目的:分析环腺苷酸反应元件结合蛋白3样蛋白1(CREB3L1)在骨肉瘤中的表达，探究CREB3L1在骨肉瘤中的作用及临床意义。方法:收集2019年9月至2021年12月于郑州大学第一附属医院骨科住院并接受手术治疗的骨肉瘤患者组织5例，采用转录组测序分析差异表达基因；实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测CREB3L1在另外12对匹配的骨肉瘤和癌旁组织中的表达；IHC验证CREB3L1表达；采用Kaplan-Meier方法分析公共数据中骨肉瘤队列中CREB3L1和患者预后的关系。组间比较采用 t检验。 结果:对临床采集的5对匹配骨肉瘤和正常骨组织进行转录组测序分析。比较分析共发现1 809个差异表达基因(|FC|>1.5， P<0.01)，其中有1 111个基因在骨肉瘤组织中表达升高，697个基因在骨肉瘤组织中表达下调；基因富集分析结果显示，差异表达的基因主要涉及细胞外基质组织、胶原蛋白分解代谢、细胞黏附等信号通路。参与胶原蛋白生物合成、修饰和降解，细胞外基质胶原纤维形成等多个通路的基因在骨肉瘤中显著富集，其中CREB3L1等在骨肉瘤中表达升高明显。RT-qPCR分析匹配的骨肉瘤及对应正常骨组织中CREB3L1的mRNA表达表明( n＝12)，大部分标本中(9/12)CREB3L1在骨肉瘤中的表达明显高于对应的正常骨组织(4.408±3.230比1.000±0.000， t＝2.256， P<0.05)；IHC表明，CREB3L1在骨肉瘤细胞核与细胞质的表达高于正常骨组织(细胞质：2.750±1.290比1.750±0.683， t＝2.739， P<0.05；细胞核：2.125±0.806比1.250±0.775， t＝3.130， P<0.01)；Kaplan-Meier生存分析表明，CREB3L1的表达与骨肉瘤患者的总体生存率、无转移生存率负相关( P<0.01， P<0.001)；通过比较有和无肺转移患者病例中CREB3L1细胞核IHC评分，CREB3L1在有肺部转移肿瘤细胞核内表达量高于非转移者(2.500±0.527比1.700±0.949， t＝2.331， P<0.05)。 结论:CREB3L1在骨肉瘤中表达升高且与患者较差的生存预后密切相关。

目的:评价预输注青年大鼠血浆对七氟烷诱发老龄大鼠认知功能障碍的影响及细胞外调节蛋白激酶(ERK)-环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)信号通路在其中的作用。方法:SPF级健康雄性Wistar大鼠120只，18月龄，体重550~650 g，采用随机数字表法分为4组( n＝30)：对照组(C组)、七氟烷麻醉组(S组)、青年大鼠血浆组(P组)和ERK抑制剂SL327组(SL组)。P组和SL组尾静脉注射经过处理的3月龄青年大鼠血浆100 μl/次，C组和S组尾静脉注射等容量生理盐水，2次/周，共4周。注射完毕后S组、P组和SL组大鼠吸入3%七氟烷麻醉3 h，麻醉前SL组尾静脉注射ERK抑制剂SL327 50 mg/kg。于麻醉前1 d和麻醉后3、7 d行Morris水迷宫实验评估大鼠认知功能；随后处死大鼠分离海马组织，采用Western blot法测定磷酸化ERK(p-ERK)、磷酸化CREB(p-CREB)、突触蛋白、突触素Ⅰ和突触囊泡蛋白的表达水平，透射电镜下观察海马神经元超微结构并记录突触数量。 结果:与C组比较，其余3组大鼠麻醉后各时点逃避潜伏期延长，穿越原平台次数减少，海马p-ERK、p-CREB、突触蛋白、突触素Ⅰ和突触囊泡蛋白的表达下调，突触数量减少( P<0.05)。与S组比较，P和SL组大鼠麻醉后各时点逃避潜伏期缩短，穿越原平台次数增加，海马p-ERK、p-CREB、突触蛋白、突触素Ⅰ和突触囊泡蛋白的表达上调，突触数量增加( P<0.05)。与P组比较，SL组大鼠麻醉后各时点逃避潜伏期延长，穿越原平台次数减少，海马p-ERK、p-CREB、突触蛋白、突触素Ⅰ和突触囊泡蛋白的表达下调，突触数量减少( P<0.05)。 结论:预输注青年大鼠血浆减轻可减轻七氟烷诱发老龄大鼠认知功能障碍，其机制与激活ERK-CREB信号通路，改善海马突触可塑性有关。

目的:探究cAMP反应元件结合蛋白3样蛋白1(CREB3L1)在胃癌中的表达及临床意义。方法:收集2019年1月—2020年12月于兰州大学第二医院行外科手术切除的97例胃癌患者为研究对象，其中男性75例，女性22例，年龄27~78岁，平均年龄(57.95±9.27)岁，中位年龄57岁。采用免疫组化方法检测CREB3L1在胃癌组织和匹配的癌旁组织的表达水平，利用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测胃癌和癌旁组织中CREB3L1表达水平，应用统计学方法分析CREB3L1在胃癌患者癌组织的表达水平与肿瘤细胞分化程度、肿瘤大小、浸润深度、TNM分期之间的关系，并利用Logistic回归分析研究影响胃癌发生的危险因素，探究CREB3L1表达水平在胃癌中的临床意义。结果:通过免疫组化结果显示，CREB3L1蛋白主要在细胞核中表达。胃癌组织中阳性率为17.5%(17例)，低于配对的癌旁正常组织的阳性率84.5%(82例)，差异有统计学意义( χ2＝87.15， P<0.001)；通过qRT-PCR方法检测胃癌和癌旁组织细胞中CREB3L1表达情况，结果表明CREB3L1在癌旁组织中表达水平显著高于癌细胞中的表达，差异有统计学意义( P<0.05)；胃癌患者的癌组织中CREB3L1的阳性表达率低，其表达水平与胃癌患者肿瘤的分化程度、肿瘤大小、浸润深度及TNM分期相关( P<0.05)，而与Lauren分型、肿瘤位置等无关( P>0.05)；Logistic回归分析结果显示，胃癌患者的癌组织中CREB3L1的阳性表达水平与胃癌患者肿瘤的分化程度具有相关性( P<0.05)。 结论:CREB3L1在胃癌组织中表达减低，并与患者肿瘤组织的分化程度、肿瘤大小、浸润深度及TNM分期有关，对胃癌患者早期诊断具有重要价值。

目的:探讨长脉宽1064 nm Nd∶YAG激光照射兔耳软骨后，导致兔耳软骨重塑的分子作用机制。方法:将33只兔按照随机数表法分为6组，分别用于以下实验：筛选激光能量(6只),观察激光照射术后即刻(6只)、1周(6只)、3周(6只)、6周(6只)兔耳软骨组织的变化，以及转录组测序和样本验证(3只)。采用自身对照研究，左耳为不做处理，为正常对照侧；右耳进行激光照射(照射侧)。(1)激光能量筛选：使用长脉宽1064 nm Nd∶YAG激光以不同能量密度(50、60、70、80、90、100 J/cm 2)照射6只兔耳右侧软骨后，取双侧厚度一致、相同规格、去除皮肤及软骨膜的软骨，进行组织学切片HE染色，观察软骨细胞的变化，确定最适宜塑形的激光能量密度(简称最适能量密度)。(2)兔耳软骨组织学观察：采用最适能量密度的激光照射24只兔右耳，分别于术后即刻及1、3、6周取材双侧软骨进行组织学观察(HE、Masson和天狼星红染色)。(3)转录组测序和样本验证：采用最适能量密度的激光照射3只兔右耳，照射后6 h内取下兔耳右侧软骨组织进行混合，设为激光照射组；取左耳相同部位、等体积的软骨组织，设为空白对照组，进行转录组RNA测序，并采用定量聚合酶链式反应(qPCR)和蛋白质印迹法检测相关基因和蛋白的表达。 结果:(1)经50~100 J/cm 2不同能量密度的激光照射后，HE染色显示，激光能量密度为80 J/cm 2时能使软骨细胞有改变但未发生空泡变形及凝固性坏死，损伤程度适宜。(2)80 J/cm 2的激光照射后，组织学观察显示，术后即刻出现激光辐射带，辐射带上软骨细胞整体形态拉长，呈梭形细胞样改变，基质染色深，折光明显，Ⅱ型胶原相对增多，1周时辐射带变浅，细胞大小较前恢复；3周到6周时辐射带周围基质染色又逐渐加深，整体形态又拉长。(3)转录组RNA测序发现：激光照射组与空白对照组相比，有198个差异表达基因(70个基因上调、128个基因下调)。通过进一步筛选和研究，激光照射组中CREB3L2基因表达上调。qPCR结果显示，激光照射组中CREB3L2 mRNA相对表达量明显高于空白对照组，差异有统计学意义( P<0.01)；蛋白质印迹法检测显示，CREB3L2蛋白相对表达量高于空白对照组，且具有时间依赖性，差异有统计学意义( P<0.01)。 结论:长脉宽1064 nm Nd∶YAG激光照射兔耳软骨后，上调了CREB3L2基因的表达，引起软骨细胞重排及增殖，导致耳软骨形态和生物力学发生改变。

目的:探讨白细胞介素-4(IL-4)基因组蛋白乙酰化修饰水平改变及其在川崎病(KD)发病机制中的作用。方法:选取2016年10月至2018年12月在深圳市儿童医院就诊的KD患儿36例为研究对象，同年龄健康儿童28例作为对照组。KD患儿分别于急性期及静脉用丙种球蛋白(IVIG)治疗有效后4～5 d取血备检。采用染色质免疫共沉淀-荧光定量PCR检测外周血CD4 ＋ T淋巴细胞IL-4基因启动子、增强子Va组蛋白H4乙酰化和p300、CREB结合蛋白(CBP)水平；流式细胞术检测外周血Ⅱ型辅助性T淋巴细胞(Th2)(CD4 ＋ IL-4 ＋)比例及CD4 ＋ T淋巴细胞中磷酸化信号转导及转录活化因子6(pSTAT6)、GATA结合蛋白3(GATA3)、活化T细胞核因子1(NFAT1)、Ⅱ型转化生长因子β受体(TGF-βRⅡ)、磷酸化L型氨基酸转运蛋白1(pLAT1)蛋白表达水平；荧光定量PCR检测CD4 ＋ T淋巴细胞IL-4、IL-5、IL-13、IL-4受体α(IL-4Rα)、Ⅰ型转化生长因子β受体(TGF-βRⅠ)、性别决定区Y框蛋白4(SOX4) mRNA表达水平；酶联免疫吸附试验测定血浆IL-4、转化生长因子β(TGF-β)水平。 结果:1．KD患儿Th2细胞比例、功能相关分子(IL-4、IL-5和IL-13)表达及IL-4基因启动子、增强子Va组蛋白乙酰化水平均明显高于对照组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)，其中冠状动脉损伤组(CAL)前述指标均高于无冠状动脉损伤组(NCAL)，差异均有统计学意义(均 P<0.05)，经IVIG治疗后显著降低，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。2.与对照组比较KD患儿外周血CD4 ＋ T淋巴细胞p300、CBP与IL-4基因启动子、增强子Va结合水平明显上调，差异均有统计学意义(均 P<0.05)，且p300与IL-4基因启动子、增强子Va结合水平与后者表达均呈正相关( r＝0.72、0.43，均 P<0.05)，经IVIG治疗后呈不同程度下降，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。其中CAL组p300、CBP与IL-4基因启动子、增强子Va结合水平明显高于NCAL组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。3.与对照组比较，KD患儿血浆IL-4水平及CD4 ＋ T淋巴细胞IL-4Rα/STAT6/GATA-3、pLAT1/NFATc1表达显著增高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)，血浆TGF-β水平及下游信号分子TGF-βRⅡ/TGF-βRⅠ/SOX4表达明显下调，差异均有统计学意义(均 P<0.05)，其中CAL组血浆IL-4水平及CD4 ＋ T淋巴细胞IL-4Rα/STAT6/GATA-3、pLAT1/NFATc1表达均高于NCAL组，血浆TGF-β水平及下游信号分子TGF-βRⅡ/TGF-βRⅠ/SOX4表达低于NCAL组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)，经IVIG治疗后呈不同程度的回调，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:IL-4基因组蛋白H4过度乙酰化可能是导致KD患儿免疫功能异常的重要原因之一。

目的:探讨褪黑素在小鼠放射性肠损伤作用中的全基因体表达图谱变化。方法:对C57BL/6J雄性小鼠按10 mg/kg体重进行腹腔注射褪黑素，1次/d，连续5 d，然后，对小鼠腹部进行14 Gy γ射线照射。照射后3 d收集小鼠小肠组织，进行DNA微阵列检测，对小肠组织差异基因进行基因本体论(GO)注释及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析。结果:与对照组相比，照射前给药组小鼠差异基因中上调基因584个，下调基因538个。照射组和照射前给药组小鼠取交集的差异基因中，照射前给药组特有的上调基因324个，下调基因246个。这些差异基因的GO注释分析显示，照射前给药组排名前15的显著富集的生物过程主要包括自噬体组装(GO：0000045)、自噬体组织(GO：1905037)和急性炎症反应调节(GO：0002673)。其中，ATG12、ATG16L2和AMBRA1基因参与自噬体组装和自噬体组织，C3、CPN1、CD55、CFP、CNR1、C1QA、C2和CREB3L3基因参与急性炎症反应调节。这些差异基因参与的KEGG通路分析显示，照射前给药组排名前15的显著富集的通路主要包括O-聚糖生物合成(hsa00512)、鞘糖脂生物合成(hsa00603)、细胞外基质-受体互作(hsa04512)和不饱和脂肪酸生物合成(hsa01040)。qRT-PCR验证显示，照射前给药组参与自噬生物过程中的ATG12和ATG16L2基因的表达量较照射组显著增加( t＝2.40、4.35, P<0.05)。 结论:与自噬和急性炎症反应相关生物过程中的差异基因，以及参与不饱和脂肪酸生物合成的通路，可能参与褪黑素在辐射诱导的放射性肠损伤中的作用。

目的:评价细胞外信号调节激酶(ERK1/2)/环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)/脑源性神经营养因子(BDNF)信号通路在右美托咪定抑制丙泊酚致胎鼠离体海马神经元凋亡中的作用。方法:将孕16 d SD大鼠处死，取胎鼠海马神经元，体外培养原代海马神经元至第7天，采用随机数字表法分为9组( n＝12)：对照组(C组)、脂肪乳剂组(I组)、二甲基亚砜组(DMSO组)、右美托咪定组(D组)、丙泊酚组(P组)、丙泊酚+右美托咪定组(PD组)、PD98059+丙泊酚+右美托咪定组(PDP组)、MH89 +丙泊酚+右美托咪定组(HDP组)和KG501+丙泊酚+右美托咪定组(KDP组)。C组不做任何处理；I组加入20%脂肪乳剂，孵育30 min；DMSO组加入0.25%DMSO，孵育30 min；D组加入右美托咪定，终浓度10 μmol/L，孵育30 min；P组加入丙泊酚，终浓度100 μmol/L，孵育3 h；PD组加入右美托咪定，终浓度10 μmol/L，孵育30 min，再加入丙泊酚，终浓度100 μmol/L，继续孵育3 h；PDP组、HDP组和KDP组分别加入25 μmol PD98059(p-ERK1/2抑制剂)、10 μmol H89(p-CREB抑制剂)、25 μmol KG501(CREB抑制剂)孵育30 min，再加入右美托咪定，终浓度10 μmol/L，孵育30 min，最后加入丙泊酚，终浓度100 μmol/L，继续孵育3 h。透射电镜下观察细胞超微结构，采用流式细胞术检测神经元凋亡情况，qRT-PCR法检测ERK1/2、CREB和BDNF mRNA的表达，Western blot法检测p-ERK1/2、CREB、p-CREB、BDNF及cleaved-caspase-3的表达。 结果:与C组比较，P组、PD组、PDP组、HDP组和KDP组神经元凋亡率升高，p-ERK 1/2和p-CREB表达下调，cleaved-caspase-3表达上调，P组、PDP组、HDP组和KDP组BDNF表达下调( P<0.05)；与P组比较，PD组神经元凋亡率降低，p-ERK1/2、p-CREB和BDNF表达上调，cleaved-caspase-3表达下调( P<0.05)；与PD组比较，PDP组、HDP组和KDP组神经元凋亡率升高，p-ERK1/2、p-CREB和BDNF表达下调，cleaved-caspase-3表达上调( P<0.05)。 结论:ERK1/2/CREB/BDNF信号通路参与了右美托咪定抑制丙泊酚致胎鼠离体海马神经元凋亡的过程。

目的:评价蛋白激酶A(PKA)-环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)信号通路在七氟烷减轻CPB诱发大鼠认知功能障碍其中的作用。方法:健康雄性SD大鼠40只，4月龄，体重300~350 g，采用随机数字表法分为4组( n＝10)：对照组(C组)、CPB组、CPB+七氟烷组(CS组)和CPB+七氟烷+PKA抑制剂H89组(CSH组)。CSH组侧脑室注射H89 5 μl后，CS组和CSH组大鼠暴露于2.4%七氟烷中1 h，然后CPB组、CS组和CSH组建立无血预充心脏不停跳CPB模型60 min。于CPB结束后2 d时采用旷场试验评估大鼠自主运动能力。于CPB结束后3 d时采用Morris水迷宫实验检测大鼠认知功能。水迷宫结束后断头取脑，分离海马组织，采用流式细胞术检测神经元凋亡率，Western blot法检测PKA、磷酸化CREB(p-CREB)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。 结果:4组旷场试验运动速度、路程及中心停留时间比较差异无统计学意义( P>0.05)。与C组比较，其余3组逃避潜伏期延长，穿越原平台次数减少，原平台象限停留时间缩短，海马神经元凋亡率升高，PKA、p-CREB和BDNF表达下调( P<0.05)；与CPB组比较，CS组逃避潜伏期缩短，穿越原平台次数增加，原平台象限停留时间延长，海马神经元凋亡率降低，PKA、p-CREB和BDNF表达上调( P<0.05)，CSH组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)；与CS组比较，CSH组逃避潜伏期延长，穿越原平台次数减少，原平台象限停留时间缩短，海马神经元凋亡率升高，PKA、p-CREB和BDNF表达下调( P<0.05)。 结论:七氟烷可通过激活PKA-CREB信号通路，减轻海马神经元凋亡，从而减轻CPB诱发大鼠认知功能障碍。

目的:评价p38丝裂原活化蛋白激酶/cAMP反应元件结合蛋白(p38 MAPK/CREB)信号通路在川芎嗪减轻脓毒症相关性脑病小鼠海马炎症反应中的作用。方法:健康雄性C57BL6小鼠60只，体重24~27 g，采用随机数字表法分为4组( n＝15)：假手术组(Sham组)、脓毒症组(Sep组)、川芎嗪组(TMP组)和p38 MAPK抑制剂SB203580组(SB组)。采用盲肠结扎穿孔法制备小鼠脓毒症相关性脑病模型。于模型制备前3 d时TMP组腹腔注射川芎嗪10 mg/kg，1次/d，SB组于模型制备后30 min时腹腔注射SB203580 2.0 mg/kg，Sham组和Sep组腹腔注射等容量生理盐水。于术后1 d时行Morris水迷宫实验测试认知功能，记录逃避潜伏期和靶象限活动时间比率。于水迷宫测试结束后处死小鼠取海马组织，采用ELISA法测定L-1β、TNF-α和IL-6含量；采用Western blot法测定p38 MAPK、GSK3和CREB磷酸化水平及BDNF的表达。 结果:与Sham组比较，Sep组、TMP组和SB组逃离潜伏期延长，靶象限活动时间比率降低，海马IL-1β、TNF-α和IL-6含量升高，p38 MAPK磷酸化水平升高，GSK3和CREB磷酸化水平降低，BDNF表达下调( P<0.05)；与Sep组比较，TMP组和SB组逃离潜伏期缩短，靶象限活动时间比率升高，海马IL-1β、TNF-α和IL-6含量降低，海马p38 MAPK磷酸化水平降低，GSK3和CREB磷酸化水平升高，BDNF表达上调( P<0.05)；与TMP组比较，SB组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:p38 MAPK/CREB信号通路参与了川芎嗪减轻脓毒症相关性脑病小鼠海马炎症反应的过程。

目的:探讨左旋肉碱(L-carnitine，LCAR)对慢性脑低灌注大鼠认知功能障碍的保护作用和机制。方法:90只3~4月龄雄性SPF级SD大鼠按照随机数字表法分为4组：假手术对照组(SHAM组， n＝15)、假手术左旋肉碱组(LCAR组， n＝25)、双侧颈总动脉结扎组(2VO组， n＝25)、双侧颈总动脉结扎+左旋肉碱组(2VO+LCAR组， n＝25)。采用双侧颈总动脉结扎法建立慢性脑低灌注模型，假手术组只分离血管，不结扎；LCAR组和2VO+LCAR组在手术后按照300 mg·kg -1·d -1的剂量连续给予左旋肉碱腹腔注射给药，共注射30 d。左旋肉碱干预30 d后，用Morris水迷宫实验检测大鼠的空间学习和记忆能力，用化学发光法检测海马组织ATP水平，通过透射电镜观察海马神经元的线粒体结构和突触结构，对线粒体损伤程度进行评分，计数和测算囊泡密度，用Western blot法检测海马组织的N-甲基-D-天冬氨酸受体功能亚单位(N-methyl-D-aspartate receptor subunit 2A or 2B，NR2A/B)、突触后致密蛋白95(postsynaptic density 95，PSD95)水平，用免疫荧光观察转录因子环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP response element-binding protein，CREB)在脑组织中的分布和表达水平。采用SPSS 16.0软件进行统计分析，大鼠水迷宫7 d重复学习训练的逃避潜伏期数据采用重复测量方差分析，其他多组间数据比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用Dunnett's t检验。 结果:(1)Morris水迷宫实验结果显示，4组大鼠逃避潜伏期的分组与时间的交互作用不显著( F＝1.4， P>0.05)，但时间主效应和组别主效应均显著( F＝21.6，15.2，均 P<0.05)。在第3~7天的平台位置学习训练中，2VO组大鼠逃避潜伏期长于SHAM组和2VO+LCAR组(均 P<0.05)。大鼠短期记忆检测结果显示，2VO组大鼠逃避潜伏期长于SHAM组和2VO+LCAR组(均 P<0.05)；2VO大鼠的平台区域穿梭次数和滞留时间均少于SHAM组和2VO+LCAR组(均 P<0.05)。(2)海马组织ATP水平结果显示，4组大鼠海马组织的ATP绝对水平和相对水平均差异有统计学意义( F＝14.6，13.2，均 P<0.05)。2VO组大鼠海马组织ATP水平低于SHAM组和2VO+LCAR组(均 P<0.05)。电镜观察线粒体形态显示，2VO组大鼠海马组织线粒体损伤的Flameng评分[(2.82±0.17)分]高于SHAM组[(0.25±0.07)分]和2VO+LCAR组[(1.76±0.09)分](均 P<0.05)。(3)2VO组大鼠海马神经元突触囊泡密度[(289.09±22.41)个/μm 2]显著低于SHAM组[(497.49±28.89)个/μm 2]和2VO+LCAR组[(401.23±45.09)个/μm 2](均 P<0.01)。Western blot结果显示，2VO海马组织突触蛋白NR2A/B、PSD95和CREB相对水平低于SHAM组和2VO+LCAR组(均 P<0.05)。免疫荧光结果显示，2VO海马亚区和皮质CREB表达相对水平低于SHAM组和2VO+LCAR组(均 P<0.01)。 结论:左旋肉碱治疗能够改善慢性脑低灌注大鼠空间学习和记忆功能障碍，可能与促进ATP生成和保护线粒体形态，以及促进突触囊泡合成和突触蛋白表达有关。