目的 研究miR-148a-3p对软骨细胞炎症因子、细胞凋亡和软骨细胞表型的影响.方法 2周龄大耳兔处死后提取原代软骨细胞.为了探究炎症对软骨细胞相关标志物及其胞内miR-148a-3p表达水平的影响,建立IL-1β-诱导的OA细胞模型,软骨细胞分为control组和IL-1β组.为了探究miR-148a-3p对软骨细胞相关标志物及细胞凋亡相关因子表达水平的影响,软骨细胞分为 blank 组、IL-1 β 组、IL-1 β+NC 组、IL-1 β+mimics 组、IL-1 β+inhibitor 组.qRT-PCR 检测 IL-1 β、SOX9、COL-Ⅱ、ACAN、MMP-13 mRNA水平;采用免疫蛋白印迹法检测软骨相关标志物MMP-13、COL-Ⅱ、ACAN、SOX9以及细胞凋亡相关因子Bax、Caspase-3、Bcl-2蛋白的表达水平.采用ELISA法检测细胞上清中IL-6和IL-10的含量.结果 ①与control组比较,IL-1 β组细胞MMP-13蛋白表达升高(P＜0.05),COL-Ⅱ和ACAN蛋白表达降低(P＜0.05);miR-148a-3p表达水平升高(P＜0.000 1);②与blank组比较,IL-1β组细胞上清液IL-6水平升高,IL-10水平降低(P＜0.05);MMP-13 mRNA和蛋白表达升高(P＜0.05),COL-Ⅱ和ACAN mRNA和蛋白表达降低(P＜0.05).与IL-1β组比较,IL-1 β+mimics组细胞上清液IL-6水平、MMP-13 mRNA 和蛋白、Bax、Caspase-3 蛋白表达升高(P＜0.05);上清液 IL-10 水平、SOX9、COL-Ⅱ、ACAN mRNA 和蛋白,以及Bcl-2蛋白表达降低(P＜0.05).IL-1β+inhibitor组和IL-1β组间上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 IL-1β诱导体外软骨细胞中miR-148a-3p表达上调,可导致软骨细胞炎症性改变、细胞凋亡、软骨细胞表型改变和细胞外基质(ECM)降解.

目的:探讨lncRNA HCP5 靶向mlR-409-3p对皮肤鳞状细胞癌(CSCC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法:采用qRT-PCR法检测CSCC细胞(SCC13、A431、HSC-5)中HCP5 和miR-409-3p的表达情况,筛选用于实验的CSCC细胞.将抑制 HCP5 表达的质粒si-HCP5 及其对照(si-NC)、过表达miR-409-3p的miR-409-3p模拟物及其对照(miR-NC)、抑制HCP5 和miR-409-3p的si-HCP5+anti-miR-409-3p及其对照(si-HCP5+anti-miR-NC)分别转染SCC13 细胞.采用CCK-8 法和Transwell 实验检测SCC13 细胞增殖、迁移、侵袭能力,Western blot法检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9 蛋白表达水平.通过双荧光素酶报告基因实验验证HCP5 和miR-409-3p的靶向关系.结果:SCC13 细胞中HCP5 表达最高,miR-409-3p表达最低(P<0.05).抑制HCP5 表达后SCC13 细胞增殖能力降低,细胞迁移数和侵袭数减少,CycIinD1、MMP2、MMP9 蛋白表达水平降低(P<0.05).过表达miR-409-3p后SCC13 细胞增殖能力降低,细胞迁移数和侵袭数减少,CycinD1、MMP2、MMP9 蛋白表达水平降低(P<0.05).双荧光素酶报告基因实验结果显示 lncRNA HCP5 和miR-409-3p存在靶向关系.抑制miR-409-3p表达可减弱HCP5 低表达对SCC13 细胞增殖以及迁移、侵袭能力的影响(P<0.05).结论:抑制HCP5 可通过靶向促进miR-409-3p表达来抑制CSCC细胞增殖、迁移和侵袭.

目的:探讨基质金属蛋白酶-9（matrix metalloprotein-9，MMP-9）、白介素-6（interleukin-6，IL-6）、趋化因子配体10（chemokine C-X-C motif ligand 10，CXCL10）、趋化因子配体13（chemokine C-X-C motif ligand 13，CXCL13）在病毒性脑炎（viral encephalitis，VE）患者血清和脑脊液中的表达水平及其临床意义。方法:选取2018年1月—2021年12月在某院收治的120例VE患者作为研究组对象，选取60例同期入院的疑似VE，经检查为正常的患者为对照组。检测并比较各组血清和脑脊液中的MMP-9、IL-6、CXCL10、CXCL13含量。利用受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve，ROC）分析血清及脑脊液中MMP-9、IL-6、CXCL10、CXCL13水平与VE的预测及预后的相关性及临床应用价值。结果:研究组血清和脑脊液中MMP-9、IL-6、CXCL10、CXCL13水平均显著高于对照组（ P<0.05），重症组血清和脑脊液中MMP-9、IL-6、CXCL10、CXCL13水平均显著高于轻症组（ P<0.05），处于恢复期的VE患者血清和脑脊液中MMP-9、IL-6、CXCL10、CXCL13水平较急性期患者明显降低（ P<0.05），有后遗症的VE患者血清和脑脊液中MMP-9、IL-6、CXCL10、CXCL13水平较无后遗症患者均明显升高（ P<0.05）。ROC曲线结果显示血清和脑脊液中联合检测MMP-9、IL-6、CXCL10、CXCL13水平预测VE的曲线下面积（area of the under curve，AUC）显著高于单一指标检测，预测灵敏度和特异度也均显著增高。 结论:血清及脑脊液MMP-9、IL-6、CXCL10、CXCL13在VE患者中呈现高表达，且表达水平与VE患者的病情严重程度及预后紧密相关。MMP-9、IL-6、CXCL10、CXCL13联合检测有助于VE的临床预测和预后评估。

目的:探讨磷酸肌醇3激酶调节亚基3(PIK3R3)在生长激素型垂体神经内分泌肿瘤(GH-PitNETs)中的表达及其与细胞增殖、迁移和侵袭之间的关系。方法:利用基因表达数据库(GEO)中相关的PitNETs数据集，分析PIK3R3在GH-PitNETs中的表达情况。利用来源于不同PitNETs亚型的细胞株，通过蛋白质免疫印迹实验(WB)检测PIK3R3在GH3、MMQ和AtT-20细胞中的表达情况。体外培养GH3细胞，应用慢病毒感染的方法对PIK3R3进行敲低，并将细胞分为PIK3R3敲低2组(Sh-PIK3R3-2)、PIK3R3敲低3组(Sh-PIK3R3-3)和未转染对照组(Sh-NC)，通过CCK-8、EdU及集落形成实验检测各组细胞增殖速度，采用流式细胞术检测细胞凋亡，采用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭，采用WB检测上皮型钙粘蛋白(E-cadherin)、神经型钙粘蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、AKT和磷酸化AKT(P-AKT)的表达。结果:GEO数据库的数据分析结果显示，相较于正常垂体或瘤旁组织，PIK3R3在GH-PitNETs中表达上调(均 P<0.05)，而在催乳素型PitNETs、促肾上腺皮质激素型PitNETs和促性腺激素型PitNETs中表达差异均无统计学意义(均 P>0.05)。WB检测结果显示，相较于MMQ和AtT-20细胞，PIK3R3在GH3细胞中表达更高(均 P<0.05)。CCK-8检测结果显示，在24 h、48 h、72 h时间点，Sh-PIK3R3-2组和Sh-PIK3R3-3组细胞的吸光度值分别为0.19±0.02、0.46±0.03、1.25±0.06和0.17±0.02、0.37±0.02、1.03±0.05，均低于对照组细胞的0.24±0.02、0.64±0.04、1.67±0.09(均 P<0.05)。EdU检测结果显示，Sh-PIK3R3-2组和Sh-PIK3R3-3组细胞的EdU阳性细胞率分别为(16.87±1.63)%和(13.45±1.33)%，均低于对照组的(34.51±2.76)%(均 P<0.05)。集落形成实验结果显示，Sh-PIK3R3-2组和Sh-PIK3R3-3组细胞的单细胞集落数分别为(84±10)个和(75±8)个，均低于对照组的(173±19)个(均 P<0.05)。流式细胞术检测结果显示，Sh-PIK3R3-2组和Sh-PIK3R3-3组细胞的细胞凋亡率分别为(25.62±2.14)%和(27.40±2.51)%，均高于对照组的(14.12±1.48)%(均 P<0.05)。Transwell迁移实验结果显示，Sh-PIK3R3-2组和Sh-PIK3R3-3组细胞的穿膜细胞数分别为(182±15)个和(166±13)个，均低于对照组的(428±27)个(均 P<0.05)。Transwell侵袭实验结果显示，Sh-PIK3R3-2组和Sh-PIK3R3-3组细胞的穿膜细胞数分别为(31±5)个和(22±3)个，均低于对照组的(64±9)个(均 P<0.05)。WB实验检测结果显示，与对照组比较，两组PIK3R3敲低组细胞的N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9和P-AKT表达均降低(均 P<0.05)，E-cadherin表达均增加(均 P<0.05)，AKT表达无明显变化(均 P>0.05)。 结论:PIK3R在GH-PitNETs中高表达，并通过激活AKT信号传导，促进肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭。

目的:探索基于显微注射方法构建胶质母细胞瘤(GBM)融合大脑类器官模型的可行性，观察该模型肿瘤组织对替莫唑胺(TMZ)的敏感性。方法:GBM组织和脑肿瘤旁组织标本(定义为正常脑组织)来源于中南大学湘雅医院神经外科行手术治疗的患者。采用绿色荧光蛋白(GFP)标记过的人诱导多能干细胞株(hiPSCs)培养24 d构建大脑类器官模型，通过免疫荧光染色方法检测蛋白标志物的表达，评估模型是否成功建立。采用显微注射方法将用红色荧光染料标记过的患者来源的GBM单细胞或U-251 MG细胞株注射到培养约30 d的大脑类器官中，构建GBM融合大脑类器官模型。采用免疫荧光染色法、HE染色等方法观察GBM细胞在大脑类器官中的增殖及浸润情况。采用免疫荧光染色法检测GBM融合大脑类器官中肿瘤细胞基质金属蛋白酶类(MMPs)及BrdU的表达情况，采用HE染色观察形态及结构变化。将10 μmol/L TMZ加入GBM融合大脑类器官模型及GBM肿瘤类组织中培养48 h，采用免疫荧光染色法检测两种模型中Caspase-3的表达。结果:(1)hiPSCs培养至第24天，形成具有明确芽和分层边缘的块状组织样结构；免疫荧光染色显示，该结构阳性表达前脑、脑室样结构、前额叶皮质及海马的标志蛋白FOXG1、N-cadherin、Auts2及Frizzled 9，以及星形胶质细胞标志蛋白胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元标志蛋白TUJ1。(2)荧光显微镜下及HE染色均显示肿瘤细胞在大脑类器官内快速增殖，呈浸润性生长。免疫荧光检测显示，与大脑类器官比较，GBM融合大脑类器官的肿瘤细胞中，MMP2和MMP13的表达明显增加，Fibronectin、MMP3及MMP9的表达明显减弱，差异均有统计学意义(均 P<0.05)，MMP10的表达差异无统计学意义( P>0.05)；GFAP和BrdU的表达水平均增高(均 P<0.05)。(3)TMZ处理48 h后，免疫荧光染色显示，GBM类肿瘤组织中Caspase-3的表达明显高于GBM融合大脑类器官。 结论:采用显微注射方法能够成功构建GBM融合大脑类器官模型。该模型中的肿瘤组织对TMZ的敏感性低于GBM肿瘤类组织。

目的:探讨微小RNA(miR)-29b-3p对大鼠膝骨关节炎模型的保护作用及其机制。方法:30只SD大鼠随机分为对照组、模型组和miR-29b-3p KD组，miR-29b-3p KD组大鼠经膝关节腔注射过表达miR-29b-3p沉默腺相关病毒，对照组和模型组经膝关节腔给予对照腺相关病毒。3组大鼠表达30 d后，模型组和miR-29b-3p KD组大鼠采用木瓜蛋白酶局部注射复制膝骨关节炎动物模型。建模4周后，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析膝关节miR-29b-3p表达水平；Mankin组织学评分和Pelletier评分分析关节炎病变程度；分析3组大鼠膝关节最大活动度；采用酶联免疫吸附实验分析白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和转化生长因子-β1(TGF-β1)水平；采用免疫组织化学分析基质金属蛋白酶(MMP)-13和Ⅱ型胶原的表达水平。组间比较采用单因素方差分析。结果:miR-29b-3p KD组大鼠膝关节组织miR-29b-3p表达水平(0.76±0.11)明显低于模型组(2.09±0.15)，差异有统计学意义( t＝22.240， P<0.05)。miR-29b-3p KD组大鼠膝关节最大屈伸角度[(126.51±6.50)°]明显大于模型组[(102.53±5.33)°]，差异有统计学意义( t＝9.017， P<0.05)。miR-29b-3p KD组大鼠膝关节Pelletier评分[(2.36±0.24)分]明显低于模型组[(3.40±0.84)分]，差异有统计学意义( t＝5.196， P<0.05)，miR-29b-3p KD组大鼠膝关节Mankin评分[(2.50±0.85)分]明显低于模型组[(3.70±0.0.82)分]，差异有统计学意义( t＝3.207， P<0.05)。miR-29b-3p KD组大鼠膝关节滑膜液IL-1β和TNF-α水平[(82.62±8.76)、(51.43±5.61) ng/mg]明显低于模型组[(163.02±11.87)、(122.07±13.21) ng/mg]，差异有统计学意义( t＝17.250， P<0.05； t＝15.560， P<0.05)。miR-29b-3p KD组大鼠膝关节滑膜液TGF-β1水平[(55.44±5.91) ng/mg]明显高于模型组[(25.40±4.09) ng/mg]，差异有统计学意义( t＝13.230， P<0.05)。miR-29b-3pKD组大鼠膝关节胶原酶Ⅱ水平(50.12±4.17)明显高于模型组(33.43±3.61)，差异有统计学意义( t＝9.579， P<0.05)。miR-29b-3p KD组大鼠膝关节MMP-13水平(82.62±8.76)明显低于模型组(163.02±11.87)，差异有统计学意义( t＝17.250， P<0.05)。 结论:miR-29b-3p沉默可显著上调TGF-β1表达水平，进而对大鼠膝关节软骨具有修复与保护作用。

目的:分析CD100对非小细胞肺癌(NSCLC)患者单核细胞杀伤功能的影响。方法:入组2018年3—9月份在郑州中心医院就诊的35例NSCLC患者(NSCLC组)和13例健康对照者(对照组)。分离肺癌组外周血单个核细胞(PBMC)和肿瘤部位、非肿瘤部位的支气管肺泡灌洗液(BALF)及对照组PBMC，纯化PBMC和BALF中的单核细胞，流式细胞术检测单核细胞中膜结合型CD100(mCD100)和CD72表达。使用重组人CD100、抗CD72、重组人基质金属蛋白酶14 (MMP14)或抗CD100抗体刺激NSCLC组肿瘤部位纯化的单核细胞，与NCI-H1882细胞共培养后检测靶细胞死亡比例，培养上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、颗粒酶A、颗粒酶B表达，单核细胞中CD16表达。组间比较采用 t检验或配对 t检验。 结果:外周血CD14 +mCD100 +细胞比例、CD14 +CD72 +细胞比例、CD100平均荧光强度(MFI)、CD72 MFI在NSCLC组和对照组之间的差异无统计学意义( P>0.05)，NSCLC组肿瘤部位CD14 +mCD100 +细胞比例、CD14 +CD72 +细胞比例、CD100 MFI、CD72 MFI均显著高于非肿瘤部位( P<0.05)。NSCLC组和对照组外周血纯化的单核细胞诱导NCI-H1882细胞死亡比例的差异无统计学意义[(13.95±3.16)%比(13.22±2.40)%， P＝0.451]，但肿瘤部位纯化的单核细胞诱导NCI-H1882细胞死亡比例低于非肿瘤部位的单核细胞[(11.61±2.81)%比(14.19±3.57)%， P＝0.008 7]，肿瘤部位单核细胞培养上清中TNF-α、IL-1β、颗粒酶A、颗粒酶B水平均低于非肿瘤部位单核细胞( P<0.05)，单核细胞中CD16水平在两组间的差异无统计学意义( P＝0.666)。重组人CD100刺激肿瘤部位纯化的单核细胞后，其诱导NCI-H1882细胞死亡的比例高于无刺激细胞( P<0.000 1)，TNF-α、IL-1β、颗粒酶A、颗粒酶B水平亦高于无刺激细胞( P<0.05)，而抗CD72预处理的单核细胞再使用重组人CD100刺激，其诱导NCI-H1882细胞死亡比例和TNF-α、IL-1β、颗粒酶A、颗粒酶B水平均低于重组人CD100刺激的单核细胞( P<0.05)。重组人MMP14刺激肿瘤部位纯化的单核细胞后，CD14 +mCD100 +比例降低，可溶型CD100(sCD100)水平升高，其诱导NCI-H1882细胞死亡的比例和TNF-α、IL-1β、颗粒酶A、颗粒酶B水平高于无刺激单核细胞( P<0.05)。加入抗CD100后，sCD100水平低于MMP14刺激的单核细胞，其诱导NCI-H1882细胞死亡的比例和TNF-α、IL-1β、颗粒酶A、颗粒酶B水平低于MMP14刺激的单核细胞( P<0.05)。 结论:NSCLC患者肿瘤部位浸润单核细胞CD100脱落不全，导致单核细胞杀伤功能下降，MMP14可能通过促进mCD100脱落和sCD100生成提高肿瘤部位浸润单核细胞的杀伤功能。

目的:探讨线粒体DNA变异和冠心病的相关性，研究1个母系遗传冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)的可能机制。方法:选取2022年5月10日在杭州市第一人民医院就诊的1例女性CHD先证者及其母系遗传CHD家系成员作为研究对象，收集该家系的先证者和母系CHD成员的临床资料。通过对先证者及家系成员进行线粒体DNA测序，对照正常线粒体基因，经过数据比对筛选变异位点。针对变异位点，进行物种间的保守性分析并使用生物信息学软件预测变异位点对tRNA二级结构的影响。Real-time PCR检测线粒体拷贝数，并建立转线粒体细胞系进行线粒体功能分析，包括膜电位和ATP水平测定。结果:该家系共4代32人，母系成员10人，患CHD有4人，外显率为40%。测序结果发现先证者和母系成员携带m.4420A>T及m.10463T>C变异，2个变异位点在物种间均具有高度保守性。m.4420A>T位于tRNA Met D环第22位碱基上，m.4420A>T变异破坏了原有13T-22A碱基配对，可能会引起tRNA代谢障碍。m.10463T>C位于tRNA Arg接收臂的第67位碱基，该位点碱基与tRNA结构稳定性相关。实验发现携带m.4420A>T和m.10463T>C变异的家系成员的线粒体拷贝数、膜电位和ATP水平均低于正常对照( P<0.05)，分别平均下降约50.47%、39.6%及47.4%。 结论:线粒体tRNA Met 4420A>T和tRNA Arg 10463T>C变异可能是这个母系CHD家系的重要分子基础。该家系表现出mtDNA同质性变异、发病年龄以及临床表型等差异，提示核基因、环境因素和线粒体遗传背景对家系成员的冠心病发病进程有一定的影响。

Background::Histone deacetylase 4 (HDAC4) regulates chondrocyte hypertrophy and bone formation. The aim of the present study was to explore the effects of HDAC4 on Interleukin 1 beta (IL-1β)-induced chondrocyte extracellular matrix degradation and whether it is regulated through the WNT family member 3A (WNT3A)/β-catenin signaling pathway.Methods::Primary chondrocytes (CC) and human chondrosarcoma cells (SW1353 cells) were treated with IL-1β and the level of HDAC4 was assayed using Western blotting. Then, HDAC4 expression in the SW1353 cells was silenced using small interfering RNA to detect the effect of HDAC4 knockdown on the levels of matrix metalloproteinase 3 (MMP3) and MMP13 induced by IL-1β. After transfection with HDAC4 plasmids, the overexpression efficiency was examined using Real-time quantitative polymerase chain reaction (qRT-PCR) and the levels of MMP3 and MMP13 were assayed using Western blotting. After incubation with IL-1β, the translocation of β-catenin into the nucleus was observed using immunofluorescence staining in SW1353 cells to investigate the activation of the WNT3A/β-catenin signaling pathway. Finally, treatment with WNT3A and transfection with glycogen synthase kinase 3 beta (GSK3β) plasmids were assessed for their effects on HDAC4 levels using Western blotting. Results::IL-1β downregulated HDAC4 levels in chondrocytes and SW1353 cells. Furthermore, HDAC4 knockdown increased the levels of MMP3 and MMP13, which contributed to the degradation of the extracellular matrix. Overexpression of HDAC4 inhibited IL-1β-induced increases in MMP3 and MMP13. IL-1β upregulated the levels of WNT3A, and WNT3A reduced HDAC4 levels in SW1353 cells. GSK-3β rescued IL-1β-induced downregulation of HDAC4 in SW1353 cells. Conclusion::HDAC4 exerted an inhibitory effect on IL-1β-induced extracellular matrix degradation and was regulated partially by the WNT3A/β-catenin signaling pathway.

目的:探讨基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在骨关节炎大鼠不同时期软骨组织中的表达及临床意义。方法:36只SD大鼠分为对照组( n＝12)、假手术组( n＝12)、模型组( n＝12)，对照组不作任何处理，假手术组行右膝关节切开术，不破坏关节内部结构，模型组行右膝前交叉韧带切断加内侧半月板切除术，于术后4、6、8周，比较各组大鼠关节软骨损伤评分，比较各组大鼠Mankin关节软骨病理评分，比较各组大鼠软骨组织中MMP-13、TNF-α水平，组间比较采用SNK- q检验。 结果:术后4、6、8周时，模型组大鼠关节软骨损伤评分、Mankin评分及MMP-13水平显著高于对照组和假手术组( q＝8.914、7.240、9.421、7.182、9.763、7.031、7.238、6.533、8.459、6.417、9.845、5.739、12.571、10.587、17.959、9.283、19.321、10.254， P<0.05)，假手术组大鼠关节软骨损伤评分、Mankin评分及MMP-13水平较对照组差异无统计学意义( q＝1.323、1.274、1.263、1.481、1.306、1.255、1.302、1.338、1.294， P>0.05)，假手术组和模型组大鼠软骨组织中TNF-α水平显著高于对照组( q＝8.241、7.063、8.579、7.208、11.321、9.445， P<0.05)，模型组大鼠软骨组织中TNF-α水平显著高于假手术组( q＝10.122、11.047、13.259， P<0.05)。模型组大鼠6周时的关节软骨损伤评分、Mankin评分及MMP-13、TNF-α水平显著高于4周( q＝5.849、5.870、13.541、5.484， P<0.05)，模型组大鼠8周时的关节软骨损伤评分、Mankin评分及MMP-13、TNF-α水平显著高于6周( q＝6.621、4.930、7.106、5.834、12.357、10.324、8.219、6.334， P<0.05)。 结论:MMP-13、TNF-α在骨关节炎大鼠软骨组织中呈高表达，其水平随着骨关节炎病程进展而持续升高。