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重组戊型肝炎疫苗不同免疫程序诱导小鼠产生IgG抗体的变化趋势研究
编辑人员丨1周前
目的:观察不同免疫程序中BALB/c小鼠体内针对重组戊型肝炎疫苗的特异性IgG抗体含量的动态变化趋势。方法:将戊型肝炎疫苗系列稀释后腹腔免疫BALB/c、C57BL/6、NIH和KM品系小鼠,筛选适宜的动物模型。将适宜的模型动物随机分为一针免疫组(0周免疫)、二针免疫组(0-4周免疫)、三针免疫组(0-4-12周免疫)和佐剂对照组(与各实验组免疫程序相同),眼内眦采血收集血清,对不同时间节点的血清抗体进行定量检测并分析其含量变化趋势。结果:C57BL/6和KM这两个品系小鼠在免疫戊型肝炎疫苗后各剂量组抗体阳转率较高,显示应答过于敏感。BALB/c和NIH品系小鼠对各剂量组疫苗免疫应答程度比较适宜,抗体阳转率也呈现一定的剂量效应关系。本研究选用BALB/c小鼠作为动物模型。一针免疫组的BALB/c小鼠体内特异性IgG抗体含量在第10周左右达到峰值,为44.35 U/ml,下降后维持在(5.52~13.28) U/ml;二针免疫组在加强免疫后抗体迅速上升于第8周达到峰值,从第10周开始血清抗体浓度开始缓慢下降至平稳期,最终维持在(16.50~32.54) U/ml;三针免疫组在1~12周的血清抗体变化趋势与二针免疫组相似,第三针加强免疫使小鼠体内抗体含量明显增加,并且延长了抗体的衰减周期,其特异性IgG含量维持在(62.65~72.61) U/ml,分别是一针免疫组和二针免疫组的9倍和3倍。结论:本研究确定了BALB/c小鼠适宜作为动物模型探究不同免疫程序中戊型肝炎疫苗特异性IgG抗体含量动态变化趋势,为进一步研究该疫苗的体内效力提供数据参考。
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编辑人员丨1周前
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化纤方通过上调外周及组织IFN-γ水平缓解放射性肺纤维化
编辑人员丨1周前
目的:探究中药化纤方用于放射性肺纤维化的疗效及作用机制。方法:在体内实验中,36只6~8周龄雄性无特定病原(SPF)级C57BL/6小鼠被随机分为对照组、放射组(全肺17 Gy照射)、放射+化纤方组(全肺17 Gy照射+化纤方灌胃)。照射后16周,使用肺系数、HE染色和Masson染色评估肺泡炎症和肺纤维化程度,使用免疫组化染色检测肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平,使用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测肺组织中γ干扰素(IFN-γ)的mRNA表达水平;同时,使用ELISA法测定血清及肺泡灌洗液中IFN-γ的含量。在体外实验中,使用IFN-γ刺激6 Gy照射后的成纤维细胞NIH/3T3,继续培养48 h后,通过qPCR、免疫荧光染色、蛋白质印记法(western blot,WB)检测α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)转录及蛋白水平的表达。统计分析多组比较使用one-way ANOVA分析,组间多重比较采用Tukey检验。结果:与对照组相比,放射组的肺系数、肺泡炎评分、Ashcroft评分、肺组织α-SMA表达显著升高(P均<0.001)。相较于放射组,放射+化纤方组的上述指标均显著下降(P均<0.001)。qPCR检测结果显示放射+化纤方组IFN-γ mRNA表达水平显著高于放射组( P=0.001);ELISA检测结果显示,与放射组相比,放射+化纤方组小鼠血清及肺泡灌洗液IFN-γ含量明显升高( P=0.032、0.037)。在体外实验中,放射后NIH/3T3细胞的α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白的mRNA及蛋白表达显著升高,而在IFN-γ刺激后其表达明显降低。 结论:化纤方能够有效缓解放射性肺纤维化,其机制与上调外周及组织IFN-γ,抑制成纤维细胞活化有关。
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编辑人员丨1周前
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LL-37及其衍生肽促进糖尿病创面愈合的机制
编辑人员丨1周前
目的:探讨LL-37及其衍生肽LL-37R对糖尿病创面愈合的影响。方法:高糖条件下培养小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3和人脐静脉内皮细胞(HUVECs),采用活/死染色及细胞计数试剂盒(CCK-8)检测LL-37和LL-37R对细胞活性的影响,划痕实验和成管实验评价对HUVEC细胞增殖和迁移能力的影响。选用36只雄性SD大鼠制作糖尿病创面模型,随机分为对照组、LL-37组和LL-37R组,每组12只。在背部制作直径2 cm的圆形全层皮肤创面,伤后每2 d分别于皮下注射生理盐水、LL-37、LL-37R,伤后第0、3、7、14、21天拍照,第21天取材进行苏木精-伊红(HE)染色、Masson染色和免疫组织化学染色评估创面愈合情况。采用ANOVA分析和非配对 t检验进行数据分析。 结果:LL-37R能够缓解高糖环境下NIH/3T3细胞和HUVEC细胞的损伤,并且表现出促进HUVEC细胞迁移和成血管的能力。对于大鼠糖尿病创面,在造模后21 d,LL-37组和LL-37R组的平均创面面积占初始创面的比例分别为(31.46±5.51)%、(18.01±4.29)%,均显著小于对照组[(41.10±4.54)%, t=3.01、2.83, P<0.05];HE染色结果显示,LL-37组和LL-37R组的创面表皮厚度分别为(73.06±17.67)、(70.35±4.60) μm,大于对照组[(26.94±11.61) μm, t=2.18、3.48, P<0.05],且LL-37R组基本完成了上皮化过程;Masson染色结果显示,LL-37R处理过后的真皮中胶原纤维比例更高( F=78.61, P<0.01),且排列更加有序和紧密;免疫组织化学染色结果表明,LL-37R组的CD31阳性血管密度为(221.62±18.69)个/mm 2,与对照组[(100.38±11.94)个/mm 2]和LL-37组[(117.95±16.01)个/mm 2]比较,血管形成最为显著( F=17.02, P<0.01),且LL-37R组创面中被CD86标记的炎性巨噬细胞数量[(20.18±5.08)个/mm 2]明显少于LL-37组[(61.82±8.101)个/mm 2]和对照组[(236.00±17.89)个/mm 2, F=95.59, P<0.01]。 结论:LL-37及其衍生肽能够通过促进血管再生、胶原沉积和调节炎症加速糖尿病创面的愈合。
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编辑人员丨1周前
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TLR2下游辐射防护关键miRNA筛选及miR-21功能验证
编辑人员丨1周前
目的:筛选Toll样受体2(Toll-like receptor 2, TLR2)通路下游与辐射防护调控相关的关键miRNA,并探讨miR-21功能。方法:以 60Co γ射线对野生型(wild type, WT)、TLR2 KO小鼠分别进行6.0、7.0、8.0 Gy全身照射,观察小鼠生存情况;通过转录组测序筛选骨髓细胞内TLR2通路下游关键miRNA,并通过QT-PCR验证其表达。过表达/敲低该miRNA后检测其生物学功能。 结果:6.0、7.0、8.0 Gy全身照射后,TLR2 KO小鼠较WT小鼠辐射敏感性增加(χ 2=4.490、13.100、7.928, P<0.05),骨髓移植实验证明TLR2 KO小鼠辐射敏感性增加与照射后骨髓细胞损伤有关(χ 2=4.291, P<0.05)。转录组测序筛选到差异基因55个([log2 Fold Change]>0.95, Q<0.05),其中上调基因28个,下调基因27个;定量PCR实验确定TLR2 KO( t=9.420, P<0.01)与MyD88 KO( t=10.700, P<0.01)小鼠骨髓细胞内miR-21表达下调。PAM3CSK4刺激后小鼠骨髓细胞内白介素6(IL-6)( t=13.790, P<0.05)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)( t=14.280, P<0.05)表达量上调且依赖于TLR2。miR-21过表达可以促进EL4( t=5.951, P<0.05)和NIH/3T3( t=4.786, P<0.05)辐射后细胞活力,抑制WT小鼠( t=4.842, P<0.05)和TLR2 KO小鼠( t=10.520, P<0.05)BMCs辐射后细胞凋亡。miR-21敲低后降低EL4( t=4.815, P<0.05)和NIH/3T3( t=4.042, P<0.05)辐射后细胞活力。 结论:miR-21在TLR2辐射防护进程中具有关键调控作用,其作用机制可能与上调IL-6与TNF-α有关。
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编辑人员丨1周前
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Cu-Fe-Zn合金微丝敷料抗菌性能、生物相容性的实验研究及其对伤口愈合的疗效观察
编辑人员丨1周前
目的:研究Cu-Fe-Zn合金微丝敷料的抗菌性能及体内、体外生物相容性,通过临床应用检测其促创面愈合功效。方法:以Cu-Fe-Zn合金微丝敷料为研究对象,利用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)测定金属离子释放浓度;在体外通过平板计数法评估敷料的综合抗菌性能;将Cu-Fe-Zn合金微丝敷料浸提液分别与表皮细胞(HaCaT)、成纤维细胞(NIH-3T3)共培养后,通过CCK-8试验测定其体外生物相容性;进一步将Cu-Fe-Zn合金微丝敷料应用于糖尿病小鼠创面以检测材料的体内生物相容性。通过前瞻性随机对照试验,选取中南大学湘雅三医院烧伤整形外科收治的50例烧伤、创伤患者,分为观察组25例与对照组25例,观察组行Cu-Fe-Zn合金微丝敷料治疗,对照组应用纳米银抗菌敷料,对比两组患者创面愈合时间和创面治疗效果。结果:ICP-MS检测Cu-Fe-Zn合金微丝敷料的Cu 2+释放浓度为1.3 μg/ml,其具备促进HaCaT、NIH-3T3细胞增殖功效(均 P<0.05)。Cu-Fe-Zn合金微丝敷料对铜绿假单胞菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抗菌率均达到100%。应用Cu-Fe-Zn合金微丝敷料的糖尿病小鼠创面愈合率[(87.39±1.83)%]显著高于对照组[(58.66±3.54)%, P<0.05],创面组织炎症反应较轻且创缘基质完整。经过Cu-Fe-Zn合金微丝敷料治疗的25例患者的创面愈合时间[(23.52±10.02)d]短于对照组患者[(40.84±21.22)d]( t=17.159, P<0.001),且患者的总体治疗有效率(96%)显著高于对照组患者(64%)(χ 2=8.472, P=0.015)。 结论:Cu-Fe-Zn合金微丝敷料具备良好的抗菌性能及生物相容性,作用于伤口具有显著促愈合的治疗效用,在有效促进创面愈合的同时发挥抗感染的效用,有望作为一种新型创面修复敷料。
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编辑人员丨1周前
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增强MRI对胰腺导管腺癌组织渗透性评估价值的实验研究
编辑人员丨1周前
目的:探讨增强MRI对胰腺导管腺癌(PDAC)小鼠模型组织渗透性的评估价值。方法:实验动物为雌性C57BL/6小鼠27只,采用随机数字法将小鼠分为3组,每组9只。将小鼠PDAC细胞(Panc02)与胚胎成纤维细胞(NIH/3T3)以2∶1和1∶1的比例种植于小鼠皮下,构建不同组织渗透性的PDAC小鼠皮下瘤模型,分别为低成纤维细胞组和高成纤维细胞组,单纯Panc02细胞种植模型为对照组。利用组织染色对各组肿瘤α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)阳性表达率、成纤维细胞活化蛋白(FAP)阳性表达率、胶原纤维覆盖率、血管数量以及组织血管长径/短径进行量化评估,利用伊文思蓝(EB)染色的组织切面平均光密度值(AOD)量化组织渗透效率。对小鼠行增强MRI,获得20 min强化程度和20 min强化率。采用单因素方差分析比较各组小鼠肿瘤组织学指标和MRI增强参数的总体差异,指标间相关性均采用Pearson相关分析。以20 min强化率为因变量,α-SMA阳性表达率、胶原纤维覆盖率和血管长径/短径3种组织学指标为自变量,进行多元线性逐步回归分析。结果:3组小鼠肿瘤组织AOD值、α-SMA阳性表达率、FAP阳性表达率、胶原纤维覆盖率、血管长径/短径、20 min强化程度和20 min强化率的总体差异均具有统计学意义( P均<0.001),血管数量总体差异无统计学意义( P=0.650)。小鼠PDAC组织的AOD值与α-SMA阳性表达率、胶原纤维覆盖率、血管长径/短径呈负相关( r=-0.888, P=0.001; r=-0.813, P=0.008; r=-0.915, P<0.001)。20 min强化程度与AOD值呈正相关( r=0.954, P<0.001),20 min强化率与α-SMA阳性表达率、胶原纤维覆盖率、血管长径/短径均呈负相关( r=-0.901, P<0.001; r=-0.837, P=0.005; r=-0.880, P=0.002)。多元线性逐步回归分析结果显示,α-SMA阳性表达率是肿瘤20 min强化率的重要影响因素(R 2=0.813, P=0.001)。 结论:成纤维细胞的种植比例提高可显著降低肿瘤组织渗透效率。增强MRI 20 min肿瘤强化程度与组织渗透效率呈正相关。
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编辑人员丨1周前
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极低频电磁场辐射干扰后小鼠成纤维细胞转录组测序的生物信息学分析
编辑人员丨1周前
目的:通过高通量测序技术分析极低频电磁场(ELF-EMFs)辐射干扰小鼠成纤维细胞后转录组的变化情况,并筛选出可能参与ELF-EMFs调控成纤维细胞生长的相关通路及基因。方法:将小鼠NIH/3T3细胞分为电磁辐射组和正常对照组,电磁辐射组细胞置于0.2 mT、50 Hz的电磁辐射系统中,正常对照组置于同等条件未通电的相同线圈系统中,于细胞培养箱中培养24 h后收集细胞,提取RNA。采用第2代高通量测序技术对2个组进行转录组测序,对筛选的差异基因进行基因功能注释及信号通路数据库分析。筛选出部分高表达基因进行实时荧光定量PCR验证。结果:本次转录组测序共鉴定出17 980个基因,筛选出140个有显著差异的基因,其中上调120个,下调20个。差异基因富集在酶的催化活性、细胞代谢过程、生物调控、生物合成等方面。京都基因与基因组百科全书分析结果显示,差异基因主要涉及55条通路,富集显著的10条通路集中于氨酰基-tRNA的生物合成、血小板活化、神经营养蛋白信号通路、肾素-血管紧张素系统等,与细胞的生物合成密切相关,进一步从中筛选出可能参与细胞辐射后应激的差异基因,包括有丝分裂原激活的蛋白激酶12( MAPK12)、神经营养性酪氨酸激酶受体3型( NTRK3)、2型血管紧张素Ⅱ受体( AGTR2)、血管内皮生长因子( VEGF)等。实时荧光定量PCR结果显示,电磁辐射组MAPK12、NTRK3、AGTR2、VEGF mRNA相对表达量分别为2.389±0.003、2.481±0.350、2.354±0.081和1.559±0.110,明显高于正常对照组的1.011±0.190、1.011±0.180、1.007±0.150、1.008±0.153,差异均有统计学意义( t=12.540、6.309、13.710、3.078,均 P<0.05)。 结论:ELF-EMFs干扰小鼠成纤维细胞后, MAPK12、 NTRK3、 AGTR2、 VEGF等基因表达明显上调,主要涉及神经营养蛋白信号通路、肾素-血管紧张素系统等通路,这部分基因及通路可能是ELF-EMFs影响成纤维细胞的主要途径。
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编辑人员丨1周前
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蕲艾挥发油通过PI3K/Akt信号通路促进感染性皮肤创口愈合的机制研究
编辑人员丨3周前
目的 观察蕲艾(Artemisia argyi Levl.et Van.var.argyi cv.Qiai)挥发油对感染性皮肤创口愈合的作用并探索其机制.方法 将 30 只雄性昆明小鼠随机分为 5 组:空白对照组、膜剂基质组、阳性对照组(3 mL·kg-1 莫匹罗星软膏)、低剂量膜剂组(每贴含 7.3 mg蕲艾挥发油)和高剂量膜剂组(每贴含 57.6 mg蕲艾挥发油).小鼠麻醉后在背部剪一直径 10 mm的全层皮肤圆形伤口,止血后在创口处涂抹 100 μL金黄色葡萄球菌菌液(1.5×108 CFU·mL-1),各组采取前述方式处理伤口,每日换药并观察皮肤创面愈合情况.术后12 d处死小鼠取创面皮肤做HE和Masson染色,观察病理学特征;利用qPCR和Western blot检测创口皮肤组织愈合相关因子Col1a1、Col3a1、Fn1、VEGFA及炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA和PI3K/Akt信号通路蛋白的表达.在小鼠胚胎成纤维细胞NIH-3T3 利用PI3K抑制剂PI-103 探究蕲艾挥发油对PI3K/Akt信号通路活性的潜在影响.结果 动物实验表明,与空白对照组相比,低剂量和高剂量膜剂组的相对创口面积显著降低;创口组织的炎性细胞浸润减少,胶原纤维表达增加;qPCR显示,与空白对照组相比,低剂量和高剂量膜剂组的VEGFA、Col3a1 和Col1a1 mRNA的表达显著上升,炎症因子IL-1β和TNF-α mRNA表达降低;Western blot结果表明,与空白对照组相比,低剂量和高剂量给药组的p-PI3K/PI3K及p-Akt/Akt比值均显著上升并呈现剂量依赖性.细胞实验结果也证实,蕲艾挥发油对NIH-3T3 细胞的PI3K/Akt信号通路存在调控作用.结论 蕲艾挥发油可促进创口愈合,其机制可能与激活PI3K/Akt信号通路,抑制炎症因子表达及促进胶原表达有关.
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编辑人员丨3周前
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三种饮用水对NIH小鼠血液指标的影响
编辑人员丨1个月前
目的 探讨三种饮用水对 NIH小鼠血液指标的影响.方法 将 54 只 NIH小鼠随机分为 3 组,分别饮用高压灭菌水、高压酸化水和无菌水袋水(膜过滤水),在实验 30、60 和 90 d分别取血进行血常规和血生化检测,并取肝组织进行组织病理学检查,探讨三种饮用水对小鼠健康状态的影响.结果 60 d水袋水组白蛋白(ALB)显著高于高压灭菌水组(P<0.05),酸化水组总蛋白(TP)极显著高于高压灭菌水组(P<0.01),其他生化和血常规指标组间无统计学意义(P>0.05),肝组织病理学结果显示各组小鼠肝组织未发现病变,为正常肝组织.结论 三种饮用水对NIH小鼠健康状态无明显影响.
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编辑人员丨1个月前
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香烟烟雾提取物对破骨细胞体积及整合素αvβ3基因表达的影响
编辑人员丨1个月前
目的 探讨香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)对破骨细胞体积及整合素αvβ3 基因表达的影响.方法 首先制作CSE溶液,实验采用 7周龄C57BL/6J小鼠骨髓单个核细胞加入M-CSF和RANKL诱导生成破骨细胞,将浓度为 5%的CSE加入实验组破骨细胞作用 3 d,对照组不加入CSE.通过Trap染色识别对照组和实验组破骨细胞并于光镜下采图;通过甲苯胺蓝染色识别两组破骨细胞在骨片上形成的骨陷窝并于光镜下采图,均用NIH imageJ计算数量及面积.用实时荧光定量聚合酶链反应,以GAPDH作为内参,最后通过2-ΔΔCT计算,以检测Trap、CTR以及整合素αvβ3 mRNA表达水平.通过Western blot检测整合素αvβ3蛋白表达.结果 破骨细胞表面积及细胞核数量的计量表明,实验组诱导形成的破骨细胞显著大于对照组(P<0.01).实验组骨片上吸收陷窝数量及面积明显多于对照组(P<0.05),CSE处理组的TRAP mRNA水平为 1.16±0.13,明显高于对照组(P<0.05),CTRmRNA水平为 0.38±0.04,明显低于对照组(P<0.01).CSE处理组的整合素αvβ3 mRNA水平为 1.75±0.05,显著高于对照组(P<0.01),蛋白质印迹分析结果也明显高于对照组(P<0.05).结论 CSE能显著增加破骨细胞的体积并上调整合素αvβ3的基因表达,并可能对骨吸收有促进作用.
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编辑人员丨1个月前
