目的:对利用生物信息学方法筛选的肾上腺皮质癌（ACC）肿瘤微环境（TME）相关基因构建的预后模型进行验证，为ACC的诊疗提供临床指导和相关生物标志物。方法:从癌症基因组图谱（TCGA）数据库中收集79例ACC患者的转录组数据和临床病理数据。采用ESTIMATE算法计算免疫评分、基质评分（二者即反映TME）和ESTIMATE评分，应用VennDiagram包对免疫评分及基质评分高、低评分组（以中位值进行分组）间差异表达基因进行选择，采用基因本体（GO）数据库和京都基因与基因组百科全书（KEGG）数据库对选择的基因进行功能富集分析，探索基因潜在功能与通路。采用单因素Cox回归、lasso回归和多因素Cox回归分析筛选与ACC TME相关的基因，并建立ACC患者预后的风险评分（RS）模型，用受试者工作特征（ROC）曲线评价构建的模型预测ACC患者预后的价值。以基因表达综合（GEO）数据库的数据集GSE33371和GSE19750作为外部验证集，对建立的预后模型进行验证。从TCGA数据库中提取79例ACC患者资料，将临床病理因素与所构建预后模型的RS纳入Cox回归分析，获得ACC患者预后影响因素。结果:根据免疫评分和基质评分，用VennDiagram包筛选得到1 205个二者交集的差异表达基因，其中上调833个，下调372个。对差异表达基因进行各回归分析筛选后，最终构建成功包含9个TME相关基因（GREB1、POU4F1、HIC1、HOXC9、CACNB2、RAB27B、ZIC2、C3、CYP2D6）的ACC预后模型，即RS=GREB1×0.223 6+POU4F1×0.671 7+HIC1×0.167 5+HOXC9×0.211 3+CACNB2×0.156 0+RAB27B×0.956 5+ZIC2×0.582 7+C3×（-0.003 1）+CYP2D6×0.819 3。该模型在TCGA数据库中预测79例ACC患者1、3、5年总生存的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.876、0.919、0.917，在GEO验证集中预测45例ACC患者1、3、5年总生存的AUC分别为0.689、0.704、0.708，表明模型对ACC患者生存具有较高的预测准确性。对TCGA数据库中79例ACC患者资料进行Cox回归分析显示，TME相关基因预后模型RS是ACC患者预后的独立影响因素（ HR=1.011，95% CI 1.005~1.016， P<0.01）。 结论:构建的ACC TME相关基因预后模型可用于预测ACC患者的预后。模型中包含的9个基因有可能作为研究ACC发病机制和免疫治疗的新靶点，值得进一步研究。

电压门控钙离子通道(VGCCs)异常表达和功能障碍会导致儿童多种神经系统疾病，包括癫痫、偏头痛和共济失调等。既往仅认为 CACNA1A、CACNA1H、CACNA2D2、CACNB4与儿童癫痫相关。近年来，越来越多与儿童癫痫相关的VGCCs基因被发现，尤其是与发育性和癫痫性脑病相关的基因。现就VGCCs相关基因突变与儿童癫痫的研究进展作一综述。

目的:分析甲状腺癌的可变剪切（AS）事件，探讨AS事件与甲状腺癌预后的相关性，并建立AS事件与剪接因子（SF）的调控网络。方法:分别从癌症基因图谱（TCGA）和TCGA SpliceSeq数据库下载507例甲状腺癌患者临床资料和AS事件数据，合并得到AS事件生存数据的矩阵，评估7种AS事件的发生情况。采用单因素Cox回归分析筛选与预后相关的AS事件，最小绝对值收敛和选择算子（LASSO）回归分析筛选变量避免模型过度拟合，多因素Cox回归分析构建预后模型。Kaplan-Meier 曲线和受试者工作特征（ROC）曲线对预后模型的价值和效能进行评价。利用Pearson试验分析AS事件与SF的相关性，并对SF基因进行GO富集和KEGG通路分析。结果:本研究共纳入507例甲状腺癌患者，研究发现10 447个基因发生了45 150次可变剪切事件。其中ES为主要类型（38.84%），ME发生次数最少（0.51%）。单因素Cox回归筛选出1 842个与预后相关的AS事件，多因素Cox分析建立了基于USHBP1-48249-AA、CACNB1-40626-AT和BEX5-89679-AP的预后风险模型。以风险分数0.807为最佳临界值，能够很好地区分高风险和低风险组（ P<0.001，AUC=0.929）。构建的SF-AS调控网络中发现多个关键SF基因能够调控AS事件的表达，包括CDK12、RBM25、DDX39B、SRRM2和DDX46等。 结论:基于3-AS事件的模型对于评估患者预后具有较高的价值，构建的SF-AS调控网络为探讨甲状腺癌发生发展机制提供了新的思路。

目的 探讨微小RNA-409-3p(miR-409-3p)对人视网膜血管内皮细胞(HRCEC)氧化应激、凋亡、炎症的影响及作用机制.方法 将对数期的HRCEC细胞分为对照组、高渗葡萄糖(HG)组、HG+miR-con组、HG+miR-409-3p 组、HG+si-con 组、HG+si-CACNB2 组、HG+miR-409-3p+pcDNA 和 HG+miR-409-3p+pcDNA-CACNB2 组.采用荧光定量 PCR(qPCR)法检测 miR-409-3p 的相对表达量,Western blotting(WB)法检测L-型电压依赖型钙通道β(CACNB2)、裂解的半胱天冬酶-3(Cleaved caspase-3)蛋白表达量,流式细胞术(F C M)检测细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(E LIS A)检测炎症因子水平,酶标仪及试剂盒检测氧化应激相关指标,双荧光素酶检测(LRA)验证miR-409-3p与CACNB2调控关系.结果 HG组miR-409-3p相对表达量低于对照组,CACNB2 mRNA和蛋白表达量高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).miR-409-3p可靶向结合CACNB2,在HRCEC细胞中负向调控CACNB2的表达.与HG+miR-con组相比,HG+miR-409-3p组的乳酸脱氢酶(LDH)及谷胱甘肽(GSH)水平升高(P＜0.01),CACNB2蛋白表达量、活性氧(ROS)及丙二醛(MDA)水平降低(P＜0.01);与 HG+miR-con 组相比,HG+miR-409-3p 组 Cleaved caspase-3、Bax 蛋白表达量,细胞凋亡率,白细胞介素(IL)-6、IL-18及IL-1β水平均降低,同时,细胞间黏附分子(ICAM)蛋白表达量降低,差异有统计学意义(P＜0.01).敲减CACNB2具有相似的作用,过表达CACNB2可逆转miR-409-3p过表达对HRCEC细胞氧化应激、细胞凋亡、炎症反应的影响.结论 miR-409-3p抑制HRCEC细胞的氧化应激、凋亡、炎症与下调CACNB2表达有关.

目的:本研究用逍遥散干预慢性应激损伤模型大鼠,观察其海马区Cacnb4基因的表达情况.方法:以60只Wistar大鼠随机分为空白对照组、慢性应激模型组、逍遥散治疗组3组,每组20只.造模方法采用Cart多相性慢性应激大鼠模型并加以改进,逍遥散治疗组在造模同时给予逍遥散2mL/(只·d),连续造模21 d,于第22天处死大鼠并取材.采用RT-PCR一步法及免疫组化检测方法测定各组大鼠海马区域Cacnb4基因及其蛋白表达情况.结果:慢性应激模型组大鼠海马Cacnb4mRNA及其相应蛋白表达均显著上调,中药复方逍遥散可从基因及蛋白水平同时纠正这种上调的表达变化.结论:电压依赖型钙离子通道β4辅助亚基的表达变化参与了慢性应激损伤过程,逍遥散对慢性应激所致神经细胞损伤可能通过调节这一基因发挥保护性作用.

目的 观察IVF-ET技术对早期胎盘滋养层细胞MAPK信号通路基因表达的影响,探讨IVF-ET技术对早期胎盘发育和功能的影响. 方法 IVF-ET周期中双胚胎移植后妊娠7～8周,经超声引导下减胎获得的胎盘绒毛组织作为研究组(IVF-ET组,28例),自然妊娠双胎7～8周人工流产中获得的胎盘绒毛组织作为对照组(8例).利用AffymetrixHG-U133 Plus 2.0基因芯片对两组胎盘绒毛组织进行芯片杂交分析.用定量反转录聚合酶链反应(qRT PCR)在两组胎盘绒毛组织中验证其中的8个差异表达基因,从基因芯片数据中选取差异表达基因进行无监督聚类分析和基因本体(GO)功能生物信息学分析. 结果 与对照组相比,IVF-ET早期胎盘MAPK信号通路有32个差异表达基因(差异倍数≥2倍),13个基因上调,19个基因下调.上调基因是PLA2G12B、JUN、RPS6KA3、ACVR1B、FGF 18、PRKACB、RASGRP3、PLA2G4A、FGFR4、PDGFRA、CACNB2、RPS6KA2和SOS1,下调基因是STK4、GNG12、MAPK9、DUSP16、IL1R2、MAP3K8、BRAF、STK3、HSPA2、HSPB1、DUSP4、EGFR、IL1R1、TGFB1、RASA1、RPS6KA5、GADD45G、PLA2G2A和DUSP5.经qRT-PCR检测,与对照组相比,IVF-ET组8个MAPK信号通路基因成员中JUN、PLA2G4A、PDGFRA和SOS1上调,MAPK9、EGFR、TGFB1和GADD45G下调,与基因芯片检测结果一致.MAPK信号通路基因定位显示,IVF-ET组胎盘绒毛组织中受到影响的基因主要位于MAPK信号通路的上游. 结论 IVF-ET来源的早期胎盘MAPK信号通路基因表达与自然妊娠早期胎盘中存在差异,差异的基因涉及MAPK信号通路的多种关键功能,进而可能影响IVF-ET胎盘早期发育和功能.

目的 探讨miR-208b对小鼠HL-1房颤细胞钙超载的影响,并分析其作用机制.方法 将小鼠HL-1心房肌细胞随机分为3组:对照组、起搏组和miR-208b组.后两组建立快速起搏HL-1房颤细胞模型,然后将miR-208b模拟物转染至miR-208b组细胞,将模拟物阴性对照转染至起搏组细胞,对照组不处理.全细胞膜片钳技术检测动作电位时程(APD)及L型钙电流(I Ca,L)的电流密度,实时荧光定量PCR及Western Blot检测钙通道蛋白mRNA及蛋白的表达.结果 与对照组相比,起搏组和miR-208b组细胞中miR-208b表达显著增加(P<0.05),且miR-208b组高于起搏组(P<0.05).与对照组相比,起搏组和miR-208b组APD50、APD90、I Ca,L的电流密度、CACNA1C mRNA、CACNB2 mRNA、CaV1.2蛋白、SERCA2 mRNA及SERCA2蛋白的表达均显著降低(P<0.05),且miR-208b组低于起搏组(P<0.05).结论 miR-208b在小鼠HL-1房颤细胞中高表达,其可通过抑制L型钙通道蛋白的表达和功能以及抑制肌浆网Ca2+摄入,导致胞内Ca2+超载,诱发AF.

间充质干细胞在治疗骨相关疾病中具有重要意义,但其在成骨分化中的机制尚未完全阐明.该研究通过分析GEO数据库中有关组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)处理过的小鼠成骨前体细胞(MC3T3-E1 preosteoblasts)的生物芯片数据,筛选出22个在成骨分化中上调,在成脂分化中下调,且受HDACi紧密调控的基因.这22个基因中有6个基因(Cacnb3、Lpcat2、Cd248等)与Ca2+调节功能相关,提示Ca2+可能在MSCs分化中发挥重要作用.在后续实验中,我们观察到电压依赖性钙通道亚单位β3(calcium voltage-gated channel auxiliary subunit beta 3,Cacnb3)和磷脂酰基转移酶2(lysophosphatidylcholine acyltransferase 2,Lpcat2)在小鼠脂肪间充质干细胞(ADSCs)、人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)和小鼠成骨前体细胞(MC3T3-E1)的成骨分化过程中上调,提示Cacnb3、Lpcat2可能参与ADSCs的体外成骨分化.此外,利用钙离子荧光探针检测方法,发现敲低Cacnb3后3T3-E1细胞内Ca2+浓度明显低于对照组,同时,成骨相关基因(ALP、Runx2)表达显著下调,表明Cacnb3可能通过影响Ca2+浓度调控细胞的成骨分化,该研究为进一步探索间充质干细胞成骨分化的机制奠定了基础.

目的 探究CACNA1C-P817S突变对早期复极综合征(ERS)的影响及其电生理机制.方法 收集ERS先证者外周血,采用二代测序技术,对ERS先证者筛选常见致心肌早期复极的候选基因.构建CACNA1C野生型(WT)和突变型质粒,连同WT-CACNB2b和WT-CACNA2D1质粒,分别共转染入人胚肾293细胞.采用全细胞膜片钳技术检测细胞电生理功能,同时应用共聚焦荧光显微镜检测Cav1.2蛋白的转运功能.结果 基因测序筛选出致ERS的突变基因CACNA1C-P817S,突变使CACNA1C氨基酸序列上817位点的脯氨酸变为丝氨酸.全细胞膜片钳检测结果显示P817S组钙电流(ICa)密度较WT组降低约68.8％[WT(n=15)vs P817S(n=12):(-19.2±1.5)pA/pF vs(-6.0±1.7)pA/pF,P<0.001].L型钙离子通道激活未见明显改变,但失活过程加速[V1/2,WT(n=15)vs P817S(n=12):(-30.4±0.75)mV vs(-41.6±0.84)mV,P<0.001].共聚焦检测结果显示,P817S突变可使Cav1.2蛋白转运功能降低[外周荧光强度绝对值,WT vs P817S:(19.6±2.0)MD vs(12.2±1.9)MD,P<0.01,n=4;外周/整体荧光强度百分比,WT vs P817S:(30.2±2.3)％vs(20.9±2.2)％,P<0.01,n=4].结论 CACNA1C-P817S突变通过降低Cav1.2蛋白的转运功能和改变通道动力学,使ICa发生功能性缺失,提示CACNA1C-P817S突变是ERS的一个明确的致病基因突变.

目的:探索当药苷通过兴奋-收缩耦联信号通路对缺血再灌注损伤后心脏收缩/舒张功能的影响.方法:24只健康雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、10 μmol·L-1当药苷给药组与1μmol·L-1地高辛给药组,并采用Langendorff系统结合左前降支冠状动脉结扎建立缺血再灌注损伤模型(I/R),2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测各组心脏梗死面积,Powerlab生理记录仪检测血流动力学参数,如左心室舒张压(LVDP)、左心室终末舒张压(LVEDP)、左心室终末收缩压(LVESP)、左心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)和左心室内压最大下降速率(-dp/dtmax);提取分离乳鼠原代心肌细胞(NRCMs),建立缺氧/复氧(H/R)损伤模型,随机分为正常组、模型组、1 μmol·L-1当药苷给药组和10 μmol·L-1当药苷给药组,多功能成像细胞分析仪和激光共聚焦显微镜测定各组心肌细胞活力、心率、收缩幅度、收缩时程、达峰时程和舒张时程及钙瞬变峰值.根据前期转录组学测序结果及文献调研,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测L型钙通道相关基因(Cacnb2),细胞色素C氧化酶相关基因(Cox6a2),肌钙蛋白(Tnnc1、Tnni3、Tnnt2)、肌动蛋白(Actc1)、肌球蛋白(Myh6、My12、My14)等兴奋-收缩耦联通路基因的mRNA表达并对差异基因进行聚类分析.结果:与正常组比较,模型组心肌梗死面积显著增加(P＜0.01)、LVDP显著降低(P＜0.01)、LVEDP显著上升(P＜0.01)、LVESP明显下降(P＜0.05)、+dp/dtmax有下降趋势和-dp/dtmax上升趋势及心肌细胞活力降低、心率降低、收缩幅度降低、收缩时程升高、达峰时程升高和舒张时程升高(P＜0.01),而当药苷可以逆转上述指标(P＜0.05)o 此外,心肌细胞经 H/R损伤后,Cacnb2、Cox6a2、Tnnc1、Tnni3、Tnnt2、Actc1、Myh6、My12、My14等兴奋-收缩耦联通路的基因表达下降(P＜0.05、P＜0.01).而使用当药苷预处理后,可以增强上述基因的表达(P＜0.05).结论:当药苷通过调节兴奋-收缩耦联信号通路,从而调节原代乳鼠心肌细胞内钙离子水平,增强心肌收缩功能,对抗I/R损伤.