目的:探讨人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞氧糖剥夺/恢复(OGD/R)模型中应激诱导蛋白 Sestrin2基因过表达对线粒体分裂的调控作用及其机制。 方法:(1)将SH-SY5Y细胞分为正常对照组、OGD/R组、 Sestrin2过表达组及空载体组，后2组细胞预先采用慢病毒感染方法分别构建 Sestrin2过表达及空载体稳转细胞株，除正常对照组细胞外均给予氧糖剥夺4 h/恢复18 h造模处理。造模完成后采用细胞计数试剂-8(CCK-8)法检测各组细胞的存活率，采用Western blotting实验检测各组细胞中Sestrin2、线粒体动力相关蛋白1(Drp1)、线粒体分裂蛋白1(Fis1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胞浆Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1(Keap1)、胞核核因子E2相关因子2(Nrf2)的蛋白水平，采用透射电镜观察各组细胞中线粒体的超微结构，采用免疫荧光染色检测各组细胞中Nrf2的核移位情况。(2)将 Sestrin2过表达稳转SH-SY5Y细胞株分为 Sestrin2过表达组、鸦胆子苦醇+ Sestrin2过表达组、二甲基亚砜(DMSO)+ Sestrin2过表达组，后2组细胞在造模前分别给予Keap1/Nrf2通路抑制剂鸦胆子苦醇(终浓度100 nmol/L)或DMSO溶液(终体积分数0.1%)预处理4 h，然后各组细胞均给予氧糖剥夺4 h/恢复18 h造模处理。造模完成后采用Western blotting实验检测各组细胞中胞浆Keap1、胞核Nrf2、Drp1、Fis1的蛋白水平。 结果:(1)与OGD/R组相比， Sestrin2过表达组细胞的存活率明显升高（61.33%±1.15% vs. 81.00%±3.00%)，Bcl-2/Bax值明显升高（0.467±0.006 vs. 0.880±0.010)，Drp1、Fis1、胞浆Keap1蛋白水平明显降低（1.089±0.033 vs. 0.865±0.014；0.829±0.009 vs. 0.350±0.007；0.967±0.017 vs. 0.881±0.024)，胞核Nrf2蛋白水平明显升高(0.627±0.025 vs. 0.957±0.015)，差异均有统计学意义( P<0.05)；并且， Sestrin2过表达组细胞的线粒体结构明显较OGD/R组更完整，Nrf2发生了明显的核移位。(2)与 Sestrin2过表达组相比，鸦胆子苦醇+ Sestrin2过表达组细胞胞核Nrf2的蛋白水平明显降低(0.920±0.013 vs. 0.627±0.035)，Drp1、Fis1的蛋白水平明显升高（0.994±0.020 vs. 1.084±0.005；0.728±0.010 vs. 0.906±0.022)，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:Sestrin2基因过表达可下调胞浆Keap1蛋白水平、促进Nrf2核移位而激活Keap1/Nrf2通路，从而抑制线粒体分裂，减少细胞凋亡，减轻SH-SY5Y细胞的OGD/R损伤。

目的 分析急性白血病(AL)合并血流感染病原菌分布、耐药性及患者Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、核因子E2-相关因子2(Nrf2)、细胞程序性死亡受体-1(PD-1)、细胞程序性死亡配体-1(PD-L1)信使核糖核酸(mRNA)对其预后的诊断价值.方法 选取2019年1月—2023年7月山东大学齐鲁医院收治的198例AL合并血流感染患者为研究对象,统计其感染病原菌分布情况及主要感染病原菌耐药性,根据患者治疗30 d后预后情况将其分为死亡组(29例)和生存组(169例),统计两组临床特征及Keap1、Nrf2、PD-1、PD-L1 mRNA水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析Keap1、Nrf2、PD-1、PD-L1 mRNA对AL合并血流感染患者预后的诊断价值.结果 AL合并血流感染患者检出革兰阴性菌占比56.59％,革兰阳性菌占比39.51％,真菌占比3.90％;大肠埃希菌对美罗培南、亚胺培南、阿米卡星、头孢他啶的耐药性均较低;表皮葡萄球菌对左氧氟沙星的耐药率为14.29％,对红霉素的耐药率为17.86％;肺炎链球菌对红霉素的耐药率为55.00％;死亡组单个淋巴核细胞Keap1、Nrf2、PD-L1 mRNA水平低于生存组(P＜0.05),单个淋巴核细胞PD-1 mRNA水平高于生存组(P＜0.05);Keap1、Nrf2、PD-1、PD-L1 mRNA联合预测AL合并血流感染患者预后的曲线下面积(AUC)值及敏感度均高于四者单独检测(P＜0.05).结论 AL患者革兰阴性菌血流感染的首选药物为美罗培南、亚胺培南、阿米卡星,革兰阳性菌感染则可优先采用环丙沙星、万古霉素、苯唑西林、庆大霉素、头孢唑林,Keap1、Nrf2、PD-1、PD-L1 mRNA联合检测可有效提高对AL合并血流感染患者预后的诊断价值.

目的 探究丹参多酚酸联合双联抗血小板治疗非心源性急性非大面积脑梗死的临床效果及安全性.方法 选取2022 年2 月—2023 年3 月收治的60 例非心源性急性非大面积脑梗死,随机数字表法分为 2 组,每组 30例.对照组采取双联抗血小板治疗,观察组采取注射用丹参多酚酸盐联合双联抗血小板治疗.观察2 组临床疗效、不良反应,以及治疗前后纤维蛋白原(FIB)、凝血酶原时间(PT)、同型半胱氨酸(Hcy)、可溶性凋亡相关因子配体(sFasL)、抗凋亡因子(Livin)、可溶性凋亡相关因子(sFas)、脑血流灌注情况、Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1(Keap1)-核因子-E2 相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应原件(ARE)信号通路[Keap1、Nrf2、醌氧化还原酶(NQO1)、ARE)]蛋白表达、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)、改良Rankin量表(mRS)评分.结果 观察组总有效率93.33%(28/30)高于对照组 73.33%(22/30)(P＜0.05).治疗 1、2 周后,观察组 FIB、Hcy、sFas、sFasL 以及 Keap1 蛋白表达低于对照组,PT长于对照组,Nrf2、NQO1、ARE蛋白表达以及Livin水平高于对照组,大脑前动脉、中动脉、后动脉血流速度较对照组快(P＜0.05).2 组不良反应发生总发生率比较,无显著差异(P＞0.05).治疗 2 周后及治疗后 3 个月,观察组mRS、NIHSS评分低于对照组(P＜0.05).结论 丹参多酚酸联合双联抗血小板治疗非心源性急性非大面积脑梗死效果确切,可通过调控凝血功能、脑微循环、Keap1-Nrf2/ARE信号通路而改善神经功能和预后,且具备一定安全性.

目的:观察小柴胡颗粒对硫代乙酰胺(TAA)致大鼠急性肝损伤(ALI)的治疗作用,探讨核转录因子(NF)-E2相关因子2(Nrf2)抗氧化损伤通路在其中的作用.方法:SD大鼠随机分为空白组,模型组,小柴胡颗粒低、中、高剂量组(1,2,4 g·kg-1),大鼠给予250 mg·kg-1 TAA腹腔注射2d制备肝损伤模型,从第3天各组分别给予等量双蒸水和不同剂量小柴胡颗粒,灌胃2周.末次给药后24 h取材,肝组织行苏木素-伊红(HE)染色;比色法测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性及组织中总超氧化物歧化酶(T-SOD),丙二醛(MDA)水平;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Nrf2通路相关mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Nrf2通路相关蛋白的表达.结果:与空白组比较,模型组ALT,AST,MDA水平显著增高,T-SOD活性明显降低(P ＜0.05,P＜0.01),病理学呈现大片炎性浸润表现,肝脏组织Nrf2,Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kee1),醌氧化还原酶1(NQO1),血红素加氧酶-1(HO-1),谷氨酸半胱氨酸合成酶催化亚基(GCLC),谷氨酸半胱氨酸合成酶调节亚基(GCLM)mRNA及蛋白表达水平均明显下降(P ＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,小柴胡颗粒各剂量组ALT,AST,MDA水平均明显降低,T-SOD活性明显升高(P ＜0.05,P＜0.01),病理结果示大鼠肝脏病变范围与严重程度均有不同程度改善,肝脏组织Nrf2,Keap1,NQO1,HO-1,GCLC,GCLM的mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P＜0.05,P＜0.01).结论:小柴胡颗粒可能通过上调Nrf2信号通路上下游分子的表达,对TAA致急性肝损伤大鼠起到治疗作用.

目的:探究百合固金汤对脂多糖诱导的急性肺损伤(LPS-ALI)小鼠的预防作用及其机制.方法:将KM小鼠随机分为5组:空白组,模型组,地塞米松组(0.002 g·kg-1),百合固金汤组(0.417,1.25 g·kg-1).除空白组外,其余各组采用LPS诱导小鼠ALI模型.给药组分别在造模前的第1～7天连续灌胃给药7d.在造模后6h取小鼠肺组织,测定左肺湿/干质量比(W/D);收集小鼠血清检测超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),活性氧(ROS),一氧化氮(NO)的水平;应用苏木素-伊红(HE)染色方法观察肺组织病理改变;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织中核转录因子E2相关因子2(Nrf2),Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1(Keap1),p62以及自噬相关蛋白(LC3)Ⅱ蛋白的表达水平.结果:与空白组比较,模型组小鼠W/D显著升高(P＜0.01),血清中MDA水平显著性升高(P＜0.01),SOD显著降低(P＜0.01),肺组织病变严重,并显著降低肺组织Nrf2,Keap1,升高p62,LC3Ⅱ的蛋白表达(P＜0.01).与模型组比较,地塞米松组、百合固金汤1.25 g·kg-1组W/D显著降低(P＜0.01);百合固金汤1.25 g·kg-1组及地塞米松组,能够明显抑制血清中MDA的水平(P ＜0.05,P＜0.01),升高SOD(P ＜0.05,P＜0.01)水平,地塞米松组及百合固金汤各剂量组对小鼠肺组织病变较模型组有不同程度的改善,且显著性升高肺组织Nrf2,Keap1,降低p62及LC3Ⅱ的蛋白表达(P ＜0.05,P＜0.01),但百合固金汤各剂量组对LC3Ⅱ无影响.结论:百合固金汤对LPS-ALI小鼠具有明显的预防作用,其机制可能与调控Nrf2/Keap1/自噬反馈回路有关.

近年来,核因子E2相关因子2(Nrf2)/Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1/抗氧化应答元件信号通路和细胞自噬之间的相互作用机制成为国内外的研究热点之一.泛素结合蛋白p62介导的自噬诱导对Nrf2活化、消除线粒体功能障碍和氧化应激至关重要.椎间盘退变是各种脊柱退行性疾病的病理基础,在退变的椎间盘中可以观察到不同水平的髓核细胞自噬.炎症、营养缺乏、低氧、压力和高糖等因素均能诱导髓核细胞自噬,但自噬在椎间盘退变中的确切作用尚存在争议.

目的:研究长期灌胃天麻粉是否可以改善APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(AD)模型小鼠学习记忆能力以及延缓AD进程,这些作用是否与调控Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1(Keap1)-核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)抗氧化应激通路有关,进一步探讨天麻粉的神经保护作用机制以及对AD预防和治疗的作用.方法:APP/PS1双转基因小鼠模型,将实验小鼠分为5组,正常组,正常给药组,模型组,天麻粉预防组,天麻粉治疗组.正常给药组,天麻粉预防组在小鼠8周龄时每日灌胃同等剂量的天麻粉(1.5 g·kg-1);正常组、模型组同时期给予等量的生理盐水,直至24周龄时行Morris水迷宫检测小鼠学习和记忆能力,天麻粉治疗组待小鼠22周龄时,连续2周每天灌胃同等剂量天麻粉(1.5 g·kg-1),灌胃至24周龄时行Morris水迷宫检测小鼠穿越平台次数、逃避潜伏期及平台停留时间;提取小鼠海马组织RNA,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Nrf2,HO-1,Keap1的mRNA水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠海马组织中Nrf2,HO-1,Keap1蛋白的表达水平.结果:与正常组比较,水迷宫检测结果显示,模型组小鼠的学习记忆能力显著降低(P＜0.01);与模型组比较,天麻粉预防组、天麻粉治疗组小鼠学习记忆能力显著提高(P＜0.01);与正常组比较,模型组小鼠海马组织中Nrf2,HO-1的mRNA及蛋白水平均有不同程度的降低(P ＜0.05,P＜0.01),与模型组比较,天麻粉预防组小鼠海马组织中Nrf2,HO-1的mRNA及蛋白水平均有不同程度的增高(P ＜0.05,P＜0.01),天麻粉治疗组Nrf2,HO-1 mRNA水平显著增高(P＜0.01),Nrf2,HO-1蛋白表达水平变化差异无统计学意义,各组间Keap1的mRNA及蛋白水平变化无统计学差异.结论:Morris水迷宫及其他结果显示天麻粉能够改善APP/PS1小鼠的学习和记忆能力,且其可能通过调控Keap1-Nrf2/HO-1通路,增强下游抗氧化基因的表达发挥抗氧化功能,进而改善APP/PS1小鼠的学习记忆能力.

目的:探讨刺五加苷B (ELB)对疲劳小鼠学习记忆能力的影响,阐明其可能的作用机制.方法:60只ICR小鼠随机分为对照组(灌胃给予蒸馏水,静坐实验)、模型组(灌胃给予蒸馏水,游泳实验)、ELB (C)组(灌胃给予80mg· kg-1 ELB,静坐实验)及ELB (M)组(灌胃给予80 mg·kg-1 ELB,游泳实验),每组15只.持续给药4周后采用转棒实验观察小鼠的抗疲劳能力,采用M orris水迷宫实验和避暗实验检测疲劳小鼠的学习记忆能力,采用比色法检测小鼠血清中乳酸(LD)水平,微量酶标法检测小鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH)活性,脲酶法检测小鼠血清中尿素氮(BUN)水平,羟胺法检测小鼠脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法(TBA)检测小鼠脑组织中丙二醛(MDA)水平,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠脑组织中活性氧簇(ROS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、γ氨基丁酸(GABA)和谷氨酸(GLU)水平,分光光度法检测小鼠脑组织中三磷酸腺苷酶(ATPase,包括Na+ K+-ATPase、Mg2+-ATPase、Ca2+-ATPase和Ca2+ Mg2+-ATPase)活性,Western blotting法检测小鼠脑组织中Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1 (Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶1(HO-1)蛋白表达水平,HE染色法观察小鼠脑组织海马区神经元结构.结果:与对照组比较,模型组小鼠转棒时间明显缩短(P＜0.05),水迷宫潜伏期明显延长(P＜0.05),避暗潜伏期缩短(P＜0.05),错误次数增加(P＜0.05),血清中LDH活性和LD、BUN水平升高(P＜0.05),脑组织中eNOS水平和SOD、Na+ K+-ATPase、Mg2+-ATPase、Ca2+-AT Pase、Ca2+ Mg2+-ATPase活性及GLU/GABA比值降低(P＜0.05),MDA和ROS水平升高(P＜0.05),脑组织中Keap1蛋白表达水平升高(P＜0.05),N rf2和HO-1蛋白表达水平降低(P＜0.05);ELB (C)组小鼠转棒时间延长(P＜0.05),但其余各检测指标差异均无统计学意义(P＞0.05).与模型组比较,ELB (M)组小鼠转棒时间延长(P＜0.05),水迷宫潜伏期缩短(P＜0.05),避暗潜伏期延长(P＜0.05),错误次数减少(P＜0.05),血清中LDH活性和LD、BUN水平降低(P＜0.05),脑组织中eNOS水平和SOD、Na+ K+-ATPase、Mg2+-AT Pase、Ca2+-ATPase、Ca2+Mg2+-AT Pase活性及GLU/GABA比值升高(P＜0.05),MDA和ROS水平降低(P＜0.05),脑组织中Keap1蛋白表达水平降低(P＜0.05),Nrf2和HO-1蛋白表达水平升高(P＜0.05).与对照组比较,模型组小鼠海马区神经元排列松散,层次不清,部分海马区神经元形态有明显的病理学改变;与模型组比较,ELB (C)和ELB (M)组小鼠脑组织海马区结构层次清晰,神经元增多,排列较为紧密有序,海马区神经元形态和体积趋于正常.结论:ELB能够改善疲劳小鼠的学习记忆能力,其机制可能与调节Keap1/N rf2/ARE信号通路的相关因子表达有关.

目的 大量研究表明核因子E2相关因子2(Nrf2)和Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1(Keap1)与肿瘤发生发展相关.本研究旨在检测食管鳞状细胞癌中Nrf2、Keap1蛋白的表达及其与临床病理参数之间的关系,探讨其在食管癌发生、发展中的意义.方法 选择2010年7月-2016年11月期间在新疆医科大学第一附属医院经手术治疗的食管癌患者174例,取食管癌组织标本及癌旁组织,使用免疫组织化学法,分别检测其中Nrf2及Keap1蛋白的表达水平并进行统计学分析,所有数据采用SPSS 17.0统计软件进行分析.结果 ①Nrf2在食管鳞状细胞癌的表达水平显著高于癌旁正常组织(x2 =21.259,P＜0.001),Keap1在食管鳞状细胞癌的表达水平显著低于癌旁正常组织(x2 =34.863,P ＜0.001).②新疆不同民族之间Nrf2、Keap1的表达差异有统计学意义(Nrf2:x2=12.674,P=0.020;Keap1:x2=11.237,P=0.004).③Nrf2的阳性表达与肿瘤淋巴结转移相关(x2=5.040,P=0.036),与食管癌组织分化程度也相关(x2=10.187,P=0.020).Keap1阳性表达与肿瘤淋巴结转移相关(x2=6.916,P=0.010)和食管癌组织分化程度相关(x2=15.432,P＜0.001).④食管鳞状细胞癌中Nrf2和Keap1的表达具有相关性(相关系数r =0.219,P=0.031).结论 食管鳞状细胞癌的发生、发展和转移是多因素共同作用的结果,Nrf2、keap1蛋白参与食管鳞状细胞癌发生、发展过程,对临床进一步研究食管癌的预防和临床治疗及判断预后提供一定的新思路.

目的:探究高良姜素(galangin)对压力负荷诱导的心脏纤维化的影响.方法:32只C57小鼠随机分成4组:假手术组、高良姜素组、主动脉缩窄组、主动脉缩窄+高良姜素组.主动脉缩窄术(AB)后4周,分别记录心重、体质量和血流动力学变化;天狼猩红染色(PSR)评价心脏纤维化程度;实时荧光定量PCR(qPCR)检测纤维化标志物的mRNA水平;Western Blot检测相关信号通路的变化;试剂盒检测心脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和过氧化氢酶(CAT)活性.结果:AB后4周,高良姜素明显减轻压力负荷诱导的心肌肥厚(P＜0.05)、血流动力学紊乱(P＜0.05)和纤维化程度(P＜0.05).主动脉缩窄+高良姜素组的胶原Ⅰ、胶原Ⅲ、结缔组织生长因子(CTGF)和转化生长因子β(TGFβ1) mRNA明显低于主动脉缩窄组(P＜0.05).主动脉缩窄+高良姜素组核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)、Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1(Keap1)、SOD和CAT活性明显高于主动脉缩窄组(P＜0.05).结论:高良姜素能明显减轻压力负荷诱导的心脏纤维化,其机制可能与氧化应激有关.