目的 探讨凉血解毒化瘀方对慢加急性肝功能衰竭(acute-on-chronic liver failure,ACLF)模型小鼠的治疗作用及其对受体Toll样受体4(TLR4)/c-Jun氨基末端激酶(JNK)/核因子κB(NF-κB)通路的影响.方法 采用四氯化碳、细菌脂多糖(LPS)和D-氨基半乳糖(D-GalN)联合诱导法构建慢加急肝衰竭小鼠模型;生化分析检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)肝功能指标.肝组织病理学检查.荧光定量PCR检测肝组织白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1 β)、TLR4的mRNA表达.CCK8筛选凉血解毒化瘀方对Raw264.7细胞的干预浓度,酶联免疫吸附法检测巨噬细胞上清TNF-α、IL-6、IL-1β含量.蛋白免疫印迹法检测TLR4/JNK/NF-κB通路相关蛋白(TLR4、NF-κB、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、p-ERK1/2、p-JNK、JNK)的表达.结果 与ACLF模型组比较,凉血解毒化瘀方可降低血清ALT、AST、TBIL含量,减少肝组织细胞坏死、纤维化、炎症细胞浸润程度,及肝组织TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4的mRNA表达,并降低肝组织TLR4/JNK/NF-κB通路相关蛋白表达.细胞实验进一步发现凉血解毒化瘀方可抑制巨噬细胞TNF-α、IL-6、IL-1β分泌,下调TLR4/JNK/NF-κB通路相关蛋白表达.结论 凉血解毒化瘀方能有效改善ALCF小鼠肝功能、抑制其炎症反应的疗效,其机制与其下调TLR4/JNK/NF-κB通路有关.

卵巢癌(OC)在女性生殖系统肿瘤中致死率最高,治疗多选择手术切除加辅助化疗,然而易出现耐药性,导致患者预后差.miRNA-7在卵巢癌细胞中低表达,通过靶向表皮生长因子受体(EGFR)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路发挥抗肿瘤作用.本综述介绍miRNA-7-EGFR/ERK通路在卵巢癌治疗中的作用,为卵巢癌的治疗提供新的思路.

目的 在锂-毛果芸香碱(Lithium-Pilocarpine)致痫大鼠模型中,检测炎症小体的激活,观察小胶质细胞的活化和异常新生神经元的形成,探索炎症小体激活小胶质细胞促进异常新生神经元形成在癫痫发生发展中的作用机制.方法 通过腹腔注射氯化锂和毛果芸香碱建立癫痫大鼠模型,将大鼠分为Sham组(生理盐水对照组,n=12)、Pilo组(锂-毛果芸香碱致痫组,n=20)和Pilo+MCC950组[锂-毛果芸香碱致痫后给予核苷酸结合结构域富含亮氨酸重复序列和含热蛋白结构域受体3(NLRP3)抑制剂组,n=20],在急性期观察记录大鼠癫痫的行为学表现,通过病理切片确认脑组织损伤情况和细胞激活情况,借助分子检测确认炎症小体和其他分子的表达情况.采用体外细胞模型挽救实验验证炎症小体的作用.结果 Pilo组大鼠有6只出现V级,5只出现Ⅳ级,2只出现Ⅲ级的癫痫发作情况.相较之下,Pilo+MCC950组大鼠则没有出现Ⅴ级,6只出现Ⅳ级,8只出现Ⅲ级,2只出现Ⅱ级的癫痫发作情况.Pilo组强直痉挛发作的潜伏期短于Pilo+MCC950组,Ⅲ级以上癫痫发作的次数和持续时间大于Pilo+MCC950组.Pilo组NLRP3和pro-caspase-1的含量、4种促炎细胞因子的含量以及脑源性神经营养因子(BNDF)和细胞外调节蛋白激酶(ERK)均高于Pilo+MCC950组.免疫荧光检测显示,Pilo组小胶质细胞大量活化,出现大量异常新生神经元.体外细胞实验后,ELISA结果验证了炎症小体的作用.结论 在锂-毛果芸香碱致痫大鼠模型中,炎症小体NLRP3接受外界炎症刺激而活化聚集,进而大量产生多种促炎细胞因子,使得小胶质细胞活化,分泌BDNF并激活ERK信号通路,调控异常新生神经元的形成和聚集等生物学行为,参与癫痫的发生发展.

目的:观察舒肌汤对左旋多巴(Levodopa,L-DOPA)诱发的帕金森病(Parkinson's disease,PD)肌僵直模型大鼠的影响,并探讨其作用机制.方法:L-DOPA诱导建立PD肌僵直大鼠模型,随机分为模型组(等体积生理盐水),舒肌汤低、中、高剂量组(10、20、40 g/kg),同时设假手术组(等体积生理盐水)作为对照,每组6只大鼠,每天灌胃给药1次,连续给药28 d.给药完成后通过旋转次数实验、翻正反射实验、肌电图检测行为学表现.免疫组化检测脑组织酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)表达水平.ELISA检测脑纹状体组织多巴胺(dopamine,DA)和TH的含量.Western blot检测脑纹状体组织FBJ鼠科骨肉瘤病毒癌基因同源物B(FBJ Murine Osteosarcoma Viral Oncogene Homolog B,FosB)、磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylation-extracellular signal-regulated kinase,p-ERK)蛋白表达水平.结果:与假手术组相比,模型组大鼠旋转次数、翻正反射时间与评分、肌肉动作电位波幅和潜伏期显著升高或延长(P＜0.01),MCV显著降低(P＜0.01);与模型组相比,舒肌汤组大鼠旋转次数、翻正反射时间与评分、肌肉动作电位波幅和潜伏期显著降低或缩短(P＜0.05),MCV显著升高(P＜0.01).免疫组化结果显示舒肌汤可上调脑组织TH表达水平;ELISA结果显示舒肌汤可上调DA和TH含量.Western blot结果显示舒肌汤可下调FosB、p-ERK蛋白表达水平.结论:舒肌汤对帕金森病模型大鼠肌僵直有显著疗效,其作用机制可能与上调DA和TH含量、下调FosB、p-ERK蛋白表达有关.

目的 探讨三七皂苷对急性肾损伤大鼠的保护作用及分子机制.方法 30只SD大鼠随机分为对照组、模型组和三七皂苷组,每组10只.模型组和三七皂苷组大鼠采用一次性灌胃给予2 g/kg对乙酰氨基酚建立急性肾损伤模型,建模成功后24 h,三七皂苷组大鼠经腹腔注射三七皂苷100 mg/kg,对照组和模型组经腹腔注射等体积生理盐水.治疗10 d后分析3组大鼠肾指数;采用苏木精-伊红(HE)染色观察3组大鼠肾病理变化;采用试剂盒检测3组大鼠血清肌酐和血尿氮水平;采用生物化学法分析3组大鼠血清氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测3组大鼠血清炎性因子[白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测3组大鼠肾组织磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)和磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)蛋白表达水平;组间计量数据比较采用单因素方差分析.结果 三七皂苷组大鼠肾指数(0.95±0.04)明显低于模型组大鼠肾指数(1.13±0.07),差异有统计学意义(t=7.547,P＜0.05).三七皂苷组大鼠血清肌酐和血尿氮[(47.31±4.40)μmol/L和(18.65±1.88)mmol/L]明显低于模型组[(76.52±5.34)μmol/L 和(26.31±2.74)mmol/L],差异有统计学意义(t=13.350、7.288,P＜0.05).三七皂苷组大鼠肾脏病理评分[(1.60±0.70)分]明显低于模型组[(3.80±0.63)分],差异有统计学意义(t=7.379,P＜0.05).三七皂苷组大鼠肾脏组织SOD活性和 GSH-Px 水平[(217.37±13.29)U/mg 和(1.60±0.09)μmol/L]明显高于模型组[(142.33±18.88)U/mg 和(1.18±0.11)μmol/L],差异有统计学意义(t=10.280、9.457,P＜0.05).三七皂苷组大鼠肾脏MDA水平[(0.80±0.07)nmol/mg]明显低于模型组[(1.44±0.14)nmol/mg],差异有统计学意义(t=12.830,P＜0.05).三七皂苷组大鼠血清TNF-α和IL-6水平[(67.96±9.84)pg/ml和(91.92±6.63)pg/ml]明显低于模型组[(67.96±9.84)pg/ml 和(91.92±6.63)pg/ml],差异有统计学意义(t=9.384、14.020,P＜0.05).三七皂苷组大鼠肾脏组织p-p38 MAPK、p-ERK和p-JNK蛋白表达水平(1.21±0.08、1.16±0.14、1.32±0.13)明显低于模型组(1.74±0.14、1.55±0.16、1.94±0.09),差异有统计学意义(t=10.280、5.887、12.460,P＜0.05).结论 三七皂苷通过抑制MAPK信号通路表达,从而减轻炎性因子释放,改善肾损伤,起到保护肾功能作用.

目的:探讨山楂有机酸通过缺血后适应保护心肌缺血再灌注(I/R)损伤的作用机制.方法:采用Langendorff离体心脏灌流装置对SD大鼠心脏进行缺血再灌注并记录心脏动力学改变,从再灌注期开始全程在灌流液中给予不同浓度的山楂有机酸.采用三苯四唑氯(TTC)染色评估心肌梗死面积.采用CellTiter 96 ?溶液细胞增殖法测定心肌细胞存活率;流式细胞仪检测H2O2(过氧化氢)诱导的心肌细胞凋亡;采用试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)释放、细胞内丙二醛(MDA)生成、抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)]活力;以试剂盒检测半胱氨酸天冬氨酸酶-3(Caspase-3)和Caspase-9活力;Western blot法检测线粒体凋亡调控蛋白(BAX和BCL-2)、磷酸化丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)和磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(p-P38)的表达变化.结果:与空白对照组相比,模型对照组的左心室舒张压显著降低,心肌梗死面积显著增加,细胞活力显著下降(P＜0.01),LDH释放和细胞内MDA生成显著增加(P＜0.01),SOD和GSH-Px的活力显著降低(P＜0.01),Caspase-3和Caspase-9的活力显著增加(P＜0.01),BAX的表达上调,BCL-2的表达显著下调(P＜0.01),AKT和ERK的磷酸化被抑制、P38和JNK的磷酸化被激活(P＜0.05或P＜0.01);与模型对照组比较,山楂有机酸25、100 μg/mL组显著改善了小鼠离体心脏左心室舒张压(P＜0.01),降低了心肌I/R损伤引起的梗死面积(P＜0.01),明显提高了心肌细胞存活率,降低了过氧化氢致心肌细胞损伤的LDH泄漏和MDA生成、提高了 SOD和GSH-Px活力(P＜0.05或P＜0.01),明显降低过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡以及Caspase-3和Caspase-9活力,下调BAX、BCL-2蛋白表达(P＜0.05或P＜0.01),上调p-AKT和p-ERK蛋白表达(P＜0.05),下调p-JNK和p-P38的蛋白表达(P＜0.01),PI3K特异性抑制剂LY294002、JNK和P38特异性激动剂Anisomycin以及ERK特异性抑制剂PD98059降低山楂有机酸100 μg/mL对过氧化氢引起的细胞存活率升高和Caspase-3活力的降低(P＜0.05或P＜0.01).结论:PI3K/AKT和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路可能介导了山楂有机酸通过缺血后适应提高抗氧化酶活力、抑制心肌细胞凋亡,保护心肌I/R损伤的作用.

目的:研究γ-突触核蛋白(γ-synuclein)对内质网应激诱导的结肠癌细胞自噬和凋亡的影响及其细胞保护作用.方法:针对稳定表达γ-synuclein siRNA的人结肠癌HCT116细胞和空载体HCT116细胞,通过基因表达谱芯片分析γ-synuclein下游差异基因,找到可能的自噬及凋亡相关分子.用毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)模拟内质网应激,采用Western blot检测γ-synuclein蛋白、自噬相关蛋白[微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、beclin-1、自噬相关蛋白5(autophagy-related protein 5,ATG5)和ATG7]及凋亡相关蛋白{多腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]、pro-caspase-3和pro-caspase-9}的表达,CCK-8法检测细胞活力,荧光显微镜观察吖啶橙染色的酸性囊泡细胞器和绿色荧光蛋白标记的LC3,检测人结肠癌HCT116和SW480细胞自噬、凋亡及活力的变化.分别采用γ-synuclein siRNA、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-reg-ulated kinase,ERK)抑制剂PD98059、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)抑制剂SP600125和JNK激活剂anisomycin预处理,Western blot检测γ-synuclein及ERK和JNK信号通路相关蛋白表达,检测伴随的HCT116细胞自噬和凋亡的变化,研究γ-synuclein通过调控相关信号通路对细胞自噬的影响及其细胞保护作用.结果:TG模拟内质网应激诱导的结肠癌细胞自噬主要发生在早期(0～24 h),细胞凋亡主要发生在晚期(36～48 h).内质网应激上调γ-synuclein的表达,并伴有自噬的增强.γ-synuclein早期(0～24 h)通过激活ERK和JNK通路促进自噬,晚期(36～48 h)通过抑制JNK通路抑制凋亡,从而起到保护细胞的作用.γ-synuclein可能在内质网应激诱导的细胞自噬和凋亡之间的过渡发挥一定的作用.结论:在内质网应激环境下,γ-synuclein通过调控ERK和JNK信号通路来促进自噬、抑制凋亡,发挥针对结肠癌细胞的保护作用,这为抗肿瘤治疗提供了一个潜在的思路.

目的:探讨五味子甲素(DSD)对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠的保护作用及其对核因子κB(NF-κB)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的作用机制.方法:将无特定病原体(SPF)组雄性SD大鼠分为假手术组(仅穿线不结扎,生理盐水灌胃)和造模大鼠(MIRI模型).将造模成功大鼠随机分为模型组(生理盐水灌胃)、阳性药物组(复方丹参滴丸8.5 mg/kg灌胃)、DSD低剂量组(DSD 20 mg/kg灌胃)、DSD中剂量组(DSD 40 mg/kg灌胃)、DSD高剂量组(DSD 80 mg/kg灌胃),每组20只.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌红蛋白(Mb)和心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ);氯化三苯基四氮唑(TTC)测量心肌梗死面积;苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织病理变化;检测心肌组织丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6);蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠心肌组织NF-κB/MAPK通路相关蛋白的表达.结果:与假手术组比较,模型组MIRI大鼠心肌组织肌纤维弯曲,肌细胞减少,肿胀明显,细胞核严重固缩,血清CK-MB、Mb、cTnⅠ水平、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率、MDA、TNF-α、IL-6含量及p-NF-κB p65、磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)、p-p38蛋白水平均升高,SOD活性降低(P＜0.05).与模型组比较,阳性药物组和DSD各剂量组大鼠心肌组织损伤减轻,肌纤维形态完整,肌细胞增加,无明显肿胀,细胞核固缩减轻,血清CK-MB、Mb、cTnⅠ水平、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率、MDA、TNF-α、IL-6含量及p-NF-κB p65、p-IκBα、p-ERK1/2、p-p38蛋白水平均降低,SOD活性升高(P＜0.05).结论:DSD通过抑制NF-κB/MAPK通路,对MIRI大鼠发挥保护作用.

目的:探索快速上浮脱险致减压病大鼠肺组织炎性反应机制，观察快速上浮脱险致减压病大鼠发病早期肺组织细胞外调节蛋白激酶(ERK)活性变化。方法:18只大鼠被分为对照组、快速上浮脱险存活组和快速上浮脱险死亡组，每组6只。快速上浮脱险大鼠在不安全的"快速上浮脱险"8 min后麻醉处死取材。所取肺组织应用Western blotting实验检测p-ERK蛋白表达量。结果:快速上浮脱险死亡组大鼠肺组织p-ERK表达量较对照组有显著增高，快速上浮脱险存活组大鼠肺组织p-ERK表达量较对照组无显著增高。结论:快速上浮脱险导致减压病大鼠肺组织发生炎性反应可能与ERK激活有关。

硫化氢(hydrogen sulfide, H 2S)在抑制中性粒细胞胞外捕网(neutrophil extracellular traps, NETs)的形成中发挥重要的生理作用。H 2S通过多种途径抑制NETs的形成，包括抑制血小板活化介导的NETs产生，上调miR-16-5P抑制其目标基因磷酸肌醇-3-激酶调节亚基1(phosphoinositide-3-kinase regulatory subunit 1, PIK3R1)和RAF1的表达，抑制丝裂原活化蛋白激酶家族(mitogen-activated protein kinases, MAPKs)细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK)途径，减少活性氧(reactive oxygen species, ROS)及呼吸爆发，降低自噬和细胞内钙离子水平等。文章就硫化氢类药物及其衍生制品的研发和应用、NETs相关疾病的临床防治进行了综述。