[目的]本研究旨在建立皂角豆象Megabruchidius dorsalis雌雄成虫触角转录组数据库,挖掘皂角豆象嗅觉相关基因.[方法]采用高通量测序平台Illumina HiSeq对皂角豆象雌雄成虫触角进行转录组测序、序列组装、功能注释及差异表达基因分析;通过qRT-PCR技术测定和验证皂角豆象雌雄成虫触角中部分高丰度表达基因的表达量.[结果]皂角豆象雌雄成虫触角转录组共获得42 053条 unigenes,N50 长度为 2 066 bp.与 NR,Swiss-Prot,Pfam,eggNOG,GO 和 KEGG 六大公共数据库比对共注释到18 039条unigenes(占43.57％),其中注释到NR数据库的unigenes数量最多,为17 687条;注释到KEGG数据库的unigenes数量最少,为9 779条.依据注释信息分析,鉴定出183个皂角豆象候选嗅觉相关基因,包括25个气味结合蛋白(odorant binding protein,OBP)基因、3 个化学感受蛋白(chemosensory protein,CSP)基因、126 个气味受体(odorant receptor,OR)基因(包括125个典型OR基因和1个非典型OR基因)、8个离子型受体(ionotropic receptor,IR)基因、18个味觉受体(gustatory receptor,GR)基因和3个感觉神经元膜蛋白(sensory neuron membrane protein,SNMP)基因.通过比较皂角豆象雌雄成虫触角转录组,共筛选出357个差异表达基因,其中包含8个OR基因和1个IR基因;这357个差异表达基因中,152个基因在雌性触角中高表达,205个基因在雄性触角中高表达.此外,qRT-PCR验证结果显示,6个嗅觉相关基因(MdorCSP3,MdorIR2,MdorIR6,MdorGR10,MdorSNMP2和MdorSNMP3)在皂角豆象雌成虫触角中高表达,4个嗅觉相关基因(MdorOBP1 5,MdorOBP22,MdorORco和MdorGR8)在雄成虫触角中高表达.[结论]本研究获得了皂角豆象成虫触角转录组数据,并鉴定筛选出候选嗅觉相关基因,结果为进一步研究皂角豆象的基因功能及嗅觉感受机制奠定分子基础.

目的 探讨RNF7在非小细胞肺癌(NSCLC)中调控髓源性抑制细胞(MDSCs)的作用机制.方法 采用TIMER2.0数据库和免疫组织化学染色分析(IHC)分析RNF7在NSCLC中表达水平.Kaplan-Meier曲线分析RNF7对肺癌患者预后的影响.通过TIMER2.0数据库和多重免疫荧光分析评估RNF7的表达与肿瘤免疫细胞浸润水平之间的相关性.通过C57BL/6小鼠建立皮下移植瘤模型,将RNF7过表达对照组(lenti-GFP,n=10)和RNF7过表达组(lenti-RNF7,n=10),RNF7敲低对照组(Ctrl,n=12)和RNF7敲低组(shRNF7,n=12)的CMT-167细胞分别种植到小鼠皮下,对于RNF7敲低对照组和RNF7敲低组的小鼠7 d后给予anti-PD-1治疗或同型IgG治疗,30 d后获取肿瘤组织,观察皮下瘤体积.通过IHC检测肿瘤组织中S100A8+A9、Gr-1的表达水平,流式细胞术检测肿瘤组织中MDSCs的浸润程度.基因集富集分析(GSEA)RNF7在非小细胞肺癌中可能的调控通路.Western blotting和荧光素酶检测RNF7对NF-κB信号通路的影响.ELISA和RT-qPCR观察趋化因子(C-X-C基序)配体1的表达情况.结果 TCGA数据库分析显示RNF7在NSCLC中的表达水平显著上调,生存分析显示,肺癌患者中RNF7的表达水平越高,患者的预后越差(P<0.001),TIMER2.0数据库显示RNF7的表达与MDSCs的浸润程度呈正相关(P<0.001).GESA分析提示,在NSCLC中,RNF7高表达富集于NF-κB信号通路.Western blotting实验显示,RNF7低表达能够抑制NF-κB信号通路激活.通过ELISA和RT-qPCR结果显示,敲除RNF7可显著降低CXCL1的转录和翻译(P<0.01).小鼠皮下移植瘤实验显示,与对照组相比,过表达RNF7可增加MDSCs的浸润程度,敲除RNF7减少MDSCs的浸润程度(P<0.001).并减轻MDSCs对效应细胞的免疫抑制功能,从而增强了抗PD-1的功效.结论 RNF7通过激活NF-κB信号通路,促进CXCL1的表达,从而使MDSCs趋化募集,使肿瘤产生抗PD-1耐药.

目的:证实骨髓细胞(BM)来源的髓源性抑制细胞(MDSC)可以趋化外周调节性T细胞(Treg)聚集于小鼠移植心脏，并发挥免疫调节功能。方法:体外应用曲古霉素A(TSA)联合单核巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导C57BL/6供体小鼠BM分化为CD11b＋Gr-1＋MDSC,将C57BL/6小鼠心脏移植至BALB/c小鼠腹腔，心脏移植成功的小鼠分为四组(每组n＝12)，M组：经受体小鼠尾静脉注入5×10 6供鼠骨髓来源MDSC细胞；C组：经尾静脉注入同剂量生理盐水；M＋T组：经尾静脉注入5×10 6供鼠MDSC细胞及口服TAK-778(100 mg/kg，每周3次)；H组：同系小鼠心脏移植。移植术后7 d对移植心脏进行Treg荧光标记，Elisa检测心肌组织及外周CCL5含量，监测各组小鼠移植心脏存活状况。 结果:TSA联合GM-CSF诱导的骨髓细胞经磁珠分选可获得纯度为93.8%的CD11b＋Gr-1＋MDSC，过继输入MDSC的小鼠移植心脏部位Treg数量为对照组4倍，过继输入MDSC后拮抗CCR5可明显抑制Treg向移植心脏迁徙( P＝0.017)，M组和M＋T组在移植物和外周血浆中CCL5含量差异有统计学意义( P<0.05)，M组小鼠移植心脏存活时间较其他组长，并且差异有统计学意义( P＝0.014)。 结论:供体小鼠骨髓来源MDSC可以在体内通过CCL5趋化Treg至移植器官，延长移植心脏存活时间。

目的:了解北京市2022全年新型冠状病毒分支BA.5.2流行特征与基因组学特征，为科学监测和防控新冠病毒感染提供依据。方法:收集北京市2022全年新冠病毒感染病例呼吸道标本，过滤后采用高通量测序法进行全基因组测序，测序数据进行比对、分析并构建系统发育树。结果:截止2022年12月中旬累计获得2 881条新冠病毒全长序列，其中BA.5.2占比12.22%，与Wuhan-Hu-1参考基因组的核苷酸和氨基酸序列一致性中位数分别为99.2%和99.0%。352条BA.5.2新冠序列共发现271个氨基酸突变位点，其中常见突变位点有ORF1ab区域的S135R和S蛋白区的D614G等35个；常见缺失位点有ORF1a基因的3 675~3 677位、ORF9b基因的27~29位和S基因的69~70位等；未发现插入变异。系统发育分析显示，北京市2022全年的BA.5.2的病毒基因组均位于GR进化支，与GISAID上的其他分支以及北京监测的其他分支存在一定的进化距离。结论:北京市2022年BA.5.2变异株的流行规律基本与全球流行趋势相一致。352条新冠病毒序列由于时间跨度长、多波输入和本土局部传播疫情共同构成，进化树存在多个进化分支并且存在高达271个氨基酸突变位点。加强对新冠病毒感染等呼吸道传染病的常规监测和全基因组测序，及时了解北京市新冠流行毒株的变化，为及时调整疾病防控策略提供指引。

目的:探究高毒力肺炎克雷伯菌(hypervirulent Klebsiella pneumoniae, hvKP)通过激活NLRP3炎症小体引发肝脓肿。 方法:C57BL/6小鼠腹腔分别注射对数期的K1型hvKP(K1-hvKP)和K35型肺炎克雷伯菌(K35-非hvKP)悬液构建小鼠肝脓肿模型。流式细胞术检测CD45 +和Gr-1 +免疫磁珠分选的人外周血中性粒细胞纯度。总糖试剂盒检测K1-hvKP和K35-非hvKP荚膜多糖含量。实时荧光定量RT-PCR和ELISA分别检测K1-hvKP和K35-非hvKP对人血中性粒细胞IL-18与IL-33的mRNA和蛋白质表达水平的影响。Western blot检测K1-hvKP和K35-非hvKP对人血中性粒细胞NLRP3炎症小体活化的影响。激光共聚焦显微镜观察K1-hvKP和K35-非hvKP对人血中性粒细胞NETosis形成的影响。 结果:与K35-非hvKP比较，K1-hvKP感染C57BL/6小鼠后产生明显的肝脓肿。分离的人外周血中性粒细胞纯度>95%。K1-hvKP的荚膜多糖含量显著高于K35-非hvKP。与K35-非hvKP比较，K1-hvKP显著促进人血中性粒细胞IL-18和IL-33的表达、NLRP3炎症小体活化和NETosis的形成。结论:hvKP通过激活NLRP3炎症小体促进人血中性粒细胞NETosis形成而引发肝脓肿。

糖皮质激素（GC）作为治疗风湿性疾病的一线药物，其强大抗炎作用的发挥有赖于GC受体（GR）的介导。GR于细胞核中的作用已有许多研究报道，使人们熟知GC细胞核途径调控的效果。已有研究表明，GR与GC结合后，不仅易位至细胞核，也易位至线粒体。线粒体是维持细胞的正常功能和代谢的重要细胞器，对人体功能至关重要，但GR易位至线粒体作用较少报道。目前线粒体调控研究方兴未艾，探究GR易位至线粒体的机制及其影响具有重要意义。

目的:探讨角膜后弹力层剥除联合自动角膜刀取材内皮移植术(DSAEK)供体中央植片厚度(CGT)和大小对角膜内皮细胞密度(ECD)的远期影响。方法:采用系列病例观察研究，收集2013年1月至2017年12月因角膜内皮功能失代偿在北京大学第三医院眼科中心接受DSAEK手术并严格完成2年或以上随访的患者134例144眼。采用角膜内皮镜测量术前供体ECD；术后1、3、6、12和24个月，采用激光扫描共聚焦显微镜测量术后ECD，计算角膜内皮细胞丢失率；采用眼前节光相干断层扫描仪测量供体CGT。根据术后3个月供体CGT将患者分为薄植片组45眼、中等厚植片组66眼和厚植片组33眼，分别为供体CGT<100 μm、≥100~<150 μm和≥150 μm。根据角膜环钻切割的供体植片大小将患者分为小植片组31眼和大植片组113眼，分别为供体植片直径≥7~<8 mm和≥8~<9 mm。比较手术后供体CGT变化及术后不同时间点角膜内皮细胞丢失率；分析术后24个月ECD与术前供体植片ECD、大小及CGT的相关性。结果:术后1、3、6、12和24个月供体CGT分别为129.0(90.8，160.8)、115.5(93.0，146.0)、115.5(89.0，151.0)、112.5(94.3，146.8)和114.0(89.0，144.5)μm，总体比较差异有统计学意义( H＝37.369， P<0.001)，其中术后1个月供体CGT与术后3个月相比差异有统计学意义( P<0.001)。术后1、3、6、12、24个月，薄植片组、中等厚植片组和厚植片组以及大植片组、小植片组角膜内皮细胞丢失率比较差异均无统计学意义(均 P>0.05)。Spearman相关性分析显示，术后24个月时ECD与术前供体植片ECD呈强正相关( rs＝0.783， P<0.001)，与供体植片大小和CGT均无明显相关性( rs＝0.141， P＝0.093； rs＝－0.044， P＝0.600)。 结论:术前供体植片ECD越大，术后ECD越大；供体植片越薄、直径越大，DSAEK术后远期角膜内皮细胞丢失率越低。

目的:探讨心脏磁共振特征追踪技术对慢性肾衰竭患者左室心肌功能的评估作用。方法:选择2018年6月至2019年6月在浙江省金华市中心医院就诊的慢性肾衰竭患者30例（慢性肾衰竭组）和同期健康体检的成人志愿者30例（健康对照组），使用Philips Acheva 3.0 T心脏磁共振成像设备，行心脏磁共振扫描，获得心脏电影序列；采用CVI42软件中的组织追踪工具对研究对象的心肌应变进行分析，检测两组左室射血分数（LVEF）、舒张末期心室容积（EDV）、收缩末期心室容积（ESV）、搏出量（AV）、整体纵向应变（GL）、整体圆周应变（GC）、整体径向应变（GR）水平，并进行比较。结果:慢性肾衰竭组EDV水平高于健康对照组[（132.3 ± 18.5）ml比（111.5 ± 15.1）ml]，LVEF水平低于健康对照组[（62.41 ± 2.10）%比（67.30 ± 3.92）%]，差异有统计学意义（ P<0.01）。慢性肾衰竭组GL、GC、GR低于健康对照组[（-16.3 ± 3.1）%比（-11.1 ± 4.1）%、（-17.5 ± 2.9）%比（-13.7 ± 4.7）%、（36.5 ± 9.5）%比（46.3 ± 8.4）%]，差异有统计学意义（ P<0.01）。当b = 300、500、800 s/mm 2，健康对照组、慢性肾衰竭组不同临床分期表观扩散系数值比较，差异有统计学意义（ P<0.01）。随着慢性肾衰竭患者临床分期越高，其ADC值越来越低。 结论:心脏磁共振特征追踪技术能准确、有效地评估慢性肾衰竭患者左室心肌功能指标变化。

目的:探讨骨骼肌细胞毒性T细胞淋巴瘤（cytotoxic T-cell lymphoma，CTL）临床病理学特点及预后。方法:回顾性收集2008—2019年首都医科大学附属北京友谊医院和解放军联勤保障部队第九八九医院（原第一五二中心医院）14例骨骼肌CTL和47例非骨骼肌结外CTL患者的临床资料，镜下观察肿瘤形态，检测肿瘤细胞的免疫表型、EB病毒（EBV）感染状态和T细胞受体（TCR）克隆性，比较分析两组患者的临床病理特征和预后。结果:骨骼肌CTL占本组结外CTL的23.0%（14/61）。患者中位年龄45.5岁（11~76岁），男性6例，女性8例。临床上主要表现为局部生长的无痛性肿块。有B症状者占比为2/14。肿瘤分别发生于颊部（7例）、舌部（4例）、下唇（3例）及左上臂（2例），其中有2例均累及两个部位。临床分期ⅠE期10例，ⅡE期4例。与非骨骼肌结外CTL比较，骨骼肌CTL多无B症状、临床分期低、主要累及面颊及口腔（舌部和唇部， P<0.05）。形态学上表现为骨骼肌组织内异型淋巴细胞弥漫性浸润。免疫组织化学检测，肿瘤阳性表达T细胞抗原（CD2、CD3、CD5、CD7），其中一个或多个抗原表达减弱或表达缺失者占比为11/14。所有病例均表达T细胞胞质内抗原-1、颗粒酶B和CD8（CD8 +>CD4 +模式），CD56阴性。Ki-67阳性指数中位数为35.0%（5%~60%）。所有病例EBER原位杂交检测阴性。除6例未检测外，其余病例TCR基因重排克隆性分析检测结果为阳性。10例获得随访，中位随访时间为40个月（10~67个月）。10例患者完全缓解，5年生存率为100%，与非骨骼肌结外CTL（5年总生存率35.9%）比较，差异有统计学意义（χ 2=8.277， P=0.004）。 结论:骨骼肌CTL多发生于面颊和口腔，肿瘤细胞具有侵嗜骨骼肌或肌炎样的形态学特征，具有CD8 +>CD4 +和细胞毒性分子模式的免疫表型，临床分期低，预后较好。

目的:探讨脾脏源性髓源性抑制细胞（MDSCs）在脓毒症诱导肾上腺损伤（SAI）中的作用及其机制。方法:采用随机数字表法将30只6～8周龄C57雄性小鼠分为正常对照组（ n＝5）、假手术组（Sham组， n＝5）、脓毒症模型组〔盲肠结扎穿孔术（CLP）组， n＝10〕和脓毒症+脾切除组（CLPS组， n＝10）。采用CLP法制备小鼠脓毒症模型；Sham组仅开腹分离盲肠后关腹，不给予盲肠结扎穿孔；CLPS组于CLP前切除脾脏；正常对照组不给予任何处理。各组于制模后24 h处死小鼠，收集外周血、脾脏、骨髓及双侧肾上腺；采用苏木素-伊红（HE）染色后光镜下观察肾上腺组织病理学改变，采用流式细胞仪测定外周血、脾脏和骨髓中MDSCs细胞比例，采用实时定量反转录-聚合酶链反应（PCR）检测肾上腺组织中MDSCs表面抗原CD11b、Gr-1和白细胞介素（IL-6、IL-1β）的mRNA表达，采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测肾上腺组织中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路相关蛋白总mTOR（T-mTOR）、磷酸化mTOR（p-mTOR）和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）的蛋白表达。 结果:光镜下显示，正常对照组和Sham组肾上腺皮质、髓质完整，结构清晰；CLP组肾上腺皮质肿胀、出血，可见细胞水肿；CLPS组上述肾上腺组织损伤较CLP组明显减轻。与正常对照组和Sham组相比，CLP组外周血中MDSCs细胞比例明显增加，脾脏中MDSCs细胞比例明显降低，骨髓中MDSCs细胞比例差异无统计学意义，肾上腺组织中CD11b、Gr-1、IL-6、IL-1β的mRNA和caspase-3蛋白表达均明显增加，p-mTOR蛋白表达明显降低，T-mTOR蛋白表达差异无统计学意义；与CLP组相比，CLPS组外周血中MDSCs细胞比例明显降低（0.143±0.011比0.324±0.023， P<0.01），肾上腺组织中CD11b、Gr-1、IL-6和IL-1β的mRNA以及caspase-3的蛋白表达均明显降低〔CD11b mRNA（2 -ΔΔCt）：2.90±0.56比5.74±0.13，Gr-1 mRNA（2 -ΔΔCt）：2.71±0.14比4.59±0.46，IL-6 mRNA（2 -ΔΔCt）：2.44±0.64比5.17±1.04，IL-1β mRNA（2 -ΔΔCt）：3.58±0.52比4.44±0.26，caspase-3蛋白（caspase-3/GAPDH）：0.05±0.01比0.13±0.02，均 P<0.01〕，p-mTOR蛋白表达明显增加（p-mTOR/GAPDH：0.61±0.11比0.27±0.04， P<0.01）。 结论:脾脏是SAI中MDSCs细胞的主要来源；脾切除可减少MDSCs细胞动员，激活mTOR信号通路，从而减轻SAI。