眼表直接暴露在外部环境中，容易受到各种抗原和病原体的影响，眼表微生物群参与免疫耐受、代谢和上皮屏障功能的调节。微生物组成在维持健康和疾病发生中都起着重要作用，微生物分布失衡可能导致某些疾病的发生。体内微生物的组成主要是细菌。在微生物组学研究中，最初主要集中在胃肠道、口腔、鼻腔、皮肤和泌尿生殖道5个部位。随着16S核糖体核糖核酸基因(16SrRNA)高通量测序及宏基因测序分子生物学检测技术的发展，眼表细菌群落与疾病的关系成为研究热点。眼表不同部位细菌群落的分布有一定差异，菌群存在也具有垂直分布的特点。年龄、性别、地理环境等因素对眼表菌群的组成和功能有一定影响，眼局部重复使用抗生素可增加眼表的耐药菌群。不同类型的干眼、角膜炎、睑缘炎等眼表疾病与眼表菌群的改变有一定关系。本文主要就正常眼表菌群的组成、分布、影响因素及眼表菌群与干眼、角膜炎、睑缘炎等眼表疾病的关系进行综述，以期为眼表疾病发生机制的研究提供新的认识，同时为眼表疾病的治疗提供指导依据。

目的:探讨老年与中青年食管鳞癌（esophageal squamous cell carcinoma， ESCC）患者食管组织的菌群特征及差异，以助于研究老年ESCC患者潜在的生物标志物。方法:采用回顾性研究，选取2018年7月至2019年7月在湖北省十堰市太和医院确诊的72例ESCC患者，其中老年组49例（≥60岁，男性40例，女性9例），中青年组23例（<60岁，男性21例，女性2例），以同期消化内镜中心20名胃镜检查无异常的健康体检者作为对照组（年龄范围35~78岁，中位年龄57岁，男性16名，女性4名）。收集ESCC患者病变食管组织和健康对照组中段食管组织、提取基因组DNA，对细菌16SrRNA基因序列V4高变区扩增，采用Illumina HiSeq测序技术，对比分析老年和中青年ESCC患者菌群特点。采用QIIME和Rstudio软件分析序列数据，统计学方法采用非参数Kruskal-Wallis检验或Wilcoxon秩和检验。结果:两组患者菌群Shannon指数［5.17（4.53，5.95）比4.79（3.74，5.97）］、Simpson指数［0.94（0.91，0.96）比0.92（0.83，0.96）］和Chao1 ［343.55（259.76，570.59）比329.16（268.88，648.00）］指数相似，差异无统计学意义（ Z=-0.791、-1.057、-0.380，均 P>0.05）；Beta多样性老年组与中青年组亦无明显差异（PC1=19.14%、PC2=6.95%， PPC1=0.67、 PPC2=0.42）。在门水平，中青年组丰度前五的菌门依次为厚壁菌门（ Firmicutes）、拟杆菌门（ Bacteroidetes）、变形菌门（ Proteobacteria）、放线菌门（ Actinobacteria）和梭杆菌门（ Fusobacteria），老年组患者丰度最高的五个门分别是厚壁菌门（ Firmicutes）、拟杆菌门（ Bacteroidetes）、变形菌门（ Proteobacteria）、梭杆菌门（ Fusobacteria）和放线菌门（ Actinobacteria）；两组差异显著的是梭杆菌门（ Fusobacteria）（ Q=0.596， P<0.05）。在属水平，中青年组丰度前五的菌属依次为：普雷沃菌属（ Prevotella）、拟杆菌属（ Bacteroides）、链球菌属（ Streptococcus）、月形单胞菌属（ Selenomonas）和韦荣球菌属（ Veillonella）；而老年组丰度前五的分别是普雷沃菌属（ Prevotella）、拟杆菌属（ Bacteroides）、链球菌属（ Streptococcus）、月形单胞菌属（ Selenomonas）和嗜血杆菌属（ Haemophilus），两组有显著差异的为梭杆菌属（ Fusobacterium）（ Q=0.938， P<0.05）。基于未观测状态重建的群落系统发育研究（PICRUSt）功能预测，老年组患者氨酰tRNA生物合成（ Aminoacyl.tRNA.biosynthesis）、核苷酸切除修复（ Nucleotide.excision.repair）、核糖核酸聚合酶（ RNA.polymerase）、核糖体（ Ribosome）、克拉维酸生物合成（ Clavulanic.acid.biosynthesis）、光合作用（ Photosynthesis）和光合作用蛋白（ Photosynthesis.proteins）丰度较中青年组降低（均 Q=0.734， P<0.05）。 结论:老年ESCC患者食管菌群与中青年患者的Alpha多样性和Beta多样性无明显差异，但老年患者梭菌属菌群丰度增高。

目的 探究壮宣饮通过调节p38 丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)信号介导的肠道菌群治疗小儿甲型流感病毒H1N1 肺炎的机制.方法 取BALB/c小鼠采用H1N1 流感病毒尿囊液滴鼻法制备 H1N1 肺炎小鼠模型,随机分为 5 组:模型组,壮宣饮低、中、高剂量组,壮宣饮高剂量(28.66 g·kg-1)+茴香霉素(10 mg·kg-1)组.对照组采用同法滴入等体积无菌生理盐水.使用壮宣饮和茴香霉素分组处理后,测定各组小鼠肺系数并以HE染色检测其肺与大肠组织病理形态;以 16SrRNA基因测序检测各组小鼠肠道菌群结构差异改变;以酶联免疫吸附法(ELASA)测定各组小鼠肺泡灌洗液(BALF)及大肠组织中炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-4、IL-6、IL-1β水平;以蛋白免疫印迹法检测各组小鼠肺与大肠组织中p38 MAPK通路相关蛋白表达.结果 与对照组比较,模型组小鼠肺与大肠组织发生明显病理损伤,肺系数,肺与大肠病理评分,ACE指数,Shannon指数,梭菌目丰度,肺泡灌洗液与大肠组织中TNF-α、IL-4、IL-6、IL-1β水平,肺与大肠组织p-p38 MAPK/p38 MAPK水平均升高(P＜0.05);拟杆菌目丰度降低(P＜0.05).与模型组比较,壮宣饮低、中、高剂量组小鼠肺与大肠组织病理损伤均减轻,肺系数,肺与大肠病理评分,ACE指数,Shannon指数,梭菌目丰度,肺泡灌洗液与大肠组织TNF-α、IL-4、IL-6、IL-1β水平,肺与大肠组织p-p38 MAPK/p38 MAPK水平均降低(P＜0.05),且均呈剂量依赖性(P＜0.05).拟杆菌目丰度均升高(P＜0.05),与壮宣饮高剂量组比较,壮宣饮高剂量+茴香霉素组小鼠肺与大肠组织病理损伤加重,肺系数,肺与大肠病理评分,ACE指数,Shannon指数,梭菌目丰度,肺泡灌洗液与大肠组织TNF-α、IL-4、IL-6、IL-1β水平,肺与大肠组织p-p38 MAPK/p38 MAPK水平均升高(P＜0.05);拟杆菌目丰度降低(P＜0.05).结论 壮宣饮可通过抑制p38 MAPK信号激活而改善H1N1 肺炎小鼠肠道菌群失衡,从而抑制小鼠炎症并减轻其肺与大肠组织损伤,对小儿H1N1 肺炎起到治疗作用.

目的 探究台湾乳杆菌Lt259对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝脏的保护作用以及肠道菌群的影响.方法 通过溶血、明胶酶活性及抗生素敏感性实验评价Lt259的安全性;通过疏水性、自聚集实验评价其肠道定植能力;通过喂食高脂饲料构建大鼠NAFLD模型,灌胃Lt259菌悬液干预8周后,观察大鼠肝脏的病理变化,检测大鼠血脂水平、血清促炎因子及内毒素水平;采用16SrRNA基因高通量测序检测肠道菌群.结果 Lt259无溶血、明胶酶活性,对所测抗生素均敏感,其疏水性与自聚集结果分别为67.00％±5.77％和63.33％±5.77％.Lt259干预改善了 NAFLD大鼠肝脏损伤以及肝功水平(P＜0.01);显著降低了 NAFLD大鼠血脂、促炎因子及内毒素浓度(P＜0.05);改善了 NAFLD大鼠肠道菌群结构,降低了变形菌门相对丰度(P＜0.05),提高了酪氨酸菌属、经黏液真杆菌属、拉克氏梭状芽孢杆菌属及阿克曼菌属等益生菌属丰度,降低了嗜胆菌属等有害菌属丰度.结论 台湾乳杆菌Lt259具有改善NAFLD大鼠肝脏病理改变、脂质沉积、炎症损伤的功效,其机制可能与改善肠道菌群紊乱、提升益生菌丰度有关.

宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤,高危型人乳头瘤病毒的持续性感染是导致宫颈癌前病变发生并进展为宫颈癌的必要不充分条件.女性生殖道表面定植着众多微生物,以乳酸杆菌主导的健康阴道菌群对人体起着关键性的保护作用.随着高通量测序技术的发展,通过16SrRNA测序、宏基因组学测序等新的分子技术实现了对阴道菌群的准确分析.乳酸杆菌缺乏伴随多种厌氧菌增加的阴道菌群失调与HPV感染、宫颈病变发生发展密切相关.本文对阴道菌群与HPV感染及宫颈病变的相关性研究进行综述,并总结了种族、激素水平等因素对阴道菌群的影响,归纳了阴道菌群的相关检测手段,为HPV感染和癌前病变的研究提供新的思路,为进一步研究女性生殖道疾病的病因及发病机制提供科学依据,为预防以及治疗相关疾病奠定基础.

目的 探讨嗜黏蛋白阿克曼菌(Akkermansia muciniphila,A.muciniphila)通过干预肠道微生态,对大鼠高温运动后的器官损伤的影响.方法 采用6～8周龄的Sprague Dawley大鼠,随机分成对照组(n=5)、常温运动组(RT组,n=8)、高温运动组(HT组,n=8)、A.muciniphila干预组(AKK干预组,n=8)、高温粪菌移植组(HT.R组,n=4)和A.muciniphila粪菌移植组(AKK.R组,n=4),在力竭运动后采集大鼠的血液、组织及粪便样本,检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)的变化.通过16SrRNA基因测序和GC-MS方法分析粪便中菌群和代谢产物的改变,对结肠组织和肝脏组织进行病理检测,采用免疫组化方法评估肠道屏障功能.结果 HT组和AKK干预组大鼠在(35±2)℃、湿度(55±5)％的环境下平均运动时间分别为(13.76±3.454)和(19.55±1.997)min,差异有统计学意义(t=-4.104,P=0.001 1).A.muciniphila 干预后,大鼠血清的 AST(U/mL)、ALT(U/mL)、BUN(mmol/L)和 Cr(pmol/L)平均水平(3.953±1.877、2.622±1.086、10.040±1.088、65.800±12.010)均低于 HT 组(6.358±1.436、4.335±1.304、15.010±1.913、93.980±39.110),其中 AST、ALT、BUN 水平检测差异均有统计学意义(t=2.878、2.856、6.381,P=0.0122、0.0127、＜0.0001).肠道菌群组成结构在属水平上发生变化,粪便中代谢产物水平有不同程度的改变.病理结果显示,AKK干预组大鼠的肝脏损伤较HT组有显著缓解.AKK干预组大鼠的肠道屏障相关连接蛋白ZO-1和Occludin表达量的累积光密度值(6 330±481.8、6 140±281.7)较HT组(3 425±257.0、3 943±242.1)上调(t=9.216、10.250,P=0.0008、0.000 5).结论 A.muciniphila 能够在一定程度上通过维持肠道屏障功能,改善肠道微生态,减轻高温运动带来的肠道及肝脏损伤.

肠道微生物与动物的健康密切相关,动物肠道微生物伴随宿主进化并与胃肠道构成复杂的微生态系统.为探究梵净山同域分布的黔金丝猴(Rhinopithecus brelichi)和藏酋猴(Macaca thibetana)的肠道微生物组成和功能差异,本研究采集两个物种冬季粪便样本进行16S rRNA基因高通量测序.结果显示,藏酋猴肠道微生物Chao1和Shannon指数都显著高于黔金丝猴(P＜0.05),基于bray-curtis距离矩阵的p多样性分析发现两者的肠道微生物群落结构存在一定相似性和差异性.门水平,厚壁菌门(Firmicutes)占两者肠道微生物的绝对优势,且藏酋猴相对丰度高于黔金丝猴;属水平,除相对丰度较高的不动杆菌属(Acinetobacter)和颤螺旋菌属(Oscillospira)外,其他优势菌属类群均不相同.LEfSe分析发现粪球菌属(Coprococcus)、布劳特氏菌属(Blautia)、阿克曼菌属(Akkermansia)等与代谢通路功能相关的微生物在两者之间差异显著.PICRUSt功能预测分析表明,两者肠道微生物与新陈代谢、基因信息处理、环境信息处理和细胞过程等功能相关,Level 2水平,有3类代谢通路具有显著性差异(P＜0.05).黔金丝猴与藏酋猴肠道微生物组成和群落特征差异较大,可能是由于同域觅食灵长类的种类、数量及食物来源不同.同时,PICRUSt功能预测揭示了两者肠道微生物功能基因丰度的显著差异,表明两者可以通过调整自身肠道微生物组成来适应外界食物资源变化带来的挑战.该结果可为生态位高度重叠的两种灵长类肠道微生物的深入研究提供一定科学依据,也对两者开展野外人工保护干预措施的建立具有一定参考价值和现实意义.

目的 探究一贯煎多糖(YGJP-W)的基本结构特征以及其改善四氯化碳(CC14)诱导小鼠肝纤维化的活性,分析YGJP-W抗肝纤维化活性与其调节肠道菌群结构变化关系.方法 采用水提醇沉和弱阴离子交换色谱制备一贯煎多糖组分YGJP-W,依次采用苯酚-硫酸法、间羟基联苯法、BCA蛋白定量分析试剂盒、高效凝胶渗透色谱法(high performance gel permeation chromatography,HPGPC)、FT-IR、离子色谱仪及扫描电镜法(scanning electron microscope,SEM)对一贯煎多糖的总糖含量、糖醛酸含量、蛋白含量、相对分子质量分布、官能团、单糖组成及形貌特征进行表征,采用CCl4诱导的小鼠模型,检测YGJP-W(50、100 mg/kg)干预3周后的小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶及肝组织羟脯氨酸水平,并通过HE染色和天狼猩红染色观察肝脏组织学变化,评价YGJP-W改善肝纤维化活性;采用16SrDNA测序技术评价YGJP-W对小鼠肠道菌群的影响;采用抗生素联合YGJP-W干预,评价YGJP-W是否通过调节肠道菌群发挥药效作用.结果YGJP-W总得率为11.60％,总糖质量分数为92.48％,至少由相对分子质量为1.74×105和5.6×103的2种多糖组成,单糖组成包含半乳糖、葡萄糖、甘露糖和果糖,其物质的量比为1.0∶2.8∶1.4∶1.6.YGJP-W干预3周后,能够显著改善CC14引起的肝功能异常、肝组织病理损伤、胶原沉积和纤维化.YGJP-W在改善肝纤维化的同时能够引起小鼠肠道菌群结构变化,在门水平上,YGJP-W显著性降低拟杆菌门丰度[(57.4±14.6)％vs(79.3±8.1)％,P＜0.01],增加变形菌门[(10.4±4.7)％vs(2.1±1.9)％,P＜0.01]和放线菌门[(3.7±2.4％)％vs(0.3±0.1)％,P＜0.01)]丰度,在属水平上,YGJP-W增加狄氏副拟杆菌属Parabacteroides、埃希氏菌-志贺氏菌属Escherichia-Shigella、活泼瘤胃球菌属Ruminococcus_gnavus_group、萨特氏菌属Sutterella、毛螺菌属NK4A136组Lachnospiraceae_NK4A136_group和梭杆菌属Fusobacterium共6个菌属的丰度(LDA score＞3,P＜0.01),降低拟普雷沃氏菌属Alloprevotella),肠鼠杆菌属Muribaculum,普雷沃氏菌属UCG-001 Prevotellaceae_UCG-001和另枝杆菌Alistipes共4个菌属的丰度(LDA score＞3,P＜0.01).抗生素联合YJGP-W干预,YJGP-W抗肝纤维化的活性显著减弱.结论 多糖类成分YJGP-W是一贯煎抗肝纤维化的重要物质基础,YJGP-W发挥抗肝纤维化的作用可能与其调控肠道菌群相关.

海黍子(Sargassum muticum,SM)、鼠尾藻(Sargassum thunbergii,ST)、铜藻(Sargassum horneri,SH)和海蒿子(Sargassum pallidum,SP)是我国黄渤海常见的大型马尾藻属海藻,研究以靖子湾潮间带4种马尾藻为研究对象,自然海水(W)作为对照,利用16SrRNA基因扩增子高通量测序技术比较4种马尾藻类附生菌群的结构.研究结果表明,ST附生菌群多样性和物种丰富度最高,SH最低.NMDS(无度量多维标定法)和PERMANOVA分析表明4种马尾藻附生菌的群落结构与海水中微生物群落结构存在显著性差异(P＜005),而不同马尾藻之间差异却不显著.LEfse分析共识别出18个Biomarkers,其中W、SH、SM和ST样本分别有9、4、3和2个.变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)和拟杆菌门(Bacteroidota)为4种马尾藻附生菌群的主要优势菌门,相对丰度为80.39％-94.54％;基于属水平和相对丰度前10 AS Vs的群落结构组成特征表明,4种马尾藻附生菌群结构组成存在明显差异,呈现出宿主特异性.利用Tax4Fun软件对4种马尾藻类附生菌群生态功能进行预测,在一级功能水平上,新陈代谢(Metabolism)、遗传信息处理(Genetic Information Processing)为主要功能;在二级功能水平上,共注释到44个二级代谢通路,其中碳水化合物代谢(Carbohydrate metabolism)相对丰度最高.研究通过比较4种马尾藻附生菌群结构多样性,为进一步深入了解马尾藻属的生态作用提供理论依据.

目的 探讨孕前和孕期高脂饲料喂养对新生大鼠肠道菌群的影响.方法 12只3周龄无特定病原体(Specific Pathogen Free,SPF)级雌性Sprague-dawley(SD)大鼠,适应性喂养一周后,按体重随机分为对照组与高脂组,孕前分别用基础饲料与高脂饲料喂养至12周龄,与同周龄SPF级雄性SD大鼠合笼,次日观察到阴道栓或阴道涂片中发现精子后,判定受孕.孕鼠单笼饲养,孕期的饲料与孕前相同.收集出生后第0.5天(postnatal day 0.5,PD 0.5)仔鼠,称量体重,采集肠道组织并称量质量,计算肠道系数;进行回肠和结肠组织病理和相关基因检测;提取肠道内容物的细菌总DNA,通过16SrRNA测序分析肠道菌群.采用t检验或Mann-Whitney U检验分析数据.结果 与对照组相比,高脂组PD 0.5仔鼠体重、肠道质量、肠道系数无显著改变(t=-0.682,P=0.499;t=0.269,P=0.790;t=0.674,P=0.506);肠道病理形态无改变;结肠闭合蛋白-1(Claudin-1)、溶菌酶(Lysozyme)、再生胰岛衍生蛋白3伽马(regenerating islet derived protein 3 gamma,Reg3γ)和 a-防御素 5(Alpha-defensin 5)的基因表达水平显著增加(t=-3.136,P=0.011;t=-3.303,P=0.019;t=-3.093,P=0.011;t=-3.575,P=0.005);肠道菌群的 α 多样性和 β多样性无显著改变(t=-1.407,P=0.190;t=-1.410,P=0.189;t=-2.017,P=0.071;U=6.000,P=0.055;F=1.030,P=0.141);肠道瘤胃球菌属、考拉杆菌属、Lachnospiracea_incertae_sedis、韦荣氏球菌属、黄杆菌属和Bacteroides_sp._SLC1-38 的丰度显著增加(U=3.500,P=0.013;U=7.000,P=0.050;U=6.000,P=0.022;U=6.000,P=0.022;U=7.000,P=0.050;U=3.000,P=0.007);线性判别分析效应量(Linear discriminant analysis Effect Size,LEfSe)分析表明高脂组中对差异影响贡献较大的物种有埃希氏菌属/志贺氏菌属、瘤胃球菌属、考拉杆菌属、Lachnospiracea_incertae_sedis和Bacteroides_SP._SLC1-38.结论 孕前和孕期高脂饲料喂养导致PD 0.5仔鼠肠道代谢相关菌和致病菌的丰度增加.