目的:探究病因不明的早发癫痫性脑病(EOEE)的遗传学病因及其在早期诊断中的价值。方法:前瞻性收集2018年1月至2021年1月就诊于福建省立医院门诊及住院部的60例病因不明的EOEE患儿的资料，采集外周血进行全外显子组测序及拷贝数变异(CNV)检测，分析患儿临床特点、遗传学测序结果。结果:检测出EOEE相关的致病或可疑致病突变24例，包括婴儿痉挛症(10例)、Dravet综合征(3例)、吡哆醇依赖性癫痫及大田原综合征(各1例)、非已知癫痫性脑病(9例)。患儿起病年龄1 d~11个月(中位年龄4.2个月)，就诊年龄2 d~4岁(中位年龄10个月)，确诊年龄均控制在就诊1个月以内。发现单基因变异20例(33.3%)，CNV 4例(6.7%)；涉及13种基因： KCNQ2、SCN1A、SCN8A、CACNA1E、CDKL5、PPP3CA、PCDH19、TSC1、TSC2、ZEB2、ALDH7A1、DCX、HNRNPU；4例CNV异常分别为17p13.3缺失、11q23.3q25缺失、1q36.31-p36.33缺失、1q43-1q44缺失合并Xp22.33重复；共20种变异为国内外首次报道的新发位点；11q23.3q25缺失导致婴儿痉挛症为国内外首次报道； ZEB2变异导致婴儿痉挛症、 PPP3CA基因导致癫痫性脑病均系国内首例报道。 结论:基因与CNV是EOEE患儿的重要潜在病因，病因不明时联合采用全外显子组测序和CNV测序技术检测，可提高EOEE患儿的遗传学病因诊断水平；对此类患儿早期进行遗传学检测，可以早期确诊及进行癫痫精准治疗。

目的:探讨DCX基因嵌合变异致男性皮质下带状灰质异位1例的临床表型及基因变异特点。方法:回顾性分析2020年8月郑州大学附属儿童医院神经内科确诊的1例男性皮质下带状灰质异位患者的临床资料、头颅磁共振成像（MRI）影像学特征，同时采用二代测序方法进行家系3人的全外显子测序（trio-WES），并采用聚合酶链反应-Sanger测序对可疑变异进行家系验证，分析其基因变异特点。结果:患儿男性，5岁1个月，因间断抽搐4年6个月入院，头围48 cm，四肢肌张力稍高，智力、运动发育均落后，头颅MRI显示皮质下带状灰质异位，家系全外显子基因检测发现患儿DCX基因存在半合子嵌合变异（嵌合比例44%）c.148A>G（p.k50E），口腔黏膜及尿液分析嵌合比例分别为38.2%和44.8%，父母均为野生型，该变异位点国内外未见报道。结论:DCX基因嵌合变异可致男性皮质下带状灰质异位，DCX基因c.148A>G（p.k50E）变异可能为先证者的病因，该变异扩充了皮质下带状灰质异位基因变异谱。

目的:探讨无脑回-巨脑回畸形患儿的临床特征及遗传病因学机制，分析其临床表型与基因型的关系。方法:收集2016年10月至2017年12月在深圳市儿童医院神经内科诊治的21例无脑回-巨脑回畸形患儿的临床资料并进行随访，对所有患儿进行全基因组测序分析。结果:21例患儿中伴癫痫18例(86%)，不伴癫痫3例(14%)；癫痫起病年龄较小，1岁以内起病16例(89%)；其中单纯巨脑回畸形16例(76%)，无脑回合并巨脑回畸形3例(14%)，单纯无脑回畸形2例(10%)。癫痫综合征主要包括West综合征12例(67%)，大田原综合征2例(11%)，其他癫痫性脑病2例(11%)，局灶性癫痫2例(11%)。头颅磁共振成像(MRI)提示单纯巨脑回畸形占多数，其中广泛性巨脑回畸形更多见(56%，9/16例)。全基因组测序结果：检出与无脑回-巨脑回畸形明确相关的致病/疑似致病性单核苷酸变异(SNV)/拷贝数变异(CNV)13例，检出率为62%， PAFAH1B1基因变异4例，染色体17p13.3微缺失综合征(导致 PAFAH1B1整个基因缺失)6例， DCX、KIF2A、PIK3R2基因变异各1例。其中 PAFAH1B1基因变异或缺失导致无脑回-巨脑回畸形占比48%(10/21例)，并以顶枕叶或广泛性脑回畸形为主要改变。既往未见报道的新变异有 PAFAH1B1：c.1067G>A、 PAFAH1B1：c.897delT及 KIF2A：c.2225delG。 结论:无脑回-巨脑回畸形多伴癫痫，以West综合征常见，头颅MRI提示广泛性巨脑回畸形多见。 PAFAH1B1基因变异或缺失是导致无脑回-巨脑回畸形的主要原因。新变异的发现丰富了无脑回-巨脑回畸形的基因型谱数据库。

目的:观察神经干细胞(NSCs)联合神经生长因子(NGF)纳米粒海马移植对APP/PS1双转基因小鼠行为学及海马突触素(SYP)的影响。方法:体外分离培养增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转基因小鼠胎脑来源NSCs，24只12月龄雄性APP/PS1双转基因AD小鼠随机分入NSCs联合NGF纳米粒移植组(NSCs＋NGF-NP组)、NSCs移植组(NSCs组)和AD对照组(AD组)，每组8只，另选8只同月龄雄性野生型小鼠作为健康对照组(WT组)。NSCs＋NGF-NP组和NSCs组分别行NSCs联合NGF纳米粒移植和NSCs移植，其余两组均行等量磷酸盐缓冲液(PBS)注射，移植部位为双侧海马区。移植4周后，采用Morris水迷宫检测4组小鼠学习记忆功能，用免疫荧光组化法检测移植细胞的迁移与分化，Western blot检测SYP蛋白水平。结果:体外悬浮培养的神经球表达EGFP阳性，免疫荧光显示NSCs特异性标志物Nestin阳性。移植4周后，可见EGFP示踪的NSCs在海马注射移植部位存活并向胼胝体，海马深部和齿状回迁移，可分化为双皮质素(DCX)阳性神经元及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性胶质细胞，并可见NSCs＋NGF-NP组存活细胞数量较多，突起较长，穿越海马颗粒层。海马突触相关蛋白SYP检测显示，WT组、NSCs组和NSCs＋NGF-NP组海马SYP蛋白水平较AD组明显增高( P<0.05)，NSCs＋NGF-NP组SYP蛋白水平明显高于NSCs组( P<0.05)，且与WT组比较，差异无统计学意义( P>0.05)。水迷宫检测显示，与AD组比较，WT组、NSCs组和NSCs＋NGF-NP组在平台象限停留时间及穿越平台次数均增加( P<0.05)，NSCs＋NGF-NP组穿越平台的次数大于NSCs组( P<0.05)，且与WT组比较，差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:NSCs联合NGF纳米粒海马移植治疗可能促进移植细胞在体内存活及成熟，增加海马突触，从而改善AD小鼠学习记忆功能。

目的 研究日常饮食中添加摄食甜菜碱对APP/PS1 转基因小鼠的影响.方法 C57BL/6J小鼠作为空白对照组,APP/PS1 小鼠分为正常饮食组和甜菜碱补充饮食组(含 5g/kg甜菜碱),每组 15 只,饮食持续 3 个月.水迷宫实验评估小鼠的记忆行为;免疫荧光法观察海马和皮质中β-淀粉样蛋白(Aβ)的沉积情况;巢蛋白(Nestin)和双皮质素(DCX)标记法以及神经元核抗原(NeuN)和EdU双标法观察海马神经再生情况;GFP-AAV脑立体注射并用荧光显微镜观察CA1 区神经元的棘突情况;电生理记录海马CA1 区长时程增强效应(LTP);Western blot法检测海马中突触后致密蛋白-95(PSD-95)、突触小泡蛋白(SYN)、微管相关蛋白(MAP-2)表达.结果 与正常饮食组比较,甜菜碱补充饮食组APP/PS1 小鼠逃避潜伏期缩短(P<0.01),进入平台所在象限的次数增多且滞留时间延长(P<0.01),海马和皮质中Aβ沉积减少(P<0.01),海马齿状回和颗粒下区中Nestin、DCX阳性细胞以及增殖的神经元数均增多(P<0.01),海马CA1 区棘突密度增加(P<0.01),fEPSP斜率增高(P<0.01),海马中PSD-95、SYN、MAP-2蛋白表达升高(P<0.01).结论 甜菜碱可改善APP/PS1 小鼠记忆障碍,减少海马和皮层中淀粉样斑块沉积并提高神经发生和突触可塑性.

目的:运用网络药理学方法探究加味丹栀逍遥散治疗抑郁症的作用机制,并通过分子对接和动物实验验证加味丹栀逍遥散治疗抑郁症的潜在靶点.方法:基于中药系统药理学数据库与分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform,TCMSP)、中医药百科全书数据库(The encyclopedia of traditional Chinese medicine,ETCM)等筛选加味丹栀逍遥散的化学成分及作用靶点.使用DisGeNet、人类孟德尔遗传数据库(online mendelian inheritance in man,OMIM)等查询抑郁症相关靶点,并采用STRING扩充二级靶点得到抑郁症的全部靶点.将加味丹栀逍遥散活性成分相关靶点与抑郁症靶点取交集,得到加味丹栀逍遥散治疗抑郁症的相关靶点.借助 Cytoscape 软件构建蛋白质互作(protein-protein interac-tion,PPI)网络.使用DAVID对潜在靶点进行基因本体(gene ontology,GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(kyoto en-cyclopedia of genes and genomes,KEGG)信号通路富集分析.通过AutoDock 对核心靶点及成分进行分子对接.48 只SPF级雄性C57BL/6 小鼠随机分为正常组 8 只和造模组 40 只,造模组小鼠建立慢性不可预知温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)模型,6 周后将造模组小鼠分为CUMS组、氟西汀组(20 mg·kg-1)及加味丹栀逍遥散低(15.9 kg·L-1)、中(31.8 kg·L-1)、高(47.7 kg·L-1)剂量组,每组8 只,以10 mL·kg-1体积灌胃给予相应药物,正常组和模型组灌胃给予等体积的生理盐水,每天1 次,持续28 天.采用蔗糖偏好实验、悬尾实验和旷场实验评估小鼠的行为学能力;HE染色观察小鼠脑部海马区病理学变化;DCX染色观察海马区新生神经元变化;Western Blot检测PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT及BDNF蛋白表达水平.结果:网络药理学分析显示,加味丹栀逍遥散活性成分164 个,对应靶点332 个;抑郁症相关靶点1 432 个;将加味丹栀逍遥散相关靶点和抑郁症相关靶点取交集,得到加味丹栀逍遥散治疗抑郁症的潜在靶点 147 个;PPI 网络分析得到 9 个核心靶点;KEGG富集分析发现,潜在靶点主要涉及细胞凋亡、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)-蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称AKT)信号通路等.分子对接结果表明山柰酚、柚皮素、槲皮素与AKT结合能力最强.动物实验结果显示,与正常组比较,CUMS组小鼠糖水偏好率、p-AKT、BDNF蛋白表达水平显著降低(P＜0.01),悬尾不动时间显著升高(P＜0.05);与CUMS组比较,加味丹栀逍遥散组小鼠的糖水偏好率、p-AKT、BDNF蛋白表达水平显著上升(P＜0.05),悬尾不动时间显著降低(P＜0.05).HE染色显示,CUMS组小鼠海马组织CA3 区神经元结构松散,细胞数量减少,排列不规则;给予加味丹栀逍遥散干预的小鼠CA3 区神经元结构更加完整,细胞数量接近正常组.免疫荧光显示,CUMS小鼠海马DG区DCX阳性细胞数量明显减少;给予加味丹栀逍遥散干预的小鼠海马DG区DCX阳性细胞数量显著增加.结论:加味丹栀逍遥散治疗抑郁症具有多成分-多靶点-多通路的特点,其作用机制可能与促进细胞增殖、影响神经元的新生有关.

背景:运动有助于改善阿尔茨海默症、痴呆症以及与年龄相关的认知能力,运动与这些健康益处之间的一个潜在中介可能是成年海马神经发生.因此,探索运动如何影响阿尔茨海默症小鼠的成年海马神经发生过程具有重要意义.目的:观察有氧运动对阿尔茨海默症小鼠成年海马神经发生的影响,探究有氧运动能否促进其成年海马神经发生.方法:将3月龄野生型(C57BL/6Jnju)及APP/PS1双转基因阿尔茨海默症小鼠随机分为4组:野生对照组、野生运动组、阿尔茨海默症对照组、阿尔茨海默症运动组,每组20只.对照组小鼠不进行运动,运动组小鼠进行5个月的有氧运动干预.运动干预结束后,采用Real-time PCR、免疫荧光及Western blot检测各组小鼠海马组织DCX、Ki67、βⅢ-tubulin及NeuN的表达.结果与结论:阿尔茨海默症对照组小鼠海马齿状回区DCX、βⅢ-tubulin及NeuN表达均显著低于野生对照组小鼠(P<0.05);阿尔茨海默症运动组小鼠海马齿状回区DCX、Ki67、βⅢ-tubulin及NeuN表达显著高于阿尔茨海默症对照组(P<0.05).提示:长期有氧运动干预后,可以促进阿尔茨海默症小鼠成年海马神经发生过程中神经元增殖、迁移分化,显著增加神经元前体细胞、新生神经元数量.

目的 探究薰衣草精油对脑卒中后大鼠缺血海马中脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)/前脑源性神经营养因子(pro-brain-derived neurotrophic factor,proBDNF)表达及抑郁恢复的影响.方法 雄性 SD大鼠 45 只随机分为对照组、模型组和干预组,每组 15 只.对照组在常规条件下饲养的大鼠,腹膜注射生理盐水作为对照试验;模型组,大脑中动脉闭塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/r)模型,腹腔注射生理盐水;干预组,大鼠MCAO/r后给予薰衣草精油和运动干预.通过露天场地、强迫游泳和蔗糖偏好测试大鼠的焦虑抑郁行为.通过商业试剂盒检测大鼠氧化应激标志物水平.通过反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)分析BDNF/proBDNF信号通路表达.通过免疫印迹发(Western blotting,WB)分析缺血海马组织中 CA1 区、CA3 区和齿状回(dentategyrus,DG)区的 BDNF/proBDNF比值.BDNF/proBDNF比值与抑郁的行为试验进行相关性分析.通过神经行为(感觉和运动)测试大鼠神经缺损.结果 模型组大鼠静止时间长于对照组,蔗糖偏好、攀爬频率和运动距离低于对照组;干预组大鼠静止时间长于对照组,短于模型组,蔗糖偏好、攀爬频率和运动距离低于对照组,高于模型组(P<0.05).模型组超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,r-glutamyl cysteingl glycine,GSH)和抗氟离子酸性磷酸酶(fluoride resistant acid phosphatase,FRAP)水平低于对照组,丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平高于对照组;干预组超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,r-glutamyl cysteingl glycine,GSH)和 FRAP水平高于模型组,MDA 水平低于对照组,低于模型组(P<0.05).模型组 BDNF、神经营养素受体(neurotrophic receptor,TrkB)和微管相关蛋白(doublecortin,DCX)mRNA表达低于对照组,proBDNF和神经营养素受体P75(neurotrophic receptor P75,p75 NTR)mRNA表达高于对照组;干预组 BDNF、TrkB和 DCX mRNA表达低于对照组,高于模型组,proBDNF和 p75 NTR mRNA表达高于对照组,低于模型组(P<0.05).模型组 CA1、CA3 和DG区的BDNF/proBDNF比值低于对照组;干预组 CA1、CA3 和 DG区的 BDNF/proBDNF比值高于模型组(P<0.05).BDNF/proBDNF比值与强迫游泳期间静止时间呈负相关(r=-0.74,P<0.01),BDNF/proBDNF比值与蔗糖偏好呈正相关(r=0.63,P<0.01).模型组神经缺损评分高于对照组;干预组神经缺损评分高于对照组,低于模型组(P<0.05).模型组 B淋巴细胞瘤-2 基因相关 X蛋白(Bcl-2 related X protein,Bax)/B 淋巴细胞瘤-2 基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)表达高于对照组,Bcl-2 表达低于对照组;干预组 Bax和 Bax/Bcl-2 表达低于模型组,Bcl-2 表达高于模型组(P<0.05).结论 薰衣草精油可能通过调节 BDNF和 proBDNF的相对水平,改善神经功能,增强内源性抗氧化防御、抑制氧化应激途径和神经凋亡,改善PSD大鼠的抑郁样行为.

目的 评价18 kDa转位蛋白(TSPO)配体YL-IPA08的抗焦虑作用并探究其可能作用机制.方法 采用雄性C57BL/6J小鼠,连续6d给予电刺激(0.5 mA,12次,持续时间1s,间隔10s)诱导焦虑样行为,同时伴随灌胃给予YL-IPA08(0.1,0.3 和 1.0 mg·kg-1)4 d.采用旷场实验(OFT)和高架十字迷宫(EPM)实验评价YL-IPA08的抗焦虑作用;采用Y-迷宫实验评价YL-IPA08的促认知效应;采用转录组学测序技术研究YL-IPA08对焦虑模型小鼠海马的可能作用机制;从结构上,采用蛋白质印迹法、免疫荧光染色以及高尔基染色法等技术研究YL-IPA08对神经可塑性的调节.从功能上,采用电生理技术检测大鼠海马齿状回(DG)的长时程增强(LTP),进而研究YL-IPA08对DG区突触可塑性影响.结果 ①YL-IPA08(1.0 mg·kg-1)伴随给药可以显著逆转电击致焦虑模型小鼠在OFT的中心区域停留的时间百分比和进入中心区域次数显著降低,显著逆转EPM中开臂停留时间百分比和进入开臂次数百分比显著降低以及在Y-迷宫中的自发交替率显著降低.②YL-IPA08抗焦虑效应机制研究:①通过RNA-seq技术的GO和KEGG富集分析表明,YL-IPA08抗焦虑作用的差异化基因主要集中在海马突触及其功能变化,因此下一步的机制研究主要围绕对突触可塑性的调节.② YL-IPA08可以显著逆转焦虑模型小鼠海马BDNF及突触相关蛋白(synapsin-1和PSD-95)水平的下降,显著逆转模型小鼠海马DG区DCX阳性神经元数量的减少,增加海马锥体神经元树突复杂性(P＜0.05)和树突棘密度(P＜0.05).另外,电生理技术研究表明,YL-IPA08可以显著增加经高频刺激后海马齿状回群峰电位(PS)的幅值(P＜0.05).结论 TSPO配体YL-IPA08可显著改善电击诱导的小鼠焦虑样行为,该效应可能通过调节海马突触可塑性所介导.

目的 观察过表达双皮质素(DCX)基因对大鼠脑胶质瘤细胞迁移能力的影响.方法 采用PCR扩增DCX基因片段,构建DCX慢病毒表达载体,感染293T细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达.筛选稳定表达DCX的大鼠脑胶质瘤C6细胞,将C6细胞分为空载体病毒感染组(GV468组)和过表达DCX病毒感染组(GV468-DCX组),qRT-PCR和Western blot法检测DCX表达.Transwell实验检测过表达DCX对大鼠胶质瘤C6细胞迁移能力的影响.结果 成功构建过表达DCX的慢病毒载体,感染C6细胞的效率达到90%.感染C6细胞后,GV468-DCX组DCX mRNA和蛋白表达较GV468组高(P<0.01或P<0.05),GV468-DCX组迁移能力高于GV468组(P<0.05).结论 成功构建DCX慢病毒表达载体,获得稳定表达DCX的大鼠胶质瘤细胞系,过表达DCX基因能促进胶质瘤细胞的迁移能力,为脑胶质瘤的基因治疗提供参考.