目的:探讨全国各省市糖尿病专科护士培训后的工作情况和职业满意度及其影响因素。方法:采用便利抽样法自2018年10月至12月选取全国31个省、自治区、直辖市已取得各地区糖尿病专科护士合格证书的3 918名护士作为研究对象。应用问卷星进行问卷调查，内容包括人口统计学资料、目前糖尿病专科护士工作现状、职业满意度。二分类变量间的比较采用独立样本 t检验，多分类变量间的比较采用单因素方差分析，两个连续变量的相关分析采用Pearson相关分析，采用多重线性回归法分析糖尿病专科护士职业满意度的影响因素。 结果:糖尿病专科护士的护理工作中，1 920名（49.0%）护士大部分时间从事糖尿病相关工作。职业满意度非常满意者仅975名（24.9%）。多重线性回归分析显示，地区（ β=-0.210）、科室（ β=0.046）、职称（ β=-0.101）、从事糖尿病护理的年限（ β=-0.008）、培训后总体工作能力提升现状（ β=0.075）、医院专科护士管理办法（ β=-0.160）、糖尿病相关工作所占比例（ β=-0.200）、从事“糖尿病临床/社区的护理工作”所占比例（ β=0.051）、从事“糖尿病教育门诊”所占比例（ β=-0.039）、从事“糖尿病会诊”所占比例（ β=-0.046）和“指导基层糖尿病护理工作”所占比例（ β=-0.065）为专科护士职业满意度得分的影响因素（均 P<0.05）。 结论:糖尿病专科护士从事糖尿病相关工作时间的比例和其职业满意度均有待进一步提高。

目的 通过GEO数据库分析骨质疏松患者血清及髋骨组织中差异miRNA的表达变化,并对差异miRNA的靶基因进行GO、KEGG功能富集分析、转录因子预测和蛋白网络调控图绘制,探讨这些差异基因在疾病发生、发展过程中的作用,为研究骨质疏松的发病机制、治疗及预防骨质疏松性骨折提供依据.方法 下载GEO数据库中的骨质疏松差异miRNA数据集作为研究对象,第一组为GSE91033 数据集,包括1 例正常对照组和2 例骨质疏松患者的血清miRNA表达谱;第二组为GSE74209 数据集,包括6 例正常对照组和6 例骨质疏松患者髋骨组织miRNA表达谱.使用GEO数据库中GEO2R分析工具,筛选两组数据中调整后P<0.05,logFC>1 或logFC<-1 的差异miRNA作为研究对象.通过SangerBox工具绘制差异miR-NA火山图,TargetScan数据库预测差异miRNA的靶基因,FunRich软件、DAVID在线数据库对靶基因进行GO、KEGG功能富集分析、转录因子预测,最后使用Cytoscape软件进行蛋白质-蛋白质相互作用网络(PPI)蛋白网络调控图绘制并确定核心蛋白.结果 在GSE91033 数据集中,筛选出骨质疏松患者外周血中有 204 个差异miRNA(164 个上调miRNA,40 个下调miR-NA);在GSE74209 数据集中,筛选出骨质疏松患者髋骨组织中有 138 个差异miRNA(39 个上调miRNA,99 个下调miRNA).通过GO、KEGG功能富集分析,得到GO生物过程包括三酰甘油合成过程、细胞分裂、细胞对DNA损伤刺激的反应、成纤维细胞迁徙的正向调控、骨重建等.KEGG富集分析得到缺氧诱导因子(HIF)-1 信号通路、细胞外基质(ECM)受体相互作用、肌动蛋白细胞骨架的调节、E-钙黏蛋白(cadherin)信号通路等.通过cytohubba插件分析得到20 个关键基因(Hub),其中处于枢纽地位的有丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)1、着丝粒相关蛋白(DSN)1、UBE203 三个基因.结论 骨质疏松患者外周血和骨组织有多个上调的差异miRNA,这些上调的差异miRNA可能通过靶向枢纽基因MAPK1、DSN1、UBE203 经多种途径参与骨质疏松的进程.

以大白菜pol型细胞质雄性不育系16C14花蕾为试验材料,采用SMART(switching mechanism at 5′end of RNA transcript)技术合成cDNA,利用DSN(duplex-specific nuclease)对所得cDNA进行均一化处理,之后与pDONRTM/Zeo载体重组并转化DH10B大肠杆菌菌株,构建了大白菜pol型雄性不育花蕾均一化cDNA文库.经检测,文库滴度为3.2×106 cfu?mL-1,库容量约为1.28×107 cfu,重组率97%,插入片段平均大小1.2 kb左右.随机挑选100个阳性菌斑进行测序,冗余度仅为3.7%,文库质量较高.本研究成功构建了大白菜胞质雄性不育系花蕾均一化cDNA文库,为进一步研究大白菜pol雄性不育相关分子机制奠定基础.

A normalized full-length cDNA library was constructed from the coralloid roots of Cycas debaoensis by the DSN (duplex-specific nuclease) normalization method combined with the SMART (Switching Mechanism At 5' end of the RNA Transcript) technique. The titer of the original cDNA library was about 1.5 × 106 cfu·mL-1 and the average insertion size was about 1 kb with a high recombination rate (97％). The 5011 high-quality expressed sequence tags (ESTs) were obtained from 5393 randomly picked cDNA clones. Clustering and assembly of ESTs resulted in 2984 unique sequences, consisting of 618 contigs and 2366 singlets. EST sequence annotation revealed that 2333 and 1901 unigenes were functionally anno-tated in the NCBI non-redundant database and Swiss-Prot protein database, respectively. Functional analysis demonstrated that 1495 (50.1％) unigenes were associated with 4082 Gene Ontology (GO) terms. A total of 847 unigenes were grouped into 22 Cluster of Orthologous Groups (COG) functional categories. Based on the EST dataset, 22 ESTs that encoded putative receptor-like protein kinase (RLK) genes were screened. Furthermore, a total of 94 simple sequence repeats (SSRs) were discovered, of which 20 loci were successfully amplified in C. debaoensis. This study is the first EST analysis for the coralloid roots of C. debaoensis and provides a valuable genomic resource for novel gene discovery, gene expression and comparative genomics, conservation and management studies as well as applications in C. debaoensis and related cycad species.

[目的]建立一种测定miR-21含量新型实验方法.[方法]利用microRNA-21(miR-21)作为靶标,并设计基于双链特异性核酸酶(Duplex specific nuclease,DSN)及杂交链式反应(Hybridization chain reaction,HCR)的探针MP、H1及H2,通过加入靶标从而引起DSN和HCR反应,达到双重信号放大的目的,最终信号输出方式为DNAzyme显色,裸眼可视,根据其产生颜色强度对靶标进行定量检测.[结果]DSN结合HCR靶标的最低检测限可达1 pmol/L,线性范围为1 pmol/L～1μmol/L,特异性良好,除靶标miR-21外,非特异性靶标均无明显信号产生,在人体血清实际样品中检测miR-21,其回收率可达到92.3％～101.5％.[结论]该检测方法成功建立测定miR-21含量的技术平台,灵敏性可达1 pmol/L,且特异性好、快速可视,为研究及临床诊断心血管疾病提供技术依托.

目的 为方便研究人员使用Serfling回归模型做疾病负担研究,开发SAS宏程序用于相关数据整理、模型应用和结果展示.方法 以宁波市2015年1月1日到2018年12月31日0～3岁儿童流感和肺炎(ICD-10:J09～ J18)门诊数据为实例,介绍和验证SAS宏程序％SERFLING(IN_DSN=,AGE=,SEX=,CLIP=,WEEKS_EPI=).结果 按照SAS宏程序％SERFLING的参数说明,在指定输入数据集(IN_DSN=)基础上按需选择年龄范围(AGE=)、性别(SEX=)、是否将不足一周的头尾数据删除(CLIP=)以及是否使用传统Serf ling回归模型(WEEKS_EPI=),就可以自动完成对原始数据的整理、Serfling回归模型应用和相关结果展示.结论 SAS宏程序％SERFLING方便了Serf ling回归模型的应用,具有一定的实用性.

目的 观察三阴性乳腺癌患者癌组织中DSN1的表达变化,并探讨其与预后的关系.方法 选择120例三阴性乳腺癌患者,采用免疫组化法检测乳腺癌组织中的DSN1,并根据免疫组化结果将患者分为DSN1高表达者与低表达者,分析DSN1表达与三阴性乳腺癌临床病理特征的关系,比较DSN1高低表达者无瘤生存率和总生存率的差异,采用Cox比例风险模型分析影响乳腺癌无瘤生存率和总生存率的独立危险因素.结果 120例患者中75.8％(91/120)DSN1高表达、24.2％(29/120)DSN1低表达.三阴性乳腺癌组织中DSN1表达与TNM分期和淋巴结转移有关(P均<0.05).DSN1高表达者无瘤生存率和总生存率均低于DSN1低表达者(P均<0.01).多因素Cox回归分析表明,DSN1表达(HR=1.091,95％CI:1.082～3.75,P=0.001)是三阴性乳腺癌患者无瘤生存率独立预测因子,DSN1表达(HR=1.887,95％CI:1.591～4.528,P=0.003)、TNM分期(HR=1.368,95％CI:0.577～2.734,P=0.013)可作为三阴性乳腺癌患者总生存率的预测因子.结论 DSN1在三阴性乳腺癌组织中高表达,且与患者TNM分期和淋巴结转移密切相关;DSN1高表达是三阴性乳腺癌预后不良的独立危险因素,可能是预测三阴性乳腺癌预后新的分子标志物.

目的 探索ARID家族富含AT的相互作用域4B(ARID4B)以及Nnf1的剂量抑制因子(DSN1)蛋白表达水平在肝细胞癌(HCC)患者预后评估中的作用.方法使用癌症基因组图谱(TCGA)和基因表达数据库(GEO)中的数据来分析HCC中ARID4B和DSN1的表达.所有组织样本均取自2016年6月至2017年6月在秦皇岛市第三医院外科接受肝切除手术且术前未行化学治疗或放射治疗的H CC患者.取新鲜冷冻的130对HCC组织和邻近非癌肝组织(ANLT)样品,采用实时定量聚合酶链反应(real-time qPCR)检测ARID4B mRNA和DSN1 mRNA的表达水平.对130例经37％甲醛溶液固定、石蜡包埋的HCC组织样品进行免疫组织化学分析,以检测ARID4B和DSN1在HCC组织中的表达水平并确定其临床意义.结果生物信息学分析、RT-PCR结果表明,与ANLT相比,ARID4B和DSN1在HCC组织中高表达(P<0.05).ARID4B高表达与肿瘤结节数(P=0.042)、TNM分期(P=0.001)密切相关.DSN1高表达与性别(P=0.035)、甲胎蛋白(AFP)(P=0.005)、肿瘤结节数(P=0.023)密切相关.此外,Kaplan-Meier和Cox比例风险分析表明,ARID4B和DSN1高表达与HCC患者的不良生存率显著相关,并且ARID4B和DSN1是HCC患者整体生存和无病生存的独立预后因素.结论ARID4B和DSN1可作为预测HCC患者预后的生物学标志物.

目的:构建糖尿病专科护士(DSN)临床培训基地准入评价指标体系.方法:成立课题研究小组,应用德尔菲法进行指标筛选,应用优序图法确定指标权重,应用EpiData 3.1软件、SPSS 22.0统计软件进行统计分析.结果:最终形成包含8个一级指标、25个二级指标、63个三级指标的DSN临床培训基地准入评价指标体系.2轮专家咨询问卷有效回收率分别为93.33％、100.00％,专家权威系数分别为0.857,0.871,重要性赋值均数为4.242分,变异系数为0.01～0.24,第1轮专家咨询一级指标、二级指标、三级指标协调系数分别为0.534,0.453和0.421(P<0.01),第2轮专家咨询一级指标、二级指标、三级指标协调系数分别为0.562,0.460和0.431(P<0.01).结论:本研究构建的DSN临床培训基地准入评价指标体系专家意见集中,研究过程可靠,结果科学.

目的 探讨mmu-miR-672-5p调控大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞凋亡的分子机制.方法 过表达或敲低mmu-miR-672-5p后,检测大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞的凋亡水平.过表达或敲低mmu-miR-672-5p后,通过RNA-seq检测mmu-miR-672-5p调控的基因.设定阈值后,通过siRNA敲低相关基因后,检测大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞的凋亡水平.通过荧光素酶报告实验验证mmu-miR-672-5p是否靶向此基因.过表达此基因后,通过免疫印迹检测CLEAVED-CAS3的表达水平,以及大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞的凋亡水平.结果 过表达mmu-miR-672-5p后,大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞的凋亡水平下降(P<0.05);敲低mmu-miR-672-5p后,大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞的凋亡水平上升(P<0.05).分别敲低和过表达mmu-miR-672-5p后,高通量测序发现大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞中多种基因的表达被调节,包括Zfp229、Zfp503、Slc4a5、Stk24、Tmem106b、Bax、Adgrb3、Tmem63b、Pmp22、Mroh2a、Dsn1、Pramef25、Naaladl2、Clk2、Stx16、Usp28、Clint1、Jph4、Msl2、Krtap8-1、Pkp2、Mllt3、Rai14.敲低上述基因后,发现仅敲低Bax时,大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞的凋亡水平下降(P<0.05).过表达Bax后,CLEAVED-CAS3的表达水平上升,大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞的凋亡水平上升(P<0.05).过表达mmu-miR-672-5p后,Bax的mRNA和蛋白水平均下降(P<0.05);敲低mmu-miR-672-5p后,Bax的mRNA和蛋白水平均上升(P<0.05).此外,mmu-miR-672-5p靶向Bax的3端非编码区(P<0.05).同时过表达mmu-miR-672-5p和Bax后,大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞的凋亡水平无显著变化(P>0.05);同时敲低mmu-miR-672-5p和Bax后,发现大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞的凋亡水平无显著变化(P>0.05).结论 mmu-miR-672-5p通过靶向Bax的3端非编码区,降低了Bax的表达水平,随后抑制了大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞的凋亡.