目的:探讨山柰酚对心肌缺血再灌注(I/R)损伤中心肌细胞铁死亡的作用机制.方法:建立体内SD大鼠心肌I/R模型和体外H9c2细胞缺氧/复氧(H/R)模型,给予山柰酚干预.通过苏木精-伊红(HE)染色观察心肌形态学变化,测定血浆心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)以评估心脏损伤程度,四甲基偶氮唑盐(MTT)法评估细胞活力,蛋白免疫印迹法(Western Blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测铁死亡相关蛋白和基因变化.结果:体外实验证明山柰酚改善H/R诱导的细胞损伤,部分逆转了铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、相关基因核糖体蛋白L8(RPL8)、铁反应元件结合蛋白2(IREB2)和三磷酸腺苷合酶F0复合亚基C3(ATP5G3)的变化.体内实验表明山柰酚减轻I/R诱导心肌组织病理变化,降低血清中cTnⅠ、CK和LDH水平,抑制铁死亡相关蛋白和基因的变化.结论:山柰酚可能通过抑制心肌I/R损伤诱导的心肌细胞铁死亡发挥心脏保护作用.

背景 既往儿童消化系统疾病以感染性疾病为主,近年来遗传代谢性疾病的诊断率也逐渐升高.目的 总结常见的消化系统遗传代谢病的临床表型和基因型.设计 病例系列报告.方法 纳入在单中心 2015 年 1 月 1 日至 2019年 12 月 31 日因消化系统症状就诊且全外显子组基因检测结果异常的患儿.从病历系统中截取患儿的人口学资料、临床资料和基因检测结果.主要结局指标 临床表型和基因型.结果 320 例行基因检测的消化科患儿中结果异常 111 例(34.7%),诊断时年龄(2.4±2.8)岁,男 68 例(61.3%).主要疾病表型包括:遗传性肝病 70 例(63.1%),其中肝豆状核变性和糖原累积病各 15 例,Citrin缺乏症 13 例,Alagille综合征、进行性家族性肝内胆汁淤积症和胆红素代谢障碍各 9 例;极早发型炎症性肠病(VEO-IBD)8 例(7.2%);进行性肌营养不良 10 例(9.1%)等.肝豆状核变性多表现为无症状的持续性转氨酶升高(53.3%),ATP7B基因c.2333G＞T(p.R778L)是最常见的变异位点(53.3%).糖原累积病患儿的临床表现主要为低血糖、肝肿大、肝功能异常(均为 93.3%)以及TG升高(60.0%),亚型包括Ⅸa型6 例,Ⅲ型5 例,GSDⅠa、GSDⅡ、GSDⅥ和ⅩⅤ型各 1 例.9 例Alagille综合征患儿均有肝功能异常,8 例(88.9%)以"皮肤、巩膜黄染"就诊;8 例(88.9%)为JAG1基因变异(Alagille综合征 1 型),1 例为NOTCH2 基因变异(Alagille综合征2型).Citrin缺乏症患儿多因"皮肤黏膜黄染"入院(92.3%),多有肝酶异常、胆汁淤积和低血糖,13例均检出SLC25A13基因突变,以c.851_854del(38.5%)和c.852_855del(30.8%)位点最为常见.9 例进行性家族性肝内胆汁淤积症患儿均有肝脏肿大,ALT、AST和总胆汁酸升高,分型包括 2 型(ABCB11基因变异)6 例,3 型(ABCB4 基因变异)2 例,1 型(ATP8B1 基因变异)1 例.9 例胆红素代谢障碍患儿主诉均为"黄疸和/或肝功能异常",均检出UGT1A1 基因突变,c.211G＞A(p.G71R)(66.7%)和A(AT)6TAAinsTA(55.6%)是最常见的变异位点.8 例VEO-IBD患儿均以"慢性腹泻"为主诉,均有血WBC计数和CRP水平升高,消化道内镜均显示结肠黏膜出现鹅卵石样改变和深度溃疡;7 例为IL10-RA基因突变,最常见的为c.301C＞T(p.R101W)(62.5%)和c.537G＞A(p.T179T)(50%),1 例为IL10-RB基因的杂合突变.结论 基因检测在儿童消化系统遗传病的诊断及治疗中有重要作用.

目的:评价Z-DNA结合蛋白1(ZBP1)/受体相互作用蛋白激酶1(RIPK1)信号通路在脂多糖(LPS)-三磷酸腺苷(ATP)致小鼠巨噬细胞焦亡中的作用。方法:常规培养小鼠RAW264.7巨噬细胞，采用随机数字表法分为6组( n＝9)：空白对照组(C组)、LPS-ATP组、LPS-ATP＋转染阴性对照scRNA组(LPS-ATP＋scRNA组)、LPS-ATP＋ZBP1小干扰RNA组(LPS-ATP＋siRNA组)、LPS-ATP＋二甲基亚砜组(LPS-ATP＋DMSO组)和LPS-ATP＋RIPK1抑制剂nec-1组(LPS-ATP＋nec-1组)。LPS-ATP＋siRNA组使用siRNA技术抑制ZBP1的表达，LPS-ATP＋nec-1组给予nec-1抑制RIPK1的表达；C组常规培养，余5组给予10 μg/ml LPS孵育24 h，然后加入5 mmol/L ATP孵育30 min构建细胞焦亡模型。采用CCK-8法检测细胞存活情况；ELISA法检测细胞上清液IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α浓度；碘化丙啶荧光染色法测定细胞焦亡情况；Western blot法检测ZBP1、RIPK1、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)和消皮素D(GSDMD)表达。 结果:与C组比较，LPS-ATP组细胞存活率降低，细胞焦亡率升高，上清液IL-1β、IL-6、IL-18及TNF-α浓度升高，细胞ZBP1、RIPK1、caspase-1和GSDMD表达上调( P<0.05)；与LPS-ATP组比较，LPS-ATP＋scRNA组和LPS-ATP＋DSMO组上述各指标差异无统计学意义( P>0.05)；与LPS-ATP＋scRNA组比较，LPS-ATP＋siRNA组细胞存活率升高，细胞焦亡率降低，上清液IL-1β、IL-6、IL-18及TNF-α浓度降低，细胞ZBP1、RIPK1、caspase-1和GSDMD表达下调( P<0.05)；与LPS-ATP＋DSMO组比较，LPS-ATP＋nec-1组细胞存活率升高，细胞焦亡率降低，上清液IL-1β、IL-6、IL-18及TNF-α浓度降低，RIPK1、caspase-1和GSDMD表达下调( P<0.05)，ZBP1表达差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:ZBP1/RIPK1信号通路激活参与了LPS-ATP致小鼠巨噬细胞焦亡的过程。

目的:探讨血清线粒体ATP合酶C亚基水平在脓毒症患者心功能状态及预后评估中的价值。方法:前瞻性纳入2017年1月1日至2018年12月31日在温州医科大学附属第一医院急诊重症监护室（EICU）收住的165例脓毒症患者，男103例（62.4%），女62例（37.6%），年龄（63±14）岁。使用人ATP合成酶脂质结合蛋白（ATP5G1）ELISA试剂盒检测患者入EICU后24 h内的血清ATP合酶C亚基水平。对照组为健康体检者，共45例。收集患者临床资料，根据左室射血分数（LVEF）及临床结局不同进行分组，比较各组之间临床指标的差异，评价血清ATP合酶C亚基水平对脓毒症患者心功能状态及预后评估的价值，分析脓毒症患者心功能状态及预后的独立危险因素。结果:脓毒症组血清ATP合酶C亚基水平高于对照组［（116±62） μg/L比（77±34） μg/L， P<0.001］。脓毒症心功能障碍组血清ATP合酶C亚基水平高于心功能正常组（ P<0.001），死亡组血清ATP合酶C亚基水平高于存活组（ P<0.05）。绘制ATP合酶C亚基、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、B型钠尿肽（BNP）、肌钙蛋白I（cTnI）、左房舒张末期内径、左室收缩末期内径、左室舒张末期容量、左室收缩末期容量受试者工作曲线（ROC）来评估脓毒症患者心功能障碍，曲线下面积（AUC）分别为0.928、0.661、0.837、0.814、0.703、0.831、0.794、0.765，其中ATP合酶C亚基截断值、灵敏度、特异度分别为139.44 ng/L、100%、75.2%。logistic回归分析得出ATP合酶C亚基、BNP、左房舒张末期内径是脓毒症患者心功能障碍的独立危险因素（均 P<0.05）。绘制年龄、尿素氮（BUN）、ATP合酶C亚基、急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ评分（APACHEⅡ）、简化急性生理评分（SAPSⅡ）ROC曲线来评估脓毒症患者预后，其AUC分别为0.719、0.772、0.656、0.868、0.884，其中ATP合酶C亚基的截断值、灵敏度、特异度分别为131.24 ng/L、61.9%、68.7%。logistic回归分析得出年龄、BUN、ATP合酶C亚基、发生心功能障碍、APACHEⅡ评分及SAPSⅡ评分是脓毒症患者预后的独立危险因素（均 P<0.05）。 结论:血清ATP合酶C亚基水平与脓毒症患者心功能障碍密切相关，并能有效预测患者预后。

目的:探讨脑胶质瘤组织中三磷酸腺苷结合盒式亚家族C成员8(ABCC8) mRNA的表达及其作为预测脑胶质瘤预后评估指标的应用价值。方法:收集中国脑胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库中304例脑胶质瘤患者(研究组)的性别、年龄、组织病理类型、WHO分级、IDH突变、1p/19q缺失、生存时间和ABCC8 mRNA表达水平等数据，采用单因素及多因素Cox回归分析明确脑胶质瘤患者的预后影响因素，并通过癌症基因组图谱(TCGA)数据库的506例脑胶质瘤患者、分子脑肿瘤数据库(REMBRANDT)的271例脑胶质瘤患者进行验证。结果:研究组304例脑胶质瘤组织中ABCC8 mRNA表达量为15.93±1.23。ABCC8 mRNA表达量与患者的年龄、组织病理类型、WHO分级、异柠檬酸脱氢酶(IDH)突变状态、1p/19q缺失状态、WHO分子分级有关(均 P<0.01)。ABCC8 mRNA高表达组患者的中位生存时间为85.60个月，明显长于低表达组(14.07个月， P<0.001)。单因素Cox回归分析显示，年龄、组织病理类型、WHO分级、IDH突变状态、1p/19q缺失状态、术后放疗、术后化疗及ABCC8 mRNA表达与患者总生存时间有关(均 P<0.05)。多因素Cox回归分析显示，WHO分级( HR＝3.117，95% CI：1.970~4.930)、1p/19q缺失状态( HR＝0.285，95% CI：0.155~0.526)、术后化疗( HR＝0.680，95% CI：0.488~0.948)及ABCC8 mRNA表达( HR＝0.690，95% CI：0.491~0.971)为脑胶质瘤患者生存时间的独立影响因素。在TCGA数据集中，ABCC8 mRNA高表达组患者的中位生存时间为133.70个月，长于低表达组患者(19.60个月， P<0.001)。在REMBRANDT数据集中，ABCC8 mRNA高表达组患者中位生存时间为37.93月，长于低表达组患者(15.83个月， P<0.001)。 结论:脑胶质瘤组织中ABCC8 mRNA的表达水平与肿瘤恶性程度有关，恶性程度越高，表达越低。ABCC8 mRNA的表达水平是脑胶质瘤患者预后的独立影响因素，ABCC8 mRNA高表达者预后好于低表达者。

目的:通过生物信息学分析探究儿童神经母细胞瘤中与MYCN(N-myc)基因相关的共表达基因。方法:下载TARGET数据库神经母细胞瘤表达数据共179例，WGCNA分析筛选MYCN扩增共表达基因模块；针对目标基因模块个基因行GO、KEGG富集分析筛选MYCN扩增相关基因可能参与生物过程及信号通路；以MYCN扩增状态将神经母细胞瘤表达数据分为扩增组65例、非扩增组114例，行差异表达基因分析；筛选的差异表达基因同MYCN扩增相关基因取交集后运用K-M法行生存分析(log-rank检验)，筛选预后相关基因，Logistics回归探究MYCN扩增状态同预后基因的关系。结果:WGCNA分析提示MEgreenyellow模块同MYCN基因扩增状态相关性最强( R＝0.46， P<0.05)，为共表达基因，包含基因1 216个，富集分析提示MYCN扩增共表达基因多参与RNA相关通路(RNA的转运、剪切、修饰，RNA相关酶的活性等过程)；差异表达基因分析显示，MYCN扩增组相较于非扩增组，基因表达上调47个，表达下调123个；WGCNA分析同差异表达基因取交集筛选出22个关键基因，行生存分析显示同预后相关的基因( P<0.05)有12个，其中DDX1与其他关键基因相关性相对较弱，或为神经母细胞瘤独立预后因素。 结论:LINC00839、ATP结合盒亚家族C4(ABCC4)、亚甲基四氢叶酸脱氢酶(NADP +依赖)2(MTHFD2)、磷酸甘油酸脱氢酶(PHGDH)、序列相似性家族13 A(FAM11A)、磷酸丝氨酸转氨酶1 (PSAT1)、假尿苷酸合酶7(PUS7)、DEAD-box解旋酶1(DDX1)、溶质载体有机阴离子转运蛋白家族5A1(SLCO5A1)、Junctophilin 1(JPH1)、溶质载体家族16 1(SLC16A1)、MYCN Opposite Strand(MYCNOS)为神经母细胞瘤中MYCN扩增的共表达基因，与较差的预后相关，是神经母细胞瘤潜在的治疗靶点及预后指标。

目的:基于单细胞转录组测序(scRNA-seq)探讨小鼠脉络膜新生血管(CNV)中内皮细胞(EC)的分子表达与病理特征。方法:取6只6~8周龄C57BL/6小鼠按照随机数字表法随机分为2个组，每组3只，处死后摘取双眼眼球，分别采用剪碎脉络膜巩膜复合体法和刮取脉络膜法分离脉络膜组织，采用胰蛋白酶/Ⅰ型胶原酶37 ℃连续消化制得单细胞悬液，流式细胞术检测细胞活率及EC比例，确定单细胞悬液制备方法。选取6只小鼠随机分为正常对照组和CNV组，每组3只，其中CNV组小鼠建立激光诱导的CNV模型；于造模后7 d制备单细胞悬液，采用10xGenomics进行单细胞分离并构建测序文库，Illumina Novaseq6000进行高通量测序，获得基因表达矩阵；根据文献报道并参考Cellmarker数据库定义细胞亚群；选取EC亚群进行拟时序分析，生成各个细胞分化状态(State)的基因表达矩阵，筛选CNV-EC并初步分析表达特征。另选取6只小鼠建立CNV模型，于造模后7 d取小鼠眼球制备冰冻切片，免疫荧光染色检测EC标志物Pecam1与线粒体外膜蛋白Tomm20、mt-Co1和毛细血管标志物Kdr、Plvap的共定位及面积占比情况，并统计血管直径。结果:剪碎复合体和刮取脉络膜所制备单细胞悬液的细胞活率分别为99.4%和99.1%，符合测序要求；流式细胞术检测EC占比约为1.58%。scRNA-seq结果显示，正常对照组和CNV组小鼠脉络膜均包含13个细胞亚群，与正常对照组比较，CNV组视锥/视杆细胞、EC和造血系细胞比例增加，视网膜色素上皮(RPE)细胞和施万细胞比例相应减少。在所有细胞亚群中，EC比例为18.40%。EC拟时序分析显示，脉络膜EC可分为4个State，CNV组中位于State 2状态的EC比例为29.1%，较正常对照组的9.5%明显升高；差异基因分析显示，State 2 EC中线粒体相关基因 mt-Nd4和 mt-Atp6等表达上调而毛细血管基因 Kdr和 Esm1等表达显著下调。免疫荧光染色结果显示，CNV区域内Tomm20和mt-Co1在Pecam1阳性EC内表达分布面积比例分别为(19.50±4.68)%和(4.64±2.82)%，明显高于正常区域的(3.00±2.09)%和(0.18±0.34)%，差异均有统计学意义( t＝7.88、3.84，均 P<0.01)。CNV区域内Kdr和Plvap在Pecam1阳性EC内表达面积比例分别为(1.50±0.29)%和(0.79±0.97)%，明显低于正常区域的(31.30±5.44)%和(10.43±2.28)%，差异均有统计学意义( t＝13.40、9.48，均 P<0.01)。CNV区域血管直径为(5.52±1.85)μm，明显大于正常区域的(4.21±1.84)μm，差异有统计学意义( t＝9.57， P<0.001)。 结论:CNV发生时，脉络膜组织中EC比例增加，CNV-EC呈现线粒体代谢活化和毛细血管特性丢失的病理特征，提示EC线粒体活化可能在CNV生成中具有一定的作用。

目的:探讨ATP合酶C亚基（Csub）在缺血性心脏病（IHD）患者血清中的表达及临床意义。方法:选择2019年5月至2020年12月玉环市人民医院急诊科收治的101例胸痛患者，其中急性心肌梗死（AMI）59例，不稳定型心绞痛（UAP）42例；同时选择体检中心年龄匹配的50例健康体检者作为健康对照（HC）。所有患者均于急诊抢救室药物及介入措施干预前完成抽血，用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清Csub含量，分析Csub与临床特征之间的关系，同时用电化学发光法检测血中超敏心肌肌钙蛋白T（hs-cTnT）和肌酸激酶同工酶（CK-MB）含量。绘制受试者工作特征曲线（ROC曲线），评估Csub、hs-cTnT及CK-MB对IHD的早期诊断价值。结果:3组受试者年龄、性别、既往史等基线资料均衡，低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、CK-MB、hs-cTnT及B型钠尿肽（BNP）差异具有统计学意义，其余生化指标差异均无统计学意义。AMI组及UAP组Csub含量均明显高于HC组〔8.96%（6.37%，11.53%）、4.27%（3.23%，6.49%）比1.56%（1.07%，2.33%），均 P<0.01〕，且心肌缺血更为严重的AMI组Csub含量较UAP组进一步升高〔8.96%（6.37%，11.53%）比4.27%（3.23%，6.49%）， P<0.01〕。59例AMI患者均接受了经皮冠状动脉介入治疗（PCI），根据Csub中位数将AMI患者分为高于中位数组（29例）和低于中位数组（30例），结果显示，两组冠状动脉病变支数、支架植入数量及术后用药情况差异均无统计学意义。ROC曲线分析显示，Csub对IHD的诊断效能〔曲线下面积（AUC）＝0.98，95%可信区间（95% CI）为0.95~1.00〕略低于hs-cTnT（AUC＝0.99，95% CI为0.99~1.00），却高于CK-MB（AUC＝0.94，95% CI为0.89~0.99）。Csub最佳截断值为4.74%时，诊断IHD的敏感度为100%，特异度为87.0%。 结论:Csub在IHD患者血清中显著升高，且随着缺血程度的加剧进一步升高，其可作为诊断以及评估心肌缺血发展的新型诊断标志物。

目的:基于单细胞转录组测序分析百草枯（PQ）诱导的帕金森病（PD）样小鼠大脑小胶质细胞亚群差异基因和相关信号通路，为阐明PQ致动物大脑PD样改变的机制研究提供线索。方法:于2021年9月，将6周龄C57BL/6雄性小鼠6只随机分为对照组和实验组（每组3只），分别以生理盐水、10.0 mg/kg PQ进行腹腔注射，每3天1次，连续10次注射造模。染毒结束后取小鼠大脑，进行10× Genomics单细胞转录组测序。根据基因表达特征筛选小胶质细胞亚群，进行基因本体（GO）富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析。进一步筛选实验组和对照组间小胶质细胞亚群的差异基因，利用生物信息学工具进行功能显著性富集分析。采用0、60、90 μmol/L的PQ溶液处理小鼠小胶质细胞（BV2细胞），通过实时荧光定量PCR实验验证差异基因己糖激酶2（Hk2）、ATPase H+转运V0亚基b（Atp6v0b）、神经调节蛋白1（Nrg1）的表达情况。结果:根据特征基因肌醇多磷酸-5-磷酸酶d（Inpp5d）和转化生长因子β受体1（Tgfbr1）将Cluster 7和Cluster 20亚群识别为小胶质细胞亚群，且该亚群反映小胶质细胞活化M2表型。生物信息学分析结果显示，所识别小胶质细胞亚群特征基因均富集到内吞作用；在分子功能方面主要富集跨膜受体蛋白激酶活性和细胞因子结合等功能。Cluster 7亚群上调基因主要富集于溶酶体通路、内吞作用等通路；下调基因主要富集于神经退行性疾病等信号通路。Cluster 20亚群上调基因主要富集于与PD相关的信号通路；下调基因主要富集于环磷酸腺苷（cAMP）信号传导途径、神经系统发育、突触功能等信号通路。实时荧光定量PCR检测结果显示，与0 μmol/L比较，90 μmol/L PQ溶液处理后BV2细胞的Hk2 mRNA和Atp6v0b mRNA表达水平升高，Nrg1 mRNA表达水平降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:小胶质细胞在PQ诱导的PD样小鼠模型中被激活，且向M2表型极化，其功能与溶酶体（内吞）、突触功能及PD相关信号通路的调节有关。

目的:通过反向遗传学方法，探索白念珠菌F1Fo-ATP合酶α亚基编码基因（ATP1）通过清除细胞内活性氧以逃逸巨噬细胞杀伤的生理作用。方法:以白念珠菌ATP1缺失株及其亲本株为研究对象，接种平板培养后计算菌落数评估其体外细胞活性，通过尾静脉接种小鼠后计算肾脏组织形成菌落数评估体内细胞活性。将培养过夜的白念珠菌菌液与巨噬细胞共培养后，接种平板，计算菌落数，测定菌的存活率，通过乳酸脱氢酶释放法测定巨噬细胞乳酸脱氢酶水平；以过氧化氢建立模拟巨噬细胞内氧化应激模型，过氧化氢作用白念珠菌后，通过计算菌落数比较各菌株细胞活性，采用DCFH-DA染色测定细胞内活性氧水平，实时荧光定量PCR检测过氧化氢酶1（CAT1）基因、超氧化物歧化酶4（SOD4）基因和超氧化物歧化酶5（SOD5）基因mRNA水平。采用双因素方差分析或Student t检验对数据进行统计学分析。 结果:在体外，亲本株组和ATP1缺失组菌落数随培养时间逐渐增多，24 h后ATP1缺失组菌落数仅为亲本株组的10%，差异有统计学意义（ F = 481.84， P < 0.001）。在小鼠体内，亲本株组肾脏组织形成菌落数随时间逐渐增多，但是ATP1缺失组逐渐减少，两组差异有统计学意义（ F = 78.27， P = 0.001）。与体内实验结果一致，体外白念珠菌菌体与巨噬细胞共培养后，ATP1缺失组白念珠菌存活率（62.67 ± 3.51）%比亲本株组（82.33 ± 2.52）%显著降低（ t = 7.88， P = 0.001），与ATP1缺失组共培养的巨噬细胞乳酸脱氢酶释放百分比（27.80 ± 3.54）%比与亲本株组共培养的巨噬细胞（87.78 ± 0.17）%显著降低（ t = 33.89， P < 0.001）。在模仿的巨噬细胞内氧化应激模型中，ATP1缺失组细胞活性比亲本株组显著降低，差异有统计学意义（ F = 3 440.65， P < 0.001）。在与巨噬细胞共培养以及模仿的巨噬细胞内氧化应激模型中，ATP1缺失组细胞内活性氧水平均比亲本株组显著增高，差异有统计学意义（均 P < 0.001）。ATP1缺失组CAT1、SOD4、SOD5 mRNA水平均比亲本株组降低，差异均有统计学意义（均 P < 0.001）。 结论:ATP1缺失可能分别通过下调氧化应激和活性氧清除相关基因表达，使白念珠菌抵抗氧化应激和清除活性氧的能力明显减弱，最终不能逃逸巨噬细胞杀灭而被宿主清除。