总Nrf2、HO-1及其mRNA表达上调( P<0.05)，T+H+B组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)；与T+H组相比，T+H+B组BALF蛋白浓度、肺组织W/D比值和肺组织病理评分升高，血清和肺组织TNF-α和HMGB1水平升高，IL-10水平降低，肺组织核Nrf2、总Nrf2、HO-1及其mRNA表达下调( P<0.05)。 结论:富氢液可减轻TBI大鼠急性肺损伤，其机制与激活肺组织Nrf2/HO-1信号通路，抑制炎症反应有关。

目的:探讨人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞氧糖剥夺/恢复(OGD/R)模型中应激诱导蛋白 Sestrin2基因过表达对线粒体分裂的调控作用及其机制。 方法:(1)将SH-SY5Y细胞分为正常对照组、OGD/R组、 Sestrin2过表达组及空载体组，后2组细胞预先采用慢病毒感染方法分别构建 Sestrin2过表达及空载体稳转细胞株，除正常对照组细胞外均给予氧糖剥夺4 h/恢复18 h造模处理。造模完成后采用细胞计数试剂-8(CCK-8)法检测各组细胞的存活率，采用Western blotting实验检测各组细胞中Sestrin2、线粒体动力相关蛋白1(Drp1)、线粒体分裂蛋白1(Fis1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胞浆Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1(Keap1)、胞核核因子E2相关因子2(Nrf2)的蛋白水平，采用透射电镜观察各组细胞中线粒体的超微结构，采用免疫荧光染色检测各组细胞中Nrf2的核移位情况。(2)将 Sestrin2过表达稳转SH-SY5Y细胞株分为 Sestrin2过表达组、鸦胆子苦醇+ Sestrin2过表达组、二甲基亚砜(DMSO)+ Sestrin2过表达组，后2组细胞在造模前分别给予Keap1/Nrf2通路抑制剂鸦胆子苦醇(终浓度100 nmol/L)或DMSO溶液(终体积分数0.1%)预处理4 h，然后各组细胞均给予氧糖剥夺4 h/恢复18 h造模处理。造模完成后采用Western blotting实验检测各组细胞中胞浆Keap1、胞核Nrf2、Drp1、Fis1的蛋白水平。 结果:(1)与OGD/R组相比， Sestrin2过表达组细胞的存活率明显升高（61.33%±1.15% vs. 81.00%±3.00%)，Bcl-2/Bax值明显升高（0.467±0.006 vs. 0.880±0.010)，Drp1、Fis1、胞浆Keap1蛋白水平明显降低（1.089±0.033 vs. 0.865±0.014；0.829±0.009 vs. 0.350±0.007；0.967±0.017 vs. 0.881±0.024)，胞核Nrf2蛋白水平明显升高(0.627±0.025 vs. 0.957±0.015)，差异均有统计学意义( P<0.05)；并且， Sestrin2过表达组细胞的线粒体结构明显较OGD/R组更完整，Nrf2发生了明显的核移位。(2)与 Sestrin2过表达组相比，鸦胆子苦醇+ Sestrin2过表达组细胞胞核Nrf2的蛋白水平明显降低(0.920±0.013 vs. 0.627±0.035)，Drp1、Fis1的蛋白水平明显升高（0.994±0.020 vs. 1.084±0.005；0.728±0.010 vs. 0.906±0.022)，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:Sestrin2基因过表达可下调胞浆Keap1蛋白水平、促进Nrf2核移位而激活Keap1/Nrf2通路，从而抑制线粒体分裂，减少细胞凋亡，减轻SH-SY5Y细胞的OGD/R损伤。

目的:探讨Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路在丙泊酚减轻大鼠神经元氧糖剥夺-复氧复糖(OGD/R)损伤中的作用。方法:大鼠原代海马神经元培养成功后，采用随机数字表法分为5组( n＝20)：对照组(C组)、OGD/R组、赋形剂组(D组)、OGD/R＋丙泊酚组(OGD/R＋P组)、OGD/R＋丙泊酚＋Nrf2抑制剂组(OGD/R＋N组)。采用氧糖剥夺6 h复氧复糖20 h的方法制备神经元OGD/R损伤模型。OGD/R＋P组于复氧复糖即刻加入丙泊酚(终浓度10 μmol/L)。OGD/R＋P＋N组于氧糖剥夺前4 h时加入Nrf2抑制剂鸦胆子苦醇(终浓度100 nmol/L)，于复氧复糖即刻加入丙泊酚(终浓度10 μmol/L)。于复氧复糖结束时测定神经元存活率和凋亡率、ROS活性、Bax、Bcl-2、KEAP1、Nrf2表达水平及Nrf2核转位情况。 结果:与C组比较，OGD/R组神经元凋亡率和ROS活性升高，存活率降低，Keap1、Nrf2及Bax表达上调，Bcl-2表达下调( P<0.05)，Nrf2核转位增多，D组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)。与OGD/R组比较，OGD/R＋P组神经元凋亡率和ROS活性降低，存活率升高，Keap1、Nrf2及Bcl-2表达上调，Bax表达下调( P<0.05)，Nrf2核转位增多。与OGD/R＋P组比较，OGD/R＋P＋N组神经元凋亡率和ROS活性升高，存活率降低，Keap1、Nrf2及Bcl-2表达下调，Bax表达上调( P<0.05)，Nrf2核转位减少。 结论:丙泊酚可通过激活Keap1/Nrf2信号通路，减轻氧化应激和细胞凋亡，减轻大鼠神经元OGD/R损伤。

目的:评价核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路在右美托咪定减轻大鼠脓毒症相关性脑病中的作用。方法:清洁级健康成年雄性SD大鼠90只，3～4月龄，体重300～400 g，采用随机数字表法分为5组( n＝18)：假手术组(Sham组)、脓毒症相关性脑病组(SAE组)、右美托咪定组(D组)、Nrf2抑制剂鸦胆子苦醇组(B组)和鸦胆子苦醇＋右美托咪定组(BD组)。采用盲肠结扎穿孔法(CLP)制备大鼠脓毒症相关性脑病模型，D组和BD组于造模前30 min时腹腔注射右美托咪定30 μg/kg，Sham组、SAE组和B组腹腔注射等容量生理盐水。B组和BD组于模型制备前10 d，隔天腹腔注射鸦胆子苦醇0.4 mg/kg。于CLP后24 h时处死大鼠取脑组织，观察病理学结果，计数存活神经元，计算神经元存活率，采用ELISA法测定TNF-α、IL-1β和IL-6含量，采用Western blot法测定Nrf2和HO-1的表达。 结果:与Sham组比较，SAE组脑组织TNF-α、IL-1β和IL-6含量升高，Nrf2和HO-1表达上调，神经元存活率降低( P<0.05)；与SAE组比较，D组脑组织TNF-α、IL-1β和IL-6含量降低，Nrf2和HO-1表达上调，神经元存活率升高( P<0.05)；与B组比较，BD组脑组织TNF-α、IL-1β和IL-6含量降低，Nrf2和HO-1表达差异无统计学意义( P>0.05)，神经元存活率升高( P<0.05)；与D组比较，BD组脑组织TNF-α、IL-1β和IL-6含量升高，Nrf2和HO-1表达下调，神经元存活率降低( P<0.05)。 结论:Nrf2/HO-1信号通路参与了右美托咪定减轻大鼠脓毒症相关性脑病的过程。

目的:探讨鸦胆子油乳对人白血病多药耐药K562/VCR细胞株增殖抑制的作用。方法:使用四唑盐（MTT）比色法对经过鸦胆子油乳干预作用后的体外细胞K562/VCR细胞增殖抑制比率进行检测。结果:随着鸦胆子油乳浓度水平的不断升高（125、250、500、750、1 000 mg/L），对K562细胞的抑制比率持续增加，差异有统计学意义（ P<0.05）。随着鸦胆子油乳作用时间的不断增加（24、48、72 h），对K562细胞的抑制比率持续增加，差异有统计学意义（ P<0.05）。随着鸦胆子油乳浓度水平的不断升高（500、750、1 000、1 500、2 000 mg/L），对K562/VCR细胞的抑制比率持续增加，差异有统计学意义（ P<0.05）；随着鸦胆子油乳作用时间的不断增加（24、48、72 h），对K562/VCR细胞的抑制比率持续增加，差异有统计学意义（ P<0.05）。伴随鸦胆子油乳浓度水平的不断升高（空白对照组、鸦胆子油组500、750、1 000、1 500 mg/L），K562/VCR细胞周期当中的G 0/G 1比率持续升高，S比率及G 2/M比值持续降低，差异有统计学意义（ P<0.05）。注射鸦胆子油乳之后，K562/VCR细胞当中的ADM浓度（荧光强度）显著升高（161.4 ± 10.9比95.9 ± 8.1），差异有统计学意义（ P<0.05）。 结论:鸦胆子油乳能够对多药耐药K562/VCR细胞株增殖产生抑制作用，同时还能够对多药耐药细胞周期的阻滞产生诱导作用；鸦胆子油乳能够增加多药耐药K562/VCR细胞株当中化疗药物的积贮量。

肝癌是发病率和致死率均较高的恶性肿瘤.毒性中药是指药性峻猛,治疗剂量与中毒剂量接近,使用不当可对人体造成严重损害,甚至死亡的中药.近5年来报道的具有抗肝癌作用的毒性中药包括清热解毒的鸦胆子和重楼,化痰散结的半夏和天南星,行气止痛的川楝子,活血化瘀的马钱子和斑蝥,祛湿邪的雷公藤和乌头,攻毒杀虫的蛇床子、蟾酥和砒霜,解毒散结的商陆,破血消癥的千金子及解肝郁的吴茱萸.药理研究表明毒性中药可有效发挥抗肝癌作用,可通过阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡、抗肿瘤血管生成、抑制细胞侵袭和迁移等机制实现.本文旨在总结近5年毒性中药的抗肝癌活性和作用机制,为业内学者进一步研究提供参考.

目的 探究鸦胆子素A对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞凋亡和侵袭的影响及相关分子机制.方法 CCK-8法和克隆形成实验分别检测鸦胆子素A对NSCLC细胞增殖和克隆形成影响;3D基质胶球侵袭和流式细胞术分别检测其对细胞侵袭和凋亡影响;Western blot检测上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和凋亡关键蛋白表达;荷瘤裸鼠体内验证鸦胆子素A抗肿瘤作用;在线数据库、分子对接,DARTS实验分别预测和筛选鸦胆子素A作用靶点.结果 鸦胆子素A明显抑制NSCLC细胞增殖和克隆形成能力、诱导细胞凋亡、抑制细胞侵袭,上调 c-caspase3、c-PARP、Bax、E-cadherin 蛋白表达,下调 Bcl-2、N-cadherin、Vimentin、Snail 蛋白表达(P＜0.05);裸鼠荷瘤实验表明,注射鸦胆子素A后肿瘤体积和质量均明显减小(P＜0.05).靶点预测、分子对接结合DARTS综合分析发现,鸦胆子素A可增加HSP90α蛋白稳定性.结论 鸦胆子素A通过激活EMT信号引起NSCLC细胞EMT水平降低、诱导细胞凋亡,其可能是通过与HSP90α结合来调控细胞功能,发挥抗癌作用.

肿瘤是一类严重威胁人类生命健康的疾病,已经成为世界范围内的主要公共卫生问题,且在我国致死率居高不下[1-2].失控的细胞增殖和生长是引起肿瘤最主要原因.

[背景]矽肺是一种肺部弥漫性纤维化疾病,由长期暴露于游离二氧化硅(SiO2)粉尘引起,发病机制复杂,缺乏有效的治疗.鸦胆子苦醇(Bru)具有多种生物活性,其在矽肺纤维化中的作用尚不明确.[目的]探究不同浓度Bru对SiO2 诱导小鼠矽肺纤维化的影响.[方法]将 30只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、矽尘组、Bru低剂量(1 mg·kg-1)组、Bru中剂量(2 mg·kg-1)组、Bru高剂量(4 mg·kg-1)组,每组 6只;除对照组外,其余各组均采用一次性非气管暴露法滴注50 μL、60 mg·mL-1 SiO2 悬浊液建立矽肺小鼠模型,对照组滴注等量生理盐水;Bru组于染尘的同时腹腔注射Bru,连续注射5 d,随后隔天注射,染尘28 d后处死小鼠,收集肺组织.测定小鼠肺系数;采用苏木精-伊红(HE)染色和Masson染色观察小鼠肺组织的病理变化;Western blot法检测小鼠肺组织中凋亡蛋白Cleaved-caspase 3、纤维化相关蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原蛋白(Col-I)、自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Sequestosome 1(p62/SQSTM1)蛋白、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1),核因子E2相关因子 2(Nrf2)的表达水平;实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测小鼠肺组织中Caspase 3、α-SMA和Col-ImRNA水平.[结果]与对照组相比,矽尘组小鼠的肺系数明显升高(P<0.01);肺组织中肺泡壁受损,出现炎性细胞浸润、纤维结节和胶原纤维沉积;Cleaved-caspase 3、α-SMA和Col-I的蛋白表达及转录水平均明显上调(P<0.01);Beclin1、LC3-Ⅱ/I、p62、Nrf2表达水平增加(P<0.05,P<0.01),而Keap1表达水平下降(P<0.05).与矽尘组相比,Bru低、中剂量组小鼠肺系数降低(P<0.05);肺组织的病理损伤及胶原沉积明显改善;Cleaved-caspase 3、α-SMA和Col-I的蛋白表达及转录水平下降(P<0.05,P<0.01),Beclin1、LC3-Ⅱ/I、p62、Nrf2表达水平也均明显下降(P<0.05,P<0.01),中剂量组Keap1水平上升(P<0.05).与矽尘组相比,Bru高剂量组肺系数、病理损伤、Cleaved-caspase 3、α-SMA和Col-I的蛋白表达及转录水平差异无统计学意义(P>0.05);Beclin1、LC3-Ⅱ/I及Nrf2表达水平降低(P<0.01),p62蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05),Keap1蛋白水平上升(P<0.01).[结论]低、中剂量Bru可能通过Keap1-Nrf2通路调控自噬,改善自噬降解障碍,降低矽肺小鼠的肺系数,减轻矽肺小鼠肺组织中的细胞凋亡,延缓矽肺纤维化的进展.

目的 评价抗寄生虫中药水提物和有机溶剂粗提物体外对细粒棘球蚴的作用效果.方法 从感染绵羊肝脏细粒棘球蚴包囊中分离原头节,体外培养24h后,取活性大于95％的原头节(100 μl,约100个)加入96孔板,分别加入终浓度为0.8 mg/ml(低浓度组)、1.6 mg/ml(中浓度组)、3.2 mg/ml(高浓度组)的鸦胆子、苦楝皮、辣蓼、石榴皮、使君子、槟榔、贯众、鱼藤、马蔺子、五倍子和仙鹤草等11种抗寄生虫中药的水提物,体外作用72 h后,伊红染色法检测原头节活性,倒置显微镜观察下观察原头节的形态,计算死亡率;同时设相同浓度的阿苯达唑组和空白对照组.从具有体外抗原头节作用的中药中提取黄酮、多糖、皂苷和生物碱等粗提物,分别以终浓度1.00 mg/ml体外作用于原头节72 h后,观察原头节形态,计算死亡率;同时设空白对照组.对体外抗原头节效果明显的粗提物进行液相色谱与串联质谱联用分析.组间比较采用单因素ANOVA分析,两两比较采用LSD-t检验.结果 中药水提物作用72h后,鸦胆子、苦楝皮、辣蓼水提物高浓度组原头节边缘模糊,结构松散,基质溶解;其余8种中药水提物高浓度组原头节形态正常,各部分结构清晰;阿苯达唑组原头节生发层有轻微损伤;空白对照组原头节形态正常.体外培养72 h后,鸦胆子、苦楝皮和辣蓼水提物高浓度组原头节的死亡率分别为(99.63±0.57)％、(90.89±1.10)％和(51.93±0.60)％,中浓度组分别为(85.97±1.50)％、(81.14±1.19)％、(42.46±0.56)％,低浓度组分别为(78.34±1.35)％、(77.27±0.92)％、(36.66±0.60)％,与空白对照组[(0.62±0.51)％]相比差异均有统计学意义(F=180 678.22、41 488.99、44 346.38,19 543.86、27 887.32、34 590.79,20 059.467、41 953.68、17 993.77,均 P＜0.01),与阿苯达唑组[(30.03±2.02)％]比较差异均有统计学意义(F=6 585.72、4 210.84、646.46,2 956.80、2 849.68、210.83,2 365.92、2 712.28、58.12,均 P＜0.01);其余8种中药水提物高、中、低浓度组原头节的死亡率与对照组比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).鸦胆子黄酮、苦楝皮黄酮、鸦胆子皂苷、辣蓼皂苷和辣蓼生物碱组原头节皱缩、结构松散、基质溶解,原头节死亡率分别为(98.33±2.89)％、(96.67±5.77)％、100％、(99.33±1.15)％和(56.67±2.11)％,与空白对照组[(10.33±2.51)％]比较差异均有统计学意义(F=1 584.00、563.71、3 808.47、3 099.52、14.65,均P＜0.01);其余中药粗提物组原头节的死亡率与对照组比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).液相色谱与串联质谱联用分析结果显示,正、负离子模式下分别鉴定出741、398种代谢产物,其中正离子模式下从鸦胆子黄酮粗提物中鉴定出差异显著的黄酮类化合物4种,分别为漆黄素、5-甲基-7-甲氧基异黄酮、儿茶素和甜橙黄酮;负离子模式下鉴定出8种,分别为原花青素B2、槲皮素-3β-D-葡萄糖苷、枸桔苷、橙皮素、槲皮素、木犀草素、芹菜素和黄豆黄素.结论 鸦胆子、苦楝皮和辣蓼水提物,鸦胆子黄酮、苦楝皮黄酮、鸦胆子皂苷和辣蓼皂苷有明显体外抗细粒棘球蚴的作用,且效果优于阿苯达唑.