目的:对1例临床高度怀疑为肾单位肾痨(nephronophthisis, NPHP)的患儿进行基因变异鉴定与分析，以明确其诊断。方法:抽取患儿及其父母的外周血样，应用高通量测序技术对患儿进行测序分析，对可疑致病变异位点进行患儿及其父母的Sanger测序验证。结果:患儿为7岁先天失明的女孩，因无明显诱因反复呕吐伴乏力、精神差7～8天于当地医院就诊，后以"肾功能衰竭"转入本院。患儿尿常规潜血(3＋)，尿蛋白(1＋)，血尿素氮、肌酐进行性明显升高；超声检查双肾体积略增大，肾实质回声增强，皮髓质分界不清，提示双侧肾脏多发囊肿。临床拟诊为"肾单位肾痨"。测序结果示患儿 CEP290基因存在c.2587-2A>T和c.2251C>T复合杂合变异，经Sanger测序验证分别遗传自其母亲和父亲。根据美国医学遗传学与基因组学学会指南，患儿携带的 CEP290基因两个变异均被判定为致病性变异。 结论:患儿被确诊为 CEP290基因变异所致的肾单位肾痨6型，该疾病案例在国内尚未见报道，为该病基因型与表型的相关性提供了新的证据。

目的:分析一个Meckel-Gruber综合征家系的致病性变异位点，为家系的遗传咨询及产前诊断提供指导。方法:应用全外显子测序的方法对先证者进行基因测序分析，检出的可疑致病变异经PCR扩增后进行Sanger测序家系验证，确定致病性变异后抽取胎盘绒毛组织进行产前诊断。结果:先证者携带 CEP290基因c.2743G>T(p.E915X)和c.2587-2A>T复合杂合变异，均为未报道的新突变，先证者父母均为杂合携带者，胎儿未携带上述复合杂合突变。 结论:CEP290基因变异是Meckel-Gruber综合征家系的遗传学病因，为家系遗传咨询和产前诊断提供依据，同时丰富了 CEP290基因变异谱。

目的:确定并观察1个汉族Leber先天性黑矇（LCA）家系的致病基因变异和临床表型。方法:回顾性研究。2022年5月在河南省立眼科医院就诊的LCA10型一家系（1例患者和2名家系成员）纳入研究。详细询问患者病史、家族史并行眼底彩色照相、闪光视网膜电图（F-ERG）检查。采集先证者及其父母的外周静脉血3 ml，提取全基因组DNA。全外显子组测序（WES）、线粒体环基因组（mtDNA）测序以获得致病基因及变异。通过生物信息学分析方法对所有变异位点进行注释，并参考美国医学遗传学和基因组学学会（ACMG）对所有变异位点进行致病等级评估。对候选位点进行Sanger验证，并对致病性证据不足的错义变异行Minigene体外功能验证。结果:先证者，男，7个月。视物追随反应差，指压眼征、畏光、眼球震颤，黄斑中心凹周围区视网膜色素上皮部分脱失。2岁时，F-ERG检查发现，双眼a、b波振幅重度降低，峰时延长，甚至无波形。先证者父母临床表型未见明显异常。WES结果显示，先证者 CEP290基因第40、2号外显子分别存在c.5515_5518del （p.Glu1839Lysfs*11）（V1）移码变异和c.74C>T （p.Ala25Val）（V2）错义变异。mtDNA测序结果为阴性。Sanger验证结果表明，先证者父亲、母亲分别携带杂合移码变异V1、新发错义变异V2，构成复合杂合变异。Minigene体外功能验证结果表明，V2变异使2号外显子产生一个新的剪接供体位点，从而导致2号外显子右侧缺失30个碱基对，蛋白质框内缺失10个氨基酸残基。ACMG评级分别为致病（V1）、可能致病变异（V2）。 结论:CEP290基因c.5515_5518del和新发变异c.74C>T构成复合杂合变异可能是本家系的致病原因，分别导致截短蛋白的产生和前体信使RNA的异常剪接。LCA具有发病年龄小、视功能严重损害和致病变异多样性等特点。

目的:观察并分析 CEP290基因新复合杂合变异导致的单纯视锥视杆细胞营养不良（CORD）的临床表型和致病性。 方法:回顾性研究。2021年12月于河南省立眼科医院就诊并经基因检测确诊的1个CORD家系中的2例患者及2名家系成员纳入研究。受检者均行最佳矫正视力（BCVA）、彩色眼底照相、自身荧光、扫频源光相干断层扫描（SS-OCT）、自适应光学眼底成像、静态阈值视野、全视野和多焦视网膜电图（ERG）检查，以及全身其他系统检查。采集受检者外周静脉血，提取全基因组DNA。应用遗传性视网膜疾病试剂盒PS400对DNA进行测序，对可疑致病突变位点进行Sanger验证及家系共分离分析。参照美国医学遗传学和基因组学学会（ACMG）指南对突变位点致病性进行分析。通过GERP++、Clustal Omega、Weblogo分析软件明确该基因突变位点在不同物种间的保守性。结果:2例患者均为男性，年龄分别为21、29岁。患者右眼和左眼BCVA分别为0.7、0.4和0.3、0.4。全视野、多焦ERG检查，视锥细胞、视杆细胞功能降低，以视锥细胞功能下降更甚。SS-OCT检查，黄斑外核层变薄，椭圆体带及嵌合体带光反射信号减弱。自适应光学眼底成像检查，黄斑中心凹10°视角内视锥细胞排列紊乱、密度降低，部分区域视锥细胞萎缩透见视网膜色素上皮细胞。全身其他系统检查未见明显异常。基因检测结果显示，2例患者均携带 CEP290 c.950T> A（p.Leu317*）（M1）、c.4144_4149del（p.Tyr1382_Glu1383del）（M2）复合杂合变异。其父亲、母亲分别携带M2、M1。M1、M2分别为新发现无义突变、新发现缺失突变，在人群基因频率数据库、ExAC数据库、千人基因组计划数据库中未见。M1被Mutation Taster、CADD软件预测为有害，GERP++显示其影响的氨基酸高度保守；根据ACMG指南评为疑似致病性变异。M2为临床意义未明变异。先证者父母临床表型未见明显异常。Sanger测序验证，符合家系共分离。 结论:CEP290基因突变导致的单纯CORD患者在视锥细胞结构异常、密度下降，视锥、视杆细胞功能下降时，仍保留较好的视力。 CEP290基因M1、M2分别为新发现无义突变、新发现缺失突变，扩大了单纯CORD的致病基因谱。

成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关蛋白(CRISPR associated proteins,Cas)系统是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御系统,可用来对抗入侵的病毒及外源DNA.随着技术的不断进展,研究者发现CRISPR/Cas9技术可用于靶向插入、替换或敲除真核细胞基因.研究者运用CRISPR/Cas9基因组编辑技术,发现了PAX6在角膜中的过度表达可导致先天性角膜上皮损伤,进一步加深了关于KRT12突变对Meesmann角膜上皮营养不良的致病机制的研究.研究还发现PAX6可通过对GJA8基因以及αA晶状体基因的敲除来进行先天性白内障动物模型的构建,有利于未来应用于先天性白内障的鉴别和病理分析.此外,研究者应用CRISPR/Cas9基因组编辑技术进一步证实了RHOS334基因突变的RHO等位基因、P23H突变的RHO基因、Y347X突变的Pde6b基因以及突变型RP9等位基因与视网膜色素变性的相关性,为突变型KCNJ13基因、突变型CEP290基因与Leber先天性黑矇的相关性提供了证据支持.利用该技术对VEGFR2基因以及TXNIP基因进行基因编辑可为眼内新生血管疾病提供新的治疗靶点,同时该技术在增生性玻璃体视网膜病变以及视网膜母细胞瘤的致病基因研究和动物模型构建中也发挥了重要的作用.本文对CRISPR/Cas9基因组编辑工具酶的发展历程、分子特点和作用机制进行总结,并概述了当前CRISPR/Cas9技术在眼科疾病研究中的进展及应用.

目的 通过报道1例Joubert综合征患儿的临床资料、基因检查结果,结合文献复习,为该病的诊断和遗传咨询提供依据.方法 对湖南省儿童医院诊断为Joubert综合征的1例患儿进行临床资料收集,提取患儿及其父母外周血基因组DNA,采用Sanger测序对相关基因进行DNA测序.检索1952年1月～2019年6月PubMed及万方中文文献数据库,以关键词“Joubert syndrome”及“Joubert综合征”进行搜索.结果 患儿男,5月,因“至今竖头不能、双眼震颤”入院,患儿有发育迟缓,肌张力低下,眼部共济失调,头MRI提示“中线裂征”,患儿基因检测到CEP290 c.5611_5614delCAAA p.(Gln1871fs)和CEP290c.1825-2A＞G两个杂合致病突变,分别遗传自父亲和母亲.共检索到英文病例文献195篇,中文文献55篇.截至目前,国外报道约有200余例,国内报道70余例.报道的病变多发生于后颅窝、以小脑蚓部缺如或发育不全为主要特征的发育畸形,常伴有小头畸形、多指、视网膜缺损或视网膜发育不良和多囊肾;纯合子发病为其显著特征.现在已确认30余种与该病有关的纤毛/基质体基因突变.结论 CEP290基因c.5611_5614delCAAA p.(Gln1871fs)和CEP290 c.1825-2A＞G复合杂合突变是导致患儿Joubert综合征的分子病因.c.5611_5614delCAAA p.(Gln1871 fs)突变为移码突变,文献报道在患者中检测到该突变,故认为此突变为致病突变;c.1825-2A＞G杂合突变为一个剪接位点突变,未见相关文献报道,经初步生物信息学分析(NetGene2 Server),其明显影响mRNA剪接,且ESP6500、千人基因组、HGMD和dbSNP数据库均未见收录,根据ACMG/AMP 2015评级标准,结果为致病性的(PVS1,PM2,PM3,PP3).Mutation Taster软件预测为致病突变.

孕妇,22岁,孕28周+2,因"孕24周产前超声提示胎儿小脑蚓部显示不清"就诊;12年前诊断为先天性小脑蚓部发育不全[又称朱伯特综合征(Joubert syndrome,JS)],幼儿期肌张力低下,发育迟缓,眼球震颤斜视,智力低下;无特殊家族史;与其夫及胎儿基因检测均为CEP290基因杂合突变.MRI:孕妇小脑下蚓部未显示,双侧小脑半球相邻中线不连续,轴位见"中线裂"征(图1A),第四脑室扩大,形态异常,小脑上脚增厚延长,轴位表现为"臼齿"征(图1B);矢状位显示小脑上脚垂直脑干,骑跨于第四脑室上部;胎儿颅后窝枕大池无明显增宽,未见小脑下蚓部,双侧小脑半球不连接,轴位小脑内见"臼齿"征(图1C)和"中线裂"征(图1D),矢状位示小脑上脚垂直脑干;提示孕妇及胎儿JS.于孕30周终止妊娠.

目的 本文利用二代测序(Next-generation sequencing,NGS)技术对上行型及下行型鼻咽癌基因突变特征进行分析,寻找两者间的差异,探讨高频突变基因与鼻咽癌侵袭及局部区域淋巴结转移的相关性.方法 收集2014年1月—2018年12月于贵州省人民医院确诊的鼻咽癌患者的肿瘤组织样本40例(上行型及下行型鼻咽癌各20例),进行DNA提取,采用Illumina测序平台对400个肿瘤相关基因进行捕获测序,检测突变情况,测序结果结合相关临床资料进行分析.结果 在40例鼻咽癌病理组织标本中,检测到ABCA13、CACNA1F、CELSR2、中心体蛋白170B(Centrosomal protein,CEP170B)基因在下行型鼻咽癌中突变高于上行型鼻咽癌;ABCC2、ALPK2、ASB15、ASRGL1、ATXN2L、BCL9L、C5orf42、CCDC88A、CEBPZ、CELSR3、CEP290、COL4A2、COL6A5、LGR5、LSR、SPEG基因在上行型鼻咽癌中突变高于下行型鼻咽癌.其中CEP170B在下行型鼻咽癌中突变率最高,其突变率为57％;上行型鼻咽癌组与下行型鼻咽癌组肿瘤突变负荷及肿瘤异质性差异均无统计学意义.结论 CEP170B基因在下行型鼻咽癌组高频率突变,因下行型鼻咽癌易发生淋巴结广泛多处转移,结果提示CEP170B基因可能与鼻咽癌发生局部区域淋巴结转移密切相关,可能成为鼻咽癌临床治疗的潜在靶点.

目的 观察胎儿Meckel-Gruber综合征的超声表现.方法 回顾性分析5胎Meckel-Gruber综合征胎儿的产前超声表现、基因检测结果、病理结果及引产后表现.结果 5胎Meckel-Gruber综合征胎儿均经产前超声明确诊断,诊断孕周11+6～21+6.产前超声5胎均表现为脑膜(脑)膨出,4胎多囊性肾发育不良,4胎多指(趾);伴发异常表现包括枕部颅骨缺损3胎,脑积水、Blake囊肿、小眼畸形、脊髓圆锥低位、肢体短小、胫骨短小并成角畸形、足内翻、羊水过少、无羊水各1胎.2胎接受基因检测,1胎结果为CEP290基因c.4240del和CEP290基因c.3777-3778del杂合突变,另1胎为MKS3基因c.1365C＞T存在纯合突变.孕妇均选择终止妊娠,引产后大体标本所见与产前超声表现相符.对1胎引产后标本进行尸检,发现双侧多囊性肾发育不良.结论 Meckel-Gruber综合征胎儿超声表现具有特征性,产前超声可于早孕期明确诊断.

特发性低促性腺激素性性腺功能减退症(idiopathic hypogonadotropic hypogonadism,IHH)是由于促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)缺乏或作用缺陷引起以性腺发育不良为特征的内分泌罕见病.依据是否并发嗅觉障碍可以分为嗅觉正常特发性低促性腺激素性性腺功能减退症(normosmic isolated hypogonadotropic hypogonadism,nIHH)和嗅觉障碍的卡尔曼综合征(Kallmann syndrome,KS).本研究收集并分析了1例nIHH散发病例的临床资料.全外显子测序证实患儿同时携带FGFR1基因变异(c.2008G>A,p.E670K)和遗传于其母亲的CEP290基因变异(c.964G>A,p.D322N).生物信息学分析发现FGFR1基因突变(c.2008G>A)改变FGFR1蛋白TK2结构域,影响FGFR1受体的功能及下游细胞信号转导通路的激活.CEP290基因(c.964G>A)可能影响GnRH神经元的正确迁徙途径导致IHH,CEP290蛋白与FGFR1蛋白之间存在相互作用.本研究结果扩展了IHH致病基因表达谱,为探究IHH的致病机制提供了新的方向,并为该类疾病的临床精准诊疗提供了借鉴和参考.