目的:检测中晚期下咽鳞状细胞癌（简称鳞癌）患者TPF（紫杉醇+顺铂+5-氟尿嘧啶）诱导化疗前G蛋白偶联受体（G protein-coupled receptor，GPR）68的表达水平和肿瘤浸润淋巴细胞（tumor infiltrating lymphocytes，TIL）的数量，评估其对化疗疗效及预后的价值。方法:回顾性分析2012年9月至2017年11月首都医科大学附属北京同仁医院收治并进行TPF诱导化疗的31例中晚期下咽鳞癌患者，其中男性28例，女性3例，年龄43~71岁。通过免疫组化染色的方法检测患者化疗前肿瘤中GPR68和CD4 +、CD8 +T细胞的阳性率，利用 t检验分析其与临床特征、化疗疗效、总生存期（overall survival，OS）之间的关系。 结果:31例患者经3个周期化疗后，4例患者达完全缓解（CR），14例部分缓解（PR），10例疾病稳定（SD），3例疾病进展（PD）。有效组（CR+PR）中GPR68及CD8阳性率分别为25%、40%；无效组（SD+PD）中GPR68及CD8阳性率分别为50%、15%，2组相比差异有统计学意义（ t值分别为5.17和12.86， P值均<0.001）；线性回归分析显示GPR68与CD8 +T细胞存在负相关关系（ r=-0.64， P<0.001）；CD4的表达与患者TPF疗效无相关性（ P>0.05）。GPR68高表达和低表达组OS分别为12.5和25.0个月，差异有统计学意义（ HR=0.30， P=0.005）；CD8高浸润和低浸润组OS分别为25.0和14.5个月，差异有统计学意义（ HR=2.58， P=0.019）。Cox回归分析结果显示，GPR68、CD8 +T细胞是有意义的预后因素［ OR（95% CI）分别为3.27（2.46~5.97）和1.53（0.78~1.82）， P值均<0.05］；而CD4对预后无影响（ P>0.05）。 结论:GPR68和CD8 +T细胞有希望成为评估中晚期下咽鳞癌患者TPF诱导化疗疗效和预后的生物标志物。

目的:通过体外研究探索肠道菌群代谢产物丁酸钠对脂肪变性HepG2细胞增殖与凋亡的影响机制。方法:采用人源性肝细胞系HepG2、游离脂肪酸(FFA；油酸与棕榈酸浓度比为2∶1)建立体外脂肪变性肝细胞模型。设置正常对照组、模型组、丁酸钠不同浓度(1、2、5、10、20、50 mmol/L)干预组，使用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测丁酸钠对脂肪变性HepG2细胞增殖的抑制作用；设置正常对照组、模型组和丁酸钠5 mmol/L干预(丁酸钠干预)组，采用流式细胞术检测各组凋亡细胞比例；设置正常对照组、模型组和丁酸钠1、2、5、10 mmol/L干预组、空白小干扰RNA(siRNA)干扰组、G蛋白偶联受体(GPR)43干扰组、GPR109a干扰组、 GPR43/ GPR109 a双敲组，采用蛋白质印迹法检测各组转染前后的磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)蛋白质水平变化。统计学方法采用单因素方差分析、SNK- q检验和logistic回归分析。 结果:CCK-8检测结果提示丁酸钠对脂肪变性HepG2细胞增殖的抑制作用有剂量、时间依赖性。流式细胞术检测结果显示，丁酸钠干预组的细胞凋亡比例高于模型组和正常对照组[(3.400±0.100)%比(1.800±0.400)%、(1.067±0.451)%]，差异均有统计学意义( t＝6.721、8.705， P均<0.01)；模型组凋亡细胞比例与正常对照组比较差异无统计学意义( P>0.05)。转染前，模型组的p-AKT、p-mTOR蛋白质水平均高于正常对照组(2.300±0.058比1.000±0.012、2.160±0.125比1.000±0.052)，差异均有统计学意义( t＝22.080、8.575， P均<0.05)；丁酸钠1、2、5、10 mmol/L干预组的p-AKT和p-mTOR蛋白质水平均低于模型组(1.530±0.085、1.407±0.096、1.032±0.035、1.036±0.099比2.300±0.058，1.483±0.073、1.297±0.048、1.067±0.035、0.970±0.072比2.160±0.125)，差异均有统计学意义( t＝7.491、7.997、19.790、11.020，4.683、6.445、8.424、8.245， P均<0.05)。转染后，GPR43干扰组、GPR109a干扰组和 GPR43/ GPR109 a双敲组的p-AKT、p-mTOR蛋白质水平均高于空白siRNA干扰组和丁酸钠5 mmol/L干预组(1.474±0.045、1.471±0.058、2.067±0.120比1.158±0.030和1.139±0.031，1.850±0.082、1.683±0.058、2.160±0.091比1.469±0.037和1.490±0.116)，差异均有统计学意义( tp-AKT＝5.807、4.816、7.322，6.109、5.080、7.463； tp-mTOR＝4.235、3.113、7.044，2.542、1.497、4.562； P均<0.05)。 结论:丁酸钠对脂肪变性HepG2细胞增殖和凋亡的影响与GPR43/GPR109a-p-AKT-mTOR信号通路有关。

目的 比较幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染与非Hp感染的慢性萎缩性胃炎(Chronic atrophic gastritis,CAG)患者胃黏膜病理状态与刺猬蛋白-细胞表面受体Ptch-G蛋白偶联受体样蛋白Smo-胶质瘤相关癌基因同源蛋白Gli(Hedgehog信号通路,Hh-Ptch-Smo-Gli)及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶/核因子κB/转录信号转导子和转录活化子1(NOX/NF-κB/STAT1)信号通路相关因子表达差异,探究Hp促进CAG"炎癌转化"的生物学机制.方法 纳入符合标准的43名CAG患者,分为CAG伴Hp感染组(Hp+CAG组,n=21)、CAG不伴Hp感染组(Hp-CAG组,n=22),观察两组患者胃黏膜苏木精-伊红(HE)染色组织形态学改变,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测胃黏膜NOX1、NOX2、NOX4、STAT1、P65、p-P65相对表达量;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测胃黏膜胶质瘤相关癌基因同源蛋白1 mRNA(Gli1 mRNA)、胶质瘤相关癌基因同源蛋白2 mRNA(Gli2 mRNA)、胶质瘤相关癌基因同源蛋白3 mRNA(Gli3 mRNA)、音猬因子mRNA(Shh mRNA)、G蛋白偶联受体样蛋白mRNA(Smo mRNA)、细胞表面受体Ptch mRNA(Ptch mRNA)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1 mRNA(NOX1 mRNA)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2 mRNA(NOX2 mRNA)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4 mRNA(NOX4 mRNA)、核因子κB mRNA(NF-κB mRNA)水平.结果 两组患者胃组织HE染色结果:Hp+CAG组患者胃黏膜上皮细胞部分坏死脱落,表面欠光整,腺体数量减少,排列紊乱,可见肠上皮化生,固有层内可见弥漫性淋巴细胞、中性粒细胞浸润;Hp-CAG组患者淋巴细胞和中性粒细胞浸润程度较Hp+CAG组轻.RT-qPCR检测结果:与Hp-CAG组相比,Hp+ CAG组患者胃黏膜Gli1 mRNA、Shh mRNA、Smo mRNA、Ptch mRNA水平显著降低(P<0.01);Gli2 mRNA、Gli3 mRNA、NOX1 mRNA、NOX2 mRNA、NOX4 mRNA、NF-κB mRNA水平显著增高(P<0.01).Western blot检测结果:与Hp-CAG组相比,Hp+CAG组患者胃黏膜NOX1/GAPDH(内参)、NOX2/GAPDH、NOX4/GAPDH、p-P65/GAPDH相对表达量明显增高(P<0.01),STAT1水平显著降低(P<0.01),两组P65/GAPDH相对表达量的差异没有统计学意义(P>0.05).结论 Hp感染后可能通过抑制Hh-Ptch-Smo-Gli信号通路,并使NOX/NF-κB/STAT1信号通路异常活化,导致胃黏膜长期炎症,促进萎缩及肠上皮化生,增加癌变风险.

目的 探讨血清可溶性MHC-I类链相关蛋白A(sMICA)、增殖细胞核抗原(PCNA)、G蛋白偶联受体相关分选蛋白1(GASP-1)、组织金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的表达及与病理分型的相关性.方法 2020年7月至2022年8月诊治的86例NSCLC患者作为研究对象,并设立为观察组,同期选取43例健康体检者设立为对照组;并根据不同病理分型将观察组分为腺癌组(n=33)和鳞癌组(n=53),对比血清 sMICA、PCNA、GASP-1、TIMP-1;并采用 Logistic 回归模型分析 sMICA、PCNA、GASP-1、TIMP-1对非小细胞肺癌的影响;采用ROC曲线模型分析sMICA、PCNA、GASP-1、TIMP-1诊断非小细胞肺癌的AUC、敏感度及特异度.结果 观察组的sMICA、PCNA、GASP-1、TIMP-1均高于对照组(P＜0.05).腺癌组的sMICA、PCNA、GASP-1、TIMP-1 均高于鳞癌组(P＜0.05).二元 Logistic 回归模型分析显示,sMICA、PCNA、GASP-1、TIMP-1高表达会对非小细胞肺癌的发生产生影响(P＜0.05). ROC曲线分析显示,sMICA、PCNA、GASP-1、TIMP-1 及四项联合诊断 NSCLC 的 AUC 值分别为(0.750、0.654、0.819、0.788、0.843,P 均＜0.05),敏感度分别为 57.00％、46.50％、67.40％、90.70％、79.10％;特异度分别为 93.00％、93.00％、88.40％、58.10％、86.00％.结论 sMICA、PCNA、GASP-1、TIMP-1在NSCLC患者中呈高表达趋势,其表达水平会随病理分型而升高.

短链脂肪酸(SCFA)作为肠道菌群的重要代谢产物,广泛参与机体免疫反应,以及糖、脂代谢调节等重要生理过程,并且作为中间介质影响2型糖尿病(T2DM)的发展.为更系统、全面地了解运动对肠道菌群SCFA的影响及其改善T2DM的可能机制,本文通过检索总结分析相关文献,就不同运动方式对T2DM机体肠道菌群或SCFA的影响效果,以及运动促进SCFA进而调节糖代谢的可能机制进行系统梳理与分析.结果发现:(1)运动可通过改变肠道菌群构成比,增加产SCFA菌群促进SCFA产生,其中涉及的运动干预呈现多元化,包括有氧运动、抗阻运动、有氧联合抗阻运动和高强度间歇运动等,证实了运动在辅助治疗T2DM方面具有潜在应用价值.(2)运动增进SCFA释放由此改善T2DM的机制可能涉及多条分子信号通路,SCFA能激活腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)信号通路抑制肝脏糖异生,另一方面,SCFA与G蛋白偶联受体(GPCR)(GPR41/GPR43)结合促进胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和肠道肽YY(PYY)释放,同时通过抑制组蛋白去乙酰化酶(HDAC)活性增加胰岛素受体底物1(IRS1)表达,激活下游的磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)信号通路,加速肌肉和脂肪对糖的摄取与利用.关于运动对产SCFA菌群与SCFA的具体影响效果,以及运动促进SCFA释放并以此调控糖代谢的作用机制有待后续研究进一步明确.

基于肠道菌群分析探讨葛根对 2 型糖尿病(type 2 diabetes,T2DM)db/db小鼠胰岛素抵抗的作用及可能机制.将 50只db/db小鼠随机分为模型组、二甲双胍组以及葛根高、中、低剂量组,另取10 只db/m小鼠为正常组.持续给药8 周,测量小鼠体质量和血糖;酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测糖化血清蛋白(glycosylated serum pro-tein,GSP)、血清空腹胰岛素(fasting serum lisulin,FINS),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);HE染色观察胰腺组织病理学变化;免疫组化检测胰腺肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达;16S rRNA技术检测正常组、模型组和葛根中剂量组小鼠粪便肠道菌群结构变化;蛋白免疫印记法检测回肠组织中法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)、G蛋白胆汁酸偶联受体 5(takeda G protein-coupled receptor 5,TGR5),肝组织中胆固醇 7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)、甾醇27α-羟化酶(sterol 27α-hydroxylase,CYP27A1)和结肠组织中G蛋白偶联受体41(G protein-coupled receptor 41,GPR41)、G蛋白偶联受体 43(G protein-coupled receptor 43,GPR43)的表达.与正常组比较,模型组小鼠体质量、血糖、血清 GSP、空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、FINS显著增加,HOMA-IR指数显著上升;胰岛细胞炎性浸润,大量腺泡细胞坏死变性,胰岛细胞和腺泡细胞边界不清晰;肠道菌群发生紊乱;组织中FXR、TGR5、CYP7A1、CYP27A1、GPR41 和GPR43 蛋白表达显著降低.与模型组比较,二甲双胍组、葛根组小鼠体质量、血糖、血清GSP、FBG、FINS显著降低;胰岛细胞形态完整呈团状边界清晰,少量腺泡细胞坏死,可见较多胰岛细胞;葛根中剂量组肠道菌群从门到属水平均发生了变化,影响肠道菌群代谢物的菌群相对丰度增加;组织中FXR、TGR5、CYP7A1、CYP27A1、GPR41 和GPR43 蛋白表达显著升高.综合实验结果发现,葛根可改善T2DM db/db小鼠胰岛细胞的炎症损伤,减轻胰岛素抵抗,其作用机制可能与增加肠道中放线菌门、双歧杆菌、拟杆菌属丰度和肠道菌群代谢物相关蛋白表达有关.

目的 探讨丁酸通过激活G蛋白偶联受体41/43(GPR41/43)通路降低高血压模型大鼠血压的机制.方法 75只雄性SD大鼠随机分为假手术组(15只)和造模组(60只),采用两肾一夹方法 建立高血压大鼠模型,将成模鼠随机分为对照组(超纯水0.1 mL/kg)、丁酸高剂量组(220 mg/kg)、丁酸低剂量组(110 mg/kg)和缬沙坦组(30 mg/kg),每组15只,连续灌胃给药4周.分别在给药前后测量大鼠尾动脉收缩压(SBP)及心率(HR).采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)含量;实时荧光定量PCR(qPCR)检测大鼠胸主动脉组织中IL-6、TNF-α、eNOS的mRNA表达水平.免疫组织化学染色检测大鼠胸主动脉GPR41/43表达量.结果 给药2周,对照组大鼠SBP较假手术组显著升高(P＜0.05),丁酸高剂量组、丁酸低剂量组、缬沙坦组SBP较对照组降低,且丁酸高剂量组低于低剂量组(P＜0.05).给药4周,丁酸高剂量组较丁酸低剂量组SBP明显降低(P＜0.05);给药前后各组大鼠HR差异均无统计学意义(P＞0.05).给药后丁酸高剂量组、丁酸低剂量组eNOS蛋白和mRNA表达量较对照组增加,IL-6、TNF-α蛋白及mRNA表达量均降低(P＜0.05).免疫组织化学染色显示,大鼠胸主动脉组织的GPR41/43表达较对照组增加,且高于缬沙坦组(P＜0.05).结论 丁酸对高血压大鼠有明显的降压作用,可能与激活GPR41/43通路增加血管舒张,抑制炎性因子表达有关.

目的:通过动物实验,研究异功散早期干预下支气管哮喘模型幼鼠血清短链脂肪酸(SCFAs)及肺组织G蛋白偶联受体43(GPR43)表达的变化,探索异功散防治哮喘的作用机制.方法:7 日龄BALB/c雌性幼鼠共 32 只,随机分为空白组、模型组、中药组(异功散)和益生菌组(酪酸梭菌),以鸡卵清蛋白(OVA)致敏激发法制备哮喘幼鼠模型后,检测其血清SCFAs含量及肺组织GPR43 的表达.结果:与空白组比较,模型组血清SCFAs中乙酸浓度升高,丙酸、丁酸浓度降低,但差异均无统计学意义(均P＞0.05);肺组织GPR43 表达有增高趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05).与模型组比较,中药组及益生菌组血清SCFAs中乙酸浓度升高、丁酸浓度下降,差异均无统计学意义(均P＞0.05),但血清乙酸相对比值升高,差异有统计学意义(P＜0.05),血清丙酸浓度及丙酸相对比值均显著下降(均P＜0.05).中药组肺组织GPR43 表达显著高于模型组(P＜0.05),但幼鼠血清乙酸浓度及肺组织GPR43 表达之间无显著相关(P＞0.05).结论:异功散的早期干预可能影响了哮喘幼鼠肠道菌群的SCFAs代谢,并上调了肺组织GPR43 表达,但对这二者的作用并无显著相关性.

目的 人类的肠道是比较复杂的生态系统.肠道菌群通过影响肠道内分泌细胞(如L细胞、EC细胞、PP细胞)等,激活特异性的G蛋白偶联受体表达(如GPR41、GPR43、GPR119和TGR5),引起GLP-1、GLP-2和PYY等多种肽类和激素的分泌,从而维持糖脂代谢、胆汁酸的代谢和免疫炎症系统的平衡.改变肠道微生物的生态会影响宿主内环境的稳定,引起代谢性疾病.胆汁酸是胆固醇代谢的产物.胆汁酸作为信号分子与TGR5结合,激活法尼醇衍生物X受体的表达,并通过肠肝循环来发挥它的生物调节作用.胆汁酸与肠道菌群对体内的代谢有着重要的作用.

探讨外源性短链脂肪酸(SCFAs)对高糖诱导的肾系膜细胞氧化应激-炎症的影响.体外培养正常小鼠肾系膜细胞,高糖作为刺激因子,设计 siRNA 靶向沉默 SCFAs 特异性 G 蛋白偶联受体43 (GPR43)表达,观察不同浓度SCFAs(乙酸、丙酸、丁酸)和GPR43受体激动剂干预后细胞活性氧簇、丙二醛和炎症因子单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素1β(IL-1β)表达的变化.SCFAs和GPR43受体激动剂呈浓度依赖性抑制高糖诱导的肾系膜细胞活性氧簇和丙二醛生成,抑制MCP-1和IL-1β的表达和释放(均P<0.05);SiRNA靶向沉默GPR43受体部分逆转SCFAs介导的抗氧化应激和抗炎效果(均P<0.05).外源性SCFAs抑制高糖诱导的肾系膜细胞氧化应激及炎症损伤,其机制可能与GPR43受体介导的信号通路有关,该信号通路可能是糖尿病肾脏疾病的潜在防治靶点.