目的:探讨转录辅激活因子Mediator 1（Med1）对小鼠皮肤毛发再生的影响及可能机制。方法:将C57BL/6J品系来源的Med1 flox/flox小鼠与K14-Cre小鼠交配，通过Cre-Loxp系统获得Med1表皮特异性敲除小鼠，即表达K14-Cre的Med1 flox/flox小鼠（敲除组），不表达K14-Cre的Med1 flox/flox小鼠即为对照组，每组3只，共同饲养8周左右行背部脱毛实验，连续12 d观察毛发再生情况。12 d后，处死两组小鼠并切取其背部脱毛和未脱毛皮肤组织，提取组织总RNA，实时定量PCR检测毛发角蛋白基因、维生素D受体/β联蛋白通路相关基因、毛囊增殖与静息状态维持相关基因的表达。制备小鼠背部脱毛和未脱毛皮肤组织石蜡切片，免疫荧光染色检测小鼠皮肤毛囊隆突部位干细胞数量。组间比较采用两独立样本 t检验。 结果:脱毛后0 ~ 12 d，与对照组相比，敲除组小鼠脱毛区皮肤毛发再生延迟。实时定量PCR检测显示，敲除组脱毛皮肤组织中毛发角蛋白基因Ha1、Krt2-16及维生素D受体/β联蛋白通路相关基因S100a3、Dlx3、Tubb3和毛囊增殖与静息状态维持相关基因Lhx2、Sox9、Nfatc1 mRNA相对表达量（22.09 ± 12.32、2.07 ± 0.20、0.02 ± 0.01、12.36 ± 2.12、1.75 ± 0.46、0.39 ± 0.02、4.42 ± 0.76、0.44 ± 0.07）均显著低于对照组（70.53 ± 9.46、7.76 ± 0.49、0.05 ± 0.01、26.16 ± 2.96、2.60 ± 0.14、0.71 ± 0.09、11.93 ± 0.42、0.75 ± 0.04； t值分别为5.40、18.64、3.89、6.57、3.04、6.10、15.03、6.18，均 P < 0.05）。免疫荧光染色显示，无论在脱毛还是未脱毛皮肤组织中，敲除组毛囊隆突部位CD34 +K15 +毛囊干细胞数量均远低于对照组。 结论:Med1基因敲除可能通过下调维生素D受体/β联蛋白通路下游基因及毛囊增殖与静息状态维持相关基因Sox9、Nfatc1、Lhx2的表达，减少毛囊干细胞数量，导致毛囊分化障碍，毛发再生延迟。

目的:对1例手足裂畸形(split-hand /split-foot malformation，SHFM)患儿进行分子遗传学分析。方法:应用低深度全基因组高通量测序技术(copy number variation sequencing，CNV-seq)对患儿进行染色体拷贝数变异分析，对检测到的微小基因组拷贝数变异通过实时荧光定量PCR进行验证。结果:患儿染色体7q21.3区存在一个约3.37 Mb的杂合缺失，对缺失区域内的 DLX6基因应用实时荧光定量PCR技术验证，结果显示 DLX6基因杂合缺失，与CNV-seq结果相符。 结论:7q21.3区域内约3.37 Mb缺失可能是导致该患儿患病的原因。CNV-seq技术可为临床基因检测和产前诊断提供更有价值的信息。

目的:分析一例手足裂胎儿的临床特征以及基因组拷贝数变异(copy number variations，CNVs)的情况。方法:收集孕期胎儿超声以及引产儿X线检查资料并进行总结。应用二代测序(next generation sequencing，NGS)检测引产儿的CNVs。用NGS及荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization，FISH)对其亲代进行分析，用实时荧光定量PCR对胎儿染色体异常区域的基因表达量进行检测。 结果:超声及X线检查提示胎儿右手及双足均呈"V"形开裂。NGS检测提示胎儿染色体7q21.3区存在约0.36 Mb的缺失。NGS及FISH检测提示其双亲均未携带相同的变异。实时荧光定量PCR结果提示胎儿DYNC1I1基因存在杂合缺失，而SEM1、DLX5、DLX6基因的拷贝数则未见异常。结论:胎儿手足裂畸形的致病原因为7q21.3区微缺失，后者为新发变异。

目的:研究长链非编码生长停滞特异性蛋白6反义RNA1（lncRNA DLX6-AS1）对皮肤鳞状细胞癌细胞A431增殖、迁移和侵袭的影响及潜在机制。方法:以双荧光素酶报告系统实验验证lncRNA DLX6-AS1与miR-16-5p、miR-16-5p与核酪蛋白激酶和细胞周期蛋白依赖性激酶底物1（NUCKS1）mRNA的靶向结合。通过单独或联合转染lncRNA DLX6-AS1抑制物（si-DLX6-AS1）、miR-16-5p抑制物（anti-miR-16-5p）、NUCKS1抑制物（si-NUCKS1）和相应对照（DLX6-AS1-NC、anti-miR-NC、NUCKS1-NC）调控A431细胞目的基因的表达，采用qRT-PCR检测A431细胞lncRNA DLX6-AS1、miR-16-5p、NUCKS1 mRNA的表达；Western印迹检测NUCKS1、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）抗体、基质金属蛋白酶（MMP）2和MMP9蛋白水平；CCK8实验检测细胞存活率；Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。两组间比较采用独立样本 t检验。 结果:双荧光素酶报告系统实验显示，lncRNA DLX6-AS1靶向结合miR-16-5p，miR-16-5p靶向结合NUCKS1。si-DLX6-AS1组A431细胞miR-16-5p表达水平（3.01 ± 0.31）高于DLX6-AS1-NC组（1.02 ± 0.10， t = 18.33， P < 0.001）；NUCKS1、Cyclin D1、MMP2和MMP9蛋白相对水平均低于DLX6-AS1-NC组（均 P < 0.05），细胞存活率、迁移和侵袭细胞数亦低于DLX6-AS1-NC组（均 P < 0.05）。si-NUCKS1组A431细胞NUCKS1、Cyclin D1、MMP2和MMP9蛋白相对水平均低于NUCKS1-NC组（均 P < 0.05），细胞存活率、迁移和侵袭细胞数亦低于NUCKS1-NC组（均 P < 0.05）。低表达lncRNA DLX6-AS1后，anti-miR-16-5p组A431细胞miR-16-5p表达（0.34 ± 0.04）低于anti-miR-NC组（1.00 ± 0.12， t = 15.65， P < 0.05），Cyclin D1、MMP2和MMP9相对表达水平均高于anti-miR-NC组（均 P < 0.05），细胞存活率、迁移和侵袭细胞数均高于anti-miR-NC组（均 P < 0.05）。低表达lncRNA DLX6-AS1、敲减miR-16-5p后，si-NUCKS1组A431细胞NUCKS1、Cyclin D1、MMP2和MMP9蛋白相对水平均低于NUCKS1-NC组（ P < 0.05），细胞存活率、迁移和侵袭细胞数均低于NUCKS1-NC组（ P < 0.05）。 结论:lncRNA DLX6-AS1可通过靶向miR-16-5p/NUCKS1调控A431细胞增殖、迁移和侵袭，lncRNA DLX6-AS1可能是治疗皮肤鳞状细胞癌的潜在分子靶点。

Objective:This study aimed to evaluate the effect of different combinations of rTMS and cognitive training (rTMS-COG) on PSCI and identify the optimal combination protocol.Methods:A cerebral infarction rat model was established by transient middle cerebral artery occlusion (tMCAO). The Morris water maze test was conducted to assess the cognitive function of rats. RNA sequencing and bioinformatics analysis were employed to study the underlying mechanisms.Results:rTMS, COG and rTMS-COG all had beneficial effects on PSCI, while cognitive training immediately after rTMS (rTMS-COG0h) achieved a better effect than cognitive training 1 h and 4 h after rTMS, rTMS and COG. We identified 179 differentially expressed genes (DEGs), including 24 upregulated and 155 downregulated genes, between the rTMS-COG0h and rTMS groups. GO analysis revealed that the major categories associated with the DEGs were antigen procession and presentation, regulation of protein phosphorylation and axoneme assembly. KEGG analysis showed that the DEGs were enriched in processes related to phagosome, circadian entrainment, dopaminergic synapse, apelin signaling pathway, long-term depression, neuroactive ligand-receptor interaction, axon guidance and glucagon signaling pathway. PPI analysis identified Calb2, Rsph1, Ccdc114, Acta2, Ttll9, Dnah1, Dlx2, Dlx1, Ccdc40 and Ccdc113 as related genes.Conclusions:These findings prompt exploration of the potential mechanisms and key genes involved in the effect of rTMS-COG0h on PSCI.

目的 探讨血清长链非编码RNA(LncRNA)无远端同源框6反义RNA 1(Dlx6os1)、LncRNA牛磺酸上调基因1(TUG1)水平与老年糖尿病肾病(DN)患者肾脏损伤及预后的相关性.方法 选取2019年1月—2021年1月西安交通大学第一附属医院榆林医院肾病学科收治的老年DN患者201例作为DN组,同期单纯T2DM患者112例作为单纯T2DM组,同期体检健康的老年人105例作为健康对照组,随访3年根据预后将老年DN患者分为不良预后亚组(61例)和良好预后亚组(140例).检测血清LncRNA Dlx6os1、LncRNA TUG1和肾脏损伤指标[计算肾小球滤过率(eGFR)、尿白蛋白肌酐比(UACR)]水平;采用Spearman相关系数分析血清LncRNA Dlx6os1、LncRNA TUG1水平与老年DN患者肾损伤的相关性;以老年DN患者预后为因变量,建立多因素非条件Logistic回归模型分析其影响因素,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线评价血清LncRNA Dlx6os1、LncRNA TUG1水平对其的预测价值.结果 健康对照组、单纯T2DM组、DN组血清LncRNA Dlx6os1和UACR水平依次升高,血清LncRNA TUG1和eGFR依次降低(F/P=870.484/＜0.001、566.671/＜0.001、271.117/＜0.001、196.722/＜0.001);Spearman 相关性显示,老年 DN 患者血清LncRNA Dlx6os1 水平与 eGFR 呈负相关、与 UACR 呈正相关(r/P=-0.816/＜0.001、0.809/＜0.001),血清 LncRNA TUG1水平与eGFR呈正相关、与UACR呈负相关(r/P=0.832/＜0.001、-0.806/＜0.001);随访截至2024年1月,老年DN患者201例不良预后发生率为30.35％(61/201);多因素非条件Logistic回归显示,慢性肾脏病≥4期、UACR升高、LncRNA Dlx6os1升高为老年DN患者不良预后的独立危险因素[OR(95％CI)=5.758(1.480～22.401)、1.013(1.005～1.022)、1.426(1.201～1.693)],eGFR 升高、LncRNA TUG1 升高为保护因素[OR(95％CI)=0.958(0.939～0.978)、0.418(0.254～0.689)];ROC 曲线显示,血清 LncRNA Dlx6os1、LncRNA TUG1 及二者联合预测老年 DN 患者不良预后的 AUC 分别为 0.774、0.777、0.852,二者联合预测的 AUC 最大(Z/P=2.930/0.003、3.335/0.001).结论 老年DN患者血清LncRNA Dlx6os1水平升高、LncRNA TUG1水平降低,与肾脏损伤加重和不良预后风险增加有关,血清LncRNA Dlx6os1联合LncRNA TUG1水平预测老年DN患者不良预后的效能较高.

目的:基于生物信息分析探讨肝细胞癌（HCC）溴结构域蛋白4（BRD4）与预后关系及其竞争性内源性RNA（ceRNA）调控网络的构建。方法:TCGA数据库中将HCC样本分为两组，采用生存R软件包分析评估BRD4对总体生存期（OS）的影响。TIMER数据库评估免疫细胞的浸润水平，采用Spearman相关分析法分析BRD4表达与癌症免疫浸润水平的相关性。采用ClusterProfiler R软件包对KEGG进行基因集富集分析。从癌症基因组图谱、基因型-组织表达和GSE147889数据集收集了HCC及正常对照的lncRNAs、microRNAs（miRNAs，miR）和mRNAs表达数据并进行差异分析，预测调控其表达的miRNAs及lncRNAs，构建ceRNA调控网络。从新疆维吾尔自治区人民医院收集了10个HCC组织样本及匹配的非癌症组织样本，检测BRD4及相关ceRNA网络基因的表达。在HCCLM3细胞中进行过表达和敲降BRD4，进行凋亡、侵袭和伤口愈合试验。结果:生存分析显示BRD4高表达的HCC患者生存率较差（HR=1.020，P<0.05）。BRD4的高表达与B细胞、CD4+ T细胞、中性粒细胞、巨噬细胞和树突细胞呈正相关（rs=0.265，0.433，0.302，0.332，0.258；P<0.05）。基因集富集分析显示，BRD4可能与胰岛素信号通路、抑制氧化磷酸化有关。通过3个数据库差异分析获得2个DEmRs调控因子miR-200a-3p和miR-141-3p，鉴定出2个交集lncRNAs（MYLK-AS1和DLX6-AS1），并构建ceRNA网络。组织样本检测证实BRD4在HCC中的表达高于对照组。敲除BRD4显著抑制HCCLM3细胞的侵袭和迁移，并促进细胞凋亡。双荧光素酶测定证实miR-200a-3p调节的BRD4和MYLK-AS1、DLX6-AS1是上游海绵。结论:BRD4在HCC中的高表达与不良预后相关，BRD4过表达促进了HCC细胞的侵袭和迁移，并通过ceRNA调控机制参与HCC发生和发展。

问号耳是一种以耳廓中下部形态异常为主的先天性畸形,典型表现为耳轮下缘和耳垂之间的自然延续中断,存在不同程度的切迹或完全分离,还可以伴随耳廓上部的明显外突,所以又称之为蝶形耳.问号耳可以以散发性、家族性和耳髁突综合征特征之一等三种形式存在.该畸形的病因目前尚未明确,多认为与咽弓发育和下颌骨分化相关的EDN1-EDNRA-DLX信号通路异常有关.手术是矫正问号耳的根本方法.本文对问号耳的病因以及手术方式的研究进展进行归纳总结.

目的 基于调节单胺系统功能和神经免疫炎症研究新型5-羟色胺和去甲肾上腺素重摄取抑制剂(SNRI)ZBH2012001的抗抑郁作用机制.方法 ①雄性ICR小鼠分为溶剂组(蒸馏水)、度洛西汀组(10或20 mg·kg-1)、ZBH2012001组(5,10和20 mg·kg-1),ig给药1h后采用小鼠悬尾实验(TST)和强迫游泳实验(FST)2 个行为绝望模型评价ZBH2012001 的抗抑郁作用.② 采用放射性配体结合实验评价ZBH2012001与人源5-HT转运蛋白(hSERT)和NE转运蛋白(hNET)的靶标亲和力.③雄性ICR小鼠分为溶剂组(蒸馏水),度洛西汀组(10或20 mg·kg-1)和ZBH2012001组(5,10和20 mg·kg-1);ig给药1h后采用小鼠5-羟色氨酸(5-HTP)诱导甩头实验、育亨宾毒性增强实验初步评价ZBH2012001对5-羟色胺(5-HT)和去甲肾上腺素(NE)系统功能的影响.④雄性ICR小鼠分为溶剂组(蒸馏水+0.1%冰醋酸),利血平模型组(蒸馏水+利血平5 mg·kg-1),度洛西汀(度洛西汀20 mg·kg-1+利血平5 mg·kg-1)组及ZBH2012001(ZBH2012001 5,10和20 mg·kg-1+利血平5 mg·kg-1)组,ig给予ZBH2012001 1 h后ip注射利血平:通过观察眼睑下垂、体温下降和运动不能行为评价ZBH2012001对利血平诱导的单胺系统功能下调的影响;采用TST评价ZBH2012001对利血平诱导的抑郁样行为的影响;采用高效液相色谱-电化学检测法(HPLC-ECD)检测利血平单胺耗竭模型小鼠海马组织中单胺递质及其代谢产物的含量;采用ELISA检测利血平诱导单胺耗竭模型小鼠海马组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的含量;采用Western印迹法检测利血平诱导单胺耗竭模型小鼠海马组织中离子化钙结合适配分子1(Iba-1)和核因子κB(NF-κB)的表达.结果 ①与溶剂组相比,ZBH2012001(5,10和20 mg·kg-1)显著减少小鼠在TST中的不动时间(P<0.01),ZBH2012001(20 mg·kg-1)显著减少FST中的不动时间(P<0.05).②ZBH2012001可竞争抑制[3H]-丙咪嗪与hSERT和[3H]-尼索西汀与hNET的结合,半抑制浓度(IC50)值分别为 84.95 和712.90 nmol·L-1.③与溶剂组相比,ZBH2012001(10和20 mg·kg-1)可显著增加5-HTP诱导的小鼠甩头次数(P<0.01),提高育亨宾诱导的小鼠死亡率(P<0.05,P<0.01).④在利血平诱导的小鼠抑郁模型上,与溶剂组相比,利血平模型组小鼠出现眼睑下垂,体温下降和运动不能(P<0.01),悬尾不动时间显著延长(P<0.01),海马NE,5-HT和DA水平显著下降(P<0.05,P<0.01),海马5-HT代谢转换率和DA代谢转换率显著升高(P<0.01),海马TNF-α和IL-6水平显著升高(P<0.05),海马Iba-1和NF-κB表达显著升高(P<0.05);与模型组相比,ZBH2012001(5,10和20 mg·kg-1)可显著拮抗利血平诱导的小鼠眼睑下垂和体温下降(P<0.01),ZBH2012001(10和20 mg·kg-1)可显著缩短利血平小鼠的悬尾不动时间(P<0.05,P<0.01),ZBH2012001(20 mg·kg-1)可显著增加利血平小鼠海马NE和5-HT的水平(P<0.05),降低5-HT代谢转换率(P<0.05),显著降低利血平小鼠海马TNF-α和IL-6的水平(P<0.05),ZBH2012001(5,10和20 mg·kg-1)可显著降低利血平小鼠海马Iba-1表达(P<0.01),ZBH2012001(20 mg·kg-1)可显著降低利血平小鼠海马NF-κB表达(P<0.05).结论 ZBH2012001通过增强单胺系统功能以及抑制神经免疫炎症发挥抗抑郁作用.

为探讨长链非编码RNA(longnoncoding RNA,lncRNA)DLX6-AS1在巨噬细胞焦亡中的作用及相关机制,采用生物信息学分析、实时荧光定量PCR和双荧光素酶报告基因实验等,在THP-1巨噬细胞中分析并验证lncRNA DLX6-AS1下游微RNA(microRNA,miRNA)及miRNA的下游靶基因;通过免疫荧光染色等实验检测DLX6-AS1/miR-15/caspase-1轴对巨噬细胞焦亡的影响.结果显示,DLX6-AS1在焦亡巨噬细胞中表达上调,敲降DLX6-AS1可抑制巨噬细胞焦亡,但这种抑制作用被miR-15抑制剂逆转;miR-15通过调控其靶基因cas-pase-1表达,抑制巨噬细胞焦亡.本研究表明,DLX6-AS1通过竞争性结合miR-15,解除miR-15对其靶基因caspase-1的抑制作用,从而诱导巨噬细胞焦亡,这将丰富lncRNA调控巨噬细胞焦亡的理论基础.