目的 探讨lncRNA LINC00339 调控细胞自噬并抑制骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSC)成骨分化的可能机制.方法 以大鼠原代 BMSC 为研究对象,根据给予的处理因素不同,分为以下 4 组:敲减LINC00339 组、敲减BECN1 组、空载对照组、敲减LINC00339+敲减BECN1 组.分别应用ELISA检测试剂盒检测细胞上清液中ALP、BGP、PICP;Western blot检测成骨相关指标BMP2、Osterix、Runx2 以及自噬相关蛋白BECN1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、p62 的表达;应用茜素红染色技术检测成骨分化;通过免疫荧光检测LC3 斑点.结果 与对照组相比,ELISA法检测结果显示siLINC00339 组ALP、BGP、PICP显著增高;Western blot结果显示成骨相关蛋白BMP2、Osterix、Runx2 和自噬相关蛋白BECN1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、p62蛋白表达上调;茜素红染色后细胞视野可见成骨明显增多;免疫荧光观察LC3 蛋白明显增多,以上结果差异均有统计学意义(P＜0.05);与对照组相比,siBECN1 组 ALP、BGP、PICP 显著下降,成骨相关基因 BMP2、Osterix、Runx2 和自噬相关蛋白BECN1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、p62 表达下调,茜素红染色后细胞视野可见成骨明显减少,免疫荧光观察LC3 蛋白明显减少,以上结果差异均有统计学意义(P＜0.05);而双基因操作的siLINC00339+siBECN1 组以上各检测结果分别与siLINC00339 组和siBECN1组相比差异均有统计学意义(P＜0.05),但与对照组相比均无统计学意义(P＞0.05).结论 lncRNA LINC00339 可抑制BMSC成骨分化,其机制可能与调控了BECN1 参与的细胞自噬现象有关.

目的:探讨Linc00339对三阴乳腺癌发生发展的作用及其相关分子机制。方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测人乳腺正常上皮细胞和乳腺癌细胞中Linc00339的表达水平；采用质粒转染试验在MDA-MB-231细胞中过表达Linc00339；采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测MDA-MB-231细胞的活性；采用黏附试验、Transwell试验分别检测MDA-MB-231细胞的黏附、侵袭和迁移能力；采用Western blot检测MDA-MB-231细胞中APC、Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达水平；采用qRT-PCR法检测MDA-MB-231细胞中miRNA-135a、miRNA-135b及miRNA-138的表达水平；将体外转染成功的MDA-MB-231细胞接种于裸鼠体内建立荷瘤裸鼠模型，观察和测量肿瘤块的体积和重量，采用Western blot检测裸鼠瘤体组织中APC、Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达水平，采用qRT-PCR法检测裸鼠瘤体组织中miRNA-135a、miRNA-135b及miRNA-138的表达水平。结果:与乳腺正常上皮细胞组(Hs578Bst)相比，乳腺癌细胞组(MCF-7、MDA-MB-468、MDA-MB-231)的Linc00339表达水平均显著上调，以三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞尤为显著；转染实验结果表明与pcDNA3.1组相比，Linc00339转染显著上调Linc00339表达水平并可显著增加MDA-MB-231细胞的活力；Linc00339过表达能够显著增加MDA-MB-231细胞的增殖、黏附、迁移和侵袭能力，增加荷瘤裸鼠肿瘤块的体积和重量；Western blot结果均表明体内外Linc00339过表达能够下调APC蛋白的表达和上调Wnt/β-catenin信号蛋白的表达，同时qRT-PCR结果表明Linc00339过表达能够上调miRNA-135b表达水平，而对miRNA-135a和miRNA-138无影响。结论:Linc00339可能通过miR-135b/APC介导的Wnt/β-catenin信号通路促进三阴乳腺癌的发生和发展。

目的 研究长链非编码RNA LINC00339在结直肠癌患者中的表达情况及其对结直肠癌细胞增殖和凋亡的作用与机制.方法 回顾性分析2015年8月至2017年1月河南省肿瘤医院收治的经病理确证的158例结直肠癌患者.采用实时荧光定量PCR方法检测结直肠癌组织和癌旁组织中LINC00339的表达,分析LINC00339的表达与患者临床病理特征和微RNA(miR)-218表达的关系.双荧光素酶报告系统验证LINC00339与miR-218的关系.在高表达LINC00339的结直肠癌细胞LoVo和HCT116中使用siRNA干扰技术下调LINC00339,实时荧光定量PCR检测miR-218的表达、MIT检测细胞活力、流式细胞术检测细胞凋亡.另外,在LoVo和HCT116细胞中共转染LINC00339 siRNA和miR-218拮抗剂(anti-miR-218),检测下调miR-218对LINC00339 siRNA影响的细胞增殖和凋亡的变化.结果 LINC00339在结直肠癌组织的表达显著高于癌旁组织(4.69±1.52比1.02±0.38,P＜0.05).LINC00339的表达与患者的年龄和性别无关(P＞0.05),而与患者的TNM分期、淋巴结转移、肿瘤长径和分化程度相关(均P＜0.05).在结直肠癌组织中LINC00339的表达与miR-218的表达呈负相关性.miR-218模拟物能够显著降低野生型LINC00339质粒的荧光强度(P=0.001),但是对突变型质粒的荧光强度无影响(P=0.88).在LoVo和HCT116细胞中下调LINC00339,细胞增殖能力受到抑制,细胞凋亡率增加(均P＜0.05);与仅转染LINC00339 siRNA相比,下调miR-218后LoVo和HCT116细胞的增殖能力增加、凋亡率降低(均P＜0.05).结论 LINC00339在结直肠癌中表达升高,与患者的临床病理特征密切相关.LINC00339通过下调miR-218表达促进结直肠癌细胞增殖,抑制凋亡.

目的 探讨LINC00339对高糖作用的成骨细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法 用终浓度为22 mmol/L的高糖溶液刺激hFOB1.19作为高糖组,以终浓度为5 mmol/L的糖溶液处理hFOB1.19作为对照组;将pcDNA3.1、pcDNA3.1-LINC00339、si-NC、si-LINC00339分别转染至正常hFOB1.19细胞中,记为pcDNA3.1组,pcDNA3.1-LINC00339组、si-NC组、si-LINC00339组.将si-NC、si-LINC00339转染至高糖处理的hFOB1.19细胞中,记为高糖组+si-NC组、高糖组+si-LINC00339组;将si-LINC00339与anti-miR-NC、anti-miR-195-5p分别共同转染至高糖处理的hFOB1.19细胞中,记为高糖组+si-LINC00339+anti-miR-NC组、高糖组+si-LINC00339+anti-miR-195-5p组.荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-195-5p和LINC00339表达水平;蛋白质印迹(Western Blot)检测细胞周期素D1(CyclinD1)、P21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测LINC00339和miR-195-5p的靶向关系.结果 高糖处理的hFOB1.19细胞中LINC00339表达水平显著升高;miR-195-5p表达水平显著降低(P<0.05).抑制LINC00339表达,高糖作用的hFOB1.19细胞中Cyclin D1、Bcl-2、BMP-2表达水平显著升高,P21、Bax表达水平显著降低,细胞活性显著升高,细胞凋亡率显著降低(P<0.05).LINC00339靶向调控miR-195-5p,抑制miR-195-5p逆转了抑制LINC00339对高糖作用的细胞hFOB1.19增殖促进和凋亡抑制的作用.结论 抑制LINC00339可促进高糖作用的成骨细胞增殖,抑制细胞凋亡,对高糖作用的成骨细胞有保护作用,其机制可能与miR-195-5p表达水平有关.

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC00339对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脑微血管内皮细胞(HBMEC)损伤的影响及分子机制.方法:将HBMEC分为对照组(未经任何处理)、ox-LDL(50 mg/L)组、ox-LDL+si-NC组(转染si-NC+50 mg/L ox-LDL)、ox-LDL+si-LINC00339组(转染si-LINC00339+50 mg/L ox-LDL)、ox-LDL+miR-NC组(转染miR-NC+50 mg/L ox-LDL)、ox-LDL+miR-149-5p组(转染miR-149-5p+50 mg/L ox-LDL)、ox-LDL+si-LINC00339+anti-miR-NC组(共转染si-LINC00339和anti-miR-NC+50 mg/L ox-LDL)及ox-LDL+si-LINC00339+anti-miR-149-5p组(共转染si-LINC00339和anti-miR-149-5p+50 mg/mL ox-LDL).RT-qPCR检测LINC00339和miR-149-5p的表达水平;分别检测丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测Bcl-2和Bax蛋白表达;双萤光素酶报告基因实验检测LINC00339和miR-149-5p的靶向关系.结果:ox-LDL诱导的HBMEC中LINC00339的表达水平升高,miR-149-5p的表达水平降低(P<0.05).抑制LINC00339表达或过表达miR-149-5p可致HBMEC的MDA含量降低,SOD和CAT活性升高,细胞凋亡率降低,Bcl-2表达水平升高,Bax表达水平降低(P<0.05).LINC00339靶向调控miR-149-5p,敲减miR-149-5p表达逆转了抑制LINC00339表达对ox-LDL诱导的HBMEC氧化损伤的作用.结论:抑制LINC00339表达可能通过上调miR-149-5p表达抑制ox-LDL诱导的HBMEC凋亡和氧化应激反应,从而减轻细胞损伤.

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC00339靶向调控miR-520a-3p对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响.方法:用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测卵巢癌细胞系(SKOV3、A2780、OVCAR3、HO-8910)和正常卵巢上皮细胞系(HOSEpiC)中LINC00339和miR-520a-3p的表达.分别将sh-NC(sh-NC组)和sh-LINC00339(sh-LINC00339组)转染入SKOV3细胞,克隆形成实验和MTT法检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞侵袭.用双荧光素酶报告基因实验验证LINC00339与miR-520 a-3 p的靶向调控关系.为了进一步验证二者调控关系,将SKOV3细胞分为sh-NC+miR-NC组、sh-LINC00339+miR-NC组、sh-LINC00339+anti-miR-520a-3p组,比较3组细胞增殖和侵袭能力.结果:与HOSEpiC细胞比较,SKOV3、A2780、OVCAR3和HO-8910细胞中LINC00339相对表达量明显升高(均P<0.05),而miR-520 a-3 p相对表达量明显降低(均P<0.05).与sh-NC组比较,sh-LINC00339组LINC00339相对表达量,克隆细胞数,转染24、48及72 h时细胞增殖活力、侵袭细胞数明显降低(均P<0.05).双荧光素酶报告基因实验证实,LINC00339可以靶向作用于miR-520a-3p.与sh-NC+miR-NC组比较,sh-LINC00339+miR-NC组细胞增殖和侵袭力明显降低(均P<0.05);与sh-LINC00339+miR-NC组比较,sh-LINC00339+anti-miR-520a-3p组细胞增殖和侵袭力明显升高(均P<0.05).结论:LINC00339可能通过靶向调控miR-520 a-3 p促进卵巢癌细胞的增殖和侵袭.

目的 探讨长链非编码RNA(long non coding RNA,LncRNA)LINC00339调控miR-873-5 p/COMP轴对结肠癌(colon cancer,CC)细胞增殖、侵袭及凋亡的影响.方法 采用qRT-PCR法检测LINC00339、miR-873-5p和COMP在CC组织和细胞中的表达.采用CCK-8、Transwell法和流式细胞术检测细胞增殖、侵袭和凋亡能力.双荧光素酶报告实验和RNA pull-down验证miR-873-5 p和LINC00339、COMP的靶向结合关系.结果 相对于癌旁组织和正常结肠上皮细胞,CC组织和细胞中LINC00339和COMP表达上调,miR-873-5p表达下调(均P<0.05).LINC00339能够与miR-873-5p竞争性结合进而上调COMP的表达.miR-873-5p和LINC00339、COMP的靶向关系被证实.敲低LINC00339可以抑制CC细胞的增殖和侵袭,并诱导细胞凋亡,但是敲低LINC00339对CC细胞生物学行为的影响能够被miR-873-5p inhibitor部分挽救(均P<0.05).LINC00339能够吸附miR-873-5 p进而上调COMP的水平,COMP上调可部分挽救敲低LINC00339对CC细胞的影响(均P<0.05).结论 LINC00339通过调控miR-873-5p/COMP轴促进CC细胞的增殖、侵袭,抑制细胞凋亡.

目的 探讨LINC00339在急性心肌梗死(AMI)大鼠中的表达及其作用机制.方法 将SD大鼠分为对照组(不做处理)、假手术组(仅开胸不结扎冠状动脉)、模型组、阴性对照(NC)组和siLINC00339组,后3组采用冠状动脉左前降支结扎法构建AMI模型,将携带NC及siRNA-LINC00339的慢病毒于术后注射至NC组和siLINC00339组大鼠心肌内;术后72 h采用心脏彩超检测心功能指标左室长轴缩短分数、左室射血分数、左室舒张末期内径和左室收缩末期内径变化,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测心肌梗死面积,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)法检测心肌凋亡指数,比色法检测心肌组织中半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测心肌组织中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β含量,实时荧光定量PCR(RT-qRCR)法检测心肌组织中LINC00339、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(Rock)1、含NLR家族Pyrin域蛋白(NLRP)3 mRNA表达,Western印迹检测心肌组织中Bcl-2、Bax、Rock1、NLRP3蛋白表达.结果 与对照组比较,假手术组心肌组织中LINC00339表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与假手术组比较,模型组左室长轴缩短分数、左室射血分数和心肌组织中Bcl-2 mRNA与蛋白表达水平均明显降低,而左室舒张末期内径、左室收缩末期内径、心肌梗死面积、凋亡指数和心肌组织中Caspase-3活性、TNF-α、IL-6、IL-1β 含量及LINC00339、Bax、Rock1、NLRP3 mRNA和Bax、Rock1、NLRP3蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);NC组和模型组比较上述各指标差异均无统计学意义(P>0.05);与NC组比较,siLINC00339组上述各指标变化趋势与模型组相反(P<0.05).结论 LINC00339在AMI大鼠心肌组织中表达上调,下调其表达可抑制心肌细胞凋亡和炎症反应,其作用机制可能与抑制Rock1、NLRP3表达有关.

目的:构建预测皮肤黑色素瘤(SKCM)预后的自噬相关长链非编码RNA(lncRNAs)风险模型,寻找与SKCM预后相关的新的生物学标志物.方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库中获得SKCM的lncRNAs的表达谱,以构建自噬基因与lncRNAs共表达网络.Lasso回归和多因素Cox回归寻找与自噬相关lncRNAs.根据自噬相关lncRNAs建立风险评分,并使用Cox回归检验其是否为独立的预后因素.利用GO和KEGG分析自噬相关lncRNAs的功能富集.结果:SKCM中鉴定出有11个自噬相关lncRNAs,其中7个(USP30-AS1、HCP5、WAC-AS1、EBLN3P、AL162171.1、LINC00339、THCAT158)是保护性因素,4 个(LINC00518、AC009570.1、AC009495.2、LINC00665)是危险因素.根据风险评分Kaplan-Meier生存分析发现,高风险组SKCM预后明显差于低风险组,差异有统计学意义(P＜0.001).Cox回归提示风险评分(HR=1.333,95％CI:1.214～1.465,P＜0.001)是影响SKCM患者预后的独立危险因素.风险评分在预测SKCM患者10年生存率的ROC曲线下面积分别为0.799.功能分析显示11个自噬相关lncRNAs主要与细胞分裂以及机体细胞的免疫相关,而且肿瘤发生、发展和复发转移的相关信号通路也出现富集情况.结论:基于11个自噬相关lncRNAs构建风险评分以及预后模型对SKCM预后具有一定的预测价值,为SKCM靶向治疗提供治疗靶点和参考.