目的:探讨一氧化氮（NO）在外源性硫化氢（H 2S）抑制大鼠结肠动力中的作用。 方法:免疫组化检测H 2S合成酶胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）和胱硫醚-β-合成酶（CBS）在成年Wistar大鼠近端结肠的分布；制备近端结肠纵行肌（LM）和环形肌条（CM），通过恒温浴槽实验观察NO相关工具药干预后外源性H 2S供体硫氢化钠（NaHS）对LM和CM收缩活动的影响；通过膜片钳实验检测不同浓度NaHS对平滑肌细胞L型钙通道电流（I Ca，L）的影响。 结果:H 2S合成酶CBS和CSE在近端结肠肌间神经丛、黏膜层及环纵平滑肌细胞均表达。河豚毒素孵育肌条后NaHS以浓度依赖的方式抑制LM和CM自发性收缩活动，LM最大抑制的半数有效浓度（IC 50）为917.6 μmol/L（95% CI：776.3~1 085 μmol/L， n=6），CM的IC 50为730.4 μmol/L（95% CI：592.2~900.8 μmol/L， n=6）。NO供体硝普钠（SNP）预处理肌条后加入NaHS（3×10 -4~6×10 -4mol/L），LM及CM收缩幅度呈现双向变化，其中低浓度NaHS使LM收缩幅度从（0.679±0.181）g增加至（0.840±0.400）g（ n=8， P<0.01），使CM收缩幅度从（0.378±0.140）g增加至（1.176.±0.056）g（ n=8， P<0.01）。sGC抑制剂可溶性鸟苷酸环化酶抑制剂（sGC）ODQ孵育组NaHS的IC 50高于对照组（ P<0.05），而NO合成酶抑制剂L-NNA、NO前体L-精氨酸、环磷酸鸟苷（cGMP）竞争性拮抗剂PET-cGMP预处理肌条前后NaHS的IC 50差异无统计学意义（ P>0.05）。NaHS（100 μmol/L）使L型钙通道峰电流密度增加[（-4.29±0.29）比（-3.77±0.27）pA/pF， P<0.01]；而NaHS（300 μmol/L）使峰电流降低至（-2.96±0.34）pA/pF（ P<0.05），并使电流-电压曲线右移。 结论:外源性H 2S对大鼠结肠动力可能具有双重调节作用，其中对结肠平滑肌的抑制作用不依赖NO；L型钙通道在H 2S对结肠动力的双重调节作用中发挥重要作用。

第一时相胰岛素分泌下降或缺失是2型糖尿病β细胞功能障碍的病理生理学特点，基因变异及表观遗传学改变影响第一时相胰岛素分泌。β细胞膜上ATP敏感钾通道(K ATP+)、L型钙通道及胰岛素胞吐基因变异降低第一时相胰岛素分泌。K ATP+通道调节蛋白基因变异一方面通过降低K ATP+亚基磺酰脲类受体1(SUR1)或内向整流钾通道(Kir6.2)水平，另一方面使K ATP+关闭障碍降低第一时相胰岛素分泌；β细胞膜L型钙通道调节蛋白基因变异通过降低L型钙通道活性或数量使第一时相胰岛素分泌下降；胞吐相关基因突变通过降低质膜停靠的胰岛素颗粒数量，减少囊泡融合及释放，进而降低第一时相胰岛素分泌。此外，DNA甲基化改变、组蛋白乙酰化修饰及miRNA表达异常等表观遗传学改变通过影响胰岛素胞吐蛋白表达减少第一时相胰岛素分泌。

目的:探讨大果木姜子油通过调控miR-328基因抗心律失常H9c2细胞的可能机制.方法:慢病毒转染构建miR-328过表达H9c2细胞株,再运用生物机能实验系统构建H9c2细胞和miR-328过表达H9c2细胞心律失常模型.将H9c2细胞分为正常对照组、模型组、大果木姜子油组、miR-328过表达组和miR-328过表达+大果木姜子油组.根据分组条件培养结束后,qPCR检测H9c2细胞中miR-328相对表达量;ELISA检测炎性因子IL-1β、IL-6、TGF-β含量;比色法检测SOD活性和MDA浓度;DCFH荧光探针检测ROS水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western Blot检测H9c2细胞L型钙通道相关蛋白表达.结果:成功构建H9c2细胞和miR-328过表达H9c2细胞心律失常模型.与正常对照组比较,模型组和miR-328过表达组细胞TGF-β、SOD活性及CaM、CaMK Ⅱ、p-CaMK Ⅱ蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、miR-328及CaV1.2蛋白表达和IL-1β、IL-6、MDA、ROS水平显著升高(P＜0.01).经大果木姜子油干预后,心律失常模型细胞形态改善,上述指标均被显著逆转(P＜0.01).结论:大果木姜子油可改善心律失常H9c2细胞,其作用机制可能与调控miR-328基因降低炎症因子水平、调节氧化应激、抑制细胞凋亡及调节L型钙通道相关蛋白表达有关.

目的 探讨微小RNA-409-3p(miR-409-3p)对人视网膜血管内皮细胞(HRCEC)氧化应激、凋亡、炎症的影响及作用机制.方法 将对数期的HRCEC细胞分为对照组、高渗葡萄糖(HG)组、HG+miR-con组、HG+miR-409-3p 组、HG+si-con 组、HG+si-CACNB2 组、HG+miR-409-3p+pcDNA 和 HG+miR-409-3p+pcDNA-CACNB2 组.采用荧光定量 PCR(qPCR)法检测 miR-409-3p 的相对表达量,Western blotting(WB)法检测L-型电压依赖型钙通道β(CACNB2)、裂解的半胱天冬酶-3(Cleaved caspase-3)蛋白表达量,流式细胞术(F C M)检测细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(E LIS A)检测炎症因子水平,酶标仪及试剂盒检测氧化应激相关指标,双荧光素酶检测(LRA)验证miR-409-3p与CACNB2调控关系.结果 HG组miR-409-3p相对表达量低于对照组,CACNB2 mRNA和蛋白表达量高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).miR-409-3p可靶向结合CACNB2,在HRCEC细胞中负向调控CACNB2的表达.与HG+miR-con组相比,HG+miR-409-3p组的乳酸脱氢酶(LDH)及谷胱甘肽(GSH)水平升高(P＜0.01),CACNB2蛋白表达量、活性氧(ROS)及丙二醛(MDA)水平降低(P＜0.01);与 HG+miR-con 组相比,HG+miR-409-3p 组 Cleaved caspase-3、Bax 蛋白表达量,细胞凋亡率,白细胞介素(IL)-6、IL-18及IL-1β水平均降低,同时,细胞间黏附分子(ICAM)蛋白表达量降低,差异有统计学意义(P＜0.01).敲减CACNB2具有相似的作用,过表达CACNB2可逆转miR-409-3p过表达对HRCEC细胞氧化应激、细胞凋亡、炎症反应的影响.结论 miR-409-3p抑制HRCEC细胞的氧化应激、凋亡、炎症与下调CACNB2表达有关.

目的 探讨姜黄素(Cur)调节N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)/钙离子(Ca2+)/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)信号通路对异氟醚(ISO)诱导的幼龄小鼠术后认知功能障碍(POCD)的影响.方法 将72只C57BL/6J小鼠分为对照组、ISO组、低剂量Cur组(Cur-L组,50 mg/kg)、中剂量Cur组(Cur-M组,100 mg/kg)、高剂量Cur组(Cur-H组,200 mg/kg)、Cur-H+NMDA(NMDAR激活剂)组(200 mg/kg+8 mg/kg),每组12只.经对应给药处理30 min后,对照组小鼠吸入含30%氧气和空气的混合气体2h,其余各组小鼠吸入2%ISO 2 h,每天1次,持续14 d.末次给药24h后,Morris水迷宫实验检测小鼠学习与空间记忆能力;HE染色检测海马CA1区病理学变化;免疫荧光染色检测小鼠海马CA1区神经元特异核蛋白(NeuN)阳性表达;TUNEL染色检测神经细胞凋亡;酶联免疫吸附试验检测海马CA1区组织中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;蛋白印迹法检测海马CA1区组织中NMDAR1和CaMKⅡ蛋白表达;荧光探针检测海马CA1区Ca2+浓度.结果 与对照组比较,ISO组小鼠海马CA1区病理损伤严重,逃避潜伏期延长,神经细胞凋亡率升高,海马CA1区组织中IL-1β和TNF-α水平升高,NMDAR1和CaMKⅡ蛋白表达及Ca2+浓度升高(P＜0.05),穿越平台次数和NeuN阳性细胞数减少(P＜0.05);与ISO组比较,Cur-L组、Cur-M组、Cur-H组小鼠海马CA1区病理损伤减轻,逃避潜伏期缩短,神经细胞凋亡率降低,海马CA1区组织中IL-1β和TNF-α水平降低,NMDAR1和CaMKⅡ蛋白表达及Ca2+浓度降低(P＜0.05),穿越平台次数和NeuN阳性细胞数增加(P＜0.05),且呈剂量依赖性;NMDA减弱了高剂量Cur对ISO诱导的小鼠POCD的改善作用(P＜0.05).结论 Cur可能通过抑制NMDAR/Ca2+/CaMKⅡ信号通路改善ISO诱导的小鼠POCD.

目的 探讨不同浓度镁离子对高磷诱导的大鼠胸主动脉血管环钙化的影响.方法 体外分离大鼠胸主动脉血管环,将其随机分为正常对照组(含10％胎牛血清DMEM培养基)、高磷组(含10 mmol/L β-甘油磷酸高磷培养基)和镁干预组(高磷培养基加不同浓度硫酸镁,使镁离子终浓度分别为l、2、3 mmol/L,镁干预组Ⅰ～Ⅲ).给予14天干预后,采用yon Kossa染色及邻甲酚酞络合酮比色法检测胸主动脉血管环钙化情况;免疫组织化学方法检测胸主动脉血管环L型钙通道α1c(LTCC α1c)、LTCC β3亚基、Runt相关转录因子2(Runx2)和平滑肌22α(SM22α)表达情况.结果 与正常对照组比较,高磷组钙沉积增加,镁干预组随镁离子浓度增大棕黑色颗粒沉积逐渐减少,钙含量测定结果与之相一致(P＜0.05).Runx2、LTCCα1、LTCCβ3亚基的表达除镁干预组Ⅲ与正常对照组差异无统计学意义外,其余各组均高于正常对照组(P＜0.05);镁干预组随镁离子浓度增大,Runx2、LTCCα1.LTCCβ3亚基的表达水平均逐渐降低,且均低于高磷组(P＜0.05).SM22α表达除镁干预组Ⅲ与正常对照组差异无统计学意义外,其余各组均低于正常对照组(P＜0.05).相关性分析显示,LTCC β、LTCCα1c亚基均与Runx2表达呈正相关(r=0.692,P＜0.001;r=0.716,P＜0.001),Run2与SM22α表达呈负相关(r=-0.671,P=0.001).结论 镁离子在一定程度上可以抑制高磷诱导的大鼠胸主动脉血管环钙化,其可能通过下调LTCCα1c、LTCCβ3亚基表达,抑制VSMCs向成骨/成软骨表型转化,进而抑制血管环钙化的发生.

目的:观察甲基苯丙胺(methamphetamine,Meth)暴露后神经病理性蛋白β-淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)及p-tau表达的改变.方法:将30只C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组、生理盐水组,Meth组,Meth组腹腔注射给予10 mg/kg的剂量,1d2次,连续7d.利用高尔基银染法观察Meth作用后大脑神经元数量及棘突的改变;采用Western blot法检测Meth暴露后神经病理性蛋白APP,p-tau表达的改变.结果:高尔基银染结果显示,Meth组与生理盐水组及对照组比较,神经元数量及棘突显著减少.通过Western blot发现Meth能剂量依赖及时间依赖性上调病理性蛋白β-APP及p-tau的表达,具有显著性差异(P＜0.05).此外,通过预孵L型钙通道的抑制剂硝苯地平,发现Meth引起的APP及p-tau上调显著被抑制.结论:Meth暴露可引起阿尔兹海默样病变,因而该研究可为Meth引起认知能力下降提供部分解释.

目的:通过自发性2型糖尿病大鼠观察糖尿病状态下大鼠的心脏结构和功能变化,同时探讨糖尿病心肌病的发病机制.方法:用Zucker糖尿病肥胖(Zucker diabetic fatty,ZDF)大鼠建立糖尿病模型,Zucker lean (ZL)大鼠为对照组.利用超声多普勒法检测ZDF大鼠心脏结构和功能的改变;麦胚凝集素染色计算单个心脏细胞面积;Western blot检测心肌细胞肥大标志物 β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)和心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP),以及晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)、L型钙通道蛋白α1C亚基(L-type calcium channel α1C subunit,CaV1.2)和钙库操纵性钙通道相关功能蛋白Orai1的表达水平.结果:与ZL大鼠相比,ZDF大鼠的血糖和体重明显增加,左心室壁增厚,心脏舒张功能明显减弱,收缩功能轻度增强;ZDF大鼠左室心肌细胞表面积明显增大,心肌细胞肥大相关蛋白β-MHC和ANP的表达水平也明显增加;ZDF大鼠心肌组织中的RAGE和Orai1蛋白表达增高,CaV1.2蛋白表达下降(P<0.05).结论:2型糖尿病大鼠心肌细胞肥大,心室肥厚,心功能代偿性增强,其机制可能与RAGE表达增强和钙调控异常有关.

目的:探讨5-羟色胺(5-HT)诱导冠状动脉收缩的机制.方法:取雄性Wistar成年大鼠,制备离体冠状动脉环,经血管张力测定仪测定动脉环的张力变化,并探讨给予不同信号通路抑制剂对5-HT诱导的冠状动脉收缩的影响.结果:首先发现给予5-HT2A受体阻断剂沙格雷酯(sarpogrelate,1 μmol/L)可完全消除5-HT引起的冠状动脉浓度依赖性收缩;磷脂酶Cβ(PLCβ)抑制剂U73122(10 μmol/L和50 μmol/L)、Rho相关蛋白激酶抑制剂Y-27632(3 μmol/L和10 μmol/L)和蛋白激酶C δ亚基(PKCδ)抑制剂rottlerin(3 μmol/L和10 μmol/L)孵育后,均可明显抑制5-HT引起的冠状动脉环收缩(P<0.05);此外,L-型钙通道(Cav1.2)阻断剂硝苯地平(1 μmol/L)及细胞内钙池操纵性钙内流(SOCE)抑制剂SKF96365(10 μmol/L和30 μmol/L)和2-氨基乙氧基苯硼酸(2-APB, 50 μmol/L和100 μmol/L)孵育后,5-HT诱导的血管收缩张力较未处理组明显下降(P<0.05);另外,在含硝苯地平(1 μmol/L)的无钙Kerbs-Henseleit(K-H)液中,发现5-HT仍可诱导血管收缩.结论:5-HT通过激活5-HT2A受体诱导冠状动脉收缩,其机制可能与PKC和Rho激酶信号通路,以及钙调控有关.

目的:观察钙池操纵性钙通道抑制剂SKF96365 对小鼠慢性哮喘模型气道重塑和气道高反应性的影响.方法:用鸡卵清白蛋白(OVA)致敏和激发小鼠,建立慢性哮喘模型,33只雌性BALB/c小鼠随机分为3组:对照组、哮喘组、SKF96365组,每组11只,其中SKF96365组于每次激发前30 min给予SKF96365(10mg/kg)干预.哮喘组和SKF96365组于第0、7、14 d腹腔注射(i.p)200μL致敏液(含OVA粉剂20 μg、氢氧化铝凝胶2 mg);自第21天起,腹腔注射1％戊巴比妥钠(70mg戊巴比妥钠/kg小鼠体重)麻醉小鼠后,OVA(40 μg)滴鼻(i.n),连续6周,每周3次,共18次.对照组则在相同时间给予相应剂量的生理盐水腹腔注射和滴鼻.最后一次激发后24 h,各组分别随机取5只小鼠用于检测组织病理学变化,另6只小鼠采用Buxco小动物肺功能仪检测气道高反应性.其中组织病理学检测计算杯状细胞(过碘酸希夫染色阳性,PAS+)、胶原细胞(Masson阳性)和平滑肌细胞(α-SMA阳性)阳染面积/支气管基底膜周长值来评估小鼠气道重塑;观察给予不同浓度乙酰甲胆碱雾化时的气道阻力(resistance index,RI)最大值,评估小鼠气道高反应性.结果:对照组未见PAS阳性染色区域,哮喘组和SKF96365组杯状细胞增生高于对照组(7.29 ±2.04,4.49 ±1.70 vs 0.00 ±0.00,均P＜0.01),且SKF96365组低于哮喘组(P＜0.05).Masson染色显示哮喘组和SKF96365组上皮下胶原沉积高于对照组(9.23 ± 1.41,7.30 ± 1.33 vs 1.60 ± 0.77,均P＜0.01),且SKF96365组低于哮喘组(P＜0.05).α-SMA免疫组化显示哮喘组和SKF96365组平滑肌增生肥大高于对照组(4.54 ± 1.05,3.15 ±0.57 vs 1.97 ±0.69,均P＜0.05),且SKF96365组低于哮喘组(P＜0.05).当乙酰甲胆碱(Mch)＜6.25 mg/mL时,3组小鼠气道阻力无显著差异(P＞0.05),当25 mg/mL＞Mch≥12.25 mg/mL时,哮喘组小鼠气道阻力明显大于对照组小鼠(P＜0.001),当 Mch≥25 mg/mL时,哮喘组小鼠气道阻力大于 SKF96365 组(P＜0.05).结论:采用SKF96365干预后,慢性哮喘小鼠气道重塑和气道高反应性指标均有改善,提示SKF96365可能对哮喘气道重塑和气道高反应性具有抑制作用.