目的:解析一个限制性心肌病家系的致病变异。方法:对先证者和两名直系亲属进行全外显子测序，通过GATK3.7软件鉴别潜在的变异，使用snpEff注释变异，参照美国医学遗传学和基因组学学会遗传变异分类标准与指南(ACMG)进行致病性评估，整合Sanger测序和临床表现开展家系内共分离分析。结果:根据ACMG判定 CRYAB c．326A>G (p.Asp109Gly)为致病变异，在家系中基因型与临床表型共分离。先证者罹患合并限制性心肌病、肌病和白内障的多系统性疾病，首发症状为左心房扩大。家系另三名患者确诊限制性心肌病，其中两例男性首发症状是双心房扩大，一例女性首发症状为心室传导阻滞。 结论:CRYAB基因c.326A>G杂合变异是该家系的致病原因，该变异导致合并限制性心肌病、肌病和白内障的多系统性疾病尚未见报道。

目的:探讨婴儿致死性僵直性肌原纤维肌病的临床、骨骼肌病理和遗传学特征。方法:回顾性分析2017年2月至2021年4月深圳市儿童医院诊治的10例确诊为婴儿致死性僵直性肌原纤维肌病患儿的临床表现、实验室检查和基因检测结果。对其中3例患儿实施头颅、骨骼肌磁共振成像(MRI)、肌电图检查，2例实施肌肉活检。结果:患儿分布为东北和华东地区各1例，华南地区8例。10例患儿中，男8例，女2例。患儿之间无血缘关系，出生时均正常。患儿发病年龄为2~12个月。10例患儿主要临床表现为进行性腹直肌(8例)、颈部肌(7例)、后背肌(2例)和肋间肌(1例)僵硬，导致呼吸衰竭。血清肌酸激酶轻度至中度升高(436~5 804 IU/L)(参考范围：24~229 IU/L)。肌电图示复合重复放电，未见肌强直电位发放。股外侧肌和腹直肌活检示肌纤维变性、坏死和空泡变性，未见明显炎症细胞浸润。改良格莫瑞染色部分视野可见红色颗粒状异常沉积物。骨骼肌免疫组织化学染色可见desmin蛋白大量沉积。电镜下可见肌纤维的肌节结构严重紊乱，Z盘破坏及颗粒状沉积物。10例患儿全外显子基因测序均表现为分别来自于父母的 CRYAB基因的c.3G>A，p.Met1？纯合变异，父母均为杂合变异。 结论:腹直肌僵硬等中轴肌受累是婴儿致死性僵直性肌原纤维肌病的临床特征。 CRYAB基因c.3G>A，p.Met1？变异是中国患儿的热点突变。

目的:探讨沉默人类同源配对盒基因6(Pax6)对人晶状体上皮细胞(LECs)的生物学行为和上皮-间质转化(EMT)的作用。方法:将SRA01/04人LECs分为小干扰RNA-Pax6(siRNA-Pax6)组和siRNA阴性对照(siRNA-NC)组，siRNA-Pax6组细胞转染siRNA-Pax6，siRNA-NC组细胞转染无序siRNA。转染后24、48、72 h采用细胞计数试剂盒8法检测细胞存活率；转染后48 h，采用流式细胞术检测细胞凋亡比例和不同细胞周期细胞比例；转染后24 h，采用细胞划痕实验检测细胞迁移率；转染后48 h，采用实时荧光定量PCR检测细胞内Pax6、α-晶状体蛋白A(CRYAA)、α-晶状体蛋白B(CRYAB)、转录因子Sox2及EMT相关分子平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、钙黏附蛋白E(E-cadherin)mRNA相对表达量，采用Western blot法检测各组细胞中Pax6蛋白相对表达量。结果:2个组转染后不同时间点细胞存活率总体比较差异均有统计学意义( F分组＝4.776， P<0.05； F时间＝13.535， P<0.05)，其中转染后48 h和72 h，siRNA-Pax6组细胞存活率均明显低于siRNA-NC组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。与siRNA-NC组比较，siRNA-Pax6组G 0/G 1期细胞比例明显增加，S期细胞比例明显减少，差异均有统计学意义( t＝9.971、-5.063，均 P<0.05)。siRNA-Pax6组细胞迁移率为(19.73±6.07)%，低于siRNA-NC组的(70.56±2.97)%，差异有统计学意义( t＝-7.245， P<0.05)。siRNA-Pax6组细胞中Sox2和α-SMA mRNA相对表达量低于siRNA-NC组，E-cadherin mRNA相对表达量高于siRNA-NC组，差异均有统计学意义( t＝-23.254、-5.294、6.062，均 P<0.01)。siRNA-Pax6组细胞中CRYAA和CRYAB mRNA相对表达量明显高于siRNA-NC组，差异均有统计学意义( t＝5.521、8.270，均 P<0.01)。siRNA-Pax6组细胞中Pax6 mRNA相对表达量为0.27±0.01，低于siRNA-NC组的1.00±0.05，差异有统计学意义( t＝-14.456， P<0.001)；siRNA-Pax6组细胞中Pax6蛋白相对表达量为0.24±0.05，低于siRNA-NC组的1.14±0.10，差异有统计学意义( t＝-4.458， P<0.001)。 结论:沉默Pax6可抑制人LECs的增生及EMT过程，维持人LECs内正常晶状体蛋白的表达。

目的:探讨骨肉瘤组织中肾母细胞瘤过表达基因(NOV)表达量检测及与细胞增殖、迁移的相关性.方法:2014年5月～2017年8月在孝感市中心医院接受手术治疗的骨肉瘤患者的病灶组织及瘤旁正常组织各97例,分别作为骨肉瘤组、正常对照组.采用荧光定量PC R检测不同组织标本中N O V基因、增殖相关基因、侵袭相关基因的表达量,采用Pearson检验评估骨肉瘤组织中NOV基因表达量及其与细胞增殖、迁移的相关性.结果:骨肉瘤组中NOV mRNA的表达量显著低于正常对照组(P<0.05);骨肉瘤组中KISS-1、TAp73 mRNA的表达量低于正常对照组(P<00.5),VCP、FoxM1、RIPK4、STIM1 mRNA的表达量高于正常对照组(P<00.5);骨肉瘤组中DLX1、Sema6A mRNA的表达量低于正常对照组(P<00.5),EFEMP1、GPR56、SOX5、CRYAB mRNA的表达量高于正常对照组(P<0.05).Pearson检验发现,骨肉瘤组织中NOV基因表达量与细胞增殖基因、侵袭基因的表达量直接相关.结论:骨肉瘤组织中NOV基因表达量低于瘤旁正常组织,且具体表达量与肿瘤细胞增殖、侵袭活性直接相关,可作为骨肉瘤恶性程度判断的可靠指标.

[目的]探讨外源基因导入对玉米叶片物理性状的影响,为转基因玉米的安全性评价提供基础资料,也为转基因玉米的科学、有效利用提供依据.[方法]在扬州大学实验农牧场种植大北农转基因(转CryAb和epsps基因)和大北农(对照)、IE09S034转基因(转CryIE基因)和IE09S034(对照)、808-双抗-12-5转基因(转CryAb/cry2Aj和Gloevo-epsps基因)和808瑞丰-1(对照)3对玉米品种,室内测定了不同时期(苗期、穂期和花粒期)各品种叶片的蜡质含量、叶绿素含量、茸毛密度、维管束埋深及Si、K、Ca、S、P和Cl含量.[结果]转基因玉米的叶片中蜡质含量、叶绿素含量和维管束埋深较对应的常规亲本品种大,而叶片茸毛密度则较对应的常规亲本品种小.其中,穗期的大北农、IE09S034和808-双抗-12-5转基因品种叶片蜡质含量分别较对照高17.95％、48.30％和39.31％;IE09S034和808-双抗-12-5转基因品种穗期叶片的维管束埋深分别较对照高13.70％和9.21％,花粒期分别高10.81％和14.47％;IE09S034和808-双抗-12-5转基因品种穗期叶片的叶绿素含量分别较对照高18.11％和13.13％,花粒期分别高16.62％和14.61％;大北农、IE09S034和808-双抗-12-5转基因品种花粒期叶片茸毛密度分别较对照低17.70％、17.43％和17.78％.3个品种的转基因玉米叶表面元素含量均大于相应的对照.其中,与常规亲本相比,穗期大北农转基因品种叶片中Ca和S含量分别高64.71％和61.18％,IE09S034转基因品种叶片中Si、Ca、S、P和Cl含量分别高110.26％、16.67％、44.44％、46.32％和20.00％,808-双抗-12-5转基因品种叶片中Si、Ca、S和P含量分别高34.78％、50.52％、115.47％和20.41％.[结论]外源基因的导入会诱导玉米叶片相关物理性状的改变.

目的:利用DNA探针杂交技术,结合显色探针技术建立一种新型、高灵敏的免疫检测体系,用于早期先天性白内障的筛查.方法:选取3个常染色体显性遗传的先天性白内障家系中患者14例,取静脉血并提取mRNA,建立CRYAB的捕获探针及显色探针.利用DNA探针,通过碱基配对原则形成三明治结构(捕获探针-DNA探针-显色探针)检测入选者的血样.1家系6例患者静脉血利用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测αB-晶状体蛋白.结果:最佳条件下,双特异探针技术可检测到最低浓度的先天性白内障晶状体蛋白的突变基因,各突变位点检测率为99.5％ ～99.7％;ELISA法检测样本αB-晶状体蛋白上调,阳性率为85.9％.双特异探针技术敏感性更高,检测位点更多,ELISA法仅局限于蛋白检测水平,精确性不高.结论:双特异探针检测技术操作简单,灵敏度高,可重复性高,经济实惠,在临床上用于产前诊断、优生优育具有重要的应用价值.

目的 探讨CRYAB基因与先天性白内障的关系.方法 本研究对一个先天性白内障家系进行调查和资料收集,抽取家系所有人和1 00名正常对照者外周静脉血,采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增疾病相关候选基因目的片段,对扩增产物进行双向测序,分析致病基因,预测基因改变对相应蛋白质是否影响.结果 基因测序结果显示CRYAB基因第一外显子区域的第59位碱基发生了C＞G的改变(c.59C＞T),此突变为错义突变,致使翻译的脯氨酸变为精氨酸;该突变使突变位点和附件区域氨基酸疏水性增大,且突变较大可能为有害突变.结论 本次研究发现一个先天性白内障家系中CRYAB c.59C＞G突变,该突变为错义突变,进一步支持了CRYAB基因与先天性白内障的关系.

目的 基于p38 MAPK-CRYAB途径探讨8-O-乙酰山栀子苷甲酸对急性心肌梗死大鼠的影响及作用机制.方法 采用结扎冠状动脉左前降支的方法建立急性心肌梗死大鼠模型,取50只造模成功的雄性SD大鼠随机分为模型组、阳性对照组、8-O-乙酰山栀子苷甲酸低、中、高剂量组,每组10只,另选10只作为空白对照组.空白对照组与模型组均给予等体积生理盐水,阳性对照组给予阿司匹林肠溶片[100 mg/(kg·d)],8-O-乙酰山栀子苷甲酸低、中、高剂量组分别给予8-O-乙酰山栀子苷甲酸[10、20及30 mg/(kg·d)],连续给药14天.检测大鼠心功能;HE染色法观察大鼠心肌组织病理变化;TUNEL法检测心肌细胞凋亡;ELISA检测SOD、LDH、GSH-Px和MDA水平;RT-PCR检测Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA表达;Western blot检测p-p38 MAPK/p38 MAPK和p-CRYAB/CRYAB表达.结果 8-O-乙酰山栀子苷甲酸可显著改善急性心肌梗死大鼠的心功能及心肌组织病理变化(P＜0.05),降低心肌细胞凋亡率(P＜0.05),减轻氧化应激损伤(P＜0.05),上调抑凋亡基因Bcl-2表达,下调促凋亡基因Bax和Caspase-3表达(P＜0.05),促进p38 MAPK和CRYAB磷酸化(P＜0.05),但各组间p38 MAPK和CRYAB蛋白表达无明显变化(P＞0.05).结论 8-O-乙酰山栀子苷甲酸可显著改善急性心肌梗死大鼠心肌损伤症状,上调Bcl-2表达,下调Bax和Caspase-3表达,促进p38 MAPK和CRYAB磷酸化,其作用机制可能与p38 MAPK-CRYAB途径有关.

目的 探讨CRYAB基因变异相关致命性婴儿型肥大型肌原纤维肌病的临床特点及预后.方法 回顾分析2例致命性婴儿型肥大型肌原纤维肌病患儿的临床资料,并结合文献复习.结果 2例患儿均为男性,发病年龄分别为3个月和8个月,均表现为躯干肌肉僵硬,限制性呼吸困难.血肌酸激酶升高,血、尿筛查无显著异常.彩色多普勒超声心动图未见异常.MRI示腹壁肌肉、大腿肌肉等骨骼肌增厚.肌电图示肌强直电位.1例患儿行肌活检示肌源性损害.2例患儿基因检测均显示CRYAB基因c.3 G>A的纯合核苷酸变异,受检者父母均为杂合子;DMPK型基因均未见异常.结论 躯干肌肉强直引起限制性呼吸困难时应行基因检查和肌肉活检,需排除CRYAB基因变异相关致命性婴儿型肥大型肌原纤维肌病.

目的 研究microRNA (miR)-513b-5p对晶状体稳定性调节蛋白αB-crystallin的调节关系,及miR-513b-5p对晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)氧化应激和凋亡调节的下游机制.方法 实时定量PCR(RT-qPCR)和Western blot法分别检测白内障患者和健康志愿者晶状体组织中miR-513b-5p及αB-crystallin的水平.miR-513b-5p拟似物mimic单独转染LEC细胞SRA01/04,或抑制剂和H2O2共处理SRA01/04;另外,mimic与αB-crystallin过表达质粒cDNA3.1-αB-crystallin(c-CRYAB)联合转染SRA01/04,试剂盒检测的细胞凋亡率,RT-qPCR法和Western blot法分别检测miR-513b-5p 的水平及αB-crystallin、活性氧(ROS)和超氧化物歧化酶(SOD)的表达变化,生物信息学分析和荧光素酶报告基因实验研究miR-513b-5p和αB-crystallin的靶向关系.结果 白内障患者晶状体组织中miR-513b-5p的水平显著上调(P＜0.05)和αB-crystallin的表达水平下调(P＜0.05);过表达miR-513b-5p促进SRA01/04凋亡和活性氧ROS分子水平,下调抗氧化分子SOD;抑制miR-513b-5p降低H2O2所诱导的活性氧ROS(P＜0.05);αB-crystallin的表达被miR-513b-5p过表达显著性下调(P＜0.05),miR-513b-5p过表达对细胞凋亡和ROS与SOD水平的调控作用被αB-crystallin过表达显著削弱(P＜0.05).结论 miR-513b-5p通过对αB-crystallin蛋白的负调节从而促进LEC的氧化应激和凋亡.