获得性免疫缺陷综合征(AIDS)急性生理学和慢性健康状况评价Ⅱ(APACHE Ⅱ)支气管肺泡灌洗液(BALF)体重指数(BMI)血尿素氮(BUN)美国临床和实验室标准化协会(CLSI)碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(CRE)脑脊液(CSF)弥散性血管内凝血(DIC)酶联免疫吸附测定(ELISA)红细胞沉降率(ESR)医院获得性肺炎(HAP)乙型肝炎病毒(HBV)人类免疫缺陷病毒(HIV)美国感染病学会(IDSA)基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)最低抑菌浓度(MIC)甲氧西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)甲氧西林耐药表皮葡萄球菌(MRSE)甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)聚合酶链反应(PCR)药效学(PD)青霉素中介肺炎链球菌(PISP)血小板(PLT)结核菌素试验(PPD)青霉素敏感肺炎链球菌(PSSP)受试者工作特征(ROC)总胆红素(TB)呼吸机相关性肺炎(VAP)白细胞(WBC)

Background::The casein kinase 2-interacting protein-1 ( CKIP-1) is important in the development of osteoblasts and cardiomyocytes. However, the effects of CKIP-1 on osteoblast precursor mesenchymal stem cells (MSCs) remain unclear. This study aimed to determine whether CKIP-1 affects osteogenic differentiation in MSCs and explore the relationship of CKIP-1 and inflammation. Methods::Bone marrow MSCs of CKIP-1 wild type (WT) and knockout (KO) mice were cultivated in vitro. Cell phenotype was analyzed by flow cytometry, colony formation was detected to study the proliferative ability. Osteogenic and adipogenic induction were performed. The osteogenic ability was explored by alizarin red staining, alkaline phosphatase (ALP) staining and ALP activity detection. Quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) was carried out to determine the mRNA expression levels of osteoblast marker genes. The adipogenic ability was detected by oil red O staining. Content of the bone was analyzed to observe the differences of bone imaging parameters including trabecular bone volume/tissue volume (BV/TV), bone surface area fraction/trabecular BV, trabecular number (Tb.N), and trabecular spacing (Tb.sp). Interleukin (IL)-1β was injected on WT mice of 2 months old and 18 months old, respectively. Difference in CKIP-1 expression was detected by RT-PCR and western blot. The relationship between CKIP-1 and inflammation was explored by RT-PCR and western blot. Results::ALP assays, alizarin red staining, and qRT-PCR showed that MSCs derived from CKIP-1 KO mice exhibited a stronger capability for osteogenesis. Micro-computed tomography detection showed that among 18-month-old mice, CKIP-1 KO mice presented significantly higher bone mass compared with WT mice ( P = 0.02). No significant difference was observed in 2-month-old mice. In vivo data showed that expression of CKIP-1 was higher in the bone marrow of aging mice than in young mice (4.3-fold increase at the mRNA level, P = 0.04). Finally, the expression levels of CKIP-1 in bone marrow (3.2-fold increase at the mRNA level, P = 0.03) and cultured MSCs were up-regulated on chronic inflammatory stimulation by IL-1β. Conclusions::CKIP-1 is responsible for negative regulation of MSC osteogenesis with age-dependent effects. Increasing levels of inflammation with aging may be the primary factor responsible for higher expression levels of CKIP-1 but may not necessarily affect MSC aging.

目的:评估6种结核分枝杆菌检测方法对不典型肾结核的早期诊断价值，为临床诊断提供参考。方法:收集河北省胸科医院泌尿外科2015年10月至2020年12月诊治的不典型肾结核患者46例(结核组)、非结核肾病患者53例(对照组)，分别采用结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)、结核菌素试验(PPD试验)、涂片抗酸杆菌染色镜检(AFB镜检法)、BACTEC MGIT960液体培养(简称液体培养法)、结核分枝杆菌脱氧核糖核酸实时荧光定量PCR(TB-DNA FQ-PCR)、利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术（GeneXpert MTB/RIF），以结核菌培养及病理结果为金标准，比较不同检测方法在不典型肾结核临床诊断中的价值。结果:T-SPOT.TB灵敏度(95.65%)高于PPD试验(73.91%)，差异有统计学意义(McNemar检验： P=0.002)；GeneXpert MTB/RIF的灵敏度为84.78%，高于AFB镜检法(4.35%)、液体培养法(28.26%)和TB-DNA FQ-PCR(58.70%)，差异有统计学意义(McNemar检验： P均<0.001)，GeneXpert MTB/RIF与三者的特异性无统计学差异(McNemar检验： P=1.000、0.500和0.250)。 结论:T-SPOT.TB与GeneXpert MTB/RIF在不典型肾结核的筛查和病原学诊断中有较高的灵敏度和应用价值，推荐应用。

目的:探讨微小RNA155（miR-155）和细胞因子信号抑制分子6（SOCS6）在结核感染鉴别诊断中的价值。方法:病例对照研究。回顾性纳入2017年1至6月来第三军医大学第三附属医院就诊的60例患者，分为活动性肺结核组、潜伏性结核组和其他肺部感染性疾病组，每组各20例。采用荧光定量PCR法检测miR-155与SOCS6基因在不同结核感染状态人群外周血单个核细胞中的表达水平。采用Logistic回归分析获得miR-155与SOCS6联合应用指标（Co-index）。研究miR-155、SOCS6以及Co-index在鉴别结核感染中的价值。绘制受试者工作特征（ROC）曲线，计算ROC曲线下面积（AUC）。统计分析和制图通过MedCalc和GraphPad Prism 8.0软件实现。结果:鉴别结核感染与未感染时，miR-155（AUC=0.663， P=0.031），SOCS6（AUC=0.708， P=0.002）和Co-index（AUC=0.718， P=0.001）鉴别力均不佳。在鉴别活动性感染和潜伏性感染时，miR-155（AUC=0.867， P<0.001）和Co-index（AUC=0.875， P<0.001）鉴别效能高，但两组间差异无统计学意义（ Z=0.142， P=0.887）；SOCS6（AUC=0.570， P=0.459）鉴别效能低。在鉴别活动性结核感染与非结核其他肺部感染时，Co-index（AUC=0.923， P<0.001）优于SOCS6（AUC=0.723， P=0.007）（ Z=2.586， P=0.010），与miR-155（AUC=0.835， P<0.001）比较，差异无统计学意义（ Z=1.585， P=0.113）。 结论:miR-155是鉴别潜伏性结核感染和活动性结核感染的潜在生物标志物。miR-155联合SOCS6有助于鉴别活动性结核感染与非结核其他肺部感染。

目的:探讨非结核分枝杆菌肺病的临床病理学特征和分子病理学方法在其诊断中的价值。方法:分析首都医科大学附属北京胸科医院2016年2月至2019年8月石蜡包埋标本诊断肺部非结核分枝杆菌（NTM）感染的45例患者病理组织学形态、抗酸杆菌形态特征及临床、影像、细菌学资料；荧光PCR方法检测结核分枝杆菌特异基因序列IS6110；探针熔解曲线方法行分枝杆菌菌种鉴定；选取同期确诊肺结核病例50例进行比较分析。结果:NTM肺病病理组织学表现为坏死性肉芽肿34例（75.6%，34/45），非坏死性肉芽肿1例（2.2%，1/45），非肉芽肿病变10例（22.2%，10/45）；坏死为粉染坏死、富于核碎片的嗜碱性坏死及化脓性坏死，与肺结核比较，后者更多表现为粉染坏死及嗜碱性坏死，差异有统计学意义（χ 2=10.270， P=0.001；χ 2=7.449， P=0.006）；17例（37.8%，17/45）NTM肺病中观察到巨大奇异形多核巨细胞，与肺结核组比较差异有统计学意义（χ 2=13.446， P<0.01）。抗酸杆菌数量多少不一，形态多样，胞内分枝杆菌常见大量抗酸杆菌，堪萨斯分枝杆菌奇异形抗酸杆菌易见。胞内分枝杆菌18例（40.0%，18/45），蟾蜍分枝杆菌8例（17.8%，8/45），鸟、堪萨斯、龟分枝杆菌各6例（13.3%，6/45），猿猴分枝杆菌1例（2.2%，1/45）。 结论:NTM肺病的诊断和鉴别诊断值得病理医师关注，仅靠组织形态学特征和抗酸杆菌形态特点不能明确诊断，分子病理学方法是确诊结核病和NTM肺病的重要手段。

目的:探讨病理组织中的病原学检查对结核病的诊断价值。方法:选择2016年5月至2019年5月深圳市第三人民医院收治的190例疑似或确诊为结核病患者的病理标本，将190份标本按照病理形态分为4组：组1为坏死性肉芽肿组(109份)，组2为非坏死性肉芽肿组(20份)，组3为普通炎症组(45份)，组4为非结核病变组(16份)。比较各种病原学检测方法在4组病理标本中检出结核分枝杆菌( Mycobacterium tuberculosis，MTB)的阳性率，同时比较不同抗结核治疗时间对病原学检查结果的影响。统计学方法采用 χ2检验或Fisher确切概率法。 结果:在组1、组2、组3和组4患者的组织病理标本中抗酸染色的阳性率分别为17.4%(19/109)、5.0%(1/20)、4.4%(2/45)、0(0/16)，MTB培养的阳性率分别为32.0%(32/100)、4/19、4.8%(2/42)、0(0/16)，结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测体系( Mycobacterium tuberculosis/rifampin resistance real-time quantitative nucleic acid amplification detection system, Xpert MTB/RIF)检测的MTB阳性率分别为74.3%(81/109)、15.0%(3/20)、13.3%(6/45)、0(0/16)，荧光定量聚合酶链反应(fluorescent quantitative polymerase chain reaction，FQ-PCR)检测的MTB阳性率分别为63.0%(58/92)、0(0/15)、2.6%(1/38)、0(0/10)，实时荧光核酸恒温扩增检测(simultaneous amplification and testing, SAT)的MTB阳性率分别为32.4%(24/74)、0(0/10)、0(0/15)、0(0/10)，各种病原学方法检测4组标本中的MTB阳性率差异均有统计学意义(均 P<0.05)。Xpert MTB/RIF检测组1标本中MTB的阳性率高于抗酸染色、MTB培养和SAT，差异均有统计学意义( χ2＝71.016、37.162、35.679，均 P<0.01)，但与FQ-PCR比较差异无统计学意义( χ2＝2.517， P＝0.112)，联合病原学检查MTB的阳性率为85.3%(93/109)，高于Xpert MTB/RIF的74.3%(81/109)，差异有统计学意义( χ2＝4.100， P＝0.043)。各种病原学检查抗结核治疗时间≤1个月与>1个月的组1病理标本MTB阳性率分别为：抗酸染色为14.3%(7/49)比20.0%(12/60)( χ2＝0.612, P＝0.434)，MTB培养为48.9%(22/45)比18.2%(10/55)( χ2＝10.721， P＝0.001)，Xpert MTB/RIF为69.4%(34/49)比78.3%(47/60)( χ2＝1.131， P＝0.287)，FQ-PCR为55.0%(22/40)比69.2%(36/52)( χ2＝1.965， P＝0.161)，SAT为43.3%(13/30)比25.0%(11/44)( χ2＝2.736， P＝0.098)。 结论:MTB病原学检查结果与典型的结核病病理形态学存在一致性。病理组织的各种病原学检查方法中以Xpert MTB/RIF检出率最高，且不受早期抗结核治疗时间的影响，而联合病原学检查能提高检出率，可在标本量足够时采用。

目的:研究化疗药物依托泊苷是否通过促凋亡分子Noxa引起儿童神经母细胞瘤(neuroblastoma，NB)细胞的死亡。方法:培养人NB TB3和TB8细胞，分别给予不同浓度的依托泊苷(0，0.125，0.25，0.5，0.75，1.0 mg/L)处理，并利用CCK8检测细胞存活的变化情况；收集处理不同时间的TB3和TB8细胞，提取RNA及蛋白，定量PCR方法检测Noxa的mRNA水平表达，Western Blot方法检测Noxa的蛋白水平表达，然后利用Noxa的siRNA转染细胞，观察依托泊苷对细胞存活率的影响情况。结果:经过浓度分别为0.125 mg/L、0.25 mg/L、0.5 mg/L、0.75 mg/L、1.0 mg/L的依托泊苷处理后，TB3细胞存活率分别为(73.13±8.45)%、(56.18±10.50)%、(33.90±4.17)%、(26.76±6.67)%、(13.49±0.58)%，差异有显著统计学意义( P均<0.01)；TB8细胞存活率分别为(71.06±6.96)%、(37.45±0.68)%、(25.53±3.70)%、(20.28±2.75)%、(10.09±2.52)%，差异有显著统计学意义( P均<0.01)。依托泊苷处理的TB3和TB8细胞Noxa mRNA和蛋白质表达量明显升高，并且表达趋势有时间依赖性；Noxa的siRNA转染细胞后，能够降低Noxa在TB3和TB8细胞中的表达。依托泊苷浓度为0.5mg/L时，转染对照siRNA、Noxa siRNA1、Noxa siRNA2的TB3细胞存活率分别为(45.12±13.58)%、(72.70±21.34)%、(52.08±20.36)% ；TB8细胞存活率分别为(35.52±0.38)%、(63.94±0.10)%、(50.27±1.62)%，差异有显著统计学意义( P均<0.01)。依托泊苷浓度为1.0 mg/L时，转染对照siRNA、Noxa siRNA1、Noxa siRNA2的TB3细胞存活率分别为(13.26±1.84)%、(51.08±2.41)%、(42.80±1.42)%，差异有统计学意义( P均<0.05)，TB8细胞存活率分别为(22.22±3.39)%、(58.00±11.37)%、(40.55±6.94)%，差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:Noxa介导化疗药物依托泊苷能引起NB TB3和TB8细胞死亡。

目的:研究DNA甲基化在结核分枝杆菌（MTB）裂解物诱导CD4 +T细胞白细胞介素6受体（IL-6R）表达下调中的作用及机制。 方法:本研究属于前瞻性研究。收集并分选2019—2020年深圳市第三人民医院10名健康人（对照组）和10例结核病患者（TB组）外周血单个核细胞（PBMC）中CD4 +T细胞，亚硫酸氢盐测序法分析 IL-6R启动子区和3′非翻译区（UTR）区CpG岛甲基化变化；RT-qPCR和Western blotting分别检测IL-6R和DNA甲基转移酶（DNMT）表达；进一步通过MTB裂解物刺激anti-CD3/CD28抗体活化的对照组PBMC和Jurkat E6-1细胞，检测 IL-6R不同区域CpG岛甲基化和IL-6R、DNMT表达的变化；双荧光素酶报告基因系统检测 IL-6R 3′UTR区甲基化状态对其转录活性的影响；两组间采用非配对 t检验，三组及以上多组运用one-way ANOVA分析。 结果:在对照组和TB 组外周血CD4 +T细胞中，TB组中IL-6R表达低于对照组，而DNMT1和DNMT3B则高于对照组；且与对照组比， IL-6R启动子CpG岛甲基化水平差异无统计学意义；3′ UTR区CpG岛甲基化率分别为54.3%±4.7%和69.5%±3.4%，差异有统计学意义（ P<0.001）；在体外，MTB裂解物刺激活化对照组PBMC后，IL-6R表达低于未刺激的，而DNMT1和DNMT 3B表达高于未刺激的；同时CD4 +T细胞中 IL-6R 3′ UTR区CpG岛甲基化率由58.9%±11.6%增加至79.4%±10.9%，差异有统计学意义（ P<0.001）；同样地，MTB刺激活化Jurkat E6-1细胞后的结果与对照组PBMC相一致。进一步发现DNA甲基转移酶抑制剂地西他滨（5-aza）与MTB裂解物共处理后IL-6R 的表达均高于MTB 裂解物单独刺激的；DNA甲基转移酶抑制剂地西他滨（5-aza）与MTB裂解物共处理后 IL-6R 3′ UTR区CpG岛甲基化水平低于MTB 裂解物单独刺激的，并且完全非甲基化修饰的 IL-6R 3′UTR报告基因的转录活性高于完全甲基化修饰的 IL-6R 3′ UTR区CpG岛。 结论:MTB裂解物刺激通过诱导CD4 +T细胞 IL-6R 3′UTR区CpG岛高甲基化抑制 IL-6R转录活性进而下调其表达；MTB诱导CD4 +T细胞 IL-6R 3′UTR区CpG岛高甲基化可能与DNMT1、DNMT3B表达增加有关。

目的:评价耐药相关基因 pncA突变检测河南省耐多药结核病患者吡嗪酰胺耐药性的效果。 方法:收集2018年1月至12月于河南省10个结核病耐药监测地区就诊的152例耐多药结核病患者的痰标本。对患者进行问卷调查，收集年龄、性别、治疗史、痰培养等信息。最终将问卷及菌株标本送至河南省疾病预防控制中心进行后续研究。采用结核分枝杆菌液体培养进行吡嗪酰胺药物敏感试验。采用聚合酶链反应和基因测序鉴定 pncA的突变情况，并与标准菌株H37Rv的序列进行比较。分析吡嗪酰胺耐药表型与抗结核治疗效果的相关性。统计学分析采用 χ2检验和独立样本 t检验。 结果:152株耐多药结核分枝杆菌菌株中，105株为吡嗪酰胺表型耐药菌株。对异烟肼、利福平、乙胺丁醇和链霉素全部耐药的菌株，以及准广泛耐药菌株和广泛耐药菌株对吡嗪酰胺的耐药率均较高，分别为80.39%(82/102)、81.13%(43/53)和92.59%(25/27)。102株菌株的 pncA基因发生突变。以表型药物敏感试验结果为参照， pncA基因突变检测吡嗪酰胺耐药性的灵敏度为89.52%(95%可信区间81.64%～94.39%)，特异度为89.36%(95%可信区间76.10%～96.01%)。共存在100种不同类型的 pncA突变，包括80种点突变和20种插入或缺失突变，其中有13株菌株存在多个位点突变。7株菌株 pncA启动子发生突变，分别为-7G插入突变、-11T到C点突变和-12A到G点突变，3组菌株中 pncA mRNA相对表达量分别为0.21±0.05、0.31±0.08和0.33±0.03，均低于标准株H37Rv(设置其 pncA mRNA表达量为1.00)，差异均有统计学意义( t＝4.57、2.43、3.65，均 P<0.05)。治疗后不同时间段吡嗪酰胺耐药患者和敏感患者的痰菌阴转率差异有统计学意义( χ2＝10.01， P＝0.02)，其中吡嗪酰胺耐药患者治疗6个月末的阴转率为1.08%(1/93)，而吡嗪酰胺敏感患者为7.14%(3/42)。 结论:耐多药结核分枝杆菌呲嗪酰胺耐药与 pncA基因突变相关，该突变散在分布且具有多样性。吡嗪酰胺耐药患者的痰菌阴转时间可能延长。

目的:初步探讨大段骨缺损移植组织工程骨(TEB)后，Arpin蛋白介导的宿主骨髓间充质干细胞(BMSCs)迁移至移植区参与骨修复的作用。方法:免疫荧光观察BMSCs中Arpin蛋白和肌动蛋白相关蛋白2/3(Arp2/3蛋白)的表达及相对定位。构建干扰Arpin蛋白表达慢病毒，转染BMSCs，通过qRT－PCR和Western blot检测Arpin的抑制水平。按照Arpin蛋白表达含量不同，分为空载体对照组和Arpin表达抑制组进行体外和体内实验。体外实验：用迁移小室建立细胞迁移模型，上室接种空载体对照组和Arpin表达抑制组细胞，荧光显微镜检测细胞迁移数量；6孔板接种空载体对照组和Arpin表达抑制组细胞，建立"伤口愈合实验"模型，显微镜检测"伤口愈合"情况。体内实验：选取8周龄C57BL/6小鼠，所有小鼠按照随机数字表法分为空载体对照组(6只)和Arpin表达抑制组(6只)。切除股骨中段2 mm骨干和骨膜，制作大段骨缺损并移植TEB模型。每只小鼠经尾静脉注射100万个BMSCs细胞，术后2, 7 d免疫荧光染色检测BMSCs迁移至骨缺损区数量的差异。术后4周，取股骨进行Micro－CT扫描，检测骨密度(BMD)、相对骨体积(BV/TV)、骨小梁间距(Tb.Sp)、骨小梁厚度(Tb.Th)，然后标本进行病理HE和Masson染色，观察成骨质量。结果:小鼠BMSCs表达Arpin蛋白，相对于Arp2/3，其定位在细胞边缘。在转染慢病毒后，BMSCs表达绿色荧光蛋白，并且Arpin表达抑制组Arpin基因及蛋白表达较空载体对照组显著降低( P<0.01)。体外细胞迁移实验中，Arpin表达抑制组细胞迁移数量[(105.7±6.5)个]较空载体对照组[(76.6±6.6)个]高( P<0.01)。"伤口愈合实验"中，Arpin表达抑制组"伤口愈合"百分比[(62.6±3.2)%]较空载体对照组[(43.8±1.9)%]高( P<0.01)。体内实验的免疫荧光结果表示，术后2 d，两组迁移细胞计数差异无统计学意义( P>0.05)，几乎无标记细胞迁移；术后7 d，Arpin表达抑制组细胞迁移至移植区的数量[(11.3±1.5)个]较空载体对照组[(5.7±1.5)个]更多( P<0.01)。术后4周，Micro－CT结果显示，相对于空载体对照组[BMD：(140.0±6.0)mg/cm 3，BV/TV：(23.4±0.9)%，Tb.Sp：(0.28±0.01)μm ，Tb.Th：(0.15±0.01)μm ], Arpin表达抑制组[BMD：(172.7±6.0)mg/cm 3，BV/TV：(28.8±1.3)%，Tb.Sp：(0.33±0.01)μm，Tb.Th：(0.11±0.01)μm]成骨质量更高( P<0.05)；病理染色提示，Arpin表达抑制组存在更多的新生骨组织。 结论:沉默Arpin蛋白的表达会促进BMSCs的迁移，增加宿主BMSCs迁移至骨缺损区域，提高骨修复效果。