目的:制备由聚乳酸－羟基乙酸共聚物(PLGA)包载全氟戊烷(PFP)与化疗药替莫唑胺(TMZ)的液气相变型纳米粒(TMZ/PFP/PLGA NPs)，联合低强度聚焦超声(LIFU)辐照，探讨其体外超声显影能力及对人胶质瘤细胞的体外干预效果。方法:采用复乳法制备TMZ/PFP/PLGA NPs，检测其基本理化性质及药物包载能力，观察纳米粒体外超声显影效果；CCK-8法检测纳米粒的体外细胞毒性及与LIFU协同干预对胶质瘤细胞存活率的影响；Western blot检测协同干预后细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2、bax及caspase-3的表达水平变化。结果:在透射电镜下，TMZ/PFP/PLGA NPs呈形态规则的类圆形核壳结构，粒径(137.9±63.31) nm，对TMZ的包封率为(83.01±5.57)%，载药量(3.19±0.22)%；纳米粒与U251细胞共孵育24 h后细胞存活率仍可保持在70%以上，在同时施加LIFU辐照的协同作用下，可使细胞凋亡加速，细胞存活率明显下降；Western blot检测结果显示，协同干预可明显下调细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2的表达，同时明显上调bax蛋白与caspase-3蛋白的表达(均 P<0.05)。 结论:TMZ/PFP/PLGA NPs本身具有良好的基本理化性质，在高效包载化疗药物替莫唑胺的同时，具有较低的体外细胞毒性，在LIFU辐照下的协同干预可明显加速U251胶质瘤细胞凋亡，具有良好的应用前景。

目的 制备一种维替泊芬聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米粒(PLGA-VP NPs)并对其对小鼠肝细胞癌细胞Hepa 1-6的抑制作用和体内安全性进行验证.方法 用乳化蒸发法制备PLGA-VP NPs,用动态光散射(DLS)检测PLGA-VP NPs的粒径和电位.将Hepa 1-6细胞分为对照组(不做任何处理)、空载PLGA NPs组(加入空载PLGA NPs)和PLGA-VP NPs组(加入PLGA-VP NPs).用阿尔玛蓝法检测细胞增殖情况,用流式细胞术检测细胞对PLGA-VP NPs的摄取情况及细胞凋亡率,用蛋白质印迹法检测细胞程序性死亡-配体1(PD-L1)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平.将C57小鼠分为正常组(尾静脉注射磷酸缓冲盐溶液100 μL)和 PLGA-VP NPs 组(尾静脉注射 2 μg·μL-1 PLGA-VP NPs 100 μL).用苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠各主要器官.结果 PLGA-VP NPs的粒径约为(124.00±1.80)nm,电位约为(-38.00±1.40)mV.PLGA-VP NPs质量浓度为0、0.5、1.0、2.0、2.5、3.0、4.0、5.0 mg·mL-1时,细胞存活率分别为(100.00±2.02)％、(87.33±3.74)％、(55.86±9.71)％、(30.32±6.30)％、(26.03±2.60)％、(23.81±2.09)％、(23.63±1.29)％和(19.75±3.32)％,PLGA-VP NPs 对 Hepa 1-6 的半抑制浓度为 0.87 mg·mL-1.0、2、4、8、12、24 h 时 Hepa 1-6 对 PLGA-VP NPs 的摄取率分别为 0、(3.27±0.10)％、(7.32±1.36)％、(27.03±1.11)％、(44.97±1.43)％和(68.37±0.94)％.对照组、空载PLGA NPs组、PLGA-VP NPs组的细胞凋亡率分别为(9.26±1.42)％、(11.08±1.16)％和(27.27±1.12)％,PD-L1 蛋白相对表达水平分别为1.00±0.01、1.00±0.08和0.21±0.06,Bcl-2蛋白相对表达水平分别为1.20±0.02、0.43±0.01和0.54±0.07,Bax蛋白相对表达水平分别为0.35±0.02、1.09±0.07 和 1.30±0.06.PLGA-VP NPs 组的上述指标与对照组及空载PLGA NPs组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).HE染色结果显示,与正常组比较,PLGA-VP NPs组小鼠主要器官未见明显异常.结论 成功合成了 PLGA-VP NPs,该纳米粒对Hepa 1-6肝癌细胞有抑制作用,可降低PD-L1蛋白的表达,且体内安全性良好.

目的:构建基于聚乳酸—羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米粒子的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)药物递送系统,研究其对心肌缺血损伤的作用及机制.方法:改进现有EGCG-PLGA纳米粒子(E-P-NPs)制备工艺,以透射电镜观察所制备的E-P-NPs形态,并测量聚合物分散性指数、Zeta电位、纳米粒径和载药率,进行纳米粒表征;以荧光标记法观察心肌细胞对纳米粒子的摄取情况.体外建立心肌细胞缺氧模型,体内建立小鼠急性心肌缺血损伤模型,检测不同浓度E-P-NPs对细胞活力、细胞凋亡、心肌肌钙蛋白I(cTn-I)水平及Bcl-2、Caspase9、Bax表达的影响.结果:E-P-NPs呈圆球形,多分散性指数(PDI)为0.285,平均粒径193.5 nm,电位-28.7 mV,载药率9.23%,可被心肌细胞摄取.体内、外实验研究均表明,E-P-NPs可剂量依赖性地增强心肌细胞活力,降低cTn-I水平,降低凋亡率,上调Bcl-2蛋白表达,下调Caspase9、Bax蛋白表达,抑制细胞凋亡;E-P-NPs对缺血心肌的保护作用优于EGCG.结论:E-P-NPs粒径分布较集中,均一性较好,可通过抑制凋亡减轻心肌缺血损伤,且能使EGCG更好地发挥药效.

目的 制备叶酸修饰的红细胞膜伪装的载青蒿素(ART)多功能靶向仿生纳米粒,并应用光声成像(PAI)评价其联合低强度聚焦超声(LIFU)治疗小鼠乳腺癌的价值.方法 选用聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)作为纳米粒的载体材料,以全氟己烷(PFH)、Fe3O4、ART 作为纳米粒的内核,再以红细胞膜(EM)包覆该纳米粒,最后EM表面经叶酸(FA)修饰为靶向分子,制备多功能靶向仿生纳米粒(PFH/ART@PLGA/Fe3O4-eFA).激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察纳米粒的FA连靶率.应用PAI观察纳米粒在小鼠乳腺癌组织内的靶向聚集程度.电感耦合等离子体发射光谱(ICP)检测纳米粒在血液中的代谢情况.纳米粒联合LIFU协同治疗肿瘤,并记录肿瘤大小变化.结果 LSCM分析显示纳米粒mander重叠系数为 83.7%.PAI结果显示合成的PFH/ART@PLGA/Fe3O4-eFA纳米粒在体外及体内均有良好的光学成像效果.PFH/ART@PLGA/Fe3O4-eFA组小鼠乳腺癌组织内光声信号强度显著高于PFH/ART@PLGA/Fe3O4 组.ICP结果显示PFH/ART@PLGA/Fe3O4-eFA组血液中Fe2+浓度显著高于PFH/ART@PLGA/Fe3O4 组;PFH/ART@PLGA/Fe3O4-eFA组小鼠肝脏及脾脏内的Fe2+显著低于PFH/ART@PLGA/Fe3O4 组;且PFH/ART@PLGA/Fe3O4-eFA组小鼠乳腺癌组织内的Fe2+显著高于PFH/ART@PLGA/Fe3O4 组.体内治疗结果显示,PFH/ART@PLGA/Fe3O4-eFA组小鼠乳腺癌体积显著小于其他各组.结论 本研究成功制备包封PFH、Fe3O4、ART的多功能靶向仿生纳米粒,具有良好的体内外光声成像效果,初步证实可用于小鼠乳腺癌的靶向诊断,联合LIFU可以协同治疗小鼠乳腺癌.

目的 构建经iRGD修饰的胡桃醌(juglone,Jug)-紫杉醇(paclitaxel,PTX)靶向纳米粒子(nanoparticles,NPs),并评价其对人骨肉瘤细胞Saos-2 的抑制作用.方法 通过乳化法制备iRGD-PLGA-(Jug,PTX)-NPs,并评价其材料特性、载药能力和体外释放结果.利用荧光显微镜观察iRGD-PLGA-(Jug,PTX)-NPs体外细胞摄取情况,再通过MTT法比较各组对Saos-2细胞的增殖抑制作用.结果 ①在Jug:PTX=0.1 mg:0.1 mg,iRGD-PLGA=1 mg条件下,成功制备iRGD-PLGA-(Jug,PTX)-NPs.②透射电镜下可见,纳米粒子为大小均一的类球形,粒径为233.3 nm,Jug载药率为8.68%,包封率为31.87%,PTX载药率为8.98%,包封率为 30.18%;③体外药物释放显示,前 24h 中为突释,随后为缓释,96 h 后 Jug 累积释放为(72.108±1.243)%,PTX为(69.980±3.626)%;④细胞摄取实验显示,iRGD修饰的纳米粒子较无修饰粒子进入细胞更多;⑤MTT结果显示,Jug和PTX均可抑制Saos-2 细胞增殖,且呈现出剂量依赖性.药物处理 24h后,裸药组抑制率明显高于其他组,而在 48h后,iRGD-PLGA-(Jug,PTX)-NPs抑制率高于裸药组.结论 iRGD-PLGA-(Jug,PTX)-NPs稳定性较好,包载药物表现出先突释后缓释的现象,iRGD修饰可增强肿瘤靶向穿透性,提升疗效.

目的 利用聚鸟氨酸和岩藻聚糖通过层层自组装技术对PLGA纳米粒进行表面修饰.方法 首先采用超声乳化溶剂挥发法制备负载阿霉素的PLGA纳米粒,其中PLGA的二氯甲烷溶液为油相,阿霉素和牛血清白蛋白的水溶液为水相.其次利用静电作用在纳米粒表面层层自组装聚鸟氨酸和岩藻聚糖.最后通过共价键连接核酸适配体AS1411,赋予其靶向功能.结果 石英微晶天平电压信号的降低以及Zeta电位正负的翻转均证实聚电解质被成功组装.经透射电子显微镜、核磁共振氢谱、红外光谱、琼脂糖凝胶电泳等检测手段证实AS1411被成功修饰.修饰后的PLGA纳米粒的表面,其载药量为(2.32±0.04)％,包封率为(15.89±0.31)％,28 d的累积释放率约为55％.结论 聚鸟氨酸和岩藻聚糖通过层层自组装技术实现了对PLGA纳米粒的表面修饰,改变了其理化性质,且可有效地缓释药物释放.

目的 制备叶酸修饰的克班宁聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸共聚物纳米粒(folic acid modified crebanine polyethylene glycol-polylactic acid hydroxyacetic acid copolymer nanoparticles,FA-Cre@PEG-PLGA NPs),并考察其体外释放及抗肿瘤活性.方法 以克班宁为模型药,用PEG-PLGA共聚物、叶酸等为材料,通过超声乳化-溶剂挥发法制备FA-Cre@PEG-PLGA NPs,采用激光粒度仪、透射电子显微镜和荧光显微镜对FA-Cre@PEG-PLGA NPs的粒径、ξ电位及形态进行表征,紫外光谱法测定并计算克班宁的包封率和载药量,比较FA-Cre@PEG-PLGA NPs和克班宁原料药72 h的体外释放规律,通过溶血实验考察二者生物学特性,CCK-8实验考察两者对正常肝L02细胞存活率的影响及对肝癌Bel-7402细胞体外增殖抑制作用.细胞划痕法考察纳米粒和原料药对肝癌Bel-7402细胞迁移能力的影响.荧光显微镜观察纳米粒在不同时间点对肝癌Bel-7402细胞的摄取情况.结果 FA-Cre@PEG-PLGA NPs 的平均粒径为(247.67+2.49)nm,多分散指数(polydispersity index,PDI)为0.139±0.027,ξ电位为(-9.40±0.54)mV,透射电子显微镜下呈圆球状核壳结构,荧光显微镜下观察纳米粒,其气化后明场呈蓝色光点、暗场呈红色光点.FA-Cre@PEG-PLGA NPs中克班宁的包封率为83.78％,载药量为67.78％.FA-Cre@PEG-PLGA NPs与克班宁原料药体外释放均符合Ritger-Peppas模型;安全性评价结果显示,FA-Cre@PEG-PLGA NPs相比于克班宁原料药在50～300 μg/mL内具有良好的生物相容性.FA-Cre@PEG-PLGA NPs对人正常肝L02细胞毒性较低,相比于克班宁原料药有一定的安全性.体外增殖抑制结果显示,两者对Bel-7402肿瘤细胞的增殖抑制率均呈现出剂量依赖性和时间依赖性,且FA-Cre@PEG-PLGA NPs联合超声辐照后对Bel-7402肝癌细胞具有更强的杀伤作用.细胞划痕实验表明,克班宁原料药、FA-Cre@PEG-PLGA NPs对Bel-7402肿瘤细胞迁移均有抑制作用,呈剂量依赖性,且纳米粒联合超声抑制细胞迁移效果更显著.细胞摄取实验表明,相同时间下超声联合纳米粒能有效增强肿瘤细胞的摄取.结论 成功制得FA-Cre@PEG-PLGA NPs,而且体外具有良好的缓释效果和抑瘤作用,为FA-Cre@PEG-PLGA NPs应用于肝癌的治疗研究提供实验依据.

该研究以PLGA为载体材料,采用溶剂扩散法制备了冰片修饰的卡马西平(1)纳米粒,并考察其在小鼠体内的分布情况.首先,采用Box-Behnken设计结合响应面法,以泊洛沙姆188浓度、PLGA用量、油-水相体积比、药脂质量比为自变量,以包封率、粒径为因变量进行处方优化.体外表征结果表明,照优化处方制得的冰片修饰的1纳米粒平均粒径为90～100 nm,包封率和载药量约为72％和6.7％.小鼠尾静脉注射给予自制冰片修饰的1纳米粒后,考察1在小鼠体内的分布,尤其是脑靶向性.结果表明,冰片修饰的1纳米粒显著延长了1的体内滞留时间,且冰片修饰可促进1纳米粒跨越血脑屏障,显示出冰片修饰的1纳米粒具有治疗癫痫的潜力.

目的:探讨转铁蛋白受体单克隆抗体(TfR mAb)纳米载药系统靶向治疗急性白血病的效果及其潜在的抗肿瘤机制.方法:合成纳米载药粒TfR mAb-聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)-聚L-赖氨酸(PLL)-聚乙二醇(PEG)-柔红霉素(DNR).急性髓性白血病细胞株HL60细胞经药物干预后,倒置荧光显微镜下观察细胞内DNR的累积;流式细胞技术(FCM)检测HL60细胞内DNR浓度及细胞凋 亡率;Western blot测定凋亡相关蛋白Cleaved-caspase 3的表达量.结果:单药DNR组和TfR mAb-PLGA-PLL-PEG-DNR组HL60细胞内可见DNR自发荧光累积,且TfR mAb-PLGA-PLL-PEG-DNR组细胞内DNR浓度高于单药DNR组(P＜0.05);FCM 检测结果显示,TfR mAb-PLGA-PLL-PEG-DNR组细胞凋亡率高于单药DNR组(P＜0.05);Western blot检测结果证实,TfR mAb-PLGA-PLL-PEG-DNR组凋亡相关蛋白Cleaved-caspase 3表达量明显高于单药DNR组(P＜0.05).结论:TfR mAb-PLGA-PLL-PEG纳米载药系统将化疗药物靶向作用于肿瘤细胞HL60,可通过凋亡途径增加药物的抗肿瘤能力.

目的 优化牛血清白蛋白修饰紫檀芪聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA]纳米粒(bovine serum albumin-modified pterostilbene PLGA nanoparticles,BSA-Pte-PLGA-NPs)处方,进行体外及体内评价.方法 纳米沉淀法制备BSA-Pte-PLGA-NPs,以包封率、载药量和粒径大小为评价指标,单因素结合Box-Behnken效应面设计法筛选BSA-Pte-PLGA-NPs最优处方.采用乳糖作为冻干保护剂将BSA-Pte-PLGA-NPs制备成冻干粉,并进行表征.SD大鼠分为紫檀茋原料药组、物理混合物组和BSA-Pte-PLGA-NPs组,按40 mg/kg(以紫檀芪计)剂量ig给药,测定血药浓度,计算主要药动学参数及相对生物利用度.结果 BSA-Pte-PLGA-NPs最佳处方为BSA质量浓度为19.0 mg/mL、载药比为8.8∶1、水相与有机相体积比为 8∶1.BSA-Pte-PLGA-NPs 包封率为(86.69±1.81)％,载药量为(9.02±0.37)％,粒径为(176.10±8.12)nm.紫檀芪在BSA-Pte-PLGA-NPs冻干粉中以无定型形式存在.BSA-Pte-PLGA-NPs在pH 1.2或pH 7.4磷酸盐缓冲液中体外释药过程均与Weibull模型拟合度最高.药动学结果显示,BSA-Pte-PLGA-NPs达峰时间(tmax)延后至(2.11±0.60)h,半衰期(t1/2)延长至(4.82±0.89)h,相对口服吸收生物利用度提高至3.24倍.结论 BSA-Pte-PLGA-NPs可显著促进紫檀芪口服吸收,值得进一步研究.