目的:探讨胆囊结石患者胆囊组织Cajal间质细胞中人类果蝇相关基因(HERG)蛋白的表达及意义。方法:收集解放军总医院肝胆胰外科医学部2018年1月至2020年12月行胆囊切除术的60例胆囊病变患者的胆囊组织，其中男性36例，女性24例，年龄(46.0±14.0)岁。按是否存在胆囊结石分为胆囊结石组和对照组(胆囊息肉、胆囊腺肌症患者)，每组各30例。彩超检测并计算胆囊收缩率。分别切除胆囊颈、体、底部组织做切片，免疫荧光、免疫组化及Western印迹检测HERG蛋白和CD117(Cajal间质细胞标志物)的表达。结果:胆囊结石组胆囊收缩率为(65.8±4.1)%，低于对照组(73.8±5.3)%，差异有统计学意义( t＝4.14， P<0.001)。免疫组化显示HERG蛋白主要分布在胆囊组织的黏膜层，呈棕黄色。Western检测胆囊结石组胆囊底部的HERG蛋白相对表达为(0.293±0.102)，低于对照组(0.694±0.059)，差异有统计学意义( t＝3.38， P＝0.027)。免疫荧光染色显示HERG蛋白主要分布于胆囊上皮Cajal间质细胞中。胆囊结石组胆囊底部Cajal间质细胞中HERG蛋白表达低于对照组，而胆囊颈部和体部Cajal间质细胞中HERG蛋白表达与对照组无明显差异。 结论:胆囊结石患者胆囊组织中均存在Cajal间质细胞和HERG蛋白，胆囊收缩率下降可能与胆囊底部组织Cajal间质细胞中的HERG蛋白表达下降有关。

目的:评价食欲素A对吗啡致小鼠胃肠道功能障碍的影响。方法:SPF级C57B/6小鼠40只，6~8周龄，雌雄各半，体重18~22 g，采用随机数字表法分为5组( n＝8)：对照组(C组)、吗啡组(M组)和吗啡+不同剂量食欲素A组(MOH组、MOM组和MOL组)。C组每天皮下注射生理盐水8 ml/kg，其余4组每天皮下注射吗啡注射液6 mg/kg，同时MOH组、MOM组和MOL组分别每天腹腔注射食欲素A 75、50和25 μg/kg，共10 d。计算每日粪便含水率，取平均值；末次给药后用黑色营养糊灌胃，30 min后检测胃排空率和小肠推进率；眼眶取血标本，采用ELISA法检测血清胃泌素(GAS)浓度；然后处死小鼠，取结肠组织，采用免疫组化法测定结肠Cajal间质细胞特异性标记物c-kit阳性细胞面积，Western blot法检测结肠组织c-kit、P物质(SP)和神经型一氧化氮合酶(nNOS)的表达。 结果:与C组比较，M组粪便含水率、胃排空率、小肠推进率和血清GAS浓度降低，结肠组织c-kit阳性细胞面积减小，c-kit和SP表达下调，nNOS表达上调( P<0.05)；与M组比较，MOH组小肠推进率和血清GAS浓度升高，结肠组织c-kit阳性细胞面积增大，c-kit表达上调，MOM组粪便含水率、胃排空率、小肠推进率和血清GAS浓度升高，c-kit阳性细胞面积增大，c-kit和SP表达上调，nNOS表达下调，MOL组血清GAS浓度升高，c-kit阳性细胞面积增大( P<0.05)。 结论:50 μg/kg食欲素A可有效缓解吗啡致小鼠胃肠道功能障碍，其机制可能与促进GAS分泌、Cajal间质细胞增长和促进SP释放、抑制NO释放有关。

目的:探讨电针对糖尿病胃轻瘫大鼠胃窦Cajal间质细胞（ICC）凋亡的影响。方法:取32只SD大鼠，分为空白对照组、模型组、电针组、胃复安组4组，每组8只。采用血糖仪测量大鼠血糖；酚红灌胃法测量计算胃排空率、小肠推进率；提取胃窦ICC原代细胞培养，用Western blot方法检测B细胞淋巴瘤蛋白质2（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相互作用蛋白（Beclin1）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）的蛋白表达，流式细胞仪检测细胞凋亡率。4组间各指标的比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD法。结果:与空白对照组相比，模型组、电针组和胃复安组血糖水平均上升，胃排空率、小肠推进率均降低，胃窦ICC Bcl-2、Beclin1、Caspase-3的蛋白表达及细胞凋亡率均升高，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与模型组相比，电针组、胃复安组血糖水平均下降，胃排空率、小肠推进率均升高，胃窦ICC Caspase-3的蛋白表达及细胞凋亡率均下降，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与模型组相比，电针组胃窦ICC Bcl-2、Beclin1的蛋白表达均升高（ P<0.01）。与胃复安组相比，电针组胃窦ICC Bcl-2、Beclin1的蛋白表达均升高，Caspase-3的蛋白表达及细胞凋亡率均下降（ P<0.05）。 结论:电针可能通过调节凋亡相关因子Bcl-2、Beclin1、Caspase-3的表达而抑制胃窦ICC的凋亡。

目的 研究枳术颗粒对功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)大鼠的药效及作用机制.方法 复合因素造模法诱导大鼠FD模型,造模成功后给予枳术颗粒治疗2周,观察枳术颗粒对FD大鼠胃残留率、小肠推进率、血清中胃泌素(gastrin,GAS)、胃饥饿素(growth hormone releasing peptide,Ghrelin)、降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)及生长抑素(somatostatin,SS)含量的影响;苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察胃窦组织、十二指肠组织病理变化;利用qRT-PCR检测下丘脑及胃组织中GAS、Ghrelin、CGRP、SSmRNA表达和胃及十二指肠组织中肾上腺素能受体 β1(β1-adrenergic receptor,ADRB1)、生长抑素受体(somatostatin receptor,SSTR)、胃饥饿素-O-乙酰转移酶(ghrelin-O-acyltransferase,GOAT)、胃饥饿素受体(growth hormone secreting hormone receptor,GHSR)、酪氨酸激酶受体(c-kit protooncogene protein,C-kit)、干细胞因子(stem cell factor,SCF)、钙激活氯离子通道蛋白 Anoctamin-1(ANO1)、肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)mRNA表达;利用Western blotting检测胃及十二指肠组织中C-kit、SCF蛋白表达.结果 枳术颗粒可以显著降低FD大鼠胃残留率(P＜0.05),提高小肠推进率(P＜0.01);升高血清中Ghrelin、GAS含量(P＜0.01),降低CGRP、SS含量(P＜0.05、0.01);升高下丘脑及胃窦组织中Ghrelin、GAS mRNA表达水平(P＜0.05、0.01),降低下丘脑及胃窦组织中CGRP、SSmRNA表达水平(P＜0.01);显著升高胃及十二指肠组织SCF、C-kit蛋白表达水平(P＜0.05、0.01),升高胃及十二指肠组织 ADRB1、GOAT、GHSR、SCF、C-kit、ANO1、MLCK mRNA 表达水平(P＜0.05、0.01),降低SSTR mRNA表达水平(P＜0.05、0.01).结论 枳术颗粒可以改善FD大鼠的胃动力异常,其作用机制可能与调节脑肠肽水平、激活SCF/C-kit通路有关.

目的:探讨增液汤对慢传输型便秘(STC)大鼠的作用及其基于MAPK信号研究其对结肠Cajal间质细胞增殖与凋亡作用机制的研究.方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、增液汤组、增液汤+U0126 组.除正常对照组外,其余组别大鼠均灌胃进行盐酸洛哌胺混悬液(2.5 mg/mL)复制STC模型,1 次/d,连续给药 7 d.造模成功后,增液汤(10.2 g/kg)组、增液汤+MAPK信号通路阻滞剂U0126(0.1 mg/kg)组按相应剂量给药.给药 2 w后,测量大鼠体质量、饲料消耗率、排便数量、粪便含水率、首粒黑便排出时间、小肠推进率.采用免疫荧光c-kit+cleaved-Caspase-3 共染检测细胞凋亡,c-kit+EdU共染及c-kit+p-ERK1/2 共染检测结肠Cajal间质细胞增殖.Western Blot检测大鼠结肠Bcl-2、PCNA、p-Raf、p-MEK1、p-ERK1/2 蛋白表达.结果:与正常对照组比较,模型组大鼠体质量、饲料消耗率、排便数量、粪便含水率、小肠推进率及c-kit+EdU、c-kit+p-ERK1/2 共染表达水平显著降低,结肠组织c-kit+cleaved-Caspase-3 共染表达显著升高,首次排便时间显著延长,结肠组织Bcl-2、PCNA、p-Raf、p-MEK1、p-ERK1/2 蛋白表达显著降低(P<0.05).与模型组比较,增液汤组大鼠体质量、饲料消耗率、排便数量、粪便含水率、小肠推进率及结肠组织c-kit+EdU、c-kit+p-ERK1/2 共染表达水平显著升高,c-kit+cleaved-Caspase-3 共染表达显著降低,首次排便时间显著缩短,结肠组织Bcl-2、PCNA、p-ERK1/2 蛋白表达显著升高(P<0.05).结论:增液汤对慢传输型便秘大鼠有显著的改善作用,其机制与基于MAPK信号调控Cajal间质细胞增殖与凋亡的作用有关.

目的:基于促分裂原活化的蛋白激酶(MAPK/MEK)/胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号通路分析健脾消痞方联合推拿疗法对厌食症幼鼠胃肠动力及胃窦Cajal间质细胞自噬的作用机制.方法:无特定病原体(SPF)级SD健康幼鼠50只随机分为健康组、模型组(小儿厌食症模型)、中药组(模型+健脾消痞方干预)、联合组(模型+健脾消痞方+推拿疗法干预),每组10只.另10只大鼠建立小儿厌食症模型给予MEK/ERK信号通路抑制剂PD98059进行注射作为抑制剂组.每2周测量幼鼠体质量和摄食量;比色法测血清淀粉酶水平;放射免疫法测血清胃泌素水平;苏木精-伊红(HE)染色观察病理形态;实时PCR检测Cajal间质细胞标志物氨酸蛋白激酶生长因子受体(c-kit)、微管相关蛋白轻链3(LC3)、自噬基因苄氯素1(Beclin1)基因表达.蛋白印迹检测MEK、ERK1/2、p-MEK、p-ERK1/2蛋白表达.结果:与健康组比较,模型组幼鼠体质量、体质量增长率、摄食量、c-Kit、小肠推进比、血清淀粉酶、血清胃泌素降低,MEK、ERK1/2、LC3、Beclin1、胃内残留水平升高(P＜0.05).在经过中药组及联合组干预后,幼鼠体质量、体质量增长率、摄食量、c-Kit、小肠推进比、血清淀粉酶、血清胃泌素升高,MEK、ERK1/2、LC3、Beclin1、胃内残留水平降低(P＜0.05),且联合组较中药组效果更佳(P＜0.05).联合组与抑制剂组幼鼠蛋白表达比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:健脾消痞方联合推拿可能是通过抑制MEK-ERK1/2信号通路激活,从而抑制胃窦Cajal间质细胞自噬,改善胃肠道功能.

胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GIST)是一种间叶源性肿瘤,1983年MazurClark首次提出此概念,将其定义为起源、生物学行为均不明的胃肠道梭形细胞肿瘤,由未成熟的间充质细胞分化为Cajal(ICC)细胞所形成[1-4].有部分学者认为,这可能与基因KIT或PDGFRA的突变有关,也有少数GIST存在BRAF、RAS家族基因和NF1基因的突变[5-11].其可发生于胃肠道各个部位,以胃和小肠最为多见,也可见于结直肠、盲肠及食管[12].极少部分可发生于腹膜、肠系膜及胰腺等[13],称为"胃肠道外 间质瘤(extra-gastrointestinal stromal tumors,EGIST)".其平均发病年龄在55～60岁,发病性别无明显差异[14].本文描述了 1例骶前EGIST的诊治过程,并结合相关文献进一步探讨.

目的:观察电针对糖尿病胃轻瘫(DGP)大鼠胃肠运动及其胃窦起搏细胞Cajal间质细胞(ICC)超微结构、c-kit受体蛋白表达及干细胞因子(SCF)基因表达的影响,探讨电针治疗DGP的机制.方法:SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、电针穴位组、电针非穴组、胃复安对照组,每组10只.腹腔注射2％链脲佐菌素结合高糖高脂饲料不规则喂养制备DGP模型.电针穴位组电针“足三里”“梁门”“三阴交”,电针非穴组电针“足三里”“梁门”“三阴交”穴位对照点,胃复安对照组予1.7％胃复安药液(1 mL/100 g)灌胃,均每日1次,连续15 d.监测血糖,酚红灌胃法测量大鼠胃排空率及小肠推进率,透射电镜法检测胃窦ICC超微结构,Western blot法、RT-PCR法分别检测大鼠胃窦c-kit蛋白及SCF mRNA表达水平.结果:与空白对照组比较,模型组大鼠血糖显著升高(P＜0.01),胃排空率和小肠推进率显著降低(P＜0.01),ICC呈细胞凋亡样改变,SCF mRNA表达量显著下降(P＜0.01);与模型组比较,电针穴位组大鼠血糖明显降低(P＜0.05),胃排空率及小肠推进率显著升高(P＜0.05,P＜0.01),ICC数目增加,受损超微结构得到修复,SCF mRNA表达量显著升高(P＜0.01);与电针非穴组比较,电针穴位组ICC受损超微结构有所恢复,SCF mRNA表达量明显升高(P＜0.05).各造模组间比较,c-kit蛋白表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论:电针“足三里”等穴可调控DGP大鼠血糖,促进胃肠排空,其作用机制可能与上调SCF mRNA,修复受损ICC超微结构,恢复其起搏功能,进而改善胃肠运动障碍有关.

目的:通过观察舒胃汤对功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)模型大鼠小肠Caal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)中IP3受体(inositol 1,4,5-triphosphate receptor,IP3R),Ry受体(ryanodine receptor,RyR)蛋白及mRNA表达的影响,从钙离子通道调节角度探讨舒胃汤对FD的治疗作用及机制.方法:取Wistar大鼠15只,随机分成空白组、模型组与舒胃汤组(30.68 g·kg-1).模型组与舒胃汤组按复合病因造模法处理21d复制FD模型,灌胃给药14d后取血制备含药血清.取2～3周Wistar乳鼠小肠平滑肌原代ICC细胞,传代培养后分为空白血清组(A组),模型血清组(B组),舒胃汤5％含药血清组(C组),舒胃汤10％含药血清组(D组),舒胃汤15％含药血清组(E组).待细胞融合至60％ ～80％时分别加入对应组别血清,继续孵育24 h.提取细胞蛋白及总RNA,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测IP3R,RyR蛋白表达,实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测IP3R,RyR mRNA表达.结果:Western blot检测发现,与A组比较,B组IP3R-1,IP3R-2,IP3R-3,RyR-1,RyR-2,RyR-3蛋白表达均明显降低(P＜0.01);与B组比较,D,E组IP3R,RyR蛋白表达明显升高(P＜0.05,P＜0.01).Real-time PCR检测发现,与A组比较,IP3R,RyR mRNA表达均明显降低(P＜0.01);与B组比较,D,E组IP3R,RyRmRNA表达明显升高(P＜0.01).结论:舒胃汤可通过上调FD模型大鼠小肠ICC细胞内IP3R,RyR蛋白及mRNA表达,发挥对功能性消化不良疾病的治疗作用.

目的 探讨消化道平滑肌瘤的临床病理特征,以及Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)在消化道平滑肌瘤中的分布特点.方法 收集郑州大学第二附属医院2012年6月至2017年6月147例消化道平滑肌瘤临床及病理资料,光镜下观察HE切片,免疫组织化学及奥辛蓝-沙红染色,Sanger测序检测C-KIT和PDGFRA基因突变状态.结果 患者年龄13～82岁,平均年龄52岁.男女比例接近1:2.发生于食管100例,胃20例,小肠12例,结直肠15例.组织学上卵圆形或梭形肿瘤细胞呈条束状或编织状排列.肿瘤细胞弥漫阳性表达平滑肌肌动蛋白、结蛋白及h-caldesmon,CD117与DOG1阳性且奥辛蓝-沙红染色阴性的分支状细胞散在分布于肿瘤内,该类细胞见于100％(100/100)食管平滑肌瘤、80％(16/20)胃平滑肌瘤、3/12的小肠平滑肌瘤,所占比例1％ ～30％不等,而不存在于结直肠平滑肌瘤中.16例CD117与DOG1阳性且奥辛蓝-沙红染色阴性细胞比例≥20％的平滑肌瘤均未检测到C-KIT及PDGFRA基因突变.结论 ICC普遍存在于食管、胃及小肠平滑肌瘤中,不能因为肿瘤细胞表达CD117与DOG1而误诊为胃肠道间质瘤,必要时可借助分子检测进行鉴别.