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AKAP1在高原低压低氧致心肌损伤中的保护作用及机制
编辑人员丨4天前
目的:探讨A型激酶锚定蛋白1(A-kinase anchored protein1,AKAP1)在高原低压低氧环境导致心肌损伤中的保护作用及可能机制。方法:于2021年1月至2022年5月,将SPF级雄性C57BL/6小鼠分为常氧野生对照(wild type,WT)组及高原低压低氧实验(hypobaric hypoxia,HH)组,各6只小鼠;HH组用动物实验低压氧舱模拟6 000 m海拔持续4周构建模型。分离SD大鼠乳鼠原代心肌细胞后分为常氧对照组及低氧实验组( n=3),用三气低氧培养箱以1%氧浓度低氧24 h构建细胞模型。用蛋白质印迹法、免疫组化及实时荧光定量聚合酶链反应检测心肌组织和细胞中AKAP1蛋白及mRNA表达。心肌点注射AKAP1或对照腺病毒后将小鼠分3组( n=6):WT组、高原低压低氧过表达对照组(HH+Ad-Ctrl组)、高原低压低氧过表达实验组(HH+Ad-AKAP1组)。用无创M型超声心动机检测小鼠心脏功能,马松及天狼猩红染色检测心肌纤维化程度,麦胚凝集素检测心肌细胞肥大状况。用siRNA干涉或腺病毒上调原代心肌细胞AKAP1表达后将细胞分3组( n=3):常氧对照组,低氧干涉对照组(低氧+siCtrl组),低氧AKAP1敲低组(低氧+siAKAP1组);常氧对照组,低氧过表达对照组(低氧+Ad-Ctrl组),低氧AKAP1过表达组(低氧+Ad-AKAP1组)。用流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法及实时荧光定量聚合酶链反应检测AKAP1、凋亡相关蛋白及mRNA的表达水平,JC-1染色检测线粒体膜电位,MitoSOX检测线粒体活性氧水平。 结果:HH组小鼠心肌AKAP1表达低于WT组,低氧实验组细胞AKAP1表达低于常氧对照组( P<0.01)。与WT组比较,HH+Ad-Ctrl组小鼠左心室射血分数及左心室短轴缩短率降低( P<0.01),心肌纤维化及肥大程度加重( P<0.01),B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,BCL-2)降低,BCL-2相关X蛋白(BCL-2-associated X protein,BAX)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase 3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase 9)表达升高( P<0.01)。过表达AKAP1后,与HH+Ad-Ctrl组比较,HH+Ad-AKAP1组小鼠左心室射血分数及左心室短轴缩短率升高( P<0.01),心肌纤维化及肥大程度减轻( P<0.01),BCL-2表达升高,BAX、Caspase 3、Caspase 9表达下降( P<0.01)。与常氧对照组比较,低氧+siCtrl组大鼠原代心肌细胞BCL-2表达降低,BAX、Caspase 3、Caspase 9表达升高,凋亡水平增加( P<0.01),线粒体膜电位降低,活性氧生成增加( P<0.01)。敲低AKAP1后,与低氧+siCtrl组比较,低氧+siAKAP1组细胞BCL-2表达降低,BAX、Caspase 3、Caspase 9表达升高,凋亡水平增加( P<0.01),线粒体膜电位降低,活性氧生成增加( P<0.01)。过表达AKAP1后,与低氧+Ad-Ctrl组比较,低氧+Ad-AKAP1组细胞BCL-2表达升高,BAX、Caspase 3、Caspase 9表达降低( P<0.05),凋亡水平降低( P<0.01),线粒体膜电位增强,活性氧水平降低( P<0.01)。 结论:高原低压低氧条件下心肌细胞AKAP1下调,可能导致线粒体膜电位降低、活性氧生成增加,引发心肌细胞凋亡,从而加重高原低压低氧心肌损伤。
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编辑人员丨4天前
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宏基因组二代测序诊断儿童进行性多灶性脑白质病一例
编辑人员丨4天前
宏基因组二代测序从技术上具备同时检测所有病原体的能力,但临床实践数据仍需要进一步积累。本研究报道1例儿童艾滋病合并进行性多灶性脑白质病。患儿6岁,以中枢神经系统症状起病,曾按弓形虫脑病治疗,效果欠佳。入院后脑脊液宏基因组二代测序查见大量JC病毒序列片段,聚合酶链反应检测JC病毒特异性,Sanger测序进一步验证了宏基因组二代测序结果。提示宏基因组二代测序可以用于检测进行性多灶性脑白质病。
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编辑人员丨4天前
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实体器官移植相关进行性多灶性脑白质病诊治进展
编辑人员丨4天前
进行性多灶性脑白质病(progressive multifocal leukoencephalopathy,PML)是一种由JC病毒感染引起的罕见但严重的中枢神经系统疾病,主要发生在包括实体器官移植(solid organ transplant,SOT)受者在内的免疫抑制人群。SOT相关的PML的常见临床症状为认知行为障碍。其病理表现为颅内多灶性脱髓鞘病变,神经影像学常显示为顶枕叶区域的脑白质病变。临床诊断通常需要结合临床表现、颅脑核磁共振以及脑脊液JC病毒的检测。治疗方面,目前缺乏特异性药物,主要依靠支持性治疗和免疫抑制剂减量等免疫调控策略。PML的预后不佳,早期诊断和增强适应性免疫应答是SOT受者PML管理的关键。
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编辑人员丨4天前
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胆道闭锁患儿Kasai手术后频发胆管炎的危险因素及预后分析
编辑人员丨4天前
目的:探讨胆道闭锁(biliary atresia,BA)患儿Kasai手术后频发胆管炎的危险因素及预后。方法:回顾性分析山西省儿童医院2018年1月至2021年9月因BA行Kasai手术后合并胆管炎患儿的临床资料和随访资料,根据患儿6个月内胆管炎发作次数是否≥3次分为频发胆管炎组和偶发胆管炎组,比较两组性别分布、术前身体质量指数(body mass index,BMI)、术前巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)感染、行Kasai手术年龄、肝纤维化分级、术前及术后2周肝功能指标和早期胆管炎发生情况,采用Cox回归分析筛选频发胆管炎的危险因素,并比较两组患儿术后黄疸清除(jaundice clearance,JC)率及自体肝生存率。结果:本研究共纳入60例因BA行Kasai手术后发生胆管炎患儿,其中频发胆管炎组20例,偶发胆管炎组40例,两组患儿性别、术前BMI指数、术前CMV感染、Kasai手术年龄和肝纤维化分级比较差异均无统计学意义( P>0.05)。频发胆管炎组术前总胆汁酸水平显著低于偶发胆管炎组( Z=-2.070, P<0.05)。两组患儿术前丙氨酸转氨酶(alanine transaminase,ALT)[(169.47±93.53)比(173.96±96.25)U/L]、天冬氨酸转氨酶(aspartate trans-aminase,AST)[242.50(169.68,296.13)比244.50(148.50,297.00)U/L]、γ-谷氨酰转肽酶(gamma-glutamyl transferase,GGT)[572.00(310.75,895.75)比388.00(245.50,695.25)U/L]、总胆红素(total bilirubin,TBIL)[(219.61±73.08)比(207.38±58.63)μmol/L]、直接胆红素(direct bilirubin,DBIL)[122.70(104.50,163.25)比116.70(81.42,158.35)μmol/L]和白蛋白(albumin,Alb)[(36.27±2.91)比(37.88±4.90)g/L]水平差异无统计学意义( P>0.05)。两组患儿术后2周ALT[(211.23±144.87)比(229.87±104.76)U/L]、AST[162.50(108.17,225.75)比196.50(160.75,235.43)U/L]、GGT[(742.85±438.09)比(584.05±385.31)U/L]、TBIL[136.20(86.05,190.23)比145.50(95.73,213.90)μmol/L]、DBIL[79.85(60.88,122.83)比90.00(61.30,129.30)μmol/L]和Alb[(37.92±5.55)比(39.22±4.55)g/L]水平差异无统计学意义( P>0.05)。频发胆管炎组早期胆管炎发生率显著高于偶发胆管炎组,差异有统计学意义(χ 2=9.909, P<0.05)。Cox回归分析结果显示,早期胆管炎是BA患儿Kasai手术后频发胆管炎的危险因素( HR=4.947,95% CI:1.754~13.948, P<0.05)。频发胆管炎组术后3个月、6个月JC率低于偶发胆管炎组,但差异无统计学意义( P>0.05),频发胆管炎组术后12个月JC率显著低于偶发胆管炎组,差异有统计学意义(χ 2=5.179, P<0.05)。两组术后1年自肝生存率差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:早期胆管炎是BA Kasai手术后频发胆管炎的独立危险因素,频发胆管炎会影响手术后黄疸清除。
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编辑人员丨4天前
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艾滋病相关进行性多灶性白质脑病1例
编辑人员丨4天前
进行性多灶性白质脑病是一种临床罕见、致命的脑部疾病,是由JC病毒感染所引起的中枢神经系统病变。目前尚无针对该病的特异性抗病毒药物。本文报道1例由JC病毒感染引起的进行性多灶性白质脑病患者,经过帕博利珠单克隆抗体联合抗反转录病毒治疗,取得了良好的效果。
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编辑人员丨4天前
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宏基因二代测序技术检测多瘤病毒在尿路感染中的临床应用
编辑人员丨4天前
目的:探讨宏基因二代测序技术检测尿路感染患者尿液中多瘤病毒的临床价值。方法:2018年9月至2020年4月复旦大学附属中山医院收治的送检尿液宏基因二代测序的尿路感染患者共33例。采用随机扩增法、脱氧核糖核酸纳米球、华大基因公司BGI-500测序平台及BWA算法为基础的比对法等技术对尿液标本的核酸提取物进行二代测序分析,以尿标本中多瘤病毒核酸序列数>100为入选标准,分析检出多瘤病毒的类型、深度、覆盖度、丰度及序列数等参数。采用Taq Man探针实时定量聚合酶链反应(PCR)法验证并检测多瘤病毒DNA载量。结果:30.3%(10/33)的患者尿标本中检出JC多瘤病毒,其中1例合并检出BK多瘤病毒。所有患者在检测前均使用抗菌药物治疗,但仅一例尿培养阳性。JC多瘤病毒检出的深度均值为35.9,覆盖度均值96.8%,相对丰度均值92.6%,唯一比对序列数均值为3 154。实时定量PCR法检测10例患者尿中JC多瘤病毒DNA载量在5.84×10 3~6.55×10 8拷贝/ml,均值为6.82×10 7拷贝/ml,其中9例患者(均为免疫受损者)的病毒载量超过5×10 4拷贝/ml,与宏基因二代测序结果基本相符。每1 M数据中的严格比对序列数(RPM)与CD4 +T细胞计数存在线性负相关( R2=0.84, P=0.004)。其中1例患者经西多福韦治疗后症状及尿检指标好转,随访尿液宏基因二代测序检查JC多瘤病毒的序列数及RPM值明显下降,实时定量PCR法证实尿中病毒DNA载量亦下降。 结论:宏基因二代测序技术在病毒性尿路感染的诊断中有着重要意义。西多福韦可能是治疗多瘤病毒尿路感染的一个选择。
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编辑人员丨4天前
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过表达B细胞淋巴瘤/白血病-2对重度创伤性脑损伤大鼠的治疗作用及其机制
编辑人员丨4天前
目的:观察过表达B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)对重度创伤性脑损伤大鼠神经保护作用。方法:2018年1月至2019年9月,60只SD大鼠采用随机数字法分为对照组、模型组和bcl-2组。对照组和模型组大鼠经脑室注射对照腺相关病毒1×10 11 v.g/只,bcl-2组经脑室注射bcl-2过表达腺相关病毒1×10 11 v.g/只,注射24 d后,模型组和bcl-2组大鼠采用自由落体撞击法建立重度创伤性脑损伤模型,对照组大鼠不处理。建模24 h后,采用神经行为学评分评价大鼠的神经功能;采用原位缺口末端标记法(TUNEL)染色分析脑组织的凋亡水平;采用JQ1法检测脑组织细胞线粒体膜电位;采用蛋白质印迹法(Western blot)分析bcl-2、bcl-2相关X蛋白(bax)和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3蛋白表达水平,计量资料比较采用单因素方差分析。 结果:bcl-2组大鼠神经功能评分(5.72±1.27)低于模型组大鼠神经功能评分(8.59±1.67),差异有统计学意义( t=3.114, P<0.05)。bcl-2组大鼠脑组织细胞线粒体膜电位(1.59±0.13)高于模型组大鼠脑组织细胞线粒体膜电位(1.01±0.10),差异有统计学意义( t=2.011, P<0.05)。bcl-2组大鼠神经细胞凋亡水平[(16.59±3.09)%]显著低于模型组[(39.54±4.09)%],差异有统计学意义( t=3.103, P<0.05)。bcl-2组细胞bcl-2蛋白表达水平(1.79±0.14)高于对照组和模型组(0.96±0.11和1.00±0.12),差异有统计学意义( t=2.019、1.978, P<0.05)。bcl-2组大鼠脑组织Caspase-3和bax蛋白表达水平(1.17±0.09和1.05±0.17)低于模型组(1.32±0.11和1.74±0.12),差异有统计学意义( t=1.280、2.016, P<0.05)。 结论:过表达bcl-2可显著抑制重度创伤性脑损伤大鼠神经细胞凋亡,提高线粒体功能,保护大鼠神经功能。
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编辑人员丨4天前
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脑脊液第二代测序技术诊断10例艾滋病相关进行性多灶性白质脑病的临床分析
编辑人员丨4天前
目的:探讨脑脊液第二代测序技术诊断艾滋病相关进行性多灶性白质脑病(progressive multifocal leukoencephalopathy,PML)患者的临床表现、影像学表现、脑脊液表现、治疗和预后特点。方法:纳入2017年10月至2019年1月上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心收治的10例通过第二代测序技术诊断为艾滋病相关PML的患者,分析其临床资料。采用描述性分析。结果:10例艾滋病相关PML患者中,男8例,女2例;年龄为(38.7±8.2)岁。CD4 +T淋巴细胞计数中位数为46/μL,人类免疫缺陷病毒RNA中位数为5.99×10 4拷贝/mL。10例患者中,4例表现为运动障碍,3例表现为头晕、共济失调,2例表现为认知功能下降,1例表现为言语障碍;3例在整个病程中出现抽搐。影像学表现:任何部位均可出现病变,3例病变位于小脑幕下,7例位于小脑幕上。10例患者中,4例脑脊液蛋白质轻度增高,细胞数为(0~10)×10 6/L,糖、氯化物均正常;脑脊液JC病毒序列数为3~12 531,中位数为67。10例患者均接受抗病毒治疗,方案中均包含整合酶抑制剂;2例患者死亡,其余8例均存活,其中5例症状好转,3例未见好转,2例存活时间超过1年。 结论:艾滋病合并PML较为少见,在临床表现、脑脊液常规检测结果和影像学表现的基础上,应用脑脊液第二代测序技术有助于诊断PML,且强效抗病毒治疗方案能改善患者预后。
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编辑人员丨4天前
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误诊为自身免疫性脑炎的进行性多灶性白质脑病1例
编辑人员丨4天前
进行性多灶性白质脑病(PML)是由JC病毒感染少突胶质出现急性或亚急性中枢神经系统脱髓鞘病变。此病主要发生在免疫缺陷或免疫低下患者中。在自身免疫病中也有报道,其病因主要与治疗或淋巴细胞减少有关。本文报道了1例RA重叠SS患者,经吩替麦考酚酯和利妥昔单抗治疗后,继发罕见的PML病例。并检索归纳相关文献,旨在探讨PML的临床特点、诊断、治疗和预后,为临床工作提供借鉴。
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编辑人员丨4天前
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第三方骨髓来源间充质干细胞治疗异基因造血干细胞移植后难治性迟发性出血性膀胱炎20例临床研究
编辑人员丨4天前
目的:观察第三方骨髓来源间充质干细胞(MSC)治疗异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后难治性迟发性出血性膀胱炎(LOHC)的疗效和安全性。方法:回顾性分析2018年7月至2020年6月allo-HSCT后发生难治性LOHC 20例患者在常规治疗基础上联合第三方骨髓来源MSC治疗。MSC以每次1×10 6/kg、每周1次输注,直至症状改善或连用4次无效停用。在MSC治疗前及治疗后第8周应用定量PCR法检测患者尿液标本中BK病毒(BKV)、JC病毒(JCV)、巨细胞病毒(CMV)。 结果:①20例难治性LOHC患者中,男15例、女5例,中位年龄35(15~56)岁;急性淋巴细胞白血病(ALL)5例,急性髓系白血病(AML)9例,骨髓增生异常综合征(MDS)5例,母细胞性浆细胞样树突细胞瘤(BPDCN)1例;HLA全相合移植4例,HLA不全相合移植16例。②MSC输注中位次数为3(2~8)次。17例患者获得完全缓解,1例获得部分缓解,总缓解率为90.0%。移植后中位随访397.5(39~937)d,13例存活、7例死亡,死亡原因包括急性GVHD 1例、感染5例、血栓性微血管病(TMA)1例。③MSC输注后第8周尿BKV-DNA及CMV-DNA拷贝数较治疗前显著降低(11342.1×10 8拷贝/L对5.2×10 8拷贝/L, P=0.016;3170.0×10 4拷贝/L对0.2×10 4拷贝/L, P=0.006),而JCV-DNA与治疗前相比无明显改变( P=0.106)。④未发生MSC输注相关不良反应。 结论:第三方骨髓来源MSC对allo-HSCT后难治性LOHC具有显著疗效且安全性良好。
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编辑人员丨4天前
