目的:评价不同浓度罗哌卡因对肺癌细胞生长和迁移能力的影响。方法:人肺腺癌细胞株A549细胞和人肺鳞癌细胞株H520细胞，采用随机数字表法分别分成4组( n＝24)：对照组(C组)和不同浓度罗哌卡因组(Ⅰ～Ⅲ组)。C组正常培养，Ⅰ～Ⅲ组分别加入罗哌卡因3、5和7 mmol/L进行处理。分别于处理24 h(T 1)、48 h(T 2)和72 h(T 3)时，采用CCK-8法测定细胞存活率；于T 1时采用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况；采用Western blot法检测细胞周期素D1(Cyclin D1)、细胞周期调节蛋白依赖性激酶4(CDK4)、cleaved多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)和cleaved caspase-3的表达；采用划痕实验检测细胞迁移距离；分光光度法检测RhoA和Rac1活性。 结果:C组、Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组T 1～3时A549和H520细胞存活率依次降低，G0/G1期比例和凋亡比例依次增加，T 1时Cyclin D1和CDK4表达依次下调，cleaved PARP-1和cleaved caspase-3表达依次上调，细胞迁移距离、RhoA和Rac1活性依次降低( P<0.05)。 结论:罗哌卡因可浓度依赖性地抑制肺癌细胞生长和迁移能力，与诱导细胞周期阻滞和凋亡有关。

目的:探讨Ras超家族亚群A(RhoA)/Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1(Rock-1)在无机磷酸盐中诱导大鼠瓣膜间质细胞(VICs)成骨分化的作用机制。方法:取8只雄性大鼠(购自上海西普尔必凯动物实验有限公司)的主动脉瓣膜消化培养至第3代后免疫荧光鉴定。小干扰RNA(siRNA)-RhoA转染VICs后用无机磷酸盐成骨培养基(IP-OIM)分别诱导转染组(RNAi)，阴性对照组(NC)及空白对照组(CON)的成骨分化，并通过蛋白质印迹法(Western blot)与聚合酶链反应(PCR)评估转染后RhoA、Rock-1、Runt相关转录因子2(Runx-2)及骨钙素(OST)的变化；7 d行碱性磷酸酶(ALP)活性相关检测，14 d行钙含量相关检测评估其早期与晚期成骨分化趋势。用IP-OIM刺激转染后的VICs 60 min，并通过Western blot检测SMAD1/5/9的磷酸化变化。采用单因素方差分析。结果:鉴定后的VICs转染siRNA-RhoA并用IP-OIM培养，经过Western blot及PCR检测后可知RNAi的RhoA(Western blot：0.330±0.020；PCR：0.357±0.060)及Rock-1(Western blot：0.366±0.020；PCR：0.383±0.040)比CON均出现表达下调(RhoA Western blot： t＝36.680， P<0.05 PCR： t＝10.610， P<0.05；Rock-1 Western blot： t＝31.240， P<0.05 PCR： t＝13.210， P<0.05)，差异有统计学意义，RNAi的OST(Western blot：0.520±0.030；PCR：0.510±0.070)和Runx-2(Western blot：0.573±0.020；PCR：0.57±0.060)比CON也出现了下降(OST Western blot： t＝16.630， P<0.05；PCR： t＝6.970， P<0.05；Runx-2 Western blot： t＝21.040， P<0.05；PCR： t＝6.710， P<0.05)，差异有统计学意义。在7 d的ALP染色中RNAi的颜色最浅，ALP活性检测中RNAi [(1.005±0.101) U/mg]活性比较NC[(2.042±0.116) U/mg]和CON[(1.931±0.136) U/mg]明显下降( t＝10.570， P<0.05； t＝9.400， P<0.05)，差异有统计学意义。在14 d的相对钙含量测定中RNAi[(22.290±1.981) ng/L]钙含量比较NC[(41.100±2.440) ng/L]和CON[(41.760±1.215) ng/L]明显下降( t＝10.530， P<0.05； t＝14.510， P<0.05)，差异有统计学意义；同样茜素红钙沉积染色中，也是RNAi颜色最浅。经IP-OIM分别刺激60 min，RNAi的SMAD1/5/9的磷酸化水平(0.337±0.030)比CON明显下降( t＝25.480， P<0.05)，差异有统计学意义。 结论:无机磷酸盐可通过RhoA/Rock-1引起瓣膜间质细胞的成骨分化，SMAD1/5/9的磷酸化在此过程中起重要作用。

目的:评价Ras同源家族成员A(RhoA)在氢减轻脂多糖(LPS)致小鼠肺微血管内皮细胞屏障功能损伤中的作用。方法:小鼠肺微血管内皮细胞培养于含10%胎牛血清和1%青链双抗的DMEM/F12培养基中，传代至第4～6代的细胞用于实验，采用随机数字表法分为6组( n＝36)：对照组(A组)、富氢液组(B组)、LPS组(C组)、LPS＋富氢液组(D组)、LPS＋RhoA抑制剂C3酶组(E组)和LPS＋富氢液＋RhoA激活剂U-46619组(F组)。A组、C组和E组采用正常培养基培养，B组、D组和F组采用含饱和氢气培养基培养，C组、D组、E组和F组加入LPS，终浓度1 μg/ml；E组于加入LPS前2 h加入C3酶，终浓度3 μg/ml；F组于加入LPS前3 h加入U-46619，终浓度10 mg/ml。分别于LPS孵育后6、12和24 h时采用Western blot法检测血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)和紧密连接蛋白(occludin)的表达；于LPS孵育后24 h时采用LDH法测定细胞LDH释放率，MTT法测定细胞活力，GST pull-down法测定RhoA活性。 结果:与A组比较，C组孵育6、12和24 h时occludin和VE-cadherin表达下调，孵育24 h时细胞活力降低，LDH释放率和RhoA活性升高( P<0.05)；与C组比较，D组孵育6、12和24 h时occludin和VE-cadherin表达上调，孵育24 h时细胞活力升高，LDH释放率和RhoA活性降低( P<0.05)；与C组比较，E组孵育6、12和24 h时occludin和VE-cadherin表达上调，孵育24 h时细胞活力升高，LDH释放率和RhoA活性降低( P<0.05)；与D组比较，F组孵育6、12和24 h时occludin和VE-cadherin表达下调，孵育24 h时细胞活力降低，LDH释放率和RhoA活性升高( P<0.05)。 结论:RhoA参与了氢减轻LPS致小鼠肺微血管内皮细胞屏障功能损伤的过程。

目的:构建阿霉素(ADR)诱导的局灶节段性肾小球硬化(FSGS)小鼠模型，探究足细胞损伤的分子机制。方法:取24只8周龄雄性BALB/c小鼠分为生理盐水组(对照组，n＝6)和FSGS模型组(ADR组，n＝18)，分别按照10 mg/kg的剂量尾静脉注射生理盐水和ADR，采集注射ADR后的7、14、28 d小鼠以及注射生理盐水后的28 d小鼠的血液、尿液和肾组织，检测血液和尿液中血肌酐﹑尿肌酐﹑尿蛋白含量，将肾组织进行HE和MASSON染色，观察其形态变化，然后采用实时定量PCR和Western blot法检测肾皮质组织中Synaptopodin和RhoA的表达。结果:与对照组比较，注射ADR 7 d后，ADR组小鼠的尿蛋白与尿肌酐比值升高，血肌酐水平升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；注射ADR 7 d后，与对照组比较，ADR组小鼠的肾皮质组织中Synaptopodin 、RhoA的mRNA和蛋白质表达量均降低，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；注射ADR 28 d后，ADR组小鼠出现肾小球硬化程度恶化、肾小管损伤和间质病变纤维化，表现为严重的肾脏损伤。 结论:ADR可成功诱导小鼠FSGS，Synaptopodin和RhoA的表达下调可能导致足细胞损伤，进而促进小鼠形成FSGS。

Background::Hyperthermia in combination with DnaJA4-knockout (KO) obviously affects the anti-viral immunity of HaCaT cells. The mechanisms of this process are not yet fully explored. However, it is known that DnaJA4 interacts with actin cytoskeleton after hyperthermia. Our aim was to investigate the effects of DnaJA4 on F-actin in HaCaT cells following hyperthermia.Methods::Wild-type (WT) and DnaJA4-KO HaCaT cells were isolated at either 37°C (unheated) or 44°C (hyperthermia) for 30 min followed by testing under conditions of 37°C and assessing at 6, 12, and 24 h after hyperthermia. The cytoskeleton was observed with immunofluorescence. Flow cytometry and Western blotting were used to detect the expression of F-actin and relevant pathway protein.Results::DnaJA4-KO and hyperthermia changed the cytoskeleton morphology of HaCaT cells. F-actin expression levels were elevated in DnaJA4-KO cells compared with WT cells (6364.33 ± 989.10 vs. 4272.67 ± 918.50, P < 0.05). In response to hyperthermia, F-actin expression levels of both WT and DnaJA4-KO cells showed a tendency to decrease followed by an obvious recovery after hyperthermia (WT cells: unheated vs. 6 h after hyperthermia or 24 h after hyperthermia: 0.34 ± 0.02 vs. 0.24 ± 0.01, 0.31 ± 0.01, P < 0.001, P < 0.05; DnaJA4-KO cells: unheated vs. 6 h after hyperthermia or 24 h after hyperthermia: 0.44 ± 0.01 vs. 0.30 ± 0.01, 0.51 ± 0.02, P < 0.001, P < 0.01). WT cells restored to baseline levels observed in the unheated condition, while DnaJA4-KO cells exceeded baseline levels in the recovery. As the upstream factors of F-actin, a similar profile in rho-associated serine/threonine kinase 1 (ROCK 1) and RhoA expressions was observed after hyperthermia. While E-cadherin expression was decreased in response to hyperthermia, it was increased in DnaJA4-KO cells compared with WT cells. Conclusions::Hyperthermia affects the expression levels of F-actin in HaCaT cells. DnaJA4 knockout increases the expression of F-actin in HaCaT cells after hyperthermia. DnaJA4 regulates the expressions of F-actin and the related pathway proteins in response to hyperthermia in HaCaT cells.

目的:研究Rho GTP酶在大鼠髋臼软骨早期发育中的作用。方法:将新生SD大鼠用随机数字表法平均分为正常发育组和异常应力组，每组48只。正常发育组不做特殊处理，异常应力组后肢伸髋伸膝位固定。分别于1、3、5、7、10、15日龄处死两组大鼠各8只(16髋)，收集大鼠髋关节进行组织学染色和原代软骨细胞提取。观察正常发育过程中和异常应力下髋关节和髋臼软骨细胞的形态变化，检测Rho GTP酶(Cdc42、Rac1、RhoA)在软骨细胞内的表达和分布。使用独立样本 t检验对两组间均数进行比较。 结果:正常发育组股骨头呈圆形，髋臼对股骨头包容良好；5~7日龄时，软骨细胞逐渐分化成熟；Rho GTP酶主要分布于核周，但随着日龄增加Rac1出现胞膜分布。异常应力组髋臼浅平，盂唇内翻；软骨细胞呈去分化改变；Cdc42、Rac1、RhoA均出现核内表达，且Rac1胞膜表达消失。正常发育组软骨细胞内Cdc42和RhoA mRNA相对表达量在7日龄达峰值，分别为1.53±0.20和1.49±0.04，与1日龄时1.00±0.11和1.00±0.10相比显著升高，且差异有统计学意义( P均<0.01)；异常应力组在异常应力作用1 d后，软骨细胞内Cdc42和RhoA mRNA相对表达量分别为1.38±0.20和1.23±0.04，均较正常发育组显著上调，且差异有统计学意义( P<0.05和 P<0.01)。在蛋白水平，正常发育组Cdc42和RhoA蛋白相对表达量分别在5日龄和7日龄达峰，为1.05±0.03和1.25±0.01，分别与1日龄时0.76±0.03和0.97±0.01比较，差异均有统计学意义( P均<0.01)。异常应力组在各个时间点与正常发育组比较，Cdc42的表达均上调( P均<0.01)，而Rac1的表达受到抑制( P均<0.01)。 结论:5~7日龄可能是大鼠髋臼软骨细胞早期发育的关键时间点，Rho GTP酶可能在调控髋臼软骨细胞早期发育中发挥作用。

目的:探讨选择性环氧合酶-2抑制剂塞来昔布是否通过抑制Rho/Rho相关蛋白激酶（ROCK）通路的表达对2型糖尿病（T2DM）合并非酒精性脂肪性肝炎（NASH）大鼠肝脏具有保护作用。方法:雄性SD大鼠40只，随机等分为T2DM合并非酒精性脂肪性肝炎（T2DM-NASH）组、T2DM-NASH+塞来昔布组、对照组、对照+塞来昔布组四组，其中T2DM-NASH及T2DM-NASH+塞来昔布组予高糖高脂饲料喂养，对照组及对照+塞来昔布组予基础饲料（25 kJ/kg）喂养，4周后T2DM-NASH组及T2DM-NASH+塞来昔布组腹腔注射链脲佐菌素（STZ，30 mg/kg）诱导T2DM模型，而对照组及对照+塞来昔布组腹腔注射等体积柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，STZ注射4周后T2DM-NASH+塞来昔布组及对照+塞来昔布组予塞来昔布（10 mg·kg -1·d -1）溶于生理盐水中灌胃4周，剩余两组大鼠予等体积生理盐水灌胃4周。第12周末处死动物，取肝脏组织，行HE染色观察肝脏病理改变；免疫组织化学及蛋白质印迹法检测RhoA、Rho相关蛋白激酶1（ROCK1）及Rho相关蛋白激酶2（ROCK2）蛋白在肝脏的表达，实时定量PCR法检测RhoA、ROCK1及ROCK2 mRNA在肝脏的表达情况，并采用方差分析及 t检验对比各组间蛋白及mRNA的表达差异。 结果:与对照组及对照组+塞来昔布组相比，T2DM-NASH组及T2DM-NASH+塞来昔布组光镜下肝组织呈重度脂肪变性，部分可见炎症细胞浸润，且肝组织RhoA、ROCK1及ROCK2的蛋白及mRNA表达水平均显著升高（ P < 0.05),而T2DM-NASH+塞来昔布组较T2DM-NASH组肝细胞脂肪变性有所减轻且肝组织RhoA、ROCK1及ROCK2蛋白及mRNA表达水平均降低（ P < 0.05)。 结论:选择性环氧合酶-2抑制剂塞来昔布对T2DM-NASH大鼠肝脏具有保护作用,而其作用可能是通过抑制Rho/ROCK通路的表达而达到的。

目的:探讨过表达破骨细胞刺激性转膜蛋白（osteoclast stimulatory transmembrane protein，OC-STAMP）对上皮-间质转化的作用及机制。方法:于2021年4月，将小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞MLE-12细胞分为过表达对照组（NC组）、 Ocstamp过表达组（over- Ocstamp组）、法舒地尔（Fasudil）干预组（over- Ocstamp+Fasudil组）、沉默对照组（si-NC组）、 Ocstamp沉默组（si- Ocstamp组）。采用蛋白免疫印迹（Western blotting）法、免疫细胞化学染色法检测OC-STAMP、上皮标志蛋白E-钙黏蛋白（E-cadherin，E-cad）、间质标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、Ras基因家族成员A（Ras homolog gene family member A，RhoA）、Rho GDP解离抑制因子α（Rho GDP dissociation inhibitor α，Rho GDIα）、Rho相关蛋白激酶（Rho-associated protein kinase，ROCK）、磷酸化肌球蛋白磷酸酶（phosphate myosin phosphatase，p-MYPT）蛋白表达，采用鬼笔环肽法检测细胞骨架肌动蛋白（filamentous actin，f-actin）的变化。采用 t检验比较两组间各蛋白的相对表达量。 结果:Western blotting及免疫细胞化学染色法结果显示，与NC组比较，over- Ocstamp组E-cad蛋白表达下调，α-SMA、Rho GDIα、RhoA、ROCK、p-MYPT蛋白表达增加，F-actin表达增强，差异均有统计学意义（ P<0.05）；与si-NC组比较，si- Ocstamp组E-cad和α-SMA蛋白表达差异均无统计学意义（ P>0.05）；与over- Ocstamp组比较，over- Ocstamp+Fasudil组E-cad蛋白表达上调，α-SMA、Rho GDIα、RhoA、ROCK、p-MYPT蛋白表达下降，F-actin表达减弱，差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:肺泡Ⅱ型上皮细胞过表达OC-STAMP，可能通过激活Rho GDIα/RhoA/ROCK信号通路，诱导肌动蛋白细胞骨架重塑，进而促进上皮-间质转化。

目的:探讨RhoA/Rho激酶1(ROCK1)下调抑制肌球蛋白轻链(MLC)磷酸化在主动脉夹层(AD)形成过程中的作用。方法:检测正常(NA)和AD主动脉原代平滑肌细胞(SMC)中RhoA/ROCK1的表达与MLC的磷酸化程度。免疫荧光观察SMC中MLC磷酸化程度和结构。β-氨基丙腈(BAPN)联合应用ROCK1抑制剂Fasudil，验证RhoA/ROCK1下调在AD形成中的作用。组间比较采用 t检验或 χ2检验，Kaplan-Meier生存曲线采用非参数检验。 结果:NA组和AD组年龄( t＝－1.439， P>0.05)、性别( χ2＝0.900， P>0.05)差异无统计学意义，AD组高血压患者多于正常组( χ2＝5.562， P<0.05)。AD主动脉SMC中RhoA(NA：42 782±31 339，AD：6 975±3 130， t＝2.585， P<0.05)和ROCK1表达下调(NA：64 626±38 822，AD：13 851±961， t＝2.977， P<0.05)，MLC磷酸化减少(NA：230 193±27 749，AD：51 142±48 151， t＝6.561， P<0.01)。免疫荧光显示AD组SMC和Fasudil处理的SMC中MLC磷酸化降低，结构受损。Fasudil联合BAPN的夹层形成率(100%)高于BAPN的夹层形成率(50%， χ2＝22.780， P<0.01)。 结论:RhoA/ROCK1下调抑制MLC磷酸化促进了AD的发生。

目的:研究核骨架-细胞骨架连接复合体(LINC complex)在周期性张应力调控大鼠生长板软骨细胞肥大分化中的作用。方法:采用四点弯曲张力仪，对体外培养的SD大鼠(华中科技大学同济医学院动物实验中心提供)生长板软骨细胞行周期性张应力，采用小干扰RNA(siRNA)抑制LINC complex(SUN1和SUN2)的活性，实验分组为对照组、对照组+siSUN、应力组和应力组+siSUN，蛋白质印迹法(Western blot)检测力学刺激对FAK、YAP和RhoA蛋白活性的改变，QPCR检测肥大分化指标Ihh和COL X的mRNA表达变化。两组间比较采用 t检验。 结果:应力组FAK、YAP和RhoA的蛋白活化明显高于对照组[磷酸化FAK(p-FAK)：0.993±0.082比0.423±0.111， t＝36.539， P<0.01；磷酸化YAP(p-YAP)：0.734±0.071比1.635±0.127， t＝19.722， P<0.01；活化RhoA(Active RhoA)：1.288±0.076比0.646±0.132， t＝18.157， P<0.01]，同时应力组Ihh和COL X的mRNA表达水平低于对照组(Ihh：0.973±0.227比3.634±0.381， t＝104.589， P<0.01；COL X：1.957±0.274比5.991±0.421， t＝47.177， P<0.01)，给予细胞siSUN抑制LINC complex(SUN1和SUN2)的活性，应力组FAK、YAP和RhoA蛋白的活化与对照组比较，差异无统计学意义(p-FAK：0.559±0.062比0.527±0.073， t＝1.595， P>0.05；p-YAP：1.258±0.064比1.342±0.075， t＝1.334， P>0.05；active RhoA：0.494±0.065比0.508±0.094， t＝2.245， P>0.05)，同时应力组Ihh和COL X的mRNA的表达与对照组比较，差异也无统计学意义(Ihh：1.264±0.262比1.719±0.345， t＝2.197， P>0.05；COL X：1.747±0.185比2.361±0.367， t＝2.175， P>0.05)。 结论:持续的周期性张应力通过LINC complex调控大鼠生长板软骨细胞的肥大分化。