目的:分析单基因肾结石病患儿的基因型特点。方法:回顾性分析2016年1月至2020年12月在首都医科大学附属北京友谊医院诊治的56例单基因肾结石病患儿临床资料和基因检测结果，所有患儿均为全外显子测序诊断，分析患儿基因型特点。结果:56例单基因肾结石病患儿中男39例、女17例，平均年龄4岁（5个月~14岁），共发现11种基因存在突变，包括常染色体隐性遗传基因7种，X连锁隐性遗传基因1种，显性和隐性遗传基因3种，其中HOGA1基因突变最为常见（16例，28.6%），其次为AGXT基因（15例，26.8%），SLC3A1基因（6例，10.7%），SLC7A9基因（5例，8.9%）和GRHPR基因（5例，8.9%）。突变类型包括无义突变、移码突变和剪切位点突变等，新发突变14个。AGXT、GRHPR和HOGA1等基因具有突变热点或热点区域，分别为c.815-816insGA和c.33dupC突变、c.864_865delTG突变和c.834-834+1突变区域；SLC3A1和SLC7A9基因有9种新发突变，但未发现突变热点或热点区域。结论:儿童单基因肾结石病多为常染色体隐性遗传，致病基因中以HOGA1、AGXT、SLC3A1、SLC7A9和GRHPR等基因突变多见；AGXT、GRHPR和HOGA1等基因具有突变热点或热点区域，且突变可能具有种族差异性。

目的:强化对原发性肉碱缺乏症(PCD)合并心肌病的临床诊断、治疗和预后的认识。方法:回顾性分析2018年5月吉林大学第一医院儿科诊治的1例PCD患儿的临床及随访资料，采用串联质谱和基因检测进行病因分析。结果:患儿，男，4岁10个月，因发现心影增大入院。超声心动图提示左室舒张末内径(LVDd)47 cm、左室射血分数(LVEF)40%，左室壁不均匀增厚。外周血游离肉碱水平(0.76 μmol/L)及多种酰基肉碱显著降低。采用左旋肉碱治疗14 d复查，游离肉碱升高至正常(14.00 μmol/L)，LVDd明显缩小(39 cm)，LVEF恢复至正常(68%)；1年后仅有左室后壁增厚。同时检测到SLC22A5基因突变。结论:提高临床医生重视PCD能够引起心肌病，扩展临床思维，必要时采用更多的检查手段明确诊断，如串联质谱、基因检测等。

目的:探讨Dynamin 3（DNM3）在胃癌中的作用机制及预后价值。方法:采用生物信息分析、实验研究方法和回顾性队列研究方法。收集2013年1月至2018年7月福建医科大学附属协和医院收治的153例行根治性胃切除术胃癌患者的临床病理资料、新鲜胃癌及配对正常组织样本和石蜡切片，行实时荧光定量聚合酶链式反应检测、免疫印迹实验、流式细胞周期实验、免疫组织化学染色检测和预后分析。收集癌症基因组图谱（TCGA）数据库的胃腺癌（STAD）数据集进行生物信息分析。观察指标：（1）胃癌中DNM3基因在TCGA-STAD中的表达情况。（2）胃癌中DNM3的突变和拷贝数改变。（3）胃癌中DNM3的启动子甲基化水平。（4）胃癌中DNM3、p53的蛋白相对表达量。（5）胃癌中DNM3相关性和富集性分析。（6）流式细胞周期G0/G1期、S期、G2/M期的比例。（7）胃癌中免疫细胞浸润和DNM3之间的相关性。（8）免疫组织化学染色检测与临床特征之间的相关性。（9）影响胃癌患者5年总生存率的独立因素分析。正态分布的计量资料以 x± s表示，多组间比较采用方差分析，进一步两两比较采用LSD法；两组间比较采用 t检验；偏态分布的计量资料以 M（ Q1， Q3）表示，组间比较采用Mann-Whitney U检验。计数资料以绝对数或百分比表示，组间比较采用 χ2检验或Fisher确切概率法。配对样本采用威尔科克森符号秩检验。等级资料采用秩和检验。运用Pearson相关系数或Spearman相关系数检验两组的相关性。单因素和多因素分析采用COX比例风险回归模型。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线并计算生存率，采用Log-Rank检验进行生存情况分析。使用Benjamini-Hochberg错误发生率校正对 P值进行调整。 结果:（1）胃癌中DNM3基因在TCGA-STAD中的表达情况。TCGA-STAD数据库中DNM3基因在27个肿瘤组织和配对正常组织中的表达水平分别为0.775（0.605，1.161）和1.216（0.772，1.681），两者比较，差异有统计学意义（ Z=-2.64， P<0.05）。DNM3基因在笔者中心48对胃癌组织和配对正常组织中mRNA表达水平分别为4.370（2.870，6.040）和2.520（0.850，4.170），两者比较，差异有统计学意义（ Z=-4.39， P<0.05）。（2）胃癌中DNM3的突变和拷贝数改变。TCGA-STAD数据库中16例胃癌患者发生DNM3突变或体细胞拷贝数改变，其中6个错义突变，1个截断突变，8个拷贝数增加，1个拷贝数减少。TCGA-STAD数据库370例胃癌患者中DNM3突变前后的mRNA表达水平分别为6.13（5.40，7.08）和5.02（3.98，5.46），两者比较，差异有统计学意义（Log 2FC=-1.11， Z=-2.59， P<0.05）。（3）胃癌中DNM3的启动子甲基化水平。TCGA-STAD数据库中372例胃癌患者DNM3甲基化水平与DNM3 mRNA的检测结果显示：DNM3甲基化水平为0.198（-0.458，0.301），DNM3 mRNA表达水平为6.014（5.141，6.628），DNM3甲基化水平与DNM3 mRNA表达水平呈负相关（ r=-0.38， P<0.05）。32例患者随访结果显示：16例DNM3高甲基化组和16例DNM3低甲基化组患者3年总生存率分别为18.8%和41.3%，两者比较，差异有统计学意义（风险比=1.40， P<0.05）。免疫印迹实验结果显示：AGS细胞用0、0.5、1.0 μmol/L 5-azacytidin处理后的DNM3相对表达量分别为0.270±0.020、0.357±0.051、0.599±0.039，3组比较，差异有统计学意义（ F=57.84， P<0.05）。HGC-27细胞用0、0.5、1.0 μmol/L 5-azacytidin处理后的DNM3相对表达量分别为0.316±0.038、0.770±0.031、0.877±0.052，3组比较，差异有统计学意义（ F=156.30， P<0.05）。（4）胃癌中DNM3、p53的蛋白相对表达量。免疫印迹实验结果显示：转染DNM3质粒和对照质粒的AGS细胞中DNM3、p53的蛋白相对表达量分别为0.688±0.047、0.872±0.041和0.249±0.029、0.352±0.020；转染DNM3质粒和对照质粒的AGS细胞比较，上述蛋白相对表达量差异均有统计学意义（ t=13.77，19.74， P<0.05）。转染DNM3质粒和对照质粒的HGC-27细胞中上述蛋白相对表达量分别为0.969±0.069、1.464±0.081和0.456±0.048、0.794±0.052，差异均有统计学意义（ t=10.57，12.06， P<0.05）。（5）胃癌中DNM3相关性和富集性分析。相关性分析结果显示：DNM3与胃癌中RBMS3、CNTN4、PDE1A基因呈正相关（ r=0.52，0.52，0.50， P<0.05），与SLC25A39、PAICS、GAPDH基因呈负相关（ r=-0.41，-0.40，-0.40， P<0.05）。基因集富集分析结果显示：与核糖体和氧化磷酸化有关的基因集在DNM3低表达组中上调［富集分数（NES）=-3.30，-2.16， P<0.05］，而淋巴细胞和非淋巴细胞之间的免疫调节相互作用在DNM3高表达组中上调（NES=1.67， P<0.05）。基因本体论分析结果显示：DNM3低表达与有丝分裂姐妹染色体分离（编号：0000070）、无义介导衰变的核转录mRNA分解过程、姐妹染色体分离（编号：0000819）、核转录mRNA分解代谢过程、氧化磷酸化的调控有关（NES=-2.29，-3.10，-2.33，-2.56，-2.68， P<0.05）。京都基因与基因组百科全书分析结果显示：DNM3低表达在核糖体和氧化磷酸化中存在上调和串联（NES=-3.34，-2.21， P<0.05）。（6）流式细胞周期G0/G1期、S期、G2/M期的比例。流式细胞周期实验结果显示：转染pCMV-DNM3质粒的AGS细胞G0/G1期、S期、G2/M期的比例分别为65.1%±3.0%、17.3%±3.0%、17.6%±1.0%，转染对照质粒的AGS细胞上述指标分别为53.4%±4.0%、26.3%±2.0%、20.3%±3.0%。转染DNM3质粒与转染对照质粒的AGS细胞比较，G0/G1期、S期差异均有统计学意义（ t=4.05，4.32， P<0.05）。（7）胃癌中免疫细胞浸润和DNM3之间的相关性。免疫细胞浸润实验结果显示：DNM3 mRNA表达水平与肥大细胞，NK细胞，pDCs，B细胞，滤泡辅助T细胞，有效记忆T细胞，T细胞，中央记忆T细胞，CD8 T细胞，DC细胞，巨噬细胞，γ-δT细胞（Tgd），iDCs，嗜酸性粒细胞浸润水平呈正相关（Spearman相关系数分别为0.41，0.29，0.26，0.20，0.22，0.22，0.13，0.16，0.15，0.14，0.14，0.17，0.18，0.22， P<0.001，<0.001，<0.001，<0.001，<0.001，<0.001， P=0.015，0.002，0.004，0.005，0.005， P<0.001，<0.001，<0.001）；与Th17细胞，Th2细胞，NK CD56dim细胞浸润水平呈负相关（ r=-0.18，-0.23，-0.10， P<0.001， P=0.001和 P=0.046）。（8）免疫组织化学染色检测与临床特征之间的相关性。免疫组织化学分析结果显示：DNM3在105例胃癌组织和105例配对正常组织中的免疫组织化学染色评分分别为3（2，4）分和6（4，9）分，差异有统计学意义（ Z=-7.35， P<0.05）。70例DNM3低表达与35例DNM3高表达胃癌患者性别、肿瘤部位、N分期比较，差异均有统计学意义（ χ2 =4.29，7.67，6.86， P<0.05）。（9）影响胃癌患者5年总生存率的独立因素分析。多因素分析结果显示：病理学T分期为T3~4期和DNM3染色评分低是胃癌患者5年总生存率的独立危险因素（风险比=1.91，0.51，95%可信区间为1.06~3.43，0.26~0.98， P<0.05）。DNM3低表达组胃癌患者和高表达组胃癌患者的5年总生存率分别为44.3%和65.7%，两者比较，差异有统计学意义（ χ2=5.02， P<0.05）。 结论:DNM3是一种肿瘤抑制因子，也是胃癌预后不良的独立预测因子，它可能通过甲基化调控胃癌的细胞周期和肿瘤微环境中的免疫抑制。

目的:对原发性远端肾小管酸中毒（distal renal tubular acidosis，dRTA）患者进行基因突变分析和基因型-表型相关性研究，以提高对该病的认识和理解。方法:通过Sanger测序或全外显子组测序的方法对2010年4月至2020年9月青岛大学附属医院和青岛大学附属市立医院确诊的来自37个家系的44例原发性dRTA患者进行致病基因突变分析，根据2015年美国医学遗传学和基因组学学会（American College of Medical Genetics and Genomics，ACMG）的分类标准和指南评估变异致病性。总结患者的临床特点，并进行基因型和表型的关联研究。结果:44例dRTA患者共确定 SLC4A1基因7个变异， ATP6V0A4基因17个变异， ATP6V1B1基因15个变异，其中新增11个新变异；根据ACMG指南，39个变异中致病性、可能致病性和良性变异分别为22、16和1个。9例患者是 SLC4A1基因突变导致的常染色体显性遗传dRTA，4例患者为 SLC4A1基因突变导致的常染色体隐性遗传dRTA合并东南亚卵圆形红细胞增多症并伴有贫血，14例和8例患者分别为 ATP6V0A4基因和 ATP6V1B1基因突变导致的常染色体隐性遗传dRTA，2例患者不符合常染色体隐性遗传模式仅携带1个 ATP6V1B1杂合突变，7例患者检测结果为阴性。43例患者均为完全性dRTA，1例患者为不完全性dRTA。 ATP6V0A4基因和 ATP6V1B1基因突变导致患者感音神经性耳聋的患病率分别为2/14和6/10。成人、儿童和婴幼儿慢性肾脏病的发生频率分别为4/4、2/4、1/36。经以枸橼酸钾钠合剂为基础的药物治疗后，大部分患儿的生长发育（28/40）和电解质紊乱（41/44）得到明显改善。 结论:本研究44例原发性dRTA共发现3个致病基因 SLC4A1、 ATP6V0A4、 ATP6V1B1的39个变异位点，其中11个为新变异。dRTA人群基因型和表型密切相关。经恰当的治疗后，大部分患者的病情获得改善。本研究丰富了人类基因突变数据库，将为dRTA人群的遗传咨询和诊治提供有益的借鉴。

目的:探讨遗传性球形红细胞增多症（Hereditary spherocytosis，HS）患者临床及遗传学特点，报道发现的新突变位点。方法:回顾性分析2017年6月1日至2023年1月31日在武汉儿童医院就诊的35例HS患儿的临床资料，其中24例男孩，11例女孩，年龄7.8（4.0，9.9）岁，分析其临床、血常规及生化检测等实验室结果，利用高通量测序技术对纳入患儿进行致病基因检测，不同基因型之间血液学参数采用Mann-Whitney U检验进行数据分析。 结果:35例患者临床表现为贫血；33例患儿存在黄疸、28例患儿脾大，11例患儿合并胆石症；35例患儿的基因检测结果均为阳性，17例患儿携带ANK1基因突变，14例患儿携带SPTB基因突变，1例患儿携带SPTA1基因突变，1例患儿携带SLC4A1基因突变；其中2例患儿同时携带ANK1和SPTB基因突变；35例患儿中共检测出39个突变位点，根据ACMG指南分为27个致病变异，6个可能致病变异，6个临床意义未明变异；所有变异位点中8个为已报道突变，31个为未见报道的新突变；携带ANK1变异的患儿与携带SPTB变异的患儿相比，外周血红细胞数量、血红蛋白含量、网织红细胞计数等差异均无统计学意义（P均>0.05）。结论:HS患儿致病基因突变以ANK1和SPTB突变为主，携带其2种基因型的患儿之间表型无明显差异；并报道了31个新突变，扩展了该类疾病的变异谱。

目的:探讨1例全面发育落后伴癫痫发作患儿的遗传学病因。方法:回顾性分析2023年2月19日就诊于广州市妇女儿童医疗中心柳州医院的1例发育落后伴癫痫发作患儿的临床资料。对患儿及其父母进行全外显子组测序，并对候选变异进行Sanger测序验证，用生物信息学软件分析变异的致病性。结果:患儿为8月龄女婴，其父母系近亲婚配。患儿表现为全面发育落后伴癫痫发作、高乳酸血症。头颅MRI提示髓鞘化不良，脑电图显示背景活动慢。测序发现患儿 SLC25A12基因存在c.115T>G(p.Phe39Val)纯合变异，遗传自父母。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)相关指南判断为意义未明变异(PM2_Supporting＋ PM3_Supporting＋PP3＋PP4)，蛋白模拟预测结果显示该变异可降低蛋白质的稳定性。 结论:SLC25A12基因c.115T>G(p.Phe39Val)纯合变异可能是该患儿的遗传学病因。

目的 本研究旨在基于对端粒相关基因(Telomere related genes,TRG)表达数据的综合分析,探讨预后分子特征以预测胃癌(GC)的预后及与免疫细胞浸润的关系.方法 联合TCGA与GEO数据库对胃癌端粒相关基因进行生存分析及预后相关性分析.通过无监督聚类确定两个端粒相关基因簇,依据Lasso回归及多因素cox回归分析构建预后模型,结合临床性状构建列线图预测患者生存期,同时进行风险差异分析,运用ROC曲线评估模型预测准确性,对样本进行免疫细胞浸润分析.结果 构建了包含 HEYL、SPC25、SRPX2、PDK4、LOXL4、SOX15、SLC39A4、MAGEA3、SHISA2、DEFB1、SLC27A2 和 C1QTNF5 等12个基因的预后模型来评估胃癌患者的预后,构建了整合风险特征的列线图来预测胃癌患者的1年、3年和5年总生存期(OS),高风险组的生存率显著低于低风险组(P＜0.05),不同风险组的免疫细胞亚型比例不同.结论 这项研究鉴定了胃癌中TRG衍生的分子亚型,并开发了一种新的预后评分模型,突出了 TRG在胃癌预后和免疫治疗中的潜在价值.

目的 分析胃癌组织中磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B(PI3K-AKT)相关基因的表达及功能,寻找胃癌相关的潜在生物标志物.方法 在癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载胃癌数据,在分子特征数据库(MSigDB)下载PI3K-AKT相关基因集合,使用Wilcoxon检验和倍性变化筛选差异表达基因.通过R包"survival"进行生存分析.使用STRING数据库分析相关蛋白质交互作用(PPI)网络信息.基于Metascape对差异表达基因进行富集分析.应用CIBERSORT算法计算胃癌免疫细胞浸润水平.选取2023年3—5月在河北医科大学第四医院外三科行根治性手术的20例进展期胃癌患者标本,使用Western法检测肿瘤组织和癌旁组织中CXC基序受体4(CXCR4)的表达.结果 基于TCGA数据库,胃癌组织中上调基因10个,分别为溶质载体家族2成员1(SLC2A1)、周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)、E2F转录因子1(E2F1)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)、tribbles假激酶3(TRIB3)、G蛋白亚基γ转导蛋白1(GNGT1)、成纤维细胞生长因子17(FGF17)、白细胞介素4(IL-4)和CXCR4.下调基因12个,分别为蛋白激酶Cβ型异构体(PRKCB)、双特异性蛋白磷酸酶3(DUSP3)、类钙结合蛋白39(CAB39L)、蛋白激酶AMP激活催化亚基α2(PRKAA2)、腺苷酸环化酶2(ADCY2)、丝裂原活化蛋白激酶10(MAPK10)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1A(CDKN1A)、Toll通路中进化保守的信号传导中间体(ECSIT)、肽基脯氨酰顺/反异构酶-NIMA相互作用1(PIN1)、丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)、MAPK相互作用的丝氨酸/苏氨酸激酶2(MKNK2)和T细胞淋巴瘤侵袭转移诱导蛋白1(TIAM1).CXCR4基因的表达与患者的预后相关,103例高表达CXCR4患者的3和5年总生存率分别为33.8％和18.8％,303例低表达CXCR4患者的3和5年总生存率分别为51.3％和42.5％,差异有统计学意义(x2=16.60,P<0.001).对CXCR4进行PPI网络显示,其与其他蛋白具有广泛的相互作用.通路富集分析结果显示,在基因本体论(GO)数据库收录的通路中,CXCR4主要与细胞因子介导的信号通路、调节白细胞胞间黏附、正向调节细胞因子产生、调节肽基酪氨酸磷酸化、调节造血功能和调节防御反应密切相关.在京都基因和基因组百科全书(KEGG)数据库收录的通路中,CXCR4主要与趋化因子信号通路、Th17细胞分化、破骨细胞分化、人巨细胞病毒感染、细胞因子-细胞因子受体相互作用密切相关.免疫细胞浸润结果显示,胃癌组织中,CXCR4的表达与初始B细胞浸润呈正相关(r=0.24,P<0.001),与CD8+T细胞浸润也呈正相关(r=0.25,P<0.001).Western blot法检测显示,CXCR4蛋白在胃癌组织中的相对表达水平为1.52±0.27,明显高于其在癌旁组织中的相对表达水平(0.42±0.12;t=17.05,P<0.001).结论 PI3K-AKT相关基因CXCR4在胃癌组织中高表达,且与胃癌患者预后、多种信号通路及初始B细胞和CD8+T细胞浸润相关,是胃癌潜在的生物标志物.

目的 报道1例血清锌正常肠病性肢端皮炎患儿及SLC39A4基因新突变位点.方法 收集患儿及家系成员临床资料及外周血,检测患儿血清锌及碱性磷酸酶水平,并对家系成员进行基因测序.结果 3次检测患儿血清锌水平分别为57.3、48.0和47.7 μmol/L,均处于正常范围,但血清碱性磷酸酶(ALP)水平偏低(34 U/L).基因测序发现,患儿存在 SLC39A4 基因 c.1462_1474+1delAGACTGAGCCCAGG(p.Arg488fs)和c.296C＞T(p.Ala99Val)复合杂合变异.结论 该例血清锌正常的肠病性肢端皮炎患儿,SLC39A4基因中发现新的突变位点:c.296C＞T(p.Ala99Val),本研究扩展了肠病性肢端皮炎的基因突变谱.

目的:探讨双胎妊娠合并Gitelman综合征(GS)孕妇的临床诊治及妊娠结局，并进行相关文献复习。方法:选取2021年9月27日，因孕龄为25＋2孕周时产前检查发现低钾血症，于四川大学华西第二医院产科入院治疗的1例(患者1)双胎妊娠合并GS孕妇为研究对象。采取回顾性分析方法对患者1病史、入院相关检查结果、治疗方案与转归等临床资料进行分析。分别以"Gitelman综合征""妊娠""Gitelman syndrome""pregnancy"为中、英文关键词，在中国知网、万方数据知识服务平台、PubMed及Web of Science数据库中，检索妊娠合并GS相关研究文献。文献检索时间设定为2013年至2023年。总结患者1及GS相关研究文献涉及的GS孕妇临床表现、诊治方案及母儿预后。本研究遵循的程序符合2013年修订的《世界医学协会赫尔辛基宣言》要求。结果:①患者1病史、入院相关检查结果、治疗方案与转归：年龄36岁，G3P1＋1，体外受精-胚胎移植术移植2枚囊胚，因常规产前检查发现其合并低钾血症(血K＋浓度为2.60 mmol/L)及低镁血症(血Mg2＋浓度为0.66 mmol/L)，于孕龄为25＋2孕周时入院。入院检查结果提示，碱中毒(血液pH值为7.530)，肾性失K＋(尿K＋浓度为47.2 mmol/24 h)，血压正常[102～125/60～77 mmHg(1 mmHg＝0.133 kPa)]，临床诊断为GS孕妇。对其采取静脉输注氯化钾(KCl)注射液、口服KCl口服液及门冬氨酸钾镁片治疗。孕龄为28＋1孕周时，病情稳定出院。出院后由多学科团队对其进行门诊随访。孕龄为36＋6孕周时，对其采取选择性剖宫产术分娩2例活婴，手术顺利，术后第4天孕妇及其分娩新生儿顺利出院。随访至2023年6月结果显示，母儿情况均良好。②文献复习结果：由于国内外双胎妊娠合并GS报道较少，所以将文献检索结果中的单胎妊娠合并GS病例纳入研究。根据本研究设定的文献检索策略，共计检索到有关GS孕妇研究的国内外相关文献共计33篇，涉及55例(患者2～56)妊娠合并GS孕妇，共计67次妊娠(69例胎儿)，双胎妊娠为2次(患者30～31)，其中发生死胎者为4例(患者2、34、46、49)，胎儿生长受限者为3例(患者29、41、53)，新生儿生后第7天死亡者为1例(患者32)，其余单胎及双胎妊娠新生儿均预后良好。GS孕妇发生妊娠期糖尿病/糖耐量异常者为14例(患者3～4、7、11～12、26～27、33～34、36、39、42、52～53)，羊水偏少/过少者为4例(患者8、28、34、41)，妊娠期高血压疾病者为6例(患者27、34、41、43～44，患者41的2次妊娠均发生子痫前期)。在67次妊娠中，除1例(患者46)孕妇频发室颤及心脏骤停，预后不良外，其余均预后较好。结论:对妊娠合并GS孕妇，临床需进行多学科团队合作及个性化管理，采取严密监测及积极治疗措施后，多数GS孕妇母儿结局较为良好。虽未观察到双胎妊娠合并GS与单胎妊娠合并GS在症状严重程度、并发症发病率及妊娠结局方面的差异，但是仍应对双胎妊娠合并GS孕妇加强管理与监测。由于目前国内外文献报道的妊娠合并GS病例仍较少，特别是双胎妊娠，因此对双胎妊娠合并GS孕妇的临床特征、分娩方式及时机、治疗方式与目标等，仍需进一步探究。