目的:探讨联合检测外周血游离Septin9、SDC2、BCAT1基因启动子甲基化对结直肠癌诊断的临床意义。方法:回顾性分析2019年1月至9月同济大学附属东方医院消化科收治的患者资料，分为结直肠癌组（结肠癌62例，直肠癌59例）、癌前病变组（结直肠腺瘤77例，高级别上皮内瘤变5例）、疾病对照组（结直肠癌与进展期腺瘤阴性但存在其他肠道病变患者61例，非结直肠癌肿瘤患者17例）、健康对照组（94名）。采用荧光PCR法同步检测外周血血浆游离Septin9、SDC2、BCAT1 3种基因甲基化状态，分析联合检测3种基因的阳性率与结直肠临床病理特征的关系，并与癌胚抗原（CEA）阳性率作比较。将结直肠癌组按照临床TNM分期，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期按等级分析计数资料，通过受试者工作特征（ROC）曲线分析检测方法对疾病的诊断效能，比较ROC曲线下面积（AUC）。结果:结直肠癌组血浆游离Septin9、SDC2、BCAT1基因甲基化联合检测阳性率86%（104/121），癌前病变组阳性率12%（10/82），疾病对照组阳性率4%（3/78）、健康对照组阳性率4%（4/94）。结直肠癌组血浆Septin9、SDC2、BCAT1基因甲基化联合检测阳性率明显高于其他3组（χ 2 =237.246， P<0.001）。结直肠癌组中血浆Septin9、SDC2、BCAT1基因甲基化联合检测阳性率高于CEA阳性率（ P<0.001）。血浆Septin9、SDC2、BCAT1基因甲基化联合检测在结直肠癌组中Ⅰ~Ⅳ期的阳性率依次分别为73%（16/22）、87%（34/39）、86%（30/35）和96%（24/25），与CEA组相比，血浆Septin9、SDC2、BCAT1基因甲基化联合检测在结直肠癌Ⅰ~Ⅲ期阳性率显著高于CEA（ P<0.001），Ⅳ期阳性率与CEA相比差异无统计学意义（ P>0.05）。ROC曲线分析Septin9、SDC2、BCAT1基因检测AUC分别为0.857（95% CI 0.810~0.903）、0.819（95% CI 0.768~0.871）、0.862（95% CI 0.816~0.909），3个基因甲基化联合检测AUC为0.889（95% CI 0.846~0.933），再联合血清CEA检测AUC为0.913（95% CI 0.874~0.951）。结肠癌患者不同性别、年龄和癌变部位与Septin9、SDC2、BCAT1基因甲基化联合检测阳性率差异均无统计学意义（ P均>0.05）。 结论:联合检测外周血血浆游离Septin9、SDC2、BCAT1基因启动子甲基化有助于结直肠癌早期诊断，对结直肠癌Ⅰ~Ⅲ期阳性率高于CEA，3个基因联合检测提高了诊断效能。

目的:探讨腹腔镜胃癌根治术患者外周血Septin9基因甲基化(mSEPT9)检测及其临床意义。方法:选取福建医科大学附属第二医院2018年2月至2021年2月40例腹腔镜胃癌根治术患者为观察组，40例健康人群为对照组，抽取外周静脉血进行Septin9基因甲基化及癌胚抗原(CEA)监测，分析其术前、术后水平的变化。结果:术前观察组mSEPT9阳性率高于对照组阳性率[67.5%(27/40)比5.0%(2/40)， χ2＝13.268， P<0.05]；术前观察组CEA阳性率高于对照组阳性率[32.5%(13/40)比2.5%(1/40)， χ2＝8.385， P<0.05]，术前胃癌患者外周血mSEPT9检测阳性率高于CEA阳性率[67.5%(27/40)比32.5%(13/40)， χ2＝5.352， P<0.05]；观察组术前mSEPT9阳性共27例，术后4周外周血mSEPT9检测阳性6例，转阴率77.8%，术后随访1年8例复发，复发病例监测mSEPT9阳性率高于CEA阳性率[75.0%(6/8)比37.5%(3/8)， χ2＝6.263， P<0.05]。 结论:外周血septin9基因甲基化检测，可作为一种有效、无创的胃癌筛查、评估手术疗效及监测复发的方法。

目的:Meta系统分析评价中国部分人群中Septin-9基因检测对结直肠癌的诊断价值。方法:检索万方、中国知网、维普、Pubmed、Embase数据库，发表日期从建库至2020年1月，筛选相关文献后提取数据，采用QUADAS-2标准对纳入文献进行质量评价，再对提取数据行初步合并，以判定阈值效应、异质性、诊断效能，进一步通过敏感性分析探讨异质性来源及亚组分析，最后评估是否存在发表偏倚。结果:共纳入17篇文献，包含病例组1 668例，对照组2 407例。合并灵敏度：0.74(95% CI：0.72～0.76)，特异度：0.81(95% CI：0.79～0.83)，阳性似然比：6.89(95% CI：3.39～12.19)，阴性似然比：0.30(95% CI：0.23～0.40)，诊断比值比：23.43(95% CI：10.25～53.53)，SROC(Summary ROC)的曲线下面积(AUC)：0.821。亚组分析显示，Septin-9基因甲基化检测在结直肠癌的诊断中，组织样本和巢式甲基化特异PCR检测方法的诊断价值较高(DOR＝63.355、56.567)，而进行手术干预治疗后的诊断价值较低(DOR＝14.245)。 结论:中国人群中Septin-9基因甲基化检测在结直肠癌的诊断价值较高，有望成为结直肠癌的诊断标记物。

Background::Ischemic acute kidney injury (AKI) is a common syndrome associated with considerable mortality and healthcare costs. Up to now, the underlying pathogenesis of ischemic AKI remains incompletely understood, and specific strategies for early diagnosis and treatment of ischemic AKI are still lacking. Here, this study aimed to define the transcriptomic landscape of AKI patients through single-cell RNA sequencing (scRNA-seq) analysis in kidneys.Methods::In this study, scRNA-seq technology was applied to kidneys from two ischemic AKI patients, and three human public scRNA-seq datasets were collected as controls. Differentially expressed genes (DEGs) and cell clusters of kidneys were determined. Gene ontology (GO) and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) pathway enrichment analysis, as well as the ligand-receptor interaction between cells, were performed. We also validated several DEGs expression in kidneys from human ischemic AKI and ischemia/reperfusion (I/R) injury induced AKI mice through immunohistochemistry staining.Results::15 distinct cell clusters were determined in kidney from subjects of ischemic AKI and control. The injured proximal tubules (PT) displayed a proapoptotic and proinflammatory phenotype. PT cells of ischemic AKI had up-regulation of novel pro-apoptotic genes including USP47, RASSF4, EBAG9, IER3, SASH1, SEPTIN7, and NUB1, which have not been reported in ischemic AKI previously. Several hub genes were validated in kidneys from human AKI and renal I/R injury mice, respectively. Furthermore, PT highly expressed DEGs enriched in endoplasmic reticulum stress, autophagy, and retinoic acid-inducible gene I (RIG-I) signaling. DEGs overexpressed in other tubular cells were primarily enriched in nucleotide-binding and oligomerization domain (NOD)-like receptor signaling, estrogen signaling, interleukin (IL) -12 signaling, and IL-17 signaling. Overexpressed genes in kidney-resident immune cells including macrophages, natural killer T (NKT) cells, monocytes, and dendritic cells were associated with leukocyte activation, chemotaxis, cell adhesion, and complement activation. In addition, the ligand-receptor interactions analysis revealed prominent communications between macrophages and monocytes with other cells in the process of ischemic AKI. Conclusion::Together, this study reveals distinct cell-specific transcriptomic atlas of kidney in ischemic AKI patients, altered signaling pathways, and potential cell-cell crosstalk in the development of AKI. These data reveal new insights into the pathogenesis and potential therapeutic strategies in ischemic AKI.

目的:分析Septin9基因甲基化检测对不能明确意义的非典型鳞状细胞(ASCUS)患者分流的临床应用价值。方法:选择2019年10月至2022年10月在青海红十字医院行人乳头瘤病毒(HPV)筛查和液基细胞学检测(TCT)的女性患者，TCT结果为ASCUS，且均行Septin9基因甲基化检测与阴道镜活检组织病理学检测。以宫颈组织病理学结果作为金标准，分析在各组织病理学检测结果中的高危HPV、Septin9基因甲基化检出率，分析Septin9基因甲基化检出率与宫颈病变之间的关系以及Septin9基因甲基化检测对ASCUS患者分流的效能。结果:共收集病例114例，根据阴道镜活检组织病理学结果分为阳性组69例、阴性组45例。在四组组织病理学检测结果中高危HPV检出率的差异具有统计学意义(均 P<0.001)，Septin9基因甲基化检出率的差异亦有统计学意义(均 P<0.001)。Cochran-Armitage趋势检验发现宫颈病变程度与Septin9基因甲基化检出率存在线性趋势(χ 2＝27.88， P<0.05)。与高危HPV检测相比，Septin9基因甲基化检测对于ASCUS患者分流具有较高的特异度(84.44%)、阳性预测值(89.06%)及曲线下面积(AUC)(0.835)(均 P<0.05)，而灵敏度(82.61%)、阴性预测值(76.00%)与准确率(83.33%)差异无统计学意义(均 P>0.05)。 结论:ASCUS患者中Septin9基因甲基化的检出率随着宫颈病变程度加重逐渐升高；Septin9基因甲基化检测对ASCUS患者的分流效能高于高危HPV检测。

目的:探讨胞裂蛋白9(SEPTIN9)基因甲基化对食管癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:采用亚硫酸盐测序聚合酶链式反应(PCR)法检测正常食管上皮细胞HEEC与食管癌ECA109、KYSE150细胞中SEPTIN9基因甲基化水平。分别应用甲基化抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dc)(实验组)和二甲基亚砜(DMSO)(对照组)与细胞共培养72 h，采用实时荧光定量聚合酶链反应及蛋白质印迹法(Western blot)检测SEPTIN9 mRNA及其蛋白，采用噻唑蓝(MTT)法及膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素标记磷脂结合蛋白(Annexin V-FITC)凋亡实验检测增殖与凋亡，Transwell小室法检测迁移和侵袭。组间比较采用独立样本 t检验。 结果:食管癌细胞ECA109、KYSE150的SEPTIN9基因甲基化程度高于正常食管上皮细胞HEEC[(83.69±7.15)%比(21.36±4.58)%；(84.26±6.97)%比(21.36±4.58)%， t＝12.714、13.063， P<0.01]。实验组食管癌细胞ECA109、KYSE150 SEPTIN9 mRNA及SEPTIN9蛋白相对表达量高于对照组(1.66±0.17比1.23±0.12、1.68±0.20比1.25±0.13；1.76±0.18比1.35±0.15、1.85±0.21比1.38±0.16， t＝3.579、3.122、3.031、3.083， P<0.05)。实验组食管癌细胞ECA109、KYSE150增殖能力低于对照组(0.38±0.06比0.91±0.17、0.40±0.05比0.97±0.16， t＝5.092、5.890， P<0.01)。实验组食管癌细胞ECA109、KYSE150凋亡率高于对照组[(35.69±4.37)%比(17.89±2.26)%、(41.18±5.49)%比(18.96±3.05)%， t＝6.267、6.128， P<0.01]。实验组食管癌细胞ECA109、KYSE150迁移细胞数目、侵袭细胞数目少于对照组[(116.75±12.59)个比(187.24±19.26)个、(120.24±13.68)个比(193.25±20.34)个；(61.34±7.52)个比(108.35±12.56)个、(63.58±6.69)个比(112.24±15.06)个， t＝5.905、5.159、5.562、5.114， P<0.01]。 结论:抑制SEPTIN9基因甲基化可使食管癌细胞中SEPTIN9基因重新表达，从而抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭，促进细胞凋亡。

结直肠癌(CRC)血液标志物主要分为4类：核酸(RNA/DNA/信使RNA/microRNA)、细胞因子、抗体和蛋白质。在核酸中最有希望的血液标志物是NEAT_v2非编码RNA，SDC2甲基化和Septin 9甲基化。检测结直肠癌的最有希望的细胞因子是白细胞介素(IL)-8，最有希望的蛋白类标志物是CA11-19糖蛋白和DC-SIGN/DC-SIGNR蛋白。这些标志物检测原发性CRC的敏感性为70%~98%，特异性为84%~99%。目前研究最广泛的血液标志物是Septin 9甲基化，该标志物灵敏性范围是48%~96%。如果结合粪便免疫化学测试(FIT)，其敏感性从78%提高到94%。Septin 9甲基化或SDC2甲基化均比CEA或CA19-9具有更好的敏感性和特异性。为了系统评估血液标志物诊断结直肠癌的效能，本文对文献报道的人类原发性结肠直肠癌的诊断性血液标志物的文献进行了系统综述。

目的:探讨在肺泡上皮细胞模型中甲型H1N1流感病毒（H1N1病毒）诱导低氧诱导因子-1α（HIF-1α）核转位的分子机制。方法:体外培养人肺腺癌上皮细胞（A549细胞），选取对数生长期细胞用于实验。①实验1：采用感染复数（MOI）1.0的H1N1病毒感染细胞24 h，建立H1N1病毒感染的A549细胞模型（H1N1病毒感染组）；并设立空白对照组。采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测细胞中核转运受体蛋白（Importin 4、Importin 7）表达，探讨HIF-1α核转位是否依赖Importin 4、Importin 7。②实验2：采用不同MOI（0、0.1、0.5、1.0、2.0、4.0）的H1N1病毒感染细胞24 h；采用MOI 1.0的H1N1病毒感染细胞0、3、6、12、18、24、36 h。采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞中胞裂蛋白9基因变异剪接体1（SEPT9_i1）mRNA表达，探讨不同MOI和感染时间对SEPT9_i1表达的影响。③实验3：采用小干扰RNA（siRNA）转染细胞24 h抑制SEPT9_i1，建立沉默SEPT9_i1的A549细胞模型（siRNA-SEPT9_i1组）；并设立空白对照组和空白载体对照组（siControl组）。3组细胞转染24 h后均给予MOI 1.0的H1N1病毒感染24 h，采用实时荧光定量RT-PCR检测细胞中SEPT9_i1 mRNA表达，以探讨siRNA对SEPT9_i1的干扰效率。④实验4：将细胞分为siControl组和siRNA-SEPT9_i1组，两组细胞转染方法同实验3。转染24 h后，两组均以MOI 1.0的H1N1病毒感染细胞，于24 h采用免疫荧光法观察细胞中HIF-1α核内外分布情况；于6、12、24、36、48 h采用实时荧光定量RT-PCR检测病毒M基因表达，以明确SEPT9_i1对HIF-1α核转位和病毒复制的影响。⑤实验5：将细胞分为空白对照组（完全培养基）、SP600125组〔100 μmol/L的c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路抑制剂SP600125处理细胞2 h〕、H1N1病毒感染组（MOI 1.0的H1N1病毒感染细胞24 h）和H1N1病毒+ SP600125组（100 μmol/L的SP600125预处理2 h后，再加入MOI 1.0的H1N1病毒感染细胞24 h）。采用实时荧光定量RT-PCR检测细胞中SEPT9_i1 mRNA和病毒M基因表达，探讨JNK信号通路对SEPT9_i1表达及病毒复制的影响。结果:①实验1：与空白对照组相比，H1N1病毒感染组A549细胞中Importin 4和Importin 7蛋白表达差异均无统计学意义〔Importin 4蛋白（Importin 4/GAPDH）：1.08±0.03比1.05±0.03，Importin 7蛋白（Importin 7/GAPDH）：0.87±0.11比0.78±0.03，均 P>0.05〕。说明H1N1病毒感染A549细胞中HIF-1α核转位可能不依赖Importin 4和Importin 7。②实验2：A549细胞中SEPT9_i1 mRNA表达随H1N1病毒MOI增加及感染时间延长呈升高趋势，分别于MOI 2.0和感染18 h达峰值，与MOI为0或感染0 h比较差异均有统计学意义（2 -ΔΔCT：MOI 2.0为1.39±0.05比1.00±0.00，18 h为1.47±0.04比1.00±0.00，均 P<0.01）。说明H1N1病毒感染A549细胞中SEPT9_i1表达与病毒MOI及感染时间相关。③实验3：与空白对照组比较，siRNA-SEPT9_i1组A549细胞中SEPT9_i1 mRNA表达明显下调（2 -ΔΔCT：0.38±0.11比1.00±0.00， P<0.01），而siControl组与空白对照组比较差异无统计学意义（2 -ΔΔCT：1.03±0.16比1.00±0.00， P>0.05）。说明沉默SEPT9_i1可抑制H1N1病毒感染A549细胞中SEPT9_i1表达。④实验4：siRNA-SEPT9_i1组H1N1病毒感染A549细胞中HIF-1α核转位较siControl组明显减少。siControl组感染H1N1病毒后细胞中病毒M基因表达逐渐升高，48 h达峰值；siRNA-SEPT9_i1组A549细胞中病毒M基因表达明显下调，48 h与siControl组比较差异有统计学意义（2 -ΔΔCT：3.47±0.66比8.17±0.38， P<0.05）。说明沉默SEPT9_i1后可以抑制H1N1病毒感染A549细胞中HIF-1α核转位和病毒复制。⑤实验5：H1N1病毒感染组A549细胞中SEPT9_i1 mRNA和病毒M基因表达较空白对照组明显升高；而H1N1病毒+ SP600125组A549细胞中SEPT9_i1 mRNA和病毒M基因表达均明显低于H1N1病毒感染组（2 -ΔΔCT：SEPT9_i1 mRNA为0.12±0.10比1.53±0.14，病毒M基因为2.13±0.10比4.66±0.14，均 P<0.05）；SP600125组上述指标与空白对照组比较差异均无统计学意义。说明H1N1病毒感染A549细胞中JNK信号通路可以调控SEPT9_i1的表达，而抑制JNK信号通路可以下调SEPT9_i1的表达及抑制病毒复制。 结论:H1N1病毒通过激活JNK信号通路调控SEPT9_i1的表达，从而提高HIF-1α转运效率以及促进病毒复制。

目的:探讨外周血Septin9基因甲基化联合测定粪便样本中硫酸类肝素蛋白多糖基因（syndecan-2，SDC2）甲基化和组织因子途径抑制物2（tissue factor pathway inhibitor 2，TFPI2）基因甲基化与粪便隐血试验（fecal occult blood test，FOBT）在大肠病变筛查中的临床价值。方法:选取2017年1月至2019年6月期间于四川省广元市中心医院治疗的75例大肠癌患者和50例进展期腺瘤患者分别作为大肠癌组和进展期腺瘤组，并以同期40例结肠镜检查结果为阴性者作为对照组，采用甲基化特异性PCR（MSP）法检测全部3组受试者外周血Septin9、SDC2和TFPI2基因甲基化状态以及粪便隐血试验筛查大肠癌和进展期腺瘤。绘制受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve，ROC），比较联合检测与各指标单独检测的诊断价值。结果:大肠癌组Septin9、SDC2、TFPI2基因甲基化、FOBT的阳性检出率分别为53.04%（61/115例）、55.65%（64/115例）、59.13%（68/115例）、26.09%（30/115例），进展期腺瘤组Septin9、SDC2、TFPI2基因甲基化、FOBT的阳性检出率分别为33.33%（30/90例）、50.00%（45/90例）、40.00%（36/90例）、17.78%（16/90例）。以病理学检查判断为金标准，Septin9、SDC2、TFPI2基因甲基化联合检查筛查大肠癌时检测敏感度（82.7%）高于各单项检查以及SDC2和TFPI2基因甲基化联合检测敏感度[Septin9基因甲基化（66.7%）、SDC2基因甲基化（69.3%）、TFPI2基因甲基化（73.3%）、FOBT（26.7%）、SDC2和TFPI2基因甲基化联合检测（77.3%）]，同时还保持了较高的特异度（80.0%）。Septin9、SDC2、TFPI2基因甲基化联合检查筛查进展期腺瘤检测敏感度（70.0%）高于各单项检查以及SDC2和TFPI2基因甲基化联合检测敏感度[Septin9基因甲基化（40.0%）、SDC2基因甲基化（64.0%）、TFPI2基因甲基化（50.0%）、FOBT（18.0%）、SDC2和TFPI2基因甲基化联合检测（64.0%）]，也保持了较高的特异度（82.5%）。ROC曲线分析结果显示3种基因甲基化联合检查筛查大肠癌时的ROC曲线下面积0.918显著高于Septin9、SDC2、TFPI2基因甲基化、FOBT单独检查时以及SDC2联合TFPI2基因甲基化检测的ROC曲线下面积（0.684、0.765、0.623、0.796和0.566），差异具有统计学意义（ P<0.05）；3种基因甲基化联合检查筛查进展期腺瘤的ROC曲线下面积0.867显著高于Septin9、SDC2、TFPI2基因甲基化、FOBT单独检查以及SDC2联合TFPI2基因甲基化的ROC曲线下面积（0.568、0.685、0.535、0.723和0.489），差异具有统计学意义（ P<0.05）。 结论:联合检测Septin9、SDC2和TFPI2基因甲基化可提高大肠病变诊断的敏感度，并有较高的特异度。

目的:探讨亚太地区结直肠肿瘤筛查(APCS)评分系统在结直肠肿瘤筛查中的优化策略。方法:选择2016年2至12月和2018年3至12月在空军军医大学西京医院、西安医学院第一附属医院行结直肠肿瘤伺机性筛查的人群为研究对象。所有入组病例在行结肠镜检查前行APCS评分(低危0～1分，中危2～3分，高危4～7分)、BMI测量、粪便隐血试验(FOBT)和血浆甲基化Septin9基因( mSEPT9)检测，以结肠镜检查和活组织病理诊断为金标准，比较以上方法在结直肠肿瘤筛查中的效能，确定优化APCS评分系统筛查效能的策略。采用卡方检验进行统计学分析。 结果:共纳入筛查对象494例，其中结直肠息肉133例，包括结直肠腺瘤86例(非进展期腺瘤82例，进展期腺瘤4例)和非腺瘤性结直肠息肉47例。APCS评分高危筛查人群结直肠腺瘤检出率(33.3%，33/99)分别是中危(16.5%，39/237)、低危(8.9%，14/158)人群的2.02和3.76倍，差异均有统计学意义(均Bonferroni校正法， P均<0.016)；BMI>23.9 kg/m 2筛查人群中结直肠腺瘤的检出率高于BMI≤23.9 kg/m 2人群[22.2%(59/266)比11.8%(27/228)]，差异有统计学意义( χ2＝9.126， P＝0.003)；而血浆 mSEPT9表达阳性筛查人群中结直肠腺瘤的检出率与血浆 mSEPT9表达阴性人群比较[22.4%(15/67)比17.3%(47/271)]差异无统计学意义( χ2＝0.913， P＝0.378)。在同时行BMI测量、FOBT和血浆 mSEPT9检测的158例中低危(APCS评分≤3分)人群中，BMI>23.9 kg/m 2者结直肠腺瘤再次检出率高于BMI≤23.9 kg/m 2者[17.8%(16/90)比5.9%(4/68)]，差异有统计学意义( χ2＝4.957， P＝0.030)；BMI>23.9 kg/m 2且FOBT阳性者结直肠腺瘤再次检出率高于BMI≤23.9 kg/m 2且FOBT阴性者[28.1%(9/32)比8.0%(4/50)]，差异有统计学意义( χ2＝5.942， P＝0.027)；FOBT和血浆 mSEPT9表达均阳性者结直肠腺瘤再次检出率高于两者均阴性者[5/14比12.9%(12/93)]，差异有统计学意义( χ2＝4.738， P＝0.045)。 结论:APCS评分系统应用于结直肠肿瘤序贯筛查时，优化选择BMI替代或联合FOBT可改善患者依从性，提高筛查效能，在结直肠肿瘤早期诊治中有重要的临床意义和推广价值。