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丹参酮ⅡA通过半乳糖凝集素-3抑制心肌重塑的机制研究
编辑人员丨1周前
目的:分析丹参酮ⅡA对缺血/再灌注(I/R)所致心力衰竭(心衰)模型大鼠心肌重构的影响。方法:①体内实验:将30只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、心衰模型组和丹参酮ⅡA组,每组10只。采用结扎大鼠左冠状动脉(冠脉)待心电监护出现明显ST段抬高30 min后放松结扎线进行再灌注2 h来制备I/R后心衰模型;假手术组于同期开胸,仅丝线绕过左冠脉而不结扎。丹参酮ⅡA组术后3 d开始腹腔注射丹参酮ⅡA 10 mg/kg,连续用药9周;其他两组于同期腹腔注射等量生理盐水。干预9周后观察各组大鼠的行为学表现,检测血流动力学相关指标。处死大鼠取心脏组织,Masson染色后光镜下观察心肌组织纤维化程度;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测半乳糖凝集素-3(Galectin-3)含量;采用荧光定量反转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的mRNA表达;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测MMP-2和TIMP-1的蛋白表达。②体外实验:提取并分离大鼠的原代心肌成纤维细胞,分为空白对照组、血管紧张素Ⅱ组(给予7~10 mmol/L血管紧张素Ⅱ)和血管紧张素Ⅱ+丹参酮ⅡA组(同时给予7~10 mmol/L血管紧张素Ⅱ+ 5~10 mmol/L丹参酮ⅡA)。分别于培养24 h和48 h时,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞吸光度( A)值并计算细胞增殖率;采用qRT-PCR法检测型胶原、型胶原、MMP-2和TIMP-1的mRNA表达;采用ELISA法检测Galectin-3含量。 结果:①体内实验:大鼠活动状态、毛发顺帖程度及进食量由好到差依次为假手术组、丹参酮ⅡA组和心衰模型组。与假手术组相比,心衰模型组大鼠心率(HR)明显下降、心功能明显受损,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、TIMP-1的mRNA和蛋白表达及Galectin-3含量均明显升高,MMP-2的mRNA和蛋白表达均明显降低。与心衰模型组相比,丹参酮ⅡA组大鼠HR明显升高、心功能明显改善,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的mRNA表达均明显降低,TIMP-1的mRNA和蛋白表达及Galectin-3含量均明显降低,MMP-2的mRNA和蛋白表达均明显升高,以制模9周变化最为明显〔Ⅰ型胶原mRNA(2 -ΔΔCt):4.70±1.19比10.21±1.62,Ⅲ型胶原mRNA(2 -ΔΔCt):3.03±0.46比13.84±1.93,TIMP-1 mRNA(2 -ΔΔCt):1.90±0.19比4.55±0.43,TIMP-1/GAPDH:0.33±0.04比0.67±0.05,Galectin-3(ng/L):489.93±79.30比821.72±94.09,MMP-2 mRNA(2 -ΔΔCt):0.37±0.07比0.03±0.01,MMP-2/GAPDH:0.69±0.09比0.21±0.04,均 P<0.05〕。Masson染色显示,心衰模型组大鼠心肌组织出现明显纤维化,而丹参酮ⅡA干预能够改善大鼠心肌组织的纤维化。②体外实验:与空白对照组相比,血管紧张素组培养24 h和48 h心肌成纤维细胞增殖率、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和TIMP-1表达及Galectin-3含量均明显升高,MMP-2表达明显降低。与血管紧张素组相比,血管紧张素+丹参酮ⅡA组心肌成纤维细胞增殖率及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和TIMP-1表达及Galectin-3含量均明显降低,MMP-2 mRNA表达明显升高,以培养48 h改变最明显〔细胞增殖率:(57.0±3.7)%比(67.0±2.4)%,Ⅰ型胶原mRNA(2 -ΔΔCt):551.43±67.10比871.48±12.25,Ⅲ型胶原mRNA(2 -ΔΔCt):233.76±18.73比385.51±31.35,TIMP-1 mRNA(2 -ΔΔCt):238.69±17.37比351.84±26.17,Galectin-3(ng/L):283.76±28.73比415.51±31.35,MMP-2 mRNA(2 -ΔΔCt):108.54±12.10比51.47±6.25,均 P<0.05]。 结论:丹参酮ⅡA可以改善I/R后心衰大鼠的心功能,抑制心肌纤维化,改善心衰大鼠的心肌重构。
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编辑人员丨1周前
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改性柑橘果胶对滑膜成纤维细胞的影响
编辑人员丨1周前
目的:研究改性柑橘果胶(MCP)对滑膜成纤维细胞(SF)及半乳糖凝集素-3(Gal-3)诱导处理后SF细胞的代谢活性及相关基因表达情况的影响。方法:分离、培养兔SF细胞,分别用不同质量浓度(0、250、500、750 mg/L)MCP的培养液处理SF细胞,同时用10 μg/ml Gal-3诱导24 h后进一步进行MCP处理SF细胞;分别于处理的第1、3、5天,通过CCK-8检测SF细胞的增殖活性;利用实时荧光定量PCR检测SF细胞的转化生长因子-β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原(COL1A2)及Gal-3的mRNA表达情况,并通过免疫荧光染色法考察SF细胞的COL1A2合成情况。结果:在第1、3、5天,不同质量浓度MCP均对SF细胞增殖有抑制作用(均 P<0.05)。与对照组相比,不同浓度的MCP可以引起不同的基因表达,高浓度的MCP上调了SF细胞的TGF-β1、COL1A2和Gal-3的mRNA表达;同时,MCP对SF细胞的COL1A2蛋白合成无影响。Gal-3诱导后,MCP处理可以下调TGF-β1和COL1A2的mRNA表达,且可以显著降低COL1A2蛋白的合成;尤其是500 mg/L MCP可以明显降低TGF-β1、COL1A2和Gal-3的mRNA表达。 结论:MCP具有抑制SF细胞过度增殖、调控SF细胞基因表达的作用。
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编辑人员丨1周前
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黄芩苷调节galectin-3/Akt/GSK-3β/Snail信号通路改善慢性肾脏病大鼠的肾纤维化机制
编辑人员丨3周前
目的 探讨黄芩苷调节半乳糖凝集素3(galectin-3)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶(GSK-3β)/Snail信号通路对慢性肾脏病大鼠肾纤维化的影响.方法 采用腺嘌呤诱导制备慢性肾脏病大鼠肾纤维化模型,随机将健康雄性SD大鼠分为对照组、模型组、阳性药物(氯沙坦,9 mg/kg)组、低剂量黄芩苷组(20 mg/kg)、中剂量黄芩苷组(40 mg/kg)、高剂量黄芩苷组(80 mg/kg),模型组和对照组给予等体积0.9%氯化钠溶液灌胃.30 d后,检测6组大鼠血清尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)水平;Masson染色检测肾脏组织胶原分布面积;苏木精-伊红(HE)染色观察肾脏组织病理变化;免疫组化学法检测肾脏组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原A1(CoLIA1)表达;蛋白印迹(Western blot)法分析肾脏组织中galectin-3、p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β、Snail表达情况.结果 与对照组比较,模型组大鼠肾脏损伤严重并伴有黑色腺嘌呤代谢物结晶沉积,胶原纤维增多,肾脏组织胶原分布面积、α-SMA、CoLIA1、Scr、BUN、galectin-3、p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β、Snail 水平升高(P<0.05);与模型组比较,阳性药物组、黄芩苷低、中和高剂量组大鼠肾间质、肾小球和肾小管病变明显减轻,腺嘌呤代谢物结晶和纤维化组织减少,肾脏组织胶原分布面积、α-SMA、CoLIA1、Scr、BUN、galectin-3、p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β、Snail 水平降低(P<0.05).结论 黄芩苷可能通过抑制galectin-3/Akt/GSK3β/Snai l信号通路,进而改善慢性肾脏病大鼠肾纤维化.
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编辑人员丨3周前
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基于miRNA21-5p调控TGF-β1/Smads信号通路探讨苓桂气化方抗射血分数保留心力衰竭心肌纤维化的机制
编辑人员丨2024/5/18
目的 基于 miRNA21-5p 调控转化生长因子-β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)/Smads 信号通路探讨苓桂气化方抗射血分数保留心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)心肌纤维化的机制.方法 40只4周龄自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)平均分为HFpEF组、沙库巴曲缬沙坦组(LCZ696,0.018 g·kg-1)、苓桂气化方低剂量组(LGQH-L,3.87 g·kg-1)和苓桂气化方高剂量组(LGQH-H,7.74 g·kg-1),给予高脂、高盐及高糖饮食16周及腹腔注射链脲霉素溶液8周建立HFpEF大鼠模型.10只威斯塔京都(Wistar Kyoto,WKY)大鼠和10只SHR大鼠作为对照组,以普通饲料喂养至实验结束.造模成功后,WKY、SHR和HFpEF组给予等剂量生理盐水,其他3组按照预先规定的干预措施,每天灌胃1次,持续6周.干预结束后,行超声心动图测量左心室(left ventricle,LV)前壁厚度(LV end-diastolic anterior wall thickness,LVAWd)、LV 后壁厚度(LV end-diastolic posterior wall thickness,LVPWd)、LV 舒张末内径(LV end-diastolic internal diameter,LVIDd)、LV 射血分数(LV ejection fraction,LVEF)、LV舒张早期二尖瓣流入峰值速度(E)、舒张晚期二尖瓣流入峰值速度(A)和LV舒张早期二尖瓣环运动速度(e'),并计算E/A和E/e';酶联免疫吸附试验检测血清心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、B型利钠肽(B-type brain natriuretic peptide,BNP)及半乳糖凝集素3(Galectin-3,Gal-3);病理切片进行苏木精伊红及马松染色观察心肌肥厚及纤维化,并计算LV室壁厚度(LV wall thickness,LVWT)、胶原体积分数(collagen volume fraction,CVF)及血管周围纤维化比率(perivascular fibrosis ratio,PFR);实时定量聚合酶链反应检测LV心肌miRNA21-5p及TGF-β1/Smads信号通路相关mRNA表达;蛋白印迹检测LV心肌TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白表达.结果 与对照组比较,HFpEF组的LVAWd、LVPWd、LVIDd、E/A、E/e'、ANP、BNP、Gal-3、LVWT、CVF 和 PFR 显著升高(P<0.05 或P<0.01);LV 心肌 miR-NA21-5,α-SMA、Coll Ⅰ、Coll Ⅲ、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA 表达和 α-SMA、Coll Ⅰ、Coll Ⅲ、TGF-β1、P-Smad2/3蛋白表达显著上调(P<0.05或P<0.01);Smad7 mRNA及蛋白表达显著下调(P<0.05或P<0.01).与HFpEF组比较,苓桂气化方呈剂量依赖性减少 LVAWd、LVPWd、LVIDd、E/A、E/e'、ANP、BNP、Gal-3、LVWT、CVF 和 PFR(P<0.05 或P<0.01);下调 miRNA21-5p,α-SMA、Coll Ⅰ、Coll Ⅲ、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA 表达和 α-SMA、Coll Ⅰ、GF-β1、P-Smad2/3蛋白表达(P<0.05或P<0.01);上调Smad7 mRNA及蛋白表达(P<0.05或P<0.01).结论 苓桂气化方可能通过靶向miRNA21-5p调控TGF-β1/Smads信号通路抑制心肌纤维化,从而减轻HFpEF大鼠LV重塑和舒张功能障碍,是治疗HFpEF的有效中药复方.
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编辑人员丨2024/5/18
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甘露糖结合凝集素补体途径与糖尿病肾病的相关性的研究进展
编辑人员丨2023/8/6
糖尿病肾病是糖尿病最严重的微血管并发症,是终末期肾病的重要病因之一.甘露糖结合凝集素(mannose-binding lectin,MBL)是糖尿病肾病发生发展重要的生物标志物,H型纤维胶原凝集素(H-ficolin)也与糖尿病肾病的发展有关,而MBL相关丝氨酸蛋白酶与糖尿病肾病的关系有待进一步研究.
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编辑人员丨2023/8/6
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跑台运动通过抑制WNK2表达改善糖尿病心肌病的心室重构
编辑人员丨2023/8/5
目的:明确运动训练延缓糖尿病诱导的心肌损伤并阐明WNK2在其中的作用.方法:雄性db/db小鼠和C57BL/6小鼠(作为对照)普通饲料喂养,根据是否参与跑台训练各分成两组,跑台组训练10周.采用心超评估小鼠心功能,留取心肌组织进行伊红苏木素(HE)染色、马松(Masson)和麦胚凝集素(WGA)染色,并提取心肌mRNA、蛋白进行实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测.H9C2心肌细胞系予以高糖(33 mmol/L)刺激并WNK2抑制剂(WNK463)预处理后检测各组细胞肥大[肌球蛋白重链(MyHC)和心房钠尿肽(ANP)]、纤维化[包括基质金属蛋白酶9(MMP-9)、I型胶原蛋白(COL-I)和转化生长因子β(TGF-β)]指标.结果:与对照组小鼠相比,db/db组小鼠心脏明显肥厚,纤维化增加,心肌收缩能力显著下降,心脏组织WNK激酶(WNK2)表达显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);经10周跑台运动后,心肌肥厚和胶原纤维沉积得到逆转,心收缩功能改善,并且WNK2表达降低,差异有统计学意义(P<0.05).利用WNK463处理高糖刺激的心肌细胞,抑制WNK2表达,可以有效降低H9C2细胞肥大(MyHC和ANP)和纤维化(MMP9、COL-I和TGF-β)指标,差异有统计学意义(P<0.05).结论:运动训练通过抑制WNK2表达来改善糖尿病心肌病的心肌肥大及纤维化.
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编辑人员丨2023/8/5
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2型糖尿病模型大鼠心肌微血管病变的观察
编辑人员丨2023/8/5
目的:观察2型糖尿病大鼠的心肌微血管病变,并探讨其病理机制.方法:18只雄性SPF级SD大鼠根据体质量均衡原则分为正常组(8只)和模型组(10只),正常组予以普通饲料喂养,模型组予以高脂饲料喂养,4周后,模型组大鼠禁食12 h,腹腔注射35 mg·kg-1链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立2型糖尿病大鼠模型.模型成功后,正常组给予普通饲料、模型组给予高脂饲料继续喂养,12周后测量大鼠的体质量(body weight,BW);口服糖耐量实验检测大鼠血糖变化,并计算曲线下面积(area under curve,AUC);超声心动图检测大鼠的左心室射血分数(ejection fractions,EF)和短轴缩短率(short-axis fractional shortening,FS);HE染色观察大鼠心肌组织结构变化;Masson染色观察大鼠心肌纤维化情况,计算胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF);免疫组化法检测心肌组织血小板内皮细胞黏附分子-1(platelet-endothe-lial cell adhesion molecule-1,PECAM-1,又名 CD31)蛋白表达水平;麦胚凝集素(wheat germ agglutinin,WGA)染色检测心肌细胞面积;Wes全自动蛋白质印迹定量分析系统检测心肌组织中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth fac-tor,VEGF)、磷酸化血管内皮生长因子受体2(phospho-VEGF receptor 2,p-VEGFR2)、血管生成素-1(angiopoietin-1,Ang-1)、酪氨酸激酶受体-2(tyrosie kinase with Ig and EGF homology domain,Tie-2)蛋白表达水平.结果:与正常组相比,模型组大鼠7天空腹血糖、12周空腹血糖、AUC、CVF、心肌细胞面积显著升高(P<0.01),12周BW、EF、FS及CD31、VEGF、p-VEGFR2、Ang-1、Tie-2蛋白表达水平明显降低(P<0.01).HE染色及Masson染色显示:正常组大鼠心肌细胞排列整齐,细胞形态正常、边界清晰,间质和周围血管无明显蓝色胶原纤维,心肌组织分布均匀;模型组大鼠心肌组织染色不均匀,肌束排列紊乱,心肌组织尤其是微血管周围有大量胶原纤维沉积,出现大量结缔组织增生.结论:2型糖尿病大鼠出现明显的心肌微血管病变,其病理机制可能与血管生成受损有关.
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编辑人员丨2023/8/5
