目的:通过成簇规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9(CRISPR/Cas9)系统构建HMGB2基因敲除的小鼠巨噬细胞株(Raw264.7)，并验证肺炎克雷伯菌(KP)感染后HMGB2敲除细胞介导促炎因子产生和杀菌能力的变化。方法:针对小鼠HMGB2基因靶向设计向导RNA(sgRNA)，将插入sgRNA的pX459质粒转染Raw264.7细胞，利用抗性筛选和有限稀释法获得HMGB2基因敲除细胞克隆。利用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)对所获细胞克隆的HMGB2基因和蛋白表达进行鉴定。通过细菌计数测定HMGB2 －/－ Raw264.7吞噬和杀伤细菌能力，通过酶联免疫吸附试验(ELISA)测定HMGB2 －/－ Raw264.7促炎因子分泌情况。组间比较采用 t检验。 结果:利用嘌呤霉素成功筛选出单克隆细胞株，HMGB2蛋白在敲除细胞株中完全不表达，HMGB2敲除后对KP的吞噬与正常细胞比较，差异无统计学意义(2.37±0.31比2.33±0.15， t＝0.17， P>0.05)，但感染后18 h胞内细菌存活比例显著高于正常细胞[(67.67±9.02)%比(32.33±6.11)%， t＝5.62， P<0.01]；KP感染HMGB2 －/－ Raw264.7，促炎因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β和IL-6分泌量显著低于正常细胞[(54.00±18.08) pg/ml比(111.70±8.50) pg/ml， t＝5.00， P<0.01；(65.67±9.87) pg/ml比(128.00±30.61) pg/ml， t＝3.36， P<0.01；(72.67±9.07) pg/ml比(95.00±5.29) pg/ml， t＝3.68， P<0.05]。 结论:通过CRISPR/Cas9技术成功构建HMGB2基因敲除Raw264.7细胞株，验证了HMGB2对诱导相关炎性因子及抗KP感染的影响。

目的:观察氧化苦参碱(OM)对过氧化氢(H 2O 2)处理的大鼠胰腺腺泡AR42J细胞株高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达和释放的影响。 方法:应用MTT法检测不同浓度H 2O 2处理对AR42J细胞生存率的影响。将体外培养的AR42J细胞分为对照组、H 2O 2组、H 2O 2＋OM组。H 2O 2组及H 2O 2＋OM组加入等容积的H 2O 2(终浓度0.16 mmol/L)，对照组加入等容积三蒸水，H 2O 2＋OM组在加入H 2O 2前0.5 h加入OM(终浓度0.5 g/L)，培养24 h后收取细胞及细胞上清液。采用蛋白免疫印迹法检测细胞HMGB1蛋白表达，酶联免疫吸附试验检测细胞上清液HMGB1蛋白水平，免疫荧光法检测HMGB1蛋白在细胞内的定位分布。 结果:H 2O 2组细胞HMGB1蛋白表达量、分泌到细胞上清液中HMGB1蛋白量、细胞质HMGB1蛋白占细胞总HMGB1蛋白的比例均显著高于对照组[1.04±0.04比0.69±0.02，(4.84±0.13)μg/L比(2.68±0.07)μg/L，(35.7±2.5)%比(10.7±1.9)%]，差异均有统计学意义( P值均<0.05)；应用OM干预后，细胞HMGB1蛋白表达及分泌量、细胞质中HMGB1蛋白占比分别为0.82±0.02、(3.97±0.10)μg/L、(27.3±1.7)%，均显著低于H 2O 2组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)。 结论:H 2O 2能够诱导大鼠胰腺腺泡细胞HMGB1的表达和释放，OM干预可减轻H 2O 2致AR42J细胞氧化应激损伤的程度。

目的:探讨问号钩端螺旋体溶血素Sph2经高迁移率组蛋白B1(high mobility group box-1，HMGB1)放大炎症反应的可能机制。方法:一定浓度的rSph2与小鼠J774A.1巨噬细胞共孵育一定时间，乳酸脱氢酶(LDH)量的变化检测细胞的膜结构损伤情况；冷冻电镜观察细胞结构的改变；ELISA方法检测细胞上清液中HMGB1的含量变化。商品化的HMGB1与小鼠J774A.1巨噬细胞共孵育一定时间，Western blot检测NF-κB、p38-MAPK及JNK炎症信号通路关键分子的磷酸化水平；ELISA检测IL-1β、IL-6、KC(IL-8)等促炎细胞因子的表达情况。结果:重组问号钩端螺旋体溶血素rSph2可导致J774A.1细胞明显的细胞核消失、细胞膜结构损伤、细胞裂解、膜泡胀；LDH释放量及HMGB1的含量明显增加；HMGB1增加NF-κB、p38-MAPK及JNK信号通路关键蛋白质的磷酸化水平；HMGB1上调J774A.1细胞IL-1β、IL-6、KC的表达且该上调作用可被3条通路抑制剂所抑制。结论:重组问号钩端螺旋体溶血素rSph2诱导小鼠J774A.1巨噬细胞产生损伤并释放大量的HMGB1，HMGB1经NF-κB、p38-MAPK及JNK信号通路调控下游促炎细胞因子的表达，从而放大rSph2造成的炎症效应。

目的:观察白细胞介素-35(IL-35)对效应T细胞内高迁移率族蛋白B1(HMGB1)分布的影响，进一步探索其机制。方法:分离、培养并活化雄性C57BL/6小鼠脾脏中CD4 + T淋巴细胞，0.025% digitonin处理3 min后固定，FAC Scan流式细胞仪检测细胞质HMGB1的表达及IL-35的影响；进一步以1 μmol/L EX527及1 μmol/L SRT1720调节细胞内HMGB1的分布，观察细胞内LC3-Ⅱ和Beclin 1变化；最后应用蛋白质印迹法(Western blot)检测T细胞内信号转导及转录激活因子(STAT1)-鼠双微体基因2 (MDM2)-p53信号转导通路的变化。符合正态性分布数据进行进行Student’s t检验，不符合正态分布数据进行独立样本非参数检验。 结果:活化效应性T细胞内，HMGB1含量[(58.02±12.77)%]高于对照组[(6.03±2.35)%， t＝9.809， P<0.01]，50 ng/ml重组IL-35处理组细胞质HMGB1[(28.50±10.66)%]低于anti-CD3/CD28组( t＝4.418， P<0.01)；SRT1720抑制细胞质LC3Ⅱ和Beclin 1的表达，与EX527作用相反；活化效应性T细胞中，IL-35促进STAT1磷酸化，抑制细胞质MDM2表达，进而降低p53降解，增加细胞核及细胞质p53。 结论:对STAT1-MDM2-p53信号转导通路的干预可能是IL-35影响高迁移率族蛋白B1分布进而干扰效应T细胞自噬的重要机制之一。

目的:比较不同麻醉方式下腹腔镜宫颈癌根治术患者围术期血浆高迁移率族蛋白1(HMGB1)浓度。方法:择期行腹腔镜宫颈癌根治术的患者68例，年龄34~68岁，BMI 19~24 kg/m 2，ASA分级Ⅰ或Ⅱ级。采用随机数字表法分为2组( n＝34)：全身麻醉组(G组)和全身麻醉联合硬膜外麻醉组(GE组)。G组采用咪达唑仑、依托咪酯、顺式阿曲库铵进行麻醉诱导，采用瑞芬太尼、丙泊酚、顺阿曲库铵维持麻醉；GE组麻醉诱导前经L 1，2间隙行硬膜外麻醉，待麻醉平面达到T 6后进行全身麻醉，方法同G组。术后采用PCIA，维持VAS评分≤3分。于麻醉前10 min(T 0)、手术结束时(T 1)、术后1 h(T 2)、24 h(T 3)和48 h(T 4)时，采集外周静脉血样，采用ELISA法测定血浆HMGB1、γ-干扰素(IFN-γ)以及IL-4浓度；通过流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群CD3 +、CD4 +、CD8 +水平和CD4 +/CD8 +比值。 结果:与G组比较，GE组T 2，4时血浆IFN-γ和IL-4浓度降低，T 2~4时血浆HMGB1浓度降低，T 2~4时CD3 +、T 2时CD4 +、T 2，3时CD8 +水平和CD4 +/CD8 +比值升高( P<0.05)。 结论:相比全身麻醉，全身麻醉联合硬膜外麻醉下腹腔镜宫颈癌根治术患者血浆HMGB1浓度更低，进而对免疫功能的影响更小。

目的:探究尖锐湿疣（CA）疣体内高迁移率族蛋白B1（HMGB1）水平变化及其临床意义。方法:回顾性选择2019年1月至2020年11月在空军军医大学第二附属医院治疗的初发CA患者64例（初发组）和复发CA患者48例（复发组），另选择同期31例接受包皮环切术患者以及19例女性性器官美容整形患者作为对照组，收集正常包皮及健康外阴组织。采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测患者疣体内HMGB1水平，并对疣体内可溶性凋亡相关因子配体（sFasL）、细胞淋巴瘤-2基因（Bcl-2）、可溶性凋亡相关因子（sFas）、生存素（Survivin） 、caspase-3表达量进行测定，同时采用酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测三组血清白细胞介素（IL）-6、IL-17、IL-23和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平。结果:初发组、复发组、对照组HMGB1 mRNA表达量分别为1.96 ± 0.20、1.53 ± 0.14、1.05 ± 0.11，三组HMGB1 mRNA表达量比较差异有统计学意义（ F = 15.20， P<0.05）；初发组疣体内HMGB1 mRNA表达量高于复发组、对照组，而复发组高于对照组，差异均有统计学意义（ P<0.05）。初发组疣体内sFas、Bcl-2、sFasL 、caspase-3 mRNA表达量低于复发组、对照组（0.52 ± 0.08比0.82 ± 0.16和1.10 ± 0.19、0.50 ± 0.05比0.79 ± 0.13和1.08 ± 0.21、0.47 ± 0.06比0.81 ± 0.15和1.01 ± 0.19、0.35 ± 0.04比0.68 ± 0.09和0.91 ± 0.16），而复发组上述指标亦低于对照组，差异均有统计学意义（ P<0.05）；初发组疣体内Survivin mRNA表达量高于复发组、对照组（2.14 ± 0.40比1.60 ± 0.27和0.99 ± 0.18），而复发组Survivin mRNA表达量亦高于对照组，差异均有统计学意义（ P<0.05）。初发组血清TNF-α、IL-6水平低于复发组、对照组[（20.08 ± 1.95） μg/L比（26.93 ± 2.74）和（37.65 ± 3.83） μg/L、（31.05 ± 3.24） μg/L比（38.13 ± 3.76）和（45.98 ± 4.69） μg/L]，而复发组上述指标亦低于对照组，差异均有统计学意义（ P<0.05）。初发组血清IL-17、IL-23水平高于复发组、对照组[（423.71 ± 28.68） ng/L比（384.26 ± 21.70）和（335.43 ± 19.65）ng/L、（289.50 ± 18.53） ng/L比（251.07 ± 15.96）和（214.67 ± 13.20） ng/L]，而复发组血清IL-17、IL-23水平亦高于对照组，差异均有统计学意义（ P<0.05）。Pearson相关分析结果表明，CA患者疣体内HMGB1 mRNA表达与疣体内caspase-3、sFas、Bcl-2、sFasL mRNA表达呈负相关（ r = - 0.602、-0.734、- 0.692、- 0.717， P<0.05），与Survivin mRNA表达呈正相关（ r = 0.645， P<0.05）；CA患者疣体内HMGB1 mRNA表达与血清IL-17、IL-23水平呈正相关（ r = 0.673、0.685， P<0.05），与TNF-α、IL-6水平呈负相关（ r = - 0.698、- 0.764， P<0.05）。 结论:尖锐湿疣患者疣体内HMGB1存在明显异常，并与细胞凋亡以及免疫、炎性相关因子异常密切相关，可能共同参与CA的发生、复发。

目的:探究非小细胞肺癌（NSCLC）患者的血清高迁移率族蛋白（HMGB）2和HMGB3水平及临床意义。方法:选取2020年1月—2022年1月西安医学院第一附属医院收治的137例NSCLC患者作为NSCLC组，另选取同期健康体检者90例作为健康组，比较两组血清HMGB2、HMGB3水平，分析血清HMGB2、HMGB3水平与NSCLC患者临床病理特征的关系；根据NSCLC患者预后情况分为预后良好组（ n=86）和预后不良组（ n=51），并比较两组的临床资料；采用多因素logistic回归分析NSCLC患者预后的影响因素；采用受试者操作特征（ROC）曲线分析血清HMGB2、HMGB3对NSCLC患者预后的预测价值。 结果:NSCLC组的血清HMGB2[（6.35±1.66）ng/ml比（2.58±0.76）ng/ml， t=20.19， P<0.001]、HMGB3[（2.48±0.56）ng/ml比（1.09±0.13）ng/ml， t=23.13， P<0.001]水平均高于健康组。有吸烟史（ t=2.80， P=0.006； t=5.04， P<0.001）、有淋巴结转移（ t=3.53， P=0.001； t=4.02， P<0.001）、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期（ t=2.58， P=0.011； t=3.82， P<0.001）的NSCLC患者血清HMGB2、HMGB3水平均显著高于无吸烟史、无淋巴结转移、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期的患者。预后不良组患者的血清HMGB2[（7.80±1.83）ng/ml比（5.49±1.56）ng/ml， t=7.85， P<0.001]、HMGB3[（2.91±0.78）ng/ml比（2.23±0.43）ng/ml， t=6.58， P<0.001）]水平均高于预后良好组，有淋巴结转移（ χ2=4.81， P=0.028）、有吸烟史（ χ2=11.67， P=0.001）、TNM分期的Ⅲ~Ⅳ期（ χ2=6.18， P=0.013）患者占比均显著高于预后良好组。多因素logistic回归分析结果显示，淋巴结转移（ OR=1.96，95% CI为1.14~3.36， P=0.015）、吸烟史（ OR=2.02，95% CI为1.33~3.06， P=0.001）、TNM分期（ OR=2.28，95% CI为1.35~3.86， P=0.002）、HMGB2（ OR=2.01，95% CI为1.40~2.91， P<0.001）、HMGB3（ OR=1.99，95% CI为1.25~3.15， P=0.003）水平均为NSCLC患者预后的独立影响因素。ROC曲线分析显示，血清HMGB2、HMGB3单独和联合预测NSCLC患者预后情况的曲线下面积（AUC）分别为0.833、0.862、0.922，二者联合预测的AUC显著高于血清HMGB2（ Z=2.44， P=0.015）、HMGB3（ Z=2.54， P=0.011）单独预测。 结论:NSCLC患者血清HMGB2、HMGB3水平上调，且与不良预后密切相关，二者联合检测对NSCLC患者预后具有一定的预测效能。

目的:探讨齐墩果酸（OA）对沉默调节蛋白1（SIRT1）介导的高迁移率族蛋白1（HMGB1）去乙酰化在蛛网膜下腔出血（SAH）后早期脑损伤中的作用。方法:将176只雄性Sprague-Dawley大鼠按完全随机法分为假手术组（Sham组）（ n=48）、SAH组（ n=48）、OA组（ n=48）和Sirtinol组（ n=32）。SAH组、OA组和Sirtinol组大鼠均采用颈内动脉穿刺法构建SAH模型，Sham组大鼠不实施穿刺。造模后1 h，OA组大鼠腹腔注射OA（20 mg/kg），Sirtinol组大鼠侧脑室注射Sirtinol（2 mmol/L，30 μL/kg），Sham组和SAH组大鼠均注射等体积的氯化钠注射液。SAH后24 h，对大鼠进行SAH评分和神经功能评分，测定大鼠脑组织含水量及依文思蓝渗出率；采用蛋白质印迹法检测大鼠脑组织中HMGB1、SIRT1和乙酰化HMGB1蛋白的表达；实时荧光定量PCR检测大鼠脑组织中HMGB1 mRNA的表达；免疫荧光染色观察大鼠脑组织中HMGB1蛋白的分布情况；TUNEL染色观察大鼠脑组织中神经元调亡情况。 结果:与SAH组相比，OA组SAH评分明显降低（ P<0.001），Garcia评分升高（ P<0.01），脑组织含水量和伊文思蓝渗出率均降低（均 P<0.01）；与OA组相比，Sirtinol组SAH评分升高（ P<0.01），Garcia评分明显降低（ P<0.001），脑组织含水量和伊文思蓝渗出率均升高（均 P<0.01）。蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR结果显示，与SAH组相比，OA组HMGB1蛋白和mRNA水平均降低（ P<0.01， P<0.05），SIRT1蛋白表达明显升高（ P<0.001），乙酰化HMGB1蛋白表达降低（ P<0.01）。免疫荧光染色结果显示，OA可抑制HMGB1蛋白由细胞核转移至细胞质。TUNEL染色结果显示，OA能有效减少TUNEL阳性细胞数量；与OA组相比，Sirtinol可明显增加TUNEL阳性细胞数量。 结论:OA可通过SIRT1/HMGB1通路减少HMGB1释放，从而保护SAH后的早期脑损伤。

目的:探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）在内毒素脂多糖（LPS）诱导脓毒症大鼠肠黏膜损伤中的作用及机制。方法:用腹腔注射LPS构建脓毒症大鼠模型；用HMGB1抑制剂EP溶液40 mg/kg干预来观察HMGB1在脓毒症中的作用，同时设磷酸盐缓冲液（PBS）对照组。制模后72 h后取各组大鼠腹主动脉血，用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测黏膜屏障通透性血浆标志物D-乳酸和二胺氧化酶（DAO）水平；光镜下观察小肠组织黏膜病理学改变并进行肠黏膜损伤评分（Chiu评分），透射电镜下观察小肠上皮超微结构改变；用实时定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）和蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）分别检测小肠组织中紧密连接蛋白封闭蛋白（Occludin）、炎性因子HMGB1及其下游信号分子核转录因子-κB p65（NF-κB p65）的mRNA与蛋白表达水平。结果:小肠组织病理学及超微结构观察结果显示，LPS组小肠组织黏膜明显水肿，部分腺体不完整，白细胞浸润增多，微绒毛缺失，排列紊乱，紧密连接数量较PBS对照组明显减少；LPS组黏膜屏障通透性血浆标志物D-乳酸和DAO水平、炎性因子HMGB1及其下游信号分子NF-κB p65的mRNA与蛋白表达水平均较PBS对照组明显升高，小肠组织中Occludin的mRNA和蛋白表达水平较PBS对照组明显降低，提示脓毒症大鼠小肠组织肠黏膜屏障损伤，通透性增加，且结构受损。而给予HMGB1抑制剂EP干预后，LPS诱导的小肠组织肠黏膜屏障损伤得到明显改善，表现为：EP干预组小肠组织Chiu评分及血浆D-乳酸和DAO水平均较LPS组明显降低〔Chiu评分（分）：1.60±0.48比3.40±0.48，D-乳酸（mmol/L）：3.30±0.22比5.30±0.16，DAO（U/L）：23.66±0.97比30.47±1.11，均 P<0.05〕，且小肠组织中Occludin的mRNA和蛋白表达水平较LPS组明显升高〔Occludin mRNA（2 -ΔΔCt）：0.82±0.05比0.37±0.08，Occludin蛋白（Occludin/β-actin）：1.04±0.09比0.75±0.11，均 P<0.05〕，而炎性因子HMGB1及其下游信号分子NF-κB p65的mRNA和蛋白表达水平较LPS组明显降低〔HMGB1 mRNA（2 -ΔΔCt）：1.63±0.10比3.57±0.10，HMGB1蛋白（HMGB1/β-actin）：1.40±0.07比1.87±0.07；NF-κB p65 mRNA（2 -ΔΔCt）：1.47±0.09比2.62±0.13，NF-κB p65蛋白（NF-κB p65/β-actin）：1.24±0.14比1.60±0.13，均 P<0.05〕。 结论:脓毒症大鼠肠黏膜屏障损伤，通透性增加，且结构受损，其机制可能是炎性因子HMGB1表达上调并促进其下游信号分子NF-κB激活，从而介导了炎症级联反应，导致肠黏膜损伤。

目的:探讨核因子E2相关因子2（Nrf2）通过调控血红素加氧酶-1（HO-1）/高迁移率族蛋白B1（HMGB1）通路在氢气（H 2）治疗脓毒症小鼠肠损伤中的保护作用及机制。 方法:选择6～8周龄雄性野生型（WT）和Nrf2基因敲除型（Nrf2-KO）ICR小鼠各140只，体重20～25 g。按随机数字表法分别将WT小鼠及Nrf2-KO小鼠分为假手术组（Sham组）、H 2对照组（Sham+H 2组）、盲肠结扎穿孔术（CLP）致脓毒症模型组（CLP组）及H 2治疗组（CLP+H 2组），每组35只。其中Sham+H 2组及CLP+H 2组分别于术后1 h及6 h各吸入2% H 2 60 min，Sham组和CLP组仅吸入空气。每组取20只小鼠观察术后7 d存活情况；剩余小鼠于术后24 h处死，收集腹腔灌洗液（PLF）测量细菌菌落数从而确定细菌负荷，用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测肠组织中HO-1及HMGB1蛋白表达；用免疫组化法测定肠组织HO-1表达，用免疫荧光法测定肠组织HMGB1表达。 结果:WT脓毒症小鼠及Nrf2-KO脓毒症小鼠7 d存活率均为0；在WT小鼠中，CLP+H 2组术后7 d存活率较CLP组明显升高（45%比0%， P<0.05），而在Nrf2-KO小鼠中，CLP+H 2组术后7 d存活率与CLP组比较差异无统计学意义（0%比0%， P>0.05）。与Sham组比较，WT及Nrf2-KO脓毒症小鼠PLF中细菌菌落数均显著增加。与CLP组相比，2% H 2处理能显著提高WT脓毒症小鼠的细菌清除率〔菌落数（CFU，×10 3）：34.7±6.3比74.2±8.1， P<0.01〕，但对Nrf2-KO脓毒症小鼠无显著影响〔菌落数（CFU，×10 3）：73.3±7.5比75.8±8.6， P>0.05〕。Western blotting、免疫组化或免疫荧光结果显示，与Sham组相比，WT和Nrf2-KO脓毒症小鼠肠组织HO-1及HMGB1表达均明显升高。与CLP组比较，2% H 2处理后WT脓毒症小鼠HO-1表达进一步升高〔HO-1蛋白表达（HO-1/β-actin）：0.716±0.035比0.460±0.045，HO-1阳性表达（积分 A值）：0.703±0.135比0.430±0.116，均 P<0.01〕，HMGB1表达明显降低〔HMGB1蛋白表达（HMGB1/β-actin）：0.052±0.038比0.082±0.008，HMGB1阳性表达（积分 A值）：24.530±9.317比41.830±2.458，均 P<0.01〕；而经2% H 2处理后的Nrf2-KO小鼠HO-1及HMGB1表达无明显变化〔HO-1蛋白表达（HO-1/β-actin）：0.148±0.004比0.164±0.043，HO-1阳性表达（积分 A值）：0.109±0.020比0.113±0.025，HMGB1蛋白表达（HMGB1/β-actin）：0.109±0.020比0.113±0.025，HMGB1阳性表达（积分 A值）：39.570±12.660比42.790±9.680，均 P>0.05〕。 结论:H 2可经Nrf2/HO-1/HMGB1途径抑制脓毒症小鼠肠损伤，Nrf2在H 2治疗脓毒症肠损伤过程中起主要作用。