目的:分析丹参酮ⅡA对缺血/再灌注（I/R）所致心力衰竭（心衰）模型大鼠心肌重构的影响。方法:①体内实验：将30只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、心衰模型组和丹参酮ⅡA组，每组10只。采用结扎大鼠左冠状动脉（冠脉）待心电监护出现明显ST段抬高30 min后放松结扎线进行再灌注2 h来制备I/R后心衰模型；假手术组于同期开胸，仅丝线绕过左冠脉而不结扎。丹参酮ⅡA组术后3 d开始腹腔注射丹参酮ⅡA 10 mg/kg，连续用药9周；其他两组于同期腹腔注射等量生理盐水。干预9周后观察各组大鼠的行为学表现，检测血流动力学相关指标。处死大鼠取心脏组织，Masson染色后光镜下观察心肌组织纤维化程度；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测半乳糖凝集素-3（Galectin-3）含量；采用荧光定量反转录-聚合酶链反应（qRT-PCR）检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）的mRNA表达；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测MMP-2和TIMP-1的蛋白表达。②体外实验：提取并分离大鼠的原代心肌成纤维细胞，分为空白对照组、血管紧张素Ⅱ组（给予7~10 mmol/L血管紧张素Ⅱ）和血管紧张素Ⅱ+丹参酮ⅡA组（同时给予7~10 mmol/L血管紧张素Ⅱ+ 5~10 mmol/L丹参酮ⅡA）。分别于培养24 h和48 h时，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）检测细胞吸光度（ A）值并计算细胞增殖率；采用qRT-PCR法检测型胶原、型胶原、MMP-2和TIMP-1的mRNA表达；采用ELISA法检测Galectin-3含量。 结果:①体内实验：大鼠活动状态、毛发顺帖程度及进食量由好到差依次为假手术组、丹参酮ⅡA组和心衰模型组。与假手术组相比，心衰模型组大鼠心率（HR）明显下降、心功能明显受损，Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、TIMP-1的mRNA和蛋白表达及Galectin-3含量均明显升高，MMP-2的mRNA和蛋白表达均明显降低。与心衰模型组相比，丹参酮ⅡA组大鼠HR明显升高、心功能明显改善，Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的mRNA表达均明显降低，TIMP-1的mRNA和蛋白表达及Galectin-3含量均明显降低，MMP-2的mRNA和蛋白表达均明显升高，以制模9周变化最为明显〔Ⅰ型胶原mRNA（2 -ΔΔCt）：4.70±1.19比10.21±1.62，Ⅲ型胶原mRNA（2 -ΔΔCt）：3.03±0.46比13.84±1.93，TIMP-1 mRNA（2 -ΔΔCt）：1.90±0.19比4.55±0.43，TIMP-1/GAPDH：0.33±0.04比0.67±0.05，Galectin-3（ng/L）：489.93±79.30比821.72±94.09，MMP-2 mRNA（2 -ΔΔCt）：0.37±0.07比0.03±0.01，MMP-2/GAPDH：0.69±0.09比0.21±0.04，均 P<0.05〕。Masson染色显示，心衰模型组大鼠心肌组织出现明显纤维化，而丹参酮ⅡA干预能够改善大鼠心肌组织的纤维化。②体外实验：与空白对照组相比，血管紧张素组培养24 h和48 h心肌成纤维细胞增殖率、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和TIMP-1表达及Galectin-3含量均明显升高，MMP-2表达明显降低。与血管紧张素组相比，血管紧张素+丹参酮ⅡA组心肌成纤维细胞增殖率及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和TIMP-1表达及Galectin-3含量均明显降低，MMP-2 mRNA表达明显升高，以培养48 h改变最明显〔细胞增殖率：（57.0±3.7）%比（67.0±2.4）%，Ⅰ型胶原mRNA（2 -ΔΔCt）：551.43±67.10比871.48±12.25，Ⅲ型胶原mRNA（2 -ΔΔCt）：233.76±18.73比385.51±31.35，TIMP-1 mRNA（2 -ΔΔCt）：238.69±17.37比351.84±26.17，Galectin-3（ng/L）：283.76±28.73比415.51±31.35，MMP-2 mRNA（2 -ΔΔCt）：108.54±12.10比51.47±6.25，均 P<0.05]。 结论:丹参酮ⅡA可以改善I/R后心衰大鼠的心功能，抑制心肌纤维化，改善心衰大鼠的心肌重构。

目的:研究改性柑橘果胶（MCP）对滑膜成纤维细胞（SF）及半乳糖凝集素-3（Gal-3）诱导处理后SF细胞的代谢活性及相关基因表达情况的影响。方法:分离、培养兔SF细胞，分别用不同质量浓度（0、250、500、750 mg/L）MCP的培养液处理SF细胞，同时用10 μg/ml Gal-3诱导24 h后进一步进行MCP处理SF细胞；分别于处理的第1、3、5天，通过CCK-8检测SF细胞的增殖活性；利用实时荧光定量PCR检测SF细胞的转化生长因子-β1（TGF-β1）、Ⅰ型胶原（COL1A2）及Gal-3的mRNA表达情况，并通过免疫荧光染色法考察SF细胞的COL1A2合成情况。结果:在第1、3、5天，不同质量浓度MCP均对SF细胞增殖有抑制作用（均 P<0.05）。与对照组相比，不同浓度的MCP可以引起不同的基因表达，高浓度的MCP上调了SF细胞的TGF-β1、COL1A2和Gal-3的mRNA表达；同时，MCP对SF细胞的COL1A2蛋白合成无影响。Gal-3诱导后，MCP处理可以下调TGF-β1和COL1A2的mRNA表达，且可以显著降低COL1A2蛋白的合成；尤其是500 mg/L MCP可以明显降低TGF-β1、COL1A2和Gal-3的mRNA表达。 结论:MCP具有抑制SF细胞过度增殖、调控SF细胞基因表达的作用。

目的 探讨黄芩苷调节半乳糖凝集素3(galectin-3)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶(GSK-3β)/Snail信号通路对慢性肾脏病大鼠肾纤维化的影响.方法 采用腺嘌呤诱导制备慢性肾脏病大鼠肾纤维化模型,随机将健康雄性SD大鼠分为对照组、模型组、阳性药物(氯沙坦,9 mg/kg)组、低剂量黄芩苷组(20 mg/kg)、中剂量黄芩苷组(40 mg/kg)、高剂量黄芩苷组(80 mg/kg),模型组和对照组给予等体积0.9％氯化钠溶液灌胃.30 d后,检测6组大鼠血清尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)水平;Masson染色检测肾脏组织胶原分布面积;苏木精-伊红(HE)染色观察肾脏组织病理变化;免疫组化学法检测肾脏组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原A1(CoLIA1)表达;蛋白印迹(Western blot)法分析肾脏组织中galectin-3、p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β、Snail表达情况.结果 与对照组比较,模型组大鼠肾脏损伤严重并伴有黑色腺嘌呤代谢物结晶沉积,胶原纤维增多,肾脏组织胶原分布面积、α-SMA、CoLIA1、Scr、BUN、galectin-3、p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β、Snail 水平升高(P＜0.05);与模型组比较,阳性药物组、黄芩苷低、中和高剂量组大鼠肾间质、肾小球和肾小管病变明显减轻,腺嘌呤代谢物结晶和纤维化组织减少,肾脏组织胶原分布面积、α-SMA、CoLIA1、Scr、BUN、galectin-3、p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β、Snail 水平降低(P＜0.05).结论 黄芩苷可能通过抑制galectin-3/Akt/GSK3β/Snai l信号通路,进而改善慢性肾脏病大鼠肾纤维化.

目的 基于 miRNA21-5p 调控转化生长因子-β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)/Smads 信号通路探讨苓桂气化方抗射血分数保留心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)心肌纤维化的机制.方法 40只4周龄自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)平均分为HFpEF组、沙库巴曲缬沙坦组(LCZ696,0.018 g·kg-1)、苓桂气化方低剂量组(LGQH-L,3.87 g·kg-1)和苓桂气化方高剂量组(LGQH-H,7.74 g·kg-1),给予高脂、高盐及高糖饮食16周及腹腔注射链脲霉素溶液8周建立HFpEF大鼠模型.10只威斯塔京都(Wistar Kyoto,WKY)大鼠和10只SHR大鼠作为对照组,以普通饲料喂养至实验结束.造模成功后,WKY、SHR和HFpEF组给予等剂量生理盐水,其他3组按照预先规定的干预措施,每天灌胃1次,持续6周.干预结束后,行超声心动图测量左心室(left ventricle,LV)前壁厚度(LV end-diastolic anterior wall thickness,LVAWd)、LV 后壁厚度(LV end-diastolic posterior wall thickness,LVPWd)、LV 舒张末内径(LV end-diastolic internal diameter,LVIDd)、LV 射血分数(LV ejection fraction,LVEF)、LV舒张早期二尖瓣流入峰值速度(E)、舒张晚期二尖瓣流入峰值速度(A)和LV舒张早期二尖瓣环运动速度(e'),并计算E/A和E/e';酶联免疫吸附试验检测血清心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、B型利钠肽(B-type brain natriuretic peptide,BNP)及半乳糖凝集素3(Galectin-3,Gal-3);病理切片进行苏木精伊红及马松染色观察心肌肥厚及纤维化,并计算LV室壁厚度(LV wall thickness,LVWT)、胶原体积分数(collagen volume fraction,CVF)及血管周围纤维化比率(perivascular fibrosis ratio,PFR);实时定量聚合酶链反应检测LV心肌miRNA21-5p及TGF-β1/Smads信号通路相关mRNA表达;蛋白印迹检测LV心肌TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白表达.结果 与对照组比较,HFpEF组的LVAWd、LVPWd、LVIDd、E/A、E/e'、ANP、BNP、Gal-3、LVWT、CVF 和 PFR 显著升高(P＜0.05 或P＜0.01);LV 心肌 miR-NA21-5,α-SMA、Coll Ⅰ、Coll Ⅲ、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA 表达和 α-SMA、Coll Ⅰ、Coll Ⅲ、TGF-β1、P-Smad2/3蛋白表达显著上调(P＜0.05或P＜0.01);Smad7 mRNA及蛋白表达显著下调(P＜0.05或P＜0.01).与HFpEF组比较,苓桂气化方呈剂量依赖性减少 LVAWd、LVPWd、LVIDd、E/A、E/e'、ANP、BNP、Gal-3、LVWT、CVF 和 PFR(P＜0.05 或P＜0.01);下调 miRNA21-5p,α-SMA、Coll Ⅰ、Coll Ⅲ、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA 表达和 α-SMA、Coll Ⅰ、GF-β1、P-Smad2/3蛋白表达(P＜0.05或P＜0.01);上调Smad7 mRNA及蛋白表达(P＜0.05或P＜0.01).结论 苓桂气化方可能通过靶向miRNA21-5p调控TGF-β1/Smads信号通路抑制心肌纤维化,从而减轻HFpEF大鼠LV重塑和舒张功能障碍,是治疗HFpEF的有效中药复方.

糖尿病肾病是糖尿病最严重的微血管并发症,是终末期肾病的重要病因之一.甘露糖结合凝集素(mannose-binding lectin,MBL)是糖尿病肾病发生发展重要的生物标志物,H型纤维胶原凝集素(H-ficolin)也与糖尿病肾病的发展有关,而MBL相关丝氨酸蛋白酶与糖尿病肾病的关系有待进一步研究.

目的:明确运动训练延缓糖尿病诱导的心肌损伤并阐明WNK2在其中的作用.方法:雄性db/db小鼠和C57BL/6小鼠(作为对照)普通饲料喂养,根据是否参与跑台训练各分成两组,跑台组训练10周.采用心超评估小鼠心功能,留取心肌组织进行伊红苏木素(HE)染色、马松(Masson)和麦胚凝集素(WGA)染色,并提取心肌mRNA、蛋白进行实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测.H9C2心肌细胞系予以高糖(33 mmol/L)刺激并WNK2抑制剂(WNK463)预处理后检测各组细胞肥大[肌球蛋白重链(MyHC)和心房钠尿肽(ANP)]、纤维化[包括基质金属蛋白酶9(MMP-9)、I型胶原蛋白(COL-I)和转化生长因子β(TGF-β)]指标.结果:与对照组小鼠相比,db/db组小鼠心脏明显肥厚,纤维化增加,心肌收缩能力显著下降,心脏组织WNK激酶(WNK2)表达显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);经10周跑台运动后,心肌肥厚和胶原纤维沉积得到逆转,心收缩功能改善,并且WNK2表达降低,差异有统计学意义(P<0.05).利用WNK463处理高糖刺激的心肌细胞,抑制WNK2表达,可以有效降低H9C2细胞肥大(MyHC和ANP)和纤维化(MMP9、COL-I和TGF-β)指标,差异有统计学意义(P<0.05).结论:运动训练通过抑制WNK2表达来改善糖尿病心肌病的心肌肥大及纤维化.

目的:观察2型糖尿病大鼠的心肌微血管病变,并探讨其病理机制.方法:18只雄性SPF级SD大鼠根据体质量均衡原则分为正常组(8只)和模型组(10只),正常组予以普通饲料喂养,模型组予以高脂饲料喂养,4周后,模型组大鼠禁食12 h,腹腔注射35 mg·kg-1链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立2型糖尿病大鼠模型.模型成功后,正常组给予普通饲料、模型组给予高脂饲料继续喂养,12周后测量大鼠的体质量(body weight,BW);口服糖耐量实验检测大鼠血糖变化,并计算曲线下面积(area under curve,AUC);超声心动图检测大鼠的左心室射血分数(ejection fractions,EF)和短轴缩短率(short-axis fractional shortening,FS);HE染色观察大鼠心肌组织结构变化;Masson染色观察大鼠心肌纤维化情况,计算胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF);免疫组化法检测心肌组织血小板内皮细胞黏附分子-1(platelet-endothe-lial cell adhesion molecule-1,PECAM-1,又名 CD31)蛋白表达水平;麦胚凝集素(wheat germ agglutinin,WGA)染色检测心肌细胞面积;Wes全自动蛋白质印迹定量分析系统检测心肌组织中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth fac-tor,VEGF)、磷酸化血管内皮生长因子受体2(phospho-VEGF receptor 2,p-VEGFR2)、血管生成素-1(angiopoietin-1,Ang-1)、酪氨酸激酶受体-2(tyrosie kinase with Ig and EGF homology domain,Tie-2)蛋白表达水平.结果:与正常组相比,模型组大鼠7天空腹血糖、12周空腹血糖、AUC、CVF、心肌细胞面积显著升高(P＜0.01),12周BW、EF、FS及CD31、VEGF、p-VEGFR2、Ang-1、Tie-2蛋白表达水平明显降低(P＜0.01).HE染色及Masson染色显示:正常组大鼠心肌细胞排列整齐,细胞形态正常、边界清晰,间质和周围血管无明显蓝色胶原纤维,心肌组织分布均匀;模型组大鼠心肌组织染色不均匀,肌束排列紊乱,心肌组织尤其是微血管周围有大量胶原纤维沉积,出现大量结缔组织增生.结论:2型糖尿病大鼠出现明显的心肌微血管病变,其病理机制可能与血管生成受损有关.