目的 探讨Takeda G蛋白偶联受体5(Takeda G pro-tein-coupled receptor 5,TGR5)在小鼠血管平滑肌细胞(vas-cular smooth muscle cells,VSMCs)增殖和迁移中的作用及机制.方法 用血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF-BB)诱导VSMCs增殖、迁移,以INT-777特异性激活TGR5,CCK-8试剂盒及增殖细胞核抗原(Ki-67)免疫荧光染色用于检测细胞增殖能力,划痕试验用于检测细胞迁移能力.Western blot检测TGR5蛋白水平变化.为探究TGR5在血管内膜增生中的作用,将40只雄性野生型C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、内膜损伤组、假手术+UDCA(熊去氧胆酸,TGR5激动剂)组及内膜损伤+UDCA组,每组10只.造模完成后按组分别予以口服普通维持饲料及含0.5％UD-CA的普通维持饲料,持续21 d后分别取材,HE染色观察颈动脉内膜增生程度,Ki-67免疫荧光染色观察颈动脉内膜血管平滑肌增殖变化.结果 特异性激活TGR5明显降低VSMCs增殖活力及Ki-67阳性细胞率,同时使VSMCs划痕愈合速度减慢.特异性激活TGR5使细胞内UCP2表达增加、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平降低.过氧化氢恢复细胞内ROS水平后,TGR5抑制VSMCs增殖迁移的作用被削弱.激活TGR5能减轻颈动脉损伤后内膜增生.结论 TGR5可能通过UCP2改善细胞内氧化应激,从而抑制小鼠VSMCs的增殖和迁移.

目的 探讨血清人G蛋白偶联胆汁酸受体1(GPBAR1)、微管相关蛋白轻链3(LC3)及血清肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF)水平对于卵巢癌发生的预测评价.方法 选取2019年10月—2022年10月期间在宁夏银川市第一人民医院经确诊接受治疗的卵巢癌患者及同期于医院体检的96例健康志愿者作为研究对象,将卵巢癌患者作为观察组(96例),健康受试者作为对照组(96例).统计两组研究对象的一般资料,并比较两组GPBAR1、LC3及HB-EGF的表达水平差异.采用多因素logistic回归模型分析卵巢癌发生与GPBAR1、LC3及HB-EGF的关系.结果 干预后,观察组GPBAR1水平为(707.69± 2.56)pg/ml明显高于对照组(246.15±11.98)pg/ml,差异有统计学意义(P＜0.05);观察组LC3水平(0.53±0.11)μg/mL显著高于对照组的(0.15±0.03)pg/ml,差异有统计学意义(P＜0.05);观察组HB-EGF水平(597.45±110.37)ng/ml明显高于对照组(302.36±93.25)ng/ml,差异有统计学意义(P＜0.05),logistic多因素回归分析显示,GPBAR1(OR=2.051、P＜0.05)、LC3(OR=0.595、P＜0.05)、HB-EGF(OR=1.974、P＜0.05)是影响卵巢癌发生的独立危险因素(P＜0.05).ROC 结果显示,血清GPBAR1、LC3及HB-EGF对卵巢癌的诊断效果曲线下面积(AUC)分别为0.758、0.768及0.817,对应灵敏度分别为82.43％、65.13％及73.26％,特异性分别为68.59％、94.11％及88.24％.三者联合诊断的AUC为0.893,灵敏度和特异度分别为83.72％和94.13％.结论 卵巢癌患者血清GPBAR1、LC3、HB-EGF水平升高,三者分别对卵巢癌发生的预测有一定的诊断价值,但三者联合的预测诊断效能更好,可在临床推广应用.

胆汁酸是胆固醇代谢的产物,主要在肝脏及肠道微生物的共同作用下产生,少部分可由中枢神经系统内神经元和星形胶质细胞产生.中枢神经系统中不但有合成胆汁酸的多种酶类,还有多种胆汁酸的结合受体,比如法尼醇X受体(FXR)、武田G蛋白偶联受体5(TGR5)、鞘氨醇1-磷酸受体2(S1PR2)等,在脑内的物质和能量代谢、神经元电活动过程中发挥重要作用,并与阿尔茨海默病(AD)、帕金森病(PD)、亨廷顿病(HD)、脑卒中等多种神经系统疾病有关.以上表明胆汁酸是肠道微生物调节神经系统功能的重要介质.深入研究胆汁酸对中枢神经系统的影响,将有助于丰富脑-肠轴的理论,为中枢神经系统疾病的治疗提供新的思路.

基于肠道菌群分析探讨葛根对 2 型糖尿病(type 2 diabetes,T2DM)db/db小鼠胰岛素抵抗的作用及可能机制.将 50只db/db小鼠随机分为模型组、二甲双胍组以及葛根高、中、低剂量组,另取10 只db/m小鼠为正常组.持续给药8 周,测量小鼠体质量和血糖;酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测糖化血清蛋白(glycosylated serum pro-tein,GSP)、血清空腹胰岛素(fasting serum lisulin,FINS),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);HE染色观察胰腺组织病理学变化;免疫组化检测胰腺肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达;16S rRNA技术检测正常组、模型组和葛根中剂量组小鼠粪便肠道菌群结构变化;蛋白免疫印记法检测回肠组织中法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)、G蛋白胆汁酸偶联受体 5(takeda G protein-coupled receptor 5,TGR5),肝组织中胆固醇 7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)、甾醇27α-羟化酶(sterol 27α-hydroxylase,CYP27A1)和结肠组织中G蛋白偶联受体41(G protein-coupled receptor 41,GPR41)、G蛋白偶联受体 43(G protein-coupled receptor 43,GPR43)的表达.与正常组比较,模型组小鼠体质量、血糖、血清 GSP、空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、FINS显著增加,HOMA-IR指数显著上升;胰岛细胞炎性浸润,大量腺泡细胞坏死变性,胰岛细胞和腺泡细胞边界不清晰;肠道菌群发生紊乱;组织中FXR、TGR5、CYP7A1、CYP27A1、GPR41 和GPR43 蛋白表达显著降低.与模型组比较,二甲双胍组、葛根组小鼠体质量、血糖、血清GSP、FBG、FINS显著降低;胰岛细胞形态完整呈团状边界清晰,少量腺泡细胞坏死,可见较多胰岛细胞;葛根中剂量组肠道菌群从门到属水平均发生了变化,影响肠道菌群代谢物的菌群相对丰度增加;组织中FXR、TGR5、CYP7A1、CYP27A1、GPR41 和GPR43 蛋白表达显著升高.综合实验结果发现,葛根可改善T2DM db/db小鼠胰岛细胞的炎症损伤,减轻胰岛素抵抗,其作用机制可能与增加肠道中放线菌门、双歧杆菌、拟杆菌属丰度和肠道菌群代谢物相关蛋白表达有关.

目的 观察加味葛根芩连汤对2型糖尿病db/db小鼠胰腺损伤的影响,基于PKA/CREB/GLP-1信号通路探讨其治疗糖尿病胰腺损伤的作用机制.方法 将50只db/db小鼠随机分为模型组、二甲双胍组和加味葛根芩连汤高、中、低剂量组,每组10只.另取10只m/m小鼠作为空白组.加味葛根芩连汤高、中、低剂量组分别予加味葛根芩连汤31.9、19.1、6.4 g/kg灌胃,二甲双胍组予二甲双胍0.2 g/kg灌胃,空白组和模型组予蒸馏水灌胃,连续12周.给药结束后检测小鼠空腹血糖(FBG),进行口服葡萄糖耐量试验,检测小鼠糖化血红蛋白(HbA1c)含量,TUNEL法检测胰腺组织细胞凋亡情况,RT-qPCR检测胰腺组织G蛋白偶联胆汁酸受体5(TGR5)、蛋白激酶A(PKA)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、前蛋白转化酶1/3(PC1/3)、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)mRNA表达,免疫组化法检测胰腺组织TGR5、PKA、p-PKA、CREB、p-CREB、PC1/3、GLP-1蛋白表达,免疫荧光染色检测胰腺组织TGR5/GLP-1、神经源性分化因子1(NeuroD1)/GLP-1共表达.结果 与空白组比较,模型组小鼠FBG、HbA1c含量显著升高(P＜0.01),口服葡萄糖耐量显著降低;胰腺组织细胞凋亡率显著升高(P＜0.01),TGR5、PKA、CREB、PC1/3、GLP-1 mRNA表达显著降低(P＜0.01),TGR5、PKA、p-PKA、CREB、p-CREB、PC1/3、GLP-1蛋白表达显著降低(P＜0.01),TGR5/GLP-1、NeuroD1/GLP-1共表达显著降低(P＜0.01).与模型组比较,二甲双胍组和加味葛根芩连汤高、中剂量组小鼠FBG、HbA1c含量显著降低(P＜0.01,P＜0.05),口服葡萄糖耐量升高(P＜0.01);各给药组小鼠胰腺组织细胞凋亡率显著降低(P＜0.01),二甲双胍组和加味葛根芩连汤高、中剂量组小鼠胰腺组织TGR5、PKA、CREB、PC1/3、GLP-1 mRNA表达显著升高(P＜0.01),TGR5/GLP-1、NeuroD1/GLP-1共表达显著升高(P＜0.01),二甲双胍组和加味葛根芩连汤高剂量组胰腺组织TGR5、PKA、p-PKA、CREB、p-CREB、PC1/3、GLP-1蛋白表达显著升高(P＜0.01).结论 加味葛根芩连汤可能通过激活TGR5调节PKA/CREB/GLP-1信号通路,恢复db/db小鼠胰岛功能,改善胰腺损伤.

目的 人类的肠道是比较复杂的生态系统.肠道菌群通过影响肠道内分泌细胞(如L细胞、EC细胞、PP细胞)等,激活特异性的G蛋白偶联受体表达(如GPR41、GPR43、GPR119和TGR5),引起GLP-1、GLP-2和PYY等多种肽类和激素的分泌,从而维持糖脂代谢、胆汁酸的代谢和免疫炎症系统的平衡.改变肠道微生物的生态会影响宿主内环境的稳定,引起代谢性疾病.胆汁酸是胆固醇代谢的产物.胆汁酸作为信号分子与TGR5结合,激活法尼醇衍生物X受体的表达,并通过肠肝循环来发挥它的生物调节作用.胆汁酸与肠道菌群对体内的代谢有着重要的作用.

G蛋白偶联胆汁酸受体Gpbar1(TGR5)是G蛋白偶联受体超家族成员.在多种组织如小肠、胃、肝、肺,特别是胎盘和脾脏中可以检测到高水平的TGR5 mRNA.TGR5不仅是胆汁酸受体,也是多种选择性合成激动剂的受体,调节不同信号通路的衍生物,如核因子-κB、AKT和细胞外信号调节激酶.在代谢调节方面TGR5参与能量稳态、胆汁酸平衡以及葡萄糖代谢.最新的研究已经将TGR5的功能扩大到其他方面,包括炎症反应、癌症和肝脏再生.这些新的发现表明TGR5是多种不同疾病的潜在药物作用靶点.该文对TGR5基本性质及其新功能进行了总结.

胆汁酸是胆固醇的主要代谢终产物,具有表面活性作用,在脂质吸收和利用过程中起重要作用.胆汁酸可破坏细胞膜脂质成分,引起细胞膜氧化损伤.肝细胞内胆汁酸淤积可导致肝细胞凋亡或坏死,造成胆汁淤积性肝损伤[1].胆汁酸是包括法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)、孕固烷X受体(pregnane X receptor,PXR)、维生素D受体(vitamin Dreceptor,VDR)以及胆汁酸G蛋白偶联受体(the G proteincoupled receptor 5,TGR5)等多种核受体、膜受体的天然配体,作为重要的信号分子参与调节脂类、葡萄糖、能量和多种药物代谢[2].此外,胆汁酸对维持肠道微生态稳态也有重要作用[3].

目的 观察肝门部胆管腺癌G蛋白偶联胆汁酸受体5(TGR5)表达变化,并分析其表达变化与肿瘤进展和患者预后的关系.方法 选择肝门部胆管腺癌患者59例,取手术切除的胆管癌组织及其癌旁组织,采用免疫组化法检测TGR5、上皮间质转化(EMT)相关标志物[上皮细胞标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、细胞角蛋白19(CK19),间质细胞标志物N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)]及锌指结构转录因子1(ZEB1)蛋白表达.分析胆管癌组织TGR5表达与EMT相关标志物及ZEB1蛋白表达的关系,以及与患者临床病理特征和预后的关系.结果 胆管癌组织TGR5表达明显高于癌旁组织,且其上皮细胞标志物E-cadherin、CK19表达明显低于癌旁组织,间质细胞标志物N-cadherin、Vimentin及ZEB1蛋白表达明显高于癌旁组织(P均<0.05).胆管癌组织TGR5表达与E-cadherin、CK19表达均呈负相关关系(r分别为-0.718、-0.774,P均<0.05),与Vimentin、N-cadherin、ZEB1蛋白表达均呈正相关关系(r分别为0.763、0.817、0.698,P均<0.05).胆管癌组织TGR5表达与肿瘤组织分化程度、淋巴结转移、神经受累有关(P均<0.05),与患者性别、年龄无关(P均>0.05).以胆管癌组织TGR5相对表达量的平均值为临界值,将患者分为TGR5高表达者30例与低表达者29例.TGR5高表达者术后无瘤生存时间、总生存时间均明显低于TGR5低表达者(P均<0.05).结论 肝门部胆管腺癌组织TGR5高表达,其高表达与肿瘤侵袭和转移以及患者不良预后有关.

目的 观察G蛋白偶联胆汁酸受体1 (G protein-coupled bile acid receptor 1,TGR5)受体激活后对内皮素-1(endothelin-1,ET-1)诱导心肌细胞肥大的作用及其机制的探讨.方法 原代培养乳鼠心肌细胞,分为空白对照组和ET-1组,ET-1组的浓度分别为10-6、10-7、10-s mmol/L,分别培养12、24、36、48 h,分别检测各组心肌细胞表面积和总蛋白浓度,建立心肌肥大细胞模型.将心肌细胞分为对照组、ET-1组、ET-1 +INT-777(TGR5受体激动剂)组、ET-1+INT-777 +TGR5 siRNA(干扰TGR5表达)组、ET-1+ INT-777+TGR5 siRNA-NC(空病毒)组.采用图像分析系统测定心肌细胞表面积,BCA法测定细胞总蛋白量,RT-PCR检测TGR5、钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)的mRNA,Western blot方法检测心房尿钠因子(atrial natriuretic factor,ANF)、β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)、TGR5、CaN、活化T细胞核因子3 (activated T cell nuclear factor 3,NFAT3)的蛋白表达变化.结果 48h内,ET-1诱导心肌细胞肥大在10-8 mmol/L～10-6 mmol/L浓度范围内成明显浓度依赖性和时间依赖性(P＜0.05),其中ET-1 10-6 mmol/L培养48 h心肌细胞表面积为(3 624.7 ±71.60)um2,总蛋白量(51.810±1.47) μg,显著高于对照组表面积(1 560.8±3 188.94)um2和总蛋白(37.827±0.47) μg(P＜0.05).与对照组相比,ET-1组心肌细胞表面积、总蛋白、ANF及β-MHC表达增加(P＜0.05),CaN及NFAT3的表达增加(P＜0.05).与ET-1组心肌细胞表面积(4 167.59±271.11)um2、总蛋白(57.765±0.553)μg、ANF/GAPDH (0.587±0.012)、β-MHC/GAPDH(0.422±0.016)、CaN/GAPDH(0.529±0.006)及NFAT3/Histone3 (0.811±0.014)相比,给予TGR5受体激动剂组心肌细胞表面积(2 421.69± 123.61) um2、总蛋白(42.714±0.542) μg、ANF/GAPDH(0.229±0.011)、β-MHC/GAPDH(0.230±0.018)、CaN/GAPDH (0.247±0.008)及NFAT3/Histone3(0.407±0.008)的表达表达增加受到抑制(P＜0.05).予以siTGR5 转染细胞后,部分消除了上述的抑制作用(P＜0.05).结论 激活TGR5可改善ET-1诱导心肌细胞肥大,其机制可能部分与抑制CaN/NFAT3信号通路有关.