目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-148a-3p调控Cullin-5(CUL5)表达对脑胶质瘤细胞生物学功能的作用。方法:实时荧光定量-聚合酶链反应(Real-time PCR)检测胶质瘤细胞(U87、U251、T98G)及正常星形胶质细胞HA1880中miR-148a-3p及CUL5 mRNA表达。胶质瘤细胞U251随机分为miR-148a-3p inhibitor组和miR-148a-3p NC组，脂质体Lipofectamine?3000将miR-148a-3p inhibitor和miR-148a-3p NC转入胶质瘤细胞中，Real-time PCR检测miR-148a-3p表达，水溶性四唑蓝(WST)法检测细胞活力，Tanswell实验检测细胞迁移及侵袭能力，Real-time PCR法及蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中CUL5蛋白及mRNA表达，并进行荧光素酶报告基因分析。组间比较采用 t检验进行分析。 结果:miR-148a-3p inhibitor组(0.31±0.03)中miR-148a-3p表达量低于miR-148a-3p NC组(1.00±0.10， t＝5.479， P<0.05)。miR-148a-3p inhibitor组(0.375±0.037)细胞活力低于miR-148a-3p NC组(0.525±0.051， t＝4.587， P<0.05)；miR-148a-3p inhibitor组细胞克隆数目[(43.52±4.25)个]少于miR-148a-3p NC组[(148.79±14.88)个]( t＝5.147， P<0.05)。miR-148a-3p inhibitor组[(38.47±3.85)个]细胞迁移数目少于miR-148a-3p NC组[(185.59±18.56)个]( t＝5.589， P<0.05)。miR-148a-3p inhibitor组[(41.79±4.18)个]细胞侵袭数目少于miR-148a-3p NC组[(195.69±19.58)个]( t＝6.482， P<0.05)。miR-148a-3p inhibitor＋ CUL野生型质粒的荧光强度(0.55±0.05)低于miR-148a-3p inhibitor＋CUL5突变型(1.01±0.10)、miR-148a-3p NC＋CUL5野生型(1.02±0.10)/突变型(1.03±0.10)。miR-148a-3p inhibitor组(1.89±0.18)中CUL5 mRNA表达量高于miR-148a-3p NC组(1.00±0.10， t＝5.579， P<0.05)。miR-148a-3p inhibitor组(0.42±0.04)中CUL5蛋白表达量高于miR-148a-3p NC组(1.43±0.14， t＝5.894， P<0.05)。 结论:下调miR-148a-3p表达进而促进CUL5表达，最终抑制U251胶质瘤细胞增殖与侵袭。

目的:探究Cullin5对胶质母细胞瘤细胞放射敏感性的影响及其相关机制。方法:将flag-NC质粒、过表达（flag-Cullin5）质粒分别转染至胶质母细胞瘤U251细胞，建立flag-NC组、flag-Cullin5组，通过实时反转录聚合酶链式反应（RT-qPCR）和蛋白质印迹法（Western blot，WB）检测细胞中Cullin5和程序性死亡配体1（PD-L1）的mRNA和蛋白表达水平。U251细胞接受0、2、4、8 Gy X线照射后，通过CCK-8法检测细胞存活率，通过流式细胞术检测细胞凋亡率。采用免疫共沉淀法检测Cullin5和PD-L1的相互作用，泛素化实验探究Cullin5对PD-L1的泛素化效应。将过表达PD-L1（oe-PD-L1）和flag-Cullin5的质粒转染至U251细胞，建立flag-Cullin5组、flag-Cullin5+oe-NC组和flag-Cullin5+oe-PD-L1组，通过RT-qPCR和WB检测细胞中Cullin5和PD-L1的mRNA和蛋白表达水平。经X线照射各组U251细胞后，通过CCK-8法检测细胞存活率，通过流式细胞术检测细胞凋亡率。采用LSD- t检验或单因素方差分析统计两组间或多组间差异。 结果:与flag-NC组比较，flag-Cullin5组细胞中Cullin5 mRNA和蛋白表达水平升高，PD-L1蛋白表达水平降低（ P<0.05）；经4、8 Gy X线照射后，细胞存活率降低，细胞凋亡率升高（ P<0.05）。Cullin5的免疫沉淀物中存在PD-L1蛋白，PD-L1的免疫沉淀物中存在Cullin5蛋白。与flag-NC组比较，flag-Cullin5组细胞中PD-L1蛋白泛素化水平升高。与flag-Cullin5组比较，flag-Cullin5+oe-PD-L1组细胞中PD-L1 mRNA和蛋白表达水平升高（ P<0.05）；经4、8 Gy剂量的X线照射后，细胞存活率升高，细胞凋亡率降低（ P<0.05）。 结论:Cullin5通过介导PD-L1的泛素化降解，增强胶质母细胞瘤细胞的放射敏感性。

目的 研究Cullin 4A(CUL4A)在脑胶质瘤的表达情况与临床意义,并探讨其与β-catenin表达的相关性.方法 收集78例脑胶质瘤标本,其中星形细胞瘤Ⅱ级27例、Ⅲ级29例和胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)22例,均为原发性脑胶质瘤,术前均未接受放化疗等相关性治疗.5例高血压脑出血患者术中减压时正常脑组织作为对照标本.运用免疫组化法检测CUL4A和β-catenin两种蛋白的表达,并运用统计学方法分析二者相关性.结果 在78例脑胶质瘤标本中,CUL4A蛋白阳性表达50例(64.1%),β-catenin蛋白阳性表达61例(78.2%).CUL4A和β-catenin阳性表达与脑胶质瘤恶性程度具有相关性,而在正常脑组织标本中不表达.CUL4A表达与β-catenin表达呈正相关.结论 CUL4A蛋白在脑胶质瘤组织出现高表达,与β-catenin蛋白表达呈正相关,这为了解胶质瘤的疾病发展提供依据.

目的:探究Cullin1(CUL1)基因对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的SH-SY5Y细胞存活和核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)炎症体通路的影响.方法:(1)将SH-SY5Y细胞分为NC组、NC-sh组、CUL1-sh组、NC-OE组和CUL1-OE组.使用Lipofectamine 2000试剂对细胞转染相应的慢病毒.(2)将SH-SY5Y细胞分为Control组、MPP+组和MPP++CUL1-OE组.MPP+组和MPP++CUL1-OE组细胞使用1 mmol/L的MPP+处理48 h,Control组细胞正常培养.通过MTT法检测细胞增殖,通过 Annexin V-FITC/PI双染色法和TUNEL染色法检测细胞凋亡,通过qRT-PCR检测CUL1的mRNA水平,通过Western blot检测CUL1、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、cleaved caspase-1、白细胞介素(IL)-1β和IL-18蛋白水平.通过ELISA法检测细胞培养上清液中IL-1β和IL-18水平.结果:(1)与NC组和NC-sh组比较,CUL1-sh组CUL1的mRNA和蛋白相对表达量降低,相对细胞活力降低,Annexin V-FITC/PI阳性率和TUNEL阳性率升高,NLRP3、ASC、cleaved caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白相对表达量以及细胞培养上清液中IL-1β和IL-18水平升高(P＜0.05).与NC组和NC-OE组比较,CUL1-OE组CUL1的mRNA和蛋白相对表达量升高,相对细胞活力升高,Annexin V-FITC/PI阳性率和TUNEL阳性率降低,NLRP3、ASC、cleaved caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白相对表达量以及细胞培养上清液中IL-1β和IL-18水平降低(P＜0.05).(2)与Control组比较,MPP+组CUL1的mRNA和蛋白相对表达量降低,相对细胞活力降低,Annexin V-FITC/PI阳性率和TUNEL阳性率升高,NLRP3、ASC、cleavedcaspase-1、IL-1β和IL-18蛋白相对表达量以及细胞培养上清液中IL-1β和IL-18水平升高(P＜0.05).与MPP+组比较,MPP++CUL1-OE组CUL1的mRNA和蛋白相对表达量升高,相对细胞活力升高,Annexin V-FITC/PI阳性率和TUNEL阳性率降低,NLRP3、ASC、cleaved caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白相对表达量以及细胞培养上清液中IL-1β和IL-18水平降低(P＜0.05).结论:CUL1可能通过抑制NLRP3炎症体激活促进MPP+诱导的SH-SY5Y细胞存活.

目的 采用蛋白质组学分析联合生物信息学技术,初步预测慢性阻塞性肺疾病(COPD)相关肺癌(COPD-LC)的生物学机制及其潜在的核心治疗靶点,并进行验证.方法 收集2018年12月至2021年8月新疆医科大学第四临床医学院门诊就诊的COPD、肺癌患者以及体检的健康人员的尿液标本,并进行高通量测序.筛选差异蛋白并构建蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络图,进行功能富集分析,进一步预测COPD-LC的关键靶点,最后采用基因表达数据库(GEO)对上述分子进行验证.结果 蛋白质组学结果显示,与正常对照组相比,COPD组存在157个差异蛋白,其中上调67个,下调90个;与正常对照组相比,肺癌组存在306个差异蛋白,其中上调132个,下调174个;此外,本研究基于相互作用基因检索工具(STRING)平台,将上述差异蛋白进行PPI分析.基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析结果显示,COPD-LC主要富集在细胞外区域、溶酶体、细胞外空间、淀粉酶活性、蛋白酶抑制剂活性、防御/免疫蛋白活性等方面.在GEO数据库中搜索关于COPD和肺癌患者微阵列数据,最终纳入GSE8581和GSE43346共2个数据集,在GSE8581数据集中共识别出13 605个差异基因,在GSE43346数据集中识别出 3 403个差异基因,进一步分析GSE8581、GSE43346数据集与COPD-LC中差异基因的重叠程度,发现潜在转化生长因子β结合蛋白(LTBP)4、N-乙酰α-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGLU)、泛素蛋白连接酶E3成分N-识别蛋白4(UBR4)、DNA损伤结合蛋白1-CULA相关因子(DCAF)5等4个重叠蛋白,最后在GEO数据集中获得验证.结论 本研究初步揭示了 LTBP4、NAGLU、UBR4、DCAF5等4个COPD-LC的潜在治疗靶点,其中靶点NAGLU、UBR4、DCAF5在COPD和肺癌中鲜有报道.上述蛋白在COPD和肺癌中均显著低表达,或可成为COPD-LC的重要诊断与治疗的生物标志物.

目的 探讨Cullin7蛋白在原发性肝癌癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系.方法 海口市人民医院原发性肝癌患者130例, 采用酶联免疫吸附法及免疫组化法测定原发性肝癌癌组织 (原发性肝癌组) 及正常肝脏组织 (癌旁组) 中Cullin7蛋白的表达水平, 分析其与临床病理参数和预后的关系.结果 原发性肝癌组Cullin7蛋白表达水平高于癌旁组 (t=170.644, P<0.05) ;原发性肝癌组Cullin7阳性率高于癌旁组 (χ2=115.535, P<0.01) ;Cullin7蛋白表达与年龄不相关 (χ2=3.211, P>0.05) ;与浸润深度、淋巴结转移、TMN分期、复发、淋巴血管间隙浸润、病理学分级、肿瘤最大径相关性明显, 且浸润深度越深、有淋巴结转移、TMN分期越高、有复发、有淋巴血管间隙浸润、病理学分期越高、肿瘤最大径≥5cm, Cullin7蛋白阳性表达率越高 (χ2=19.238、37.717、20.512、23.662、15.331、20.910、15.455, P<0.01) ;Cullin7阴性组3年生存率及生存期均明显高于Cullin7阳性组 (χ2=34.592, Z=19.764, P<0.01) .结论 Cullin7在原发性肝癌的发生发展过程中起促进作用;Cullin7蛋白在原发性肝癌癌组织中表达量增加, Cullin7蛋白低表达的原发性肝癌患者能获得较好的预后.

目的 探讨CAC1(Cdk-associated cullin1)和Cyclin E在人结肠癌组织中的表达及其意义.方法 采取免疫组化SP法检测201例人结肠癌组织及201例癌旁正常组织(距癌组织≥5 cm)中CAC1和Cyclin E的表达,分析两者与人结肠癌临床病理因素之间的关系.采用Spearman相关检验分析CAC1和Cyclin E表达的相关性.结果 CAC1和Cyclin E在人结肠癌组织中的阳性表达率分别为60.20％和56.72％,均明显高于癌旁正常组织(分别为19.40％和11.94％,P<0.05).CAC1的表达与患者的淋巴结转移、远处转移、TNM分期有关(P<0.05).Cyclin E的表达与患者的淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05).CAC1和Cyclin E在结肠癌组织中的表达呈正相关(r=0.500,P<0.001).结论 CAC1和Cyclin E在结肠癌组织中高表达,并与结肠癌发生发展和转移密切相关.

Cullin-RING ligases (CRLs) comprise a large group of modular eukaryotic E3 ubiquitin ligases.Within this family,the CRL4 ligase (consisting of the Cullin4[CUL4]scaffold protein,the Rbx1 RING finger domain protein,the DNA damage-binding protein 1[DDB1],and one of many DDB1-associated substrate receptor proteins) has been intensively studied in recent years due to its involvement in regulating various cellular processes,its role in cancer development and progression,and its subversion by viral accessory proteins.Initially discovered as a target for hijacking by the human immunodeficiency virus accessory protein r,the normal targets and function of the CRL4 substrate receptor protein DDB1-Cut4-associated factor 1 (DCAF1;also known as VprBP) had remained elusive,but newer studies have begun to shed light on these questions.Here,we review recent progress in understanding the diverse physiological roles of this DCAF1 in supporting various general and cell type-specific cellular processes in its context with the CRL4 E3 ligase,as well as another HECT-type E3 ligase with which DCAF1 also associates,called EDD/UBR5.We also discuss emerging questions and areas of future study to uncover the dynamic roles of DCAF1 in normal physiology.

目的 探讨微小RNA-194-5p(miR-194-5p)与泛素连接酶cullin4A(CUL4A)在肺结核病人中的表达及其意义.方法 选取2016年12月至2018年12月中国平煤神马集团职业病防治院结核病病人为研究对象,确诊为肺结核病人50例作为肺结核组,潜伏结核感染病人50例作为潜伏结核感染组,同期该院体检健康者50例作为对照组.实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-194-5p、CUL4A mRNA、鸟苷酸结合蛋白5(GBP5)mRNA的表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测可溶性Tim-3(sTim-3)、可溶性Gal-9(sGal-9)水平;采用Pearson相关性分析检验肺结核病人miR-194-5p、CUL4A表达量与GBP5、sTim-3、sGal-9的相关性.结核分枝杆菌(Mtb)感染人巨噬细胞系U937,ELISA检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平.蛋白质印迹法(Western blotting)检测Wnt/β-连环素(Wnt/β-catenin)信号通路相关蛋白T细胞因子(TCF)、糖原合成酶激酶-3(GSK-3β)、β-catenin表达量.结果 与对照组相比,潜伏结核感染组与肺结核组病人血清miR-194-5p、GBP5 mRNA的表达水平升高(P<0.05),其中miR-194-5p:(1.01±0.23)比(2.32±0.53)比(3.35±0.20),sTim-3、sGal-9水平升高(P<0.05),CUL4A mRNA的表达水平显著降低[(1.03±0.11)比(0.73±0.12)比(0.41±0.15),P<0.05],潜伏结核感染组与肺结核组各指标间相比差异有统计学意义(P<0.05);miR-194-5p与CUL4A呈负相关(r=-0.421,P<0.001),miR-194-5p与GBP5、sTim-3、sGal-9呈正相关(P<0.05);Mtb感染细胞后,IL-6、TNF-α的表达水平升高(P<0.05),TCF、GSK-3β、β-catenin表达量升高(P<0.05).结论 miR-194-5p在肺结核病人中表达上调,CUL4A表达下调,二者可能参与肺结核发生及发展过程.

目的 从青天葵Nervilia fordii克隆SKP1的同源基因NSKs,并对编码的蛋白进行生物信息学分析及原核表达,为了深入研究青天葵中SCF复合体的功能奠定基础.方法 从青天葵转录组中筛选得到5条SKP1同源基因序列(NSK2、NSK3、NSK5、NSK7、NSK11),构建pGEX-4T-NSKs原核表达载体于大肠杆菌Rosetta (DE3)中诱导表达GST-NSKs融合蛋白并进行纯化.结果 NSK2、NSK3、NSK5、NSK7、NSK11的开放阅读框(ORF)分别为495、483、489、498和486 bp,编码164、160、162、165和161个氨基酸,蛋白相似性达到73.65％,均属于SKP1蛋白家族,具F-box和Cullin蛋白结合位点.亚细胞定位预测NSK2、NSK3和NSK5定位于细胞核,而NSK7和NSK11定位于细胞质和细胞核.系统进化树结果表明,NSK2、NSK3和NSK5聚为一簇,与小麦和玉米等的同源性较高;NSK7和NSK11聚为一簇,与多头绒泡菌的同源性较高.通过构建原核表达载体,确定了在大肠杆菌Rosetta (DE3)中的有利诱导条件,成功诱导表达并纯化得到5个GST-NSKs重组蛋白.结论 成功克隆5个SKP1同源基因NSKs,获得NSKs蛋白,为深入研究青天葵中SCF复合体的功能提供了一定的基础.