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circ_0003998对肺腺癌细胞上皮间质转化的作用和机制
编辑人员丨5天前
目的:研究circ_0003998对肺腺癌细胞上皮间质转化的作用和机制。方法:本研究为实验研究。培养肺上皮细胞株BEAS-2B和肺腺癌细胞株A549、H1299、H1395、H1975,检测各细胞株中circ_0003998、miR-218的表达水平。通过转染阴性对照(NC) 干扰小RNA、circ_0003998干扰小RNA、NC微小RNA抑制物核苷酸序列或miR-218抑制物核苷酸序列,将A549细胞分为si-NC组、si-circ_0003998组、si-circ_0003998+miR-NC抑制物组、si-circ_0003998+miR-218抑制物组;通过转染NC微小RNA核苷酸序列或miR-218核苷酸序列,将A549细胞分为miR-NC组和miR-218组。通过Transwell迁移实验检测细胞迁移能力,荧光定量聚合酶链反应实验检测circ_0003998、Bmi-1 mRNA、E-cadherin mRNA、N-cadherin mRNA、miR-218的表达水平,蛋白质印迹法检测Bmi-1、E-cadherin、N-cadherin的蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-218与circ_0003998、Bmi-1的靶向关系,逆转实验验证miR-218抑制物逆转si-circ_0003998的作用。结果:肺腺癌细胞株中circ_0003998的表达水平均高于肺上皮细胞株,miR-218的表达水平均低于肺上皮细胞株(均 P<0.05),其中A549细胞中上述表达的变化最显著。si-circ_0003998组circ_0003998、穿膜细胞数目、N-cadherin mRNA、N-cadherin蛋白、Bmi-1 mRNA、Bmi-1蛋白表达水平均低于si-NC组,miR-218、E-cadherin mRNA、E-cadherin蛋白表达水平均高于si-NC组( t值分别为15.21、15.53、9.76、7.82、12.02、9.93、11.51、10.00、7.28,均 P<0.001)。miR-218组野生型circ_0003998质粒、野生型Bmi-1质粒的荧光素酶活性均低于miR-NC组( t值分别为13.61、14.68,均 P<0.001)。si-circ_0003998+miR-218抑制物组穿膜细胞数目、N-cadherin mRNA、Bmi-1 mRNA、N-cadherin蛋白、Bmi-1蛋白表达水平均高于si-circ_0003998+miR-NC抑制物组,miR-218、E-cadherin mRNA、E-cadherin蛋白表达水平均低于si-circ_0003998+miR-NC抑制物组(均 P<0.05)。 结论:circ_0003998通过miR-218/Bmi-1轴促进肺腺癌细胞上皮间质转化。
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编辑人员丨5天前
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结肠癌转移相关基因1调控β-连环蛋白通路在肺腺癌侵袭转移中的作用
编辑人员丨5天前
目的:探讨结肠癌转移相关基因1(MACC1)在侵袭转移中的作用及其机制。方法:收集2016年7月至2017年9月于江南大学附属医院手术切除肺癌组织及其对应的癌旁组织180例,构建组织微阵列免疫组织化学检测组织中MACC1与β-连环蛋白(β-catenin)的表达情况。采用慢病毒介导的小干扰RNA(siRNA)下调MACC1在A549细胞中的表达,分为对照组、慢病毒空载体组和敲低组。构建短发卡RNA(shRNA)质粒实现MACC1-shRNA干扰质粒后慢病毒感染H1299细胞(购自美国ATCC公司)使MACC1基因的沉默,分为质粒转染组与慢病毒空载体组,采用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法、Transwell小室实验、划痕试验分别检测细胞增殖能力、侵袭性和迁移性。组间比较采用两独立样本 t检验。 结果:组织芯片免疫组织化学显示肺腺癌组织中MACC1与β-catenin的表达水平呈正相关(相关系数0.397, P<0.05);慢病毒介导A549细胞MACC1下调后引起β-catenin表达下降[对照组(0.83±0.04)比空载体组(0.91±0.09, t=-0.241, P>0.05;空载体组(0.91±0.09)比敲低组(0.24±0.02, t=1.940, P<0.05);对照组(0.83±0.04)比敲低组(0.24±0.02, t=1.699, P<0.05];沉默MACC1后行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测H1299的β-catenin表达显著下降(0.79±0.07比0.38±0.08, t=3.267, P<0.05),且质粒转染组H1299细胞平均穿膜细胞数[(18.3±2.36)个]少于慢病毒空载体组[(36.2±2.1)个, t=-13.460, P<0.05];划痕实验显示24 h后质粒转染组[(266±27) μm]距离明显小于慢病毒空载体组[(931±36) μm, t=2.631, P<0.01]。 结论:MACC1在肺腺癌中高表达,促进癌基因β-catenin的表达,从而促进肺腺癌的侵袭转移。
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编辑人员丨5天前
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miRNA-628-3p对非小细胞肺癌H1299细胞增殖、凋亡及侵袭的影响及其与胰岛素样生长因子1受体的靶向关系
编辑人员丨5天前
目的:探讨miRNA-628-3p(miR-628-3p)对非小细胞肺癌H1299细胞增殖、凋亡及侵袭的影响及其与胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)的靶向关系。方法:设立空白对照组(未经处理的H1299细胞)、miR-NC组(转染空载质粒的H1299细胞)、miR-628-3p-M组(转染含miR-628-3p模拟物序列质粒的H1299细胞)、miR-628-3p-I组(转染含miR-628-3p抑制序列质粒的H1299细胞)。各组细胞培养72 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖能力,结晶紫染色测定细胞单克隆形成数,流式细胞术测定细胞凋亡水平,Transwell法测定细胞侵袭能力,反转录、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法测定细胞中miR-628-3p、IGF-1R mRNA水平,蛋白质印迹法测定细胞中IGF-1R蛋白水平。结果:与空白对照组和miR-NC组比较,miR-628-3p-M组细胞存活率[(42±7)%比(78±6)%、(76±7)%]、单克隆形成数[(235±35)个比(614±89)个、(618±75)个]、侵袭细胞数[(265±85)个比(693±185)个、(703±119)个]、IGF-1R mRNA相对表达量(2.17±0.14比3.38±0.15、3.37±0.13)和IGF-1R蛋白相对表达量(0.34±0.13比0.89±0.19、0.88±0.18)均低(均 P<0.05),细胞凋亡率[(9.30±3.51)%比(3.30±1.54)%、(3.10±1.94)%]、miR-628-3p相对表达量(6.93±0.17比3.29±0.15、3.30±0.16)均高(均 P<0.05);而miR-628-3p-I组细胞存活率[(90±6)%]、单克隆形成数[(1 063±102)个]、侵袭细胞数[(1 985±426)个]、IGF-1R mRNA相对表达量(4.30±0.18)和IGF-1R蛋白相对表达量(1.47±0.17)均高(均 P<0.05),细胞凋亡率[(0.90±0.20)%]、miR-628-3p相对表达量(1.93±0.18)均低(均 P<0.05)。与miR-628-3p-M组比较,miR-628-3p-I组细胞存活率、单克隆形成数、侵袭细胞数、IGF-1R mRNA及蛋白相对表达量均高(均 P<0.05),细胞凋亡率、miR-628-3p相对表达量均低(均 P<0.05)。 结论:调节miR-628-3p水平对H1299细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡有影响;miR-628-3p与IGF-1R可能有靶向关系。
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编辑人员丨5天前
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基于生物信息学方法分析长链非编码RNA LINC00494在肺腺癌中的表达及诊疗与预后价值
编辑人员丨5天前
目的:探讨LINC00494在肺腺癌中的表达及诊疗与预后价值。方法:本研究为实验研究。采用生物信息学分析方法,检索TCGA数据库中535个肺腺癌患者组织和59个正常肺组织的RNA-seq数据,以及相应的患者临床资料(生存信息、性别、年龄、肿瘤长径、临床分期和淋巴结转移情况)。根据LINC00494在肺腺癌患者组织表达的中位数,分为高表达组(224例)和低表达组(224例),比较2组患者临床特征。采用Log-rank检验与多因素Cox回归分析明确LINC00494与肺腺癌患者预后的关系。采用lncATLAS在线数据库分析LINC00494的亚细胞定位情况。通过共表达分析方法获得与LINC00494共表达的蛋白质编码基因,对其进行基因本体论(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析、蛋白质-蛋白质相互作用网络分析,探讨LINC00494在肺腺癌中的功能。采用非随机抽样的方法收集2016年1月至2020年12月于西安交通大学第二附属医院经病理学检查确诊为肺腺癌的21例患者,通过将21对肺腺癌及其对应癌旁组织标本进行实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验,验证LIN00494在肺腺癌组织中的表达情况。采用3种肺腺癌细胞系A549、H1299和PC-9,以及正常支气管上皮细胞系BEAS-2B进行RT-qPCR,验证LINC00494的表达水平。将H1299细胞进行细胞核与细胞质分离,确定LINC00494的亚细胞定位。结果:LINC00494在肺腺癌组织中较正常肺组织中表达上调。高表达组和低表达组患者的性别、肿瘤长径和临床分期比较差异均有统计学意义(均 P<0.01),年龄和淋巴结转移比较差异均无统计学意义(均 P>0.05)。生存分析结果显示高表达组的生存状态优于低表达组( χ2=7.24, P=0.007),高表达组的总生存期和中位总生存期均长于低表达组[(7.14±1.82)年比(5.36±1.62)年、(3.89±1.29)年比(3.27±0.87)年]。多因素Cox回归分析结果显示临床分期Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期是影响肺腺癌患者预后的独立危险因素,LINC00494高表达水平是影响肺腺癌患者预后的独立保护因素(均 P<0.05)。lncATLAS在线数据库分析发现LINC00494定位于细胞核。通过共表达分析方法,获得247个与LINC00494共表达的蛋白质编码基因。GO分析显示与LINC00494共表达的蛋白质编码基因主要富集通路为信号转导、免疫应答、炎性反应、免疫应答调节、细胞表面受体信号等。KEGG分析显示与LINC00494共表达的蛋白质编码基因主要富集通路为细胞因子受体间相互作用、原发性免疫不全、细胞黏附分子、EB病毒感染、T细胞受体信号通路等。21例患者中男13例,女8例;年龄(60.57±10.41)岁,年龄范围40~76岁;肺腺癌组织LINC00494表达较癌旁组织高,差异有统计学意义[(1.954±0.075)比(0.986±0.056), t=2.73, P=0.013]。4种细胞系的LINC00494表达水平差异有统计学意义( F=109.06, P<0.001)。H1299和PC-9肺腺癌细胞系的LINC00494表达水平较正常支气管上皮细胞系BEAS-2B升高[(4.860±0.603)比(1.959±0.168)比(1.002±0.008)],差异均有统计学意义(均 P<0.05)。在H1299细胞中,LINC00494约有87%在细胞核中表达。 结论:LINC00494在肺腺癌中表达上调,且与肺腺癌预后良好有关。LINC00494定位于细胞核,参与多条免疫反应相关通路,是潜在的肺腺癌诊断、治疗和预后评估的生物标志物。
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编辑人员丨5天前
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ILR2调控PI3K-AKT信号抑制MMP-2蛋白活性对非小细胞肺癌的影响
编辑人员丨5天前
目的:基于PI3K-AKT信号通路探讨免疫球蛋白样受体2(immunoglobulin-like receptor 2,ILR2)是否通过抑制基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)影响非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞生物学行为。方法:收集2017年9月至2019年3月贵州医科大学附属医院病理科存入的确诊为NSCLC患者的癌组织和癌旁正常肺组织石蜡切片,共48例。采用免疫组织化学染色SP法检测癌组织和癌旁组织中ILR2和MMP-2表达情况。购置NSCLC细胞株,检测各细胞株中ILR2和MMP-2表达水平。转染siRNA敲低ILR2,分析敲低ILR2对H1299细胞增殖、侵袭、转移、凋亡及相关蛋白表达的影响。结果:癌组织ILR2和MMP-2阳性表达率显著高于癌旁组织(54.17%比25.00%,58.33%比27.08%, χ2值分别为8.54和9.58, P值均<0.05);H1299细胞株中ILR2和MMP-2表达水平显著高于其他种类NSCLC细胞株,因此将H1299细胞株用于后续研究;沉默组H1299细胞存活率显著低于空白对照组和空载体组[(70.24±13.15)%比(116.24±18.34)%,(70.24±13.15)%比(103.76±20.72)%, t值分别为12.26和11.62, P值均<0.05];沉默组H1299细胞侵袭细胞数目显著少于空白对照组和空载体组[(82.25±9.15)个比(224.18±30.16)个,(82.25±9.15)个比(218.26±28.37)个, t值分别为31.16和34.13, P值均<0.05];沉默组H1299细胞愈合程度显著低于空白对照组和空载体组[(47.26±8.26)%比(60.25±7.25)%,(47.26±8.26)%比(65.24±8.76)%, t值分别为10.25和11.16, P值均<0.05];沉默组H1299细胞凋亡率显著高于空白对照组和空载体组[(29.54±3.17)%比(4.28±1.06)%,(29.54±3.17)%比(3.72±1.01)%, t值分别为7.25和8.16, P值均<0.05];与空白对照组和空载体组比较,沉默组H1299细胞ILR2、MMP-2、磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI3K)和苏氨酸蛋白激酶(threonine protein kinase,AKT)蛋白表达水平升高,p53蛋白表达水平降低,差异具有统计学意义( t空白对照组=4.03、3.15、3.82、7.26、5.82, t空载体组=2.25、3.26、4.83、6.25、6.08; P值均<0.05)。 结论:NSCLC癌组织中ILR2阳性表达率高,敲低ILR2可通过下调MMP-2蛋白表达水平,调控PI3K-AKT信号通路,抑制癌细胞增殖、侵袭和迁移,并促进细胞凋亡,ILR2有可能成为治疗NSCLC的新靶点。
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编辑人员丨5天前
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circDDX17靶向miR-223-3p/RIP3调控非小细胞肺癌细胞增殖及凋亡
编辑人员丨5天前
目的:探讨circDDX17通过靶向miR-223-3p/RIP3分子轴调控非小细胞肺癌细胞增殖及凋亡的分子机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人正常肺上皮细胞株BEAS-2B和非小细胞肺癌H1299、A549、H446细胞中circDDX17、miR-223-3p、受体相互作用蛋白3(RIP3)的表达水平。分别将pcDNA、pcDNA-circDDX17、anti-miR-con、anti-miR-223-3p、pcDNA-circDDX17与miR-con、pcDNA-circDDX17与miR-223-3p mimics转染至H1299细胞。采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况,平板克隆实验检测细胞增殖能力,双荧光素酶报告实验验证circDDX17与miR-223-3p、miR-223-3p与RIP3的靶向关系,Western blot法检测CyclinD1、CDK2、Cleaved caspase-3、Bax蛋白的表达水平。结果:与BEAS-2B比较,H1299、A549、H446细胞中circDDX17 mRNA表达水平降低,miR-223-3p mRNA表达水平升高,RIP3 mRNA的表达水平降低(均 P<0.05)。pcDNA-circDDX17组细胞活力[(69.46±4.68)%]、细胞克隆数[(83.49±7.86)个]、S期细胞比例[(22.52±1.41)%]、CyclinD1、CDK2蛋白表达水平均低于pcDNA组[分别为(97.54±7.72)%、(205.03±13.37)个、(28.69±1.49)%,均 P<0.05],pcDNA-circDDX17组细胞G 0/G 1期细胞比例[(64.45±3.56)%]、细胞凋亡率[(18.36±1.63)%]、Cleaved caspase-3、Bax蛋白表达水平均高于pcDNA组[分别为(51.33±2.76)%和(5.21±0.54)%,均 P<0.05];anti-miR-223-3p组细胞活力[(72.64±5.44)%]、细胞克隆数[(78.16±8.23)个]、S期细胞比例[(21.34±1.59)%]、CyclinD1、CDK2蛋白表达水平均低于anti-miR-con组[分别为103.47±6.25、(169.32±14.53)个、(28.43±1.26)%,均 P<0.05],anti-miR-223-3p组细胞G 0/G 1期细胞比例[(62.86±3.28)%]、细胞凋亡率[(14.64±1.67)%]、Cleaved caspase-3、Bax蛋白表达水平均高于anti-miR-con组[分别为(51.33±2.71)%和(4.83±0.39)%,均 P<0.05]。circDDX17与miR-223-3p存在结合位点,miR-223-3p与RIP3存在结合位点。pcDNA-circDDX17+miR-223-3p组细胞活力[(135.45±9.28)%]、细胞克隆数[(174.64±10.68)个]、S期细胞比例[(26.39±2.25)%]、CyclinD1、CDK2蛋白表达水平均高于pcDNA-circDDX17+miR-con组[分别为(101.56±6.68)%、(107.65±7.62)个、(21.64±1.72)%,均 P<0.05],pcDNA-circDDX17+miR-223-3p组细胞G 0/G 1期细胞比例[(56.64±2.76)%]、细胞凋亡率[(8.34±0.76)%]、Cleaved caspase-3、Bax蛋白表达水平均低于pcDNA-circDDX17+miR-con组[分别为(64.03±3.48)%和(15.21±1.18)%,均 P<0.05]。 结论:circDDX17可靶向调控miR-223-3p/RIP3分子轴从而抑制非小细胞肺癌细胞增殖及诱导细胞凋亡。
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编辑人员丨5天前
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circRNA_0128846靶向miR-1183介导人非小细胞肺癌细胞放射抵抗的研究
编辑人员丨5天前
目的:探讨环状RNA(circRNA)_0128846对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞放射抵抗的影响及机制。方法:应用GEO数据库筛选、采用荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测在人NSCLC细胞A549及其放射抵抗细胞(A549R)中差异表达最显著的circRNA作为目标circRNA,qRT-PCR检测其在人支气管上皮细胞Beas-2B及人NSCLC细胞A549、H460、H1299、H1975中的表达水平。在A549细胞中转染目标circRNA过表达载体,在A549R细胞中转染目标circRNA沉默载体,并检测以上细胞经8 Gy X射线照射后的克隆形成能力。应用人类环状RNA数据库和circinteractome数据库预测目标circRNA下游的miRNA,qRT-PCR检测A549R细胞中目标circRNA沉默后表达水平上升最显著的miRNA作为目标miRNA。qRT-PCR检测A549细胞中过表达目标circRNA后目标miRNA的表达情况;通过双荧光素酶报告基因分析人胚肾细胞293T中过表达目标miRNA后目标circRNA的表达情况;qRT-PCR检测目标miRNA在A549、A549R细胞中的表达水平。在A549细胞中转染目标miRNA抑制剂以沉默目标miRNA,在A549R细胞中转染目标miRNA模拟物以过表达目标miRNA,并检测以上细胞经8 Gy X射线照射后的克隆形成能力;将过表达目标circRNA的A549细胞进行8 Gy X射线照射并在该细胞中过表达目标miRNA,检测细胞的克隆形成能力。组间数据的比较采用独立样本 t检验。 结果:qRT-PCR检测结果显示,circRNA_0128846为目标circRNA,且其在人NSCLC细胞A549、H460、H1299、H1975中的相对表达水平均高于人支气管上皮细胞Beas-2B( t=6.200、7.903、6.010、6.132,均 P<0.01)。过表达circRNA_0128846的A549细胞经照射后的克隆形成能力增强(0.22%对0.45%, t=4.427, P<0.05);沉默circRNA_0128846后A549R细胞经照射后的克隆形成能力降低(0.23%对0.10%, t=3.780, P<0.05)。qRT-PCR检测结果显示,miR-1183为目标miRNA,在A549细胞中过表达circRNA_0128846显著下调miR-1183的表达( t=6.002, P<0.01);双荧光素酶报告基因分析证实过表达miR-1183可显著下调circRNA_0128846的表达( t=4.562, P<0.05);miR-1183在A549R细胞中的相对表达水平显著低于亲本A549细胞( t=6.025, P<0.01)。过表达miR-1183显著降低A549R细胞经照射后的克隆形成能力,沉默miR-1183显著增强A549细胞经照射后的克隆形成能力(0.26%对0.15%、0.21%对0.31%, t=3.671、3.293,均 P<0.05),且过表达miR-1183显著降低了过表达circRNA_0128846对A549细胞克隆形成能力的促进作用(1.90%对1.20%, t=6.325, P<0.01)。 结论:circRNA_0128846作为miR-1183的吸附海绵,可抑制miR-1183的表达进而抑制其放疗增敏作用,从而促进人NSCLC细胞的放射抵抗。
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编辑人员丨5天前
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基于生物信息学分析KIF23在肺腺癌中的功能及验证
编辑人员丨5天前
目的:探究驱动蛋白超家族23(kinesin superfamily 23,KIF23)在肺腺癌中的表达水平与预后的相关,以及其对肺腺癌细胞侵袭、迁移和增殖的影响。方法:分析基因表达谱数据动态分析(GEPIA)数据库中KIF23在肺腺癌中的表达水平,利用Kaplan-Meier Plotter数据库分析肺腺癌患者生存周期,对KIF23进行基因集富集分析(GSEA)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测肺癌细胞系中KIF23的表达水平,使用shRNA-KIF23病毒感染细胞,沉默KIF23的表达。Transwell法检测细胞侵袭、迁移能力。通过细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞增殖能力。通过免疫组织化学染色分析KIF23在肺腺癌和癌旁组织的表达水平。结果:GEPIA数据库分析表明KIF23在肺腺癌(515例)中表达高于正常肺组织(59例),差异有统计学意义( P<0.001);Kaplan-Meier Plotter进行患者生存周期分析表明高表达KIF23患者358例总生存期(overall survival,OS)短于低表达KIF23患者361例OS,差异有统计学意义( HR=1.35,95% CI:1.06~1.70, P=0.013);GSEA结果提示KIF23高表达组的肺腺癌患者255例中心体相关通路和G2/M检查点通路富集程度高于KIF23低表达组患者255例。Transwell结果显示,转染shRNA-KIF23的H1299和A549细胞迁移率明显低于对照组( F分别为55.45和64.93,均 P<0.001)。转染shRNA-KIF23的H1299和A549细胞的侵袭率也低于对照组( F=68.16和175.00,均 P<0.001)。CCK-8实验结果显示除第1天外,在第2、3、4、5天H1299和A549肺癌细胞系的2个KIF23敲低组的增殖能力均低于对照组,差异有统计学意义(H1299细胞 F值分别为72.74、113.60、46.93、93.48;A549细胞 F值分别为31.07、103.80、92.83、130.20,均 P<0.001)。肺腺癌标本免疫组织化学染色表明KIF23在肺腺癌(53.06±10.78)中表达水平高于癌旁组织(33.03±11.98),差异有统计学意义( t=9.63, P<0.001)。 结论:KIF23在肺腺癌中表达水平高于正常肺组织,参与了肺腺癌的细胞侵袭、迁移和增殖,促进了肺腺癌的发生发展,可能成为新的靶向治疗靶点并作为预测肺腺癌预后的分子标志物。
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编辑人员丨5天前
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miR-511-3p靶向ATP2A2调控内质网应激对肺癌细胞增殖和凋亡的影响
编辑人员丨5天前
目的:探讨miRNA-511-3p(miR-511-3p)对肺癌细胞增殖和凋亡的影响,及ATP2A2、内质网应激在其中的可能作用。方法:回顾性收集2020年1月至2022年3月惠州市中心人民医院69例肺癌患者的肺癌组织和癌旁正常组织(距离肿瘤>2 cm)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测癌和癌旁组织以及永生化肺上皮细胞株BEAS-2B、人肺细胞株CCD-19Lu、人肺癌细胞株A549、H1975、H1299中miR-511-3p转录水平相对表达量。选择miR-511-3p相对表达水平最低的肺癌细胞株A549进行后续实验。将细胞分为miR对照组(转染miR-511-3p无关序列)、miR-511-3p过表达组(转染miR-511-3p模拟物)、miR-511-3p敲低组(转染miR-511-3p抑制物);另取A549细胞分为ATP2A2过表达对照组(转染空载质粒)、ATP2A2过表达组(转染ATP2A2过表达质粒),以及ATP2A2敲低对照组(转染载有小干扰RNA无关序列的质粒)和ATP2A2敲低组(转染载有ATP2A2小干扰RNA序列的质粒)。采用qRT-PCR法检测各组A549细胞miR-511-3p和ATP2A2转录水平相对表达量;蛋白质印迹法检测各组A549细胞ATP2A2蛋白及内质网应激标志蛋白的相对表达量;双荧光素酶报告基因实验验证miR-511-3p与ATP2A2 mRNA的靶向关系;CCK-8法检测各组A549细胞增殖能力(以吸光度值表示);流式细胞术检测各组A549细胞中凋亡细胞占比;无机磷比色法检测各组A549细胞Ca 2+-ATP酶活性;荧光探针法检测各组A549细胞Ca 2+浓度。 结果:69例患者肺癌组织和癌旁组织miR-511-3p转录水平相对表达量分别为0.08±0.03、0.17±0.12,差异有统计学意义( t=6.04, P<0.05)。miR-511-3p过表达组、miR-511-3p敲低组、miR对照组A549细胞中凋亡细胞占比分别为(58.1±6.1)%、(11.0±1.3)%、(22.0±2.1)%,miR-511-3p过表达组较miR对照组高,miR-511-3p敲低组较对照组低,差异均有统计学意义( t值分别为9.70、7.64,均 P<0.05)。培养24、48、72 h后,miR-511-3p过表达组A549细胞增殖能力均较miR对照组低,miR-511-3p敲低组均较miR对照组高,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。ATP2A2敲低组、ATP2A2敲低对照组A549细胞中凋亡细胞占比分别为(58.2±1.5)%、(23.8±1.0)%,差异有统计学意义( t=33.94, P<0.05);ATP2A2过表达组、ATP2A2过表达对照组A549细胞中凋亡细胞占比分别为(13.8±2.0)%、(23.8±1.0)%,差异有统计学意义( t=7.96,均 P<0.05)。miR-511-3p过表达组、miR-511-3p敲低组、miR对照组A549细胞ATP2A2转录水平相对表达量分别为0.11±0.01、1.34±0.19、0.51±0.12,miR-511-3p过表达组较miR对照组低,miR-511-3p敲低组较对照组高,差异均有统计学意义( t值分别为5.76、6.40,均 P<0.05);miR-511-3p过表达组A549细胞ATP2A2蛋白相对表达量较其对照组低,miR-511-3p敲低组较其对照组高,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验验证miR-511-3p与ATP2A2 mRNA存在靶向关系。对照组、miR-511-3p过表达组、ATP2A2过表达组、miR-511-3p过表达+ATP2A2过表达组A549细胞中凋亡细胞占比分别为(21.5±3.0)%、(58.1±5.0)%、(13.3±1.2)%、(20.5±4.0)%,差异有统计学意义( F=73.28, P<0.001);对照组、miR-511-3p敲低组、ATP2A2敲低组、miR-511-3p敲低+ATP2A2敲低组A549细胞中凋亡细胞占比分别为(23.5±3.0)%、(11.3±1.2)%、(60.1±7.0)%、(25.6±5.0)%,差异有统计学意义( F=78.45, P<0.001)。ATP2A2过表达组A549细胞Ca 2+-ATP酶活性高于对照组,ATP2A2敲低组低于对照组,差异均有统计学意义( t值分别为4.61、6.07,均 P<0.05);ATP2A2过表达组A549细胞内Ca 2+浓度低于对照组,ATP2A2敲低组高于对照组,差异均有统计学意义( t值分别为3.30、3.95,均 P< 0.05)。miR-511-3p过表达组A549细胞Ca 2+-ATP酶活性低于miR对照组,miR-511-3p敲低组高于miR对照组,差异均有统计学意义( t值分别为6.54、4.16,均 P<0.05);miR-511-3p过表达组A549细胞内Ca 2+浓度高于miR对照组,miR-511-3p敲低组低于miR对照组,差异均有统计学意义( t值分别为3.60、6.23,均 P<0.05)。敲低ATP2A2或过表达miR-511-3p的A549细胞内质网应激标志GRP78、PERK、p-eIF2a、ATF4、CHOP蛋白相对表达量均较相应对照组高,差异均有统计学意义(均 P<0.05);过表达ATP2A2或敲低miR-511-3p的A549细胞各蛋白相对表达量均较相应对照组低,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:miR-511-3p水平变化可能影响肺癌细胞的增殖和凋亡,机制可能是其靶向ATP2A2进而调控内质网应激而影响肺癌细胞凋亡。
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编辑人员丨5天前
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微小RNA-1246靶向CXC趋化因子受体4非小细胞肺癌转移特性的机制
编辑人员丨5天前
目的:探讨微小RNA(miR)-1246靶向CXC趋化因子受体4(CXCR4)非小细胞肺癌转移特性的分子机制。方法:选取2019年7月到2021年7月河南省人民医院收集的72例非小细胞肺癌和对应癌旁组织作为研究对象,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法分析肿瘤组织和癌旁组织中miR-1246的表达水平。人非小细胞肺癌H1299细胞系随机分为miRNA对照组和miR-1246组,采用miRNA对照和miR-1246慢病毒感染,建立稳定细胞系。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、划痕实验、Transwell和上皮间质转化分析miR-1246对非小细胞肺癌增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化的影响。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-1246的靶基因。采用蛋白质免疫印迹(Western blot)分析靶蛋白表达水平。组间比较采用 t检验。 结果:癌旁组织中miR-1246表达水平(1.07±0.19)明显高于miR-1246组(0.66±0.13),差异有统计学意义( t=15.860, P<0.05)。miRNA对照组吸光度值(1.95±0.06)明显高于miR-1246组(1.58±0.07),差异有统计学意义( t=10.090, P<0.05)。miRNA对照组划痕愈合率[(90.20±6.57)%]明显高于miR-1246组[(74.56±9.36)%],差异有统计学意义( t=3.351, P<0.05)。miRNA对照组细胞侵袭数量[(131.00±16.37)个]明显高于miR-1246组[(94.17±5.19)个],差异有统计学意义( t=5.177, P<0.05)。miRNA对照组细胞上皮细胞标志物E-钙黏素(E-cadherin)和细胞角蛋白(cytokeratins)表达水平(0.87±0.06、0.71±0.06)明显低于miR-1246组(1.27±0.04、1.23±0.15),差异有统计学意义( t=14.240、7.839, P<0.05)。miRNA对照组细胞间质细胞标志物N-钙黏素(N-cadherin)和TWIST1表达水平(1.14±0.14、1.25±0.05)明显高于miR-1246组(0.81±0.05、0.92±0.03),差异有统计学意义( t=5.574、14.270, P<0.05)。CXCR4是miR-1246的靶基因。癌旁组织CXCR4蛋白表达水平(1.03±0.13)明显低于非小细胞肺癌组织(2.12±0.17),差异有统计学意义( t=15.860, P<0.05)。miRNA对照组细胞CXCR4蛋白表达水平(1.17±0.11)明显低于miR-1246组(0.80±0.07),差异有统计学意义( t=6.789, P<0.05)。 结论:miR-1246通过靶向调节CXCR4蛋白表达水平,进而参与非小细胞肺癌的迁移、侵袭和上皮间质转化过程。
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编辑人员丨5天前
