目的:探讨根皮素调节CC趋化因子配体2(CCL2)-CC趋化因子受体2(CCR2)信号轴对肺癌细胞恶性进展的影响.方法:将A549细胞分为对照组(未进行任何处理的A549细胞)、低剂量根皮素组(500μmoL/L根皮素处理A549细胞)、中剂量根皮素组(750μmoL/L根皮素处理A549细胞)、高剂量根皮素组(1000μmoL/L根皮素处理A549细胞)、高剂量根皮素+GW0742组(1000μmoL/L根皮素与1.OμmoL/L CCL2-CCR2信号通路激活剂GW0742处理 A549细胞).CCK-8法和流式细胞术分别检测A549细胞增殖及凋亡;Transwell法检测细胞迁移和侵袭;Western blot测定CCL2-CCR2信号轴相关蛋白表达.结果:低、中、高剂量根皮素组细胞OD450值、迁移及侵袭数量、CCL2、CCR2蛋白表达均低于对照组(P＜0.05),细胞凋亡率高于对照组(P＜0.05),且呈剂量依赖性.高剂量根皮素+GW0742组细胞OD450值、迁移及侵袭数量、CCL2、CCR2蛋白表达均 高于高剂量根皮素组(P＜0.05),细胞凋亡率低于对照组(P＜0.05).结论:根皮素可能通过调节CCL2-CCR2信号轴介导的免疫反应进而抑制肺癌细胞的恶性进展.

目的:观察根皮素对白细胞介素(IL)-1β诱导的Graves眼病(GO)患者眼眶成纤维细胞(OFs)中炎症反应和氧化应激的抑制作用及其机制。方法:收集2019年1月至2020年12月于河南省立眼科医院确诊为非活动期GO并行眼眶减压术的患者6例6眼的眼眶脂肪及结缔组织。采用组织块培养法分离原代OFs并传代，细胞免疫荧光法鉴定OFs。将细胞分为对照组、IL-1β诱导组以及不同浓度根皮素处理组。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测25、50、75、100和200 μmol/L根皮素处理24和48 h后OFs的活性。采用IL-1β诱导OFs模拟GO体外炎症环境。采用荧光探针H 2DCF-DA法检测正常对照组、IL-1β诱导组、50 μmol/L根皮素组和100 μmol/L根皮素组细胞内活性氧簇(ROS)水平。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测正常对照组、IL-1β诱导组以及25、50、75、100 μmol/L根皮素组细胞培养上清液中促炎细胞因子IL-6、IL-8和MCP-1质量浓度。采用Western blot法检测正常对照组、IL-1β诱导组及100 μmol/L根皮素组细胞内血红素加氧酶1(HO-1)、核因子NF-E2相关因子Nrf2和MAPK信号通路蛋白P38、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)及其磷酸化蛋白表达。 结果:原代分离培养的OFs表达vimentin，证明为间充质来源，desimin、S-100、cytokeratin-18表达阴性，鉴定为成纤维细胞。CCK-8结果显示，25、50、75和100 μmol/L根皮素组细胞处理后24和48 h吸光度( A)值与对照组比较，差异均无统计学意义(均 P>0.05)。50 μmol/L根皮素组和100 μmol/L根皮素组细胞内ROS水平分别为21.95±1.71和10.01±1.03，明显低于IL-1β诱导组的39.27±4.01，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。ELISA结果显示，25 μmol/L、50 μmol/L、75 μmol/L和100 μmol/L根皮素组细胞培养上清液中IL-6质量浓度分别为(4 544.25±572.98)、(1 000.25±133.96)、(724.25±98.63)和(519.50±118.02)pg/ml，均显著低于IL-1β诱导组的(7 581.75±565.93)pg/ml，差异均有统计学意义(均 P<0.01)；50 μmol/L、75 μmol/L和100 μmol/L根皮素组细胞培养上清液中IL-8质量浓度分别为(3 679.50±676.76)、(2 143.75±616.20)和(1 174.75±284.18)pg/ml，显著低于IL-1β诱导组的(8 411.00±939.67)pg/ml，差异均有统计学意义(均 P<0.01)；50 μmol/L、75 μmol/L和100 μmol/L根皮素组细胞培养上清液中MCP-1质量浓度分别为(3 783.25±610.24)、(1 565.75±457.89)和(745.75±227.01)pg/ml，显著低于IL-1β诱导组的(5 533.00±602.87)pg/ml，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。100 μmol/L根皮素组HO-1、Nrf2蛋白相对表达量明显高于IL-1β诱导组，p-P38、p-ERK、p-JNK蛋白相对表达量明显低于IL-1β诱导组，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。 结论:根皮素可降低IL-1β诱导的GO患者OFs细胞内氧化应激水平，抑制促炎细胞因子产生，其作用机制与Nrf2/HO-1的激活及MAPK信号通路的抑制相关。

目的 探讨日本落叶松根际土壤水浸提液对林下山参的化感作用,为提高林下山参道地药材的品质以及规范化栽培与选址提供参考.方法 研究了3种不同浓度(0.25、0.05、0.01 g·mL-1)的日本落叶松根际土壤水浸提液对林下山参种子萌发(发芽率、发芽势、发芽指数)、3年生林下山参显微性状(主根木质部、韧皮部、周皮及皮层)、人参皂苷含量[人参皂苷-Rg1、-Re、-Rf、-Rb1、-Rg2、-Rc、-Rb2、-Rb3、-Rd以及原人参三醇型人参皂苷(PPT)、原人参二醇型人参皂苷(PPD)和9种人参皂苷总量]的影响,结合液质联用技术对化感物质进行分析,并查阅相关文献对化感物质进行筛选.结果 日本落叶松根际土壤水浸提液对林下山参的发芽指标有显著化感抑制作用,且随浓度增加抑制作用增强;化感作用会导致林下山参主根发生腐烂病变、皮层木栓化程度增强;化感作用对人参皂苷含量的积累具有显著促进作用.通过结果分析结合文献查阅,认为根皮素等5种物质可能是日本落叶松对林下山参作用的化感物质.结论 结合上述研究结果,考虑到林下山参苗成活率、药材性状、劳动力成本、农药残留等因素,不建议在日本落叶松纯林下生产高品质林下山参.

木姜叶柯Lithocarpus litseifolius(Hance)Chun.又名多穗石柯Lithocarpus polystachyus Rehd.,俗称甜茶,属于药食同源中药,集药、茶、食、糖多种用途于一体.木姜叶柯富含三叶苷、根皮苷、根皮素等二氢查尔酮类成分.本文综述了木姜叶柯及其主要成分三叶苷在调节糖脂代谢、抗炎、抗衰老与抗氧化应激、神经保护和保肝等药理作用方面的国内外研究进展,以期为甜茶木姜叶柯的后续研究与综合开发利用提供依据.

目的:建立了俄色叶(变叶海棠)配方颗粒的最佳提取工艺条件.方法:采用高效液相色谱法同时测定俄色叶(变叶海棠)中的绿原酸、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、根皮苷、槲皮素、根皮素的含量.在单因素试验的基础上,以浸泡时间、料液比、提取时间、提取次数为考察因素,上述7 种成分含量、总黄酮、出膏率的综合评分为考察指标,采用Box-Behnken响应面法优化俄色叶(变叶海棠)配方颗粒的提取工艺.结果:俄色叶(变叶海棠)配方颗粒的最佳提取工艺为俄色叶饮片加水煎煮 2 次,第一次加15 倍量水,浸泡30 min,煎煮45 min;第二次加13 倍量水,煎煮45 min,滤过,合并煎液,即得.经过3 次实验验证,所得平均综合评分为0.91(RSD =0%,n =3),与预测综合评分(0.938)的相对误差较小(3.08%)结论:Box-Behnken响应面法结合多指标综合评分法可用于俄色叶(变叶海棠)配方颗粒提取工艺优化,且所得最佳提取工艺稳定、简单、重现性好,可为俄色叶(变叶海棠)配方颗粒的制备及工业化大生产提供基础.

红花作为传统的活血化瘀中药,具有抗肿瘤、抗炎、免疫调节等药理活性.黄酮糖苷是红花植物的主要生物活性组分,糖基转移酶作为活性糖苷化合物生物合成的下游后修饰酶,具有重要的研究意义.该研究基于红花转录组数据分析,挖掘到一条糖基转移酶基因CtUGT49,对其进行了系统的生物信息学分析和酶学性质考察.该基因开放阅读框(ORF)长度为1 416 bp,编码 471 个氨基酸残基,相对分子质量约为 52 kDa.系统进化分析表明,该糖基转移酶属于UGT73 家族.体外酶促结果显示,CtUGT49 可催化柚皮素查尔酮生成樱桃苷和南酸枣苷;催化根皮素生成的主产物为根皮苷和三叶苷,并且具有良好的底物宽泛性.通过蛋白异源表达与纯化得到较为纯净的重组蛋白CtUGT49 后,进行CtUGT49 催化柚皮素查尔酮的酶学性质考察.结果显示,CtUGT49 催化反应的最适pH为7.0,最适温度为37℃,反应8 h后,底物转化率达到最高.采用米氏方程计算CtUGT49 的酶活常数Km=209.90 μmol·L-1,kcat =48.36 s-1.该研究发现的新颖糖基转移酶CtUGT49 对于丰富糖基化工具酶库具有重要意义,且能为进一步解析红花黄酮糖苷的糖基化过程奠定基础.

目的 制备根皮素前体脂质体,并考察其体内药动学.方法 载体沉积法制备根皮素前体脂质体.以磷脂与胆固醇比例、脂(磷脂+胆固醇)药比、载(乳糖)脂比为影响因素,包封率为评价指标,Box-Behnken响应面法优化处方,测定体外释药、稳定性,进行晶型分析.12 只大鼠随机分为 2 组,分别灌胃给予根皮素及其前体脂质体的PBS缓冲液(40 mg/kg),于不同时间点采血,HPLC法测定根皮素血药浓度,计算主要药动学参数.结果 最佳处方为根皮素用量 20 mg,磷脂与胆固醇比例 4.8 ∶ 1,脂药比 16.5 ∶ 1,载脂比 4.2 ∶ 1.所得前体脂质体呈球形或椭圆形,平均包封率为 83.06%,粒径为 216.84 nm,Zeta电位为-22.76 mV.原料药以无定形状态存在于前体脂质体中.前体脂质体在模拟胃液、模拟肠液中的累积释放度明显高于原料药,在 90d内稳定性良好.与原料药比较,前体脂质体tmax缩短(P<0.05),Cmax、AUC0～t、AUC0～∞升高(P<0.01),相对生物利用度增加至 2.44 倍.结论 前体脂质体可促进根皮素体外释放、体内吸收.

目的:探讨根皮素对神经酰胺诱导小鼠神经元parthanatos的影响.方法:分离培养C57BL/6J胎鼠原代皮层神经元,分为对照组、神经酰胺组、根皮素组和根皮素+神经酰胺组.神经酰胺组和根皮素组分别用终浓度为20 μmol/L的神经酰胺和根皮素处理24 h;根皮素+神经酰胺组先用终浓度为20 μmol/L的根皮素处理24h后,再用终浓度为20 μmol/L的神经酰胺处理24 h;对照组用等体积的DMSO处理.采用CCK-8 检测神经元活力,Hoechst33342/PI双染检测神经元的死亡,DCFH-DA探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,Western blot检测多腺苷二磷酸核糖(PAR)聚合物和DNA损伤标志物γH2AX表达水平,彗星实验检测DNA损伤,细胞免疫荧光法检测细胞凋亡诱导因子(AIF)核转位.结果:神经酰胺处理后,神经元活力降低,神经元死亡率和ROS水平升高;根皮素+神经酰胺处理后,神经元活力升高,神经元死亡率和ROS水平降低(P<0.05);神经酰胺处理后,γH2AX蛋白表达水平升高,神经元拖尾长度和拖尾中的DNA百分比升高;根皮素+神经酰胺处理后,γH2AX蛋白表达水平降低,神经元拖尾长度和拖尾中的DNA百分比降低(P<0.05).神经酰胺处理后,PAR蛋白表达水平升高,AIF发生核转位;根皮素+神经酰胺处理后,PAR蛋白表达水平降低,AIF核转位受到抑制(P<0.05).结论:根皮素可能通过抑制氧化应激,进而抑制神经酰胺诱导的神经元发生parthanatos.

目的 探究根皮素对结肠癌 SW480 细胞增殖、凋亡及 Wnt/β-catenin 信号通路的影响.方法 设置对照组、低浓度组(25 μmol/L根皮素)、中浓度组(50 μmol/L根皮素)、高浓度组(100 μmol/L根皮素)、高浓度+LiCl组(100 μmol/L根皮素+20 mmol/L Wnt激活剂),MTT法检测SW480 细胞活力;克隆形成实验检测SW480 细胞增殖情况;流式细胞术检测SW480 细胞凋亡情况;West-ern blotting检测 SW480 细胞中增殖、凋亡及通路相关蛋白表达情况.结果 相较于对照组,低浓度组、中浓度组、高浓度组 SW480细胞存活率、c-Myc、Cyclin D1、β-catenin、p-GSK-3β/GSK-3β水平显著降低,克隆细胞数减少而细胞凋亡率、Caspase-3、Bax表达水平显著提高(P＜0.05),呈剂量依赖性;与高浓度组相比,高浓度+LiCl组细胞存活率、c-Myc、Cyclin D1、β-catenin、p-GSK-3β/GSK-3β 水平显著提高,克隆细胞数增加而细胞凋亡率、Caspase-3、Bax表达水平显著降低(P＜0.05).结论 根皮素对 SW480 细胞增殖的抑制及凋亡的促进可能与抑制 Wnt/β-catenin信号通路有关.

目的 研究根皮素在不同条件下的稳定性.方法 采用经典恒温法考察根皮素在不同pH值水溶液中的稳定性以及抗氧剂、强酸、强碱、强光、强氧化和高温条件下对其稳定性的影响,并研究根皮素在常温条件下,在不同溶剂和pH值缓冲液中的最大溶解度,用反相高效液相色谱法测定其含量.结果 根皮素在碱性、中性和强氧化性条件下不稳定,在酸性环境、强光、高温条件下稳定.不同的抗氧化剂对其稳定性具有一定的保护作用.结论 根皮素在酸性环境下比较稳定,在溶液0.1 mol·L-1 HCl,pH值3.0,pH值4.0,水,pH值5.0,pH值6.0,30mL·L-1H2O2,pH值7.0缓冲液中稳定性依次降低,对于根皮素及其相关产品的研发具有重要意义,在实际应用中应加以考虑.