目的:评价Nr1D1核受体亚家族1，组D，成员1(Rev-erbα)/芳香烃受体核转位蛋白样1受体(Bmal1)信号通路在糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用及其与自噬的关系。方法:SPF级成年雄性SD大鼠，6～8周龄，体重200～220 g，腹腔注射链脲佐菌霉素60 mg/kg建立1型糖尿病模型，糖尿病造模成功后继续饲养8周。取糖尿病大鼠30只，采用随机数字表法分为3组：糖尿病假手术组(DS组， n＝6)、糖尿病心肌缺血再灌注组(DI/R组， n＝12)和糖尿病心肌缺血再灌注+Rev-erbα拮抗剂SR-8278组(DI/R+SR组， n＝12)。另取非糖尿病大鼠18只，采用随机数字表法分为2组：非糖尿病假手术组(NS组， n＝6)和非糖尿病心肌缺血再灌注组(NI/R组， n＝12)。采用结扎左冠状动脉前降支30 min再灌注120 min的方法建立心肌缺血再灌注损伤模型。DI/R+SR组于缺血前1 h时经股静脉注射SR-8278 2 mg/kg。再灌注结束即刻采集颈动脉血标本，采用ELISA法检测血清cTnI、CK-MB和LDH水平；然后处死大鼠，取心肌组织，采用TTC法测定心肌梗死面积百分比，透射电镜下计数自噬小体，采用RT-PCR检测Rev-erbα和Bmal1的mRNA表达水平，Western blot法检测Rev-erbα、Bmal1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ和LC3 Ⅰ的表达水平，并计算LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ比值。 结果:与NS组比较，NI/R组心肌梗死体积百分比、血清cTnI、CK-MB和LDH水平和自噬小体计数升高，心肌组织Rev-erbα及其mRNA表达上调，Bmal1及其mRNA表达下调，LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高，DS组血清cTnI、CK-MB和LDH水平升高，自噬小体计数降低，心肌组织Rev-erbα及其mRNA表达上调，Bmal1及其mRNA表达下调，LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低( P<0.05)；与NI/R组比较，DI/R组心肌梗死体积百分比、血清cTnI、CK-MB和LDH水平升高，自噬小体计数降低，心肌组织Rev-erbα及其mRNA表达上调，Bmal1及其mRNA表达下调，LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低( P<0.05)；与DS组比较，DI/R组心肌梗死体积百分、血清cTnI、CK-MB和LDH水平和自噬小体计数升高，心肌组织Rev-erbα及其mRNA表达上调，Bmal1及其mRNA表达下调，LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高( P<0.05)；与DI/R组比较，DI/R+SR组心肌梗死体积百分比、血清cTnI、CK-MB和LDH水平降低，自噬小体计数降低，心肌组织Rev-erbα及其mRNA表达下调，Bmal1及其mRNA表达上调，LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高( P<0.05)。 结论:Rev-erbα/BMAL1信号通路可通过调节细胞自噬水平，参与糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的过程。

目的:探索可能影响肾脏衰老的相关基因，并验证时钟基因 Arntl在衰老肾脏中的表达变化。 方法:通过全转录组测序鉴定C57BL/6雄性24月龄小鼠（衰老组）和3月龄小鼠（年轻组）的差异表达基因，并通过生物信息学方法分析其所富集的生物学通路及关键蛋白。应用实时荧光定量PCR和Western印迹验证Arntl的mRNA及蛋白表达量。结果:（1）全转录组测序结果显示在C57BL/6衰老组小鼠及年轻组小鼠中共筛选出119个显著差异表达基因。差异表达基因主要富集于节律过程、昼夜节律、基因表达的昼夜调控等生物学过程（均 P<0.001）。蛋白质互作网络分析结果显示，Nfil3、Hspa8、Arntl、Hlf、Rorc、Per3、Npas2等是差异表达基因中的关键蛋白。时钟基因 Arntl、 Nfil3、 Npas2、 Per3在衰老组及年轻组小鼠之间的mRNA表达差异（均 P<0.05）与测序结果一致。（2）相较于C57BL/6年轻组小鼠和SAMR1快速老化小鼠，Arntl蛋白表达量在衰老组小鼠和SAMP8快速老化小鼠肾脏组织中均有下降趋势。 结论:时钟基因及其参与的昼夜节律生物学通路可能在肾脏衰老过程中发挥重要作用。Arntl在衰老肾脏中表达量有下降趋势。

目的 基于铁死亡相关基因(FRG)构建骨肉瘤(OS)预后模型,探讨FRG在OS中的表达及与患者预后的关系.方法 通过生物信息学方法从UCSC Xena数据库中获取88例OS患者的转录组测序数据和其中85例患者的临床资料,与基因型-组织表达(GTEx)数据库中获取的396例正常骨组织样本合并,从FerrDb数据库中获取FRG,从合并后的数据中进行差异分析并提取差异表达的FRG.采用基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析探索OS中FRG的生物学功能.采用单因素Cox与Lasso回归模型筛选预后相关基因并构建预后预测模型.采用受试者工作特征(ROC)曲线分析预后模型的预测价值.采用单因素及多因素Cox回归模型分析OS患者预后的独立影响因素.采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测预后相关FRG在人成骨细胞hFOB1.19与OS细胞系U2OS、MG63中的表达情况.结果 共获得57个差异表达的FRG.GO与KEGG富集分析发现这些差异基因主要富集在缺氧反应、线粒体外膜、铁离子结合等生物学反应和线粒体自噬、化学致癌-活性氧以及铁死亡等途径.应用单因素Cox及Lasso回归模型共筛选出9个预后相关的FRG来构建预后模型,分别为酰基辅酶A合成酶家族成员2(ACSF2)、芳香烃受体核转运因子样蛋白(ARNTL)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相互作用蛋白3(BNIP3)、脂肪酸去饱和酶2(FADS2)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)、磷酸葡萄糖酸脱氢酶(PGD)、细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)、转化生长因子β受体1(TGFBR1)、血管内皮生长因子A(VEGFA).ROC曲线和生存分析证实这9个FRG构建的风险模型对OS患者的生存情况具有较好的预测价值.单因素和多因素分析结果显示,转移和风险评分均是OS患者预后的独立影响因素(P＜0.01).qPCR结果显示,U2OS和MG63细胞中FADS2 mRNA相对表达量均高于hFOB 1.19细胞,差异均有统计学意义(P＜0.05);MG63细胞中ACSF2 mRNA相对表达量高于hFOB1.19细胞,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 本研究成功构建了基于 FRG 的 OS 预后模型,发现 A CSF2、ARNTL、G6PD、PGD、FADS2、SOCS1、BNIP3、TGFBR1、VEGFA 等 9个FRG能够作为OS患者的预后生物标志物,可为OS患者的临床治疗和预后评估提供参考.

目的 探讨脑和肌肉组织芳香烃受体核转运蛋白的类似蛋白1(BMAL1)通过核因子E2相关因子2(NRF2)调节活性氧(ROS)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体通路对过氧化氢(H2O2)诱导的心肌细胞损伤的影响.方法 体外培养H9c2细胞和BMAL1稳定过表达的H9c2细胞,建立H2O2诱导的H9c2细胞损伤模型,并将细胞分为对照(Control)组、H2O2组、BMAL1过表达(BMAL1-OE)组、BMAL1过表达+H2O2(BMAL1-OE+ H2O2)组、BMAL1过表达+NRF2抑制剂(BMAL1-OE+ML385)组、BMAL1过表达+NRF2抑制剂+H2O2(BMAL1-OE+ ML385+H2O2)组.采用CCK-8法检测细胞活力,荧光探针2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯检测ROS生成,Western blot检测BMAL1、NRF2和NLRP3蛋白表达,酶联免疫吸附试验法检测白细胞介素(IL)-1β释放.结果 与Control组相比,H2O2组H9c2心肌细胞活力减弱,ROS生成增多,BMAL1和NRF2蛋白表达水平降低,NLRP3蛋白表达水平升高,IL-1β释放增多(P＜0.05);与H2O2组相比,BMAL1-OE+H2O2组H9c2心肌细胞活力升高,ROS生成减少,BMAL1和NRF2蛋白表达水平升高,NLRP3蛋白表达水平降低,IL-1β释放减少(P＜0.05).与BMAL1-OE+H2O2组相比,BMAL1-OE+ML385+H2O2组H9c2心肌细胞活力减弱,ROS生成增多,NLRP3蛋白表达水平升高,IL-1β释放增多(P＜0.05).结论 BMAL1可减轻H2O2诱导的H9c2心肌细胞损伤,其机制可能与NRF2调节ROS/NLRP3炎症小体通路有关.

背景:低氧训练可以促进机体脂肪的降解,外界环境变化可影响动物昼夜节律,但昼夜节律变化对脂肪组织棕色化及脂肪降解的调控机制尚不明确.目的:阐明时钟基因对低氧训练大鼠附睾脂肪组织棕色化的调控机制.方法:喂养高脂饲料构建肥胖大鼠模型,造模成功后抽取40只肥胖大鼠随机分为4组,即常氧安静组、低氧安静组、常氧训练组、低氧训练组,每组10只,进行4周的干预.安静组大鼠不实施干预;低氧组大鼠全天生活在氧浓度为13.6%的低氧仓中;训练组第1周为适应性训练,后3周训练速度和时长保持不变.测量肥胖大鼠体质量、体长和肾周脂肪质量;并使用血脂生化检测试剂盒检测肥胖大鼠血清中三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇以及高密度脂蛋白胆固醇水平;油红O染色观察肝脏脂肪含量变化;苏木精-伊红染色评价各组大鼠附睾脂肪组织棕色化变化;转录组测序技术结合生物信息学分析脂肪组织中转录组水平变化;采用qRT-PCR检测附睾脂肪组织中PGC-1α、Beclin1、KLF2、Perilipin1 mRNA的表达变化情况.结果与结论:①低氧训练干预使营养性肥胖大鼠体质量、脂体比、Lees's指数、血清总胆固醇、三酰甘油以及低密度脂蛋白胆固醇浓度显著降低(P＜0.01),高密度脂蛋白胆固醇浓度显著升高(P＜0.01);②油红O染色和苏木精-伊红染色显示,相比于常氧安静组、低氧安静组和常氧训练组,低氧训练更能有效促进大鼠肝脏组织中脂肪动员和附睾旁脂肪组织棕色化;③转录组测序结果显示,低氧训练时钟基因Dbp、Nr1d1、Sik1以及脂肪组织棕色化基因Ppargc1a(PGC-1α)等表达显著上调(P＜0.05),而Arntl(Bmal1)显著下调(P＜0.05),同时伴随物质代谢相关基因的表达增强;④qRT-PCR结果证实低氧训练时脂肪组织棕色化基因PGC-1α和脂代谢基因Perilipin1表达量均显著升高(P＜0.01);⑤结果证实时钟基因在低氧训练促进脂肪组织棕色化过程中起到重要作用.

目的 研究miR-25 在鳜的时空表达特征,预测其靶向核心生物钟基因,对其可能存在的生物学意义进行探讨.方法 采用实时荧光定量PCR分析miR-25 在鳜各组织以及不同阶段胚胎中的表达特征,并利用TargetScan对其靶向核心生物钟基因进行预测分析.结果 miR-25 在鳜红肌和心肌中的表达量较高(P<0.05),而在鳜脾、肾、肠以及肝中的表达量较低,且这 4 个组织中的表达量,差异无统计学意义(P>0.05);miR-25 在鳜胚胎的 2 细胞期表达量较高(P<0.05),随着胚胎发育,其表达水平逐渐降低.靶基因预测结果显示,节律基因Arntl2、Nr1d2b mRNA的 3'UTR区域存在miR-25 的靶位点.结论 miR-25 在胚胎发育过程中呈母源性表达,并且可能在鳜红肌和心肌中具有重要的调控意义,此外miR-25 可能通过靶向调节Arntl2、Nr1d2b的表达来调控鳜生物节律,为后续研究miR-25 的生理作用以及调控昼夜节律从而预防相关疾病提供参考依据.

目的 探讨miR-92a和miR-362-3p调节TOB2参与亚低温对重型创伤性脑损伤保护作用.方法 前瞻性选择2015年3月至2017年4月就诊的重型颅脑损伤患者84例,采用随机数字发将其分为常规治疗组(42例)和亚低温+常规治疗组(42例).常规治疗组患者给予脱水、止血、抗炎及神经营养药物等常规治疗;亚低温+常规治疗组患者常规治疗基础上外加亚低温治疗.于治疗前,治疗后第1天、第7天和第14天采集肘静脉血5 ml,用qRT-PCR法检测患者血清miR-92a和miR-362-3p表达水平,用western blotting法检测患者血清TOB2蛋白表达,用荧光素酶活性实验验证TOB2是否是miR-92a和miR-362-3p的靶基因,记录患者伤后6个月时的格拉斯哥预后分级(GOS).结果 在治疗前,两组患者血清miR-92a和miR-362-3p表达无统计学差异(P >0.05).在治疗后第1天、第7天和第14天,相比于常规治疗组,亚低温+常规治疗组患者血清miR-92a和miR-362-3p表达水平均降低(P <0.01),此外,治疗期间TOB2表达水平逐渐增加.荧光素酶活性实验验证证实ARNTL是miR-92a和miR-362-3p靶基因.在伤后第6个月,相比于常规治疗组,亚低温+规治疗组患者预后良好率和中等残疾率均增加,而重度残疾率、植物生存率和死亡率均降低( P <0.05).结论 创伤性脑损伤后miR-92a和miR-362-3p调节TOB2参与亚低温对其保护作用.

目的 探讨出生前邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP)暴露对成年后子代大鼠的昼夜节律相关基因表达的影响.方法 将32只健康SD妊娠大鼠分为对照(玉米油)组和2、10、50 mg/kg DEHP染毒组,每组8只.在母鼠妊娠第14日至19日进行灌胃染毒,每日1次.子代大鼠于10周龄时,采用实时荧光定量PCR法检测下丘脑SCN核区Clock、A rntl、Dbp、PeriodJ和Period2 5个昼夜节律相关基因的表达水平.结果 与对照组相比,10、50 mg/kgDEHP染毒组成年雄性子代大鼠下丘脑SCN核团Dbp基因的表达水平下调,差异均有统计学意义(P＜0.05);而各剂量组DEHP染毒组成年雄性大鼠下丘脑SCN核团的Clock、Arntl、Perl、Per2基因的表达水平均无明显改变.与对照组比较,50mg/kgDEHP染毒组成年雌性子代大鼠下丘脑SCN核团的Clock、Per1基因的表达水平均升高,差异有统计学意义(P＜0.01);而各剂量DEHP染毒组成年雌性子代大鼠下丘脑SCN核团的Arntl、Dbp、Per2基因的表达水平均无明显改变.结论 出生前DEHP暴露可能通过改变大鼠下丘脑SCN核区昼夜节律相关基因的表达影响成年后大鼠的昼夜节律调控功能,且这种影响具有性别差异.

目的探讨重性抑郁障碍患者中,节律相关基因CRY2 rs10838524位点及ARNTL rs2278749位点多态性与选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(selective serotonin reuptake inhibitors,SSRIs)疗效、副反应及患者临床症状的关联性.方法采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和PCR产物直接测序法对537例中国汉族重性抑郁障碍患者CRY2及ARNTL基因进行分型.其中319例患者完成6周SSRIs抗抑郁治疗.在基线期及治疗2、4、6周末用17项汉密尔顿抑郁量表(17-item Hamilton depression scale,HAMD17)及不良反应量表(treatment emergent symptom scale/UKU side effect rating scale,TESS/UKU)评估抑郁严重程度和副反应情况,以6周末HAMD17减分率评估疗效.结果未发现治疗有效组与无效组间CRY2 rs10838524位点及ARNTLrs2278749位点基因型分布差异具有统计学意义(P＞0.05);未发现不同基因型患者治疗前HAMD17各因子分值的差异具有统计学意义(P＞0.05);ARNTL基因rs2278749位点CT+TT基因型患者相对于CC基因型更易发生腹泻(P=0.030,OR=1.91,95％CI:1.06～3.45)及头晕(P=0.038,OR=1.55,95％CI:1.02～2.35)副反应.结论本研究未发现节律相关基因CRY2 rs10838524位点及ARNTL rs2278749位点多态性与中国汉族重性抑郁障碍患者SSRIs疗效及临床症状有关,但ARNTL rs2278749位点多态性可能与SSRIs治疗过程出现腹泻及头晕副反应有关.

[背景]磷酸三苯酯(TPHP)是目前应用最广泛的有机磷酸酯类阻燃剂之一,已在多种环境介质中被检测到.由于该化合物的多重毒性,近年来TPHP的健康风险引起了广泛的关注.然而,有关TPHP暴露对肝脏代谢影响的研究较少.[目的]基于转录组测序数据,采用生物信息学方法探讨TPHP暴露对大鼠肝脏代谢紊乱的效应.[方法]基于基因表达数据库(GEO)获得基因表达谱数据集.采用主成分分析和层次聚类分析方法,依据不同剂量组的基因表达模式的相似程度将样本归类至对照组(0 mg·kg-1,含5个样本)、低剂量组(55.0、110.0、220.0 mg·kg-1,含9个样本)和高剂量组(441.0、881.0 mg·kg-1,含6个样本);利用R3.5.3软件中limma包筛选差异表达基因(DEGs).运用clusterProfiler包对DEGs进行基因本体(GO)、京都基因和基因组数据库(KEGG)富集分析.利用STRING网络数据库建立蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,并运用Cytoscape 3.7.1软件的网络分析插件CytoHubba筛选中心基因.最后,运用clusterProfiler包对重要的中心基因进行基因集富集分析(GSEA).[结果]与对照组相比,低剂量组DEGs共53个,其中表达上调的基因30个,表达下调的基因23个;而高剂量组DEGs共151个,其中表达上调的基因80个,表达下调的基因71个.GO和KEGG富集分析显示,两个剂量组与对照组的DEGs富集的功能相似,主要涉及昼夜节律、碳水化合物代谢、脂质代谢、氨基酸代谢、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)信号通路等生物学途径.PPI网络分析和GSEA显示,Arntl基因是唯一一个在低、高剂量组PPI网络中都存在的中心基因,Arntl基因低表达、高表达组分别在6、19条通路上富集,并且其高表达富集于不饱和脂肪酸的生物合成、PPAR信号通路等生物学途径.[结论]TPHP可诱导大鼠肝脏中昼夜节律、碳水化合物、脂质和氨基酸代谢途径受到干扰.节律基因Arntl可能在TPHP暴露导致的肝脏代谢紊乱中发挥重要作用,并影响内分泌功能.