目的:评价磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路在依达拉奉减轻老龄大鼠术后认知功能障碍中的作用。方法:健康雄性SD大鼠60只，20月龄，体质量600~700 g，采用随机数字表法分为4组( n＝15)：对照组(C组)、手术组(O组)、依达拉奉组(E组)和PI3K抑制剂LY294002组(LY组)。O组、E组和LY组于3%七氟烷麻醉下行剖腹探查术。E组和LY组术前30 min时腹腔注射依达拉奉3 mg/kg，同时LY组尾静脉注射LY294002 0.3 mg/kg。术后3 d时行旷场实验评估大鼠自发活动能力，然后行Morris水迷宫实验评估大鼠认知功能。行为学实验结束后处死大鼠分离海马组织，采用Western blot法测定磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、突触素(SYP)和突触后致密蛋白95(PSD-95)的表达水平，行高尔基染色记录海马CA1区神经元树突长度，计算树突棘密度。 结果:4组运动速度、路程及旷场中心停留时间比较差异无统计学意义( P>0.05)。与C组比较，O组逃避潜伏期延长，穿越原平台位置次数减少，海马p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、SYP和PSD-95表达下调，海马CA1区神经元树突长度缩短，树突棘密度降低( P<0.05)；与O组比较，E组逃避潜伏期缩短，穿越原平台位置次数增加，海马p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、SYP和PSD-95表达上调，海马CA1区神经元树突长度增加，树突棘密度升高( P<0.05)；与E组比较，LY组逃避潜伏期延长，穿越原平台位置次数减少，海马p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、SYP和PSD-95表达下调，海马CA1区神经元树突长度缩短，树突棘密度降低( P<0.05)。 结论:依达拉奉减轻老龄大鼠术后认知功能障碍的机制与激活PI3K/Akt/mTOR信号通路，改善海马突触可塑性有关。

目的:探讨法舒地尔对主动脉平滑肌细胞（VSMC）自噬及凋亡的影响以及与磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）-蛋白激酶B（Akt）-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的关系。方法:用10%胎牛血清+DMEM培养液培养SD大鼠VSMC，并利用免疫细胞化学染色法检测传代细胞α平滑肌肌动蛋白（a-SMA）的表达情况鉴定VSMC。采用血小板源性生长因子（PDGF）诱导VSMC，并将PDGF诱导的VSMC分为空白组、对照组、法舒地尔组（30 μmol/L法舒地尔）、法舒地尔+LY294002组（30 μmol/L法舒地尔+25 μmol/L LY294002）。采用MTT法检测各组细胞增殖情况，流式细胞仪检测细胞凋亡率和凋亡周期，GFP-mRFP-LC3双荧光检测细胞自噬水平。采用蛋白免疫印迹法（WB）检测各组细胞Bax、Bcl-2、LC3、Beclin-1及PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR的蛋白表达情况并比较分析。结果:镜下观察培养细胞呈长梭形、放射性生长，出现典型的"峰-谷"样结构，a-SMA阳性表达率为99%，确认所培养细胞为高纯度主动脉VSMC。法舒地尔组细胞增殖能力低于对照组（ P<0.05），法舒地尔+LY294002组高于法舒地尔组（ P<0.05）。与对照组比较，法舒地尔组凋亡率及G 0-G 1期细胞比例升高（均 P<0.05）；与法舒地尔组相比，法舒地尔+LY294002组凋亡率及G 0-G 1期细胞比例回降（均 P<0.05）。与对照组比较，法舒地尔组自噬增强（ P<0.05），而法舒地尔+LY294002组的自噬则较法舒地尔组有所减弱（ P<0.05）。与对照组比较，Bax、Bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin1水平以及PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平升高（均 P<0.05）；法舒地尔+LY294002组Bax、Bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin 1水平以及PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平较法舒地尔组有所回降（均 P<0.05）。 结论:法舒地尔通过激活PI3K-AKT-mTOR信号通路抑制VSMC增殖，促进自噬及凋亡，改善血管功能。

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路对肿瘤的发生、发展及肿瘤治疗发挥着重要作用。既往研究对mTOR信号通路异常导致多种恶性肿瘤的发生以及多种mTOR抑制剂的抗肿瘤疗效进行了相关报道。然而，近年多个关于化疗或程序性死亡受体1抑制剂在肿瘤治疗中产生耐药或抵抗机制的研究关注到mTOR信号的抑制可能与肿瘤抵抗治疗有关。文章对mTOR信号通路的生理功能及其在肿瘤发生中的调控机制进行总结，并针对其在肿瘤治疗敏感性中的作用机制进行综述。

目的 基于网络药理学的研究方法探讨中药藤梨根治疗结直肠癌的作用机制.方法 通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)以及中医药整合药理学研究平台(TCMIP)获取藤梨根的主要活性成分和药物作用靶点,通过GeneCards数据库和OMIM数据库获取结直肠癌的疾病靶点,再通过R语言及VennDiagram作图数据包映射筛选得出药物与疾病的交集靶点,即为藤梨根治疗结直肠癌的潜在治疗靶点.利用Cytoscape 3.7.1 软件、String 数据库分别构建藤梨根治疗结直肠癌的潜在治疗靶点的"药物-成分-疾病-靶点"网络图和蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络图.最后通过David数据库对潜在治疗靶点进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,并将富集结果可视化.结果 筛选到藤梨根药物主要活性成分 6 个,药物作用靶点 154 个,结直肠癌相关疾病靶点10 622 个,两者取交集得到藤梨根治疗结直肠癌的潜在治疗靶点145 个;藤梨根的6 种活性成分芦荟大黄素(aloe-emodin)、ent-表儿茶素(ent-Epicatechin)、(+)-儿茶素[(+)-catechin]、槲皮素(quercetin)、谷甾醇(sitos-terol)及β-谷甾醇(beta-sitosterol)均为治疗结直肠癌的关键核心成分,关键靶点有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 1(AKT1)、白细胞介素6(IL-6)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、JUN、胱天蛋白酶 3(CASP3)、IL-1β、表皮生长因子受体(EGFR)、ESR1 等;GO功能富集分析结果共得到生物过程(BP)条目 141 个,主要涉及DNA结合转录因子活性、转录因子活性、细胞因子活性、血红素结合抗氧化活性等生物过程,KEGG通路富集分析结果显示主要涉及晚期糖基化终末产物-晚期糖基化终末产物受体(AGE-RAGE)信号通路、肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、IL-17 信号通路、缺氧诱导因子-1(HIF-1)信号通路等.结论 基于网络药理学的角度初步探讨并验证了藤梨根治疗结直肠癌的多成分、多靶点、多通路的整体调节作用特点,预测了藤梨根治疗结直肠癌的潜在作用机制,为其活性成分研究与实验研究提供科学依据.

目的 探究加味桃仁承气汤通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对机械通气相关性肺损伤(VILI)大鼠细胞自噬的影响.方法 将60只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、加味桃仁承气汤低剂量组(中药-L组,2.85 g/kg)、加味桃仁承气汤高剂量组(中药-H组,8.55 g/kg)和加味桃仁承气汤高剂量+AMPK抑制剂Compound C组(中药-H+CC组,加味桃仁承气汤8.55 g/kg+ Compound C 250μg/kg),每组12只.于插管即刻和机械通气1h、2h与4h时测定氧合指数(OI).机械通气结束后收集肺泡灌洗液(BALF),酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-18水平;处死大鼠,取肺组织测定湿/干重(W/D)比值;HE染色观察各组大鼠肺组织病理学改变并进行肺损伤评分;透射电镜观察肺泡上皮细胞形态.RT-qPCR检测大鼠肺组织中的AMPK、mTORC1 mRNA表达水平;Western blot检测大鼠肺组织中AMPK、p-AMPK、mTORC1、p-mTORC1和自噬相关蛋白的表达情况.结果 与Sham组相比,Model组大鼠肺组织病理损伤严重,肺W/D、BALF中TNF-α、IL-1β和IL-18水平、肺损伤评分、mTORC1 mRNA表达水平、p-mTORC1蛋白表达升高(P＜0.05);机械通气2h、4h时OI,肺组织AMPK mRNA表达水平,p-AMPK、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1蛋白表达降低(P＜0.05).与Model组相比,中药-H组大鼠肺组织病理损伤减轻,相关指标的变化趋势与上述相反(P＜0.05),肺泡上皮细胞自噬小体增多.Compound C减弱了加味桃仁承气汤对VILI大鼠的保护作用(P＜0.05).结论 加味桃仁承气汤可能通过激活AMPK/mTOR信号通路促进细胞自噬,减轻大鼠VILI.

与帕金森病(Parkinson's disease,PD)相关的信号通路较多,针刺调控不同信号通路改善PD的作用靶点也不尽相同.磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/丝氨酸苏氨酸激酶(serine/threoninekinase,AKT)与脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)/酪氨酸激酶受体B(Tyrosine kinase receptor B,TrkB)信号通路主要围绕促细胞生长、分化和代谢,抗神经元凋亡及保护多巴胺能神经元存活;核因子E2 相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related fac-tor 2,Nrf2)/抗氧化反应元件(anti-oxidantresponseelement,ARE)、Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)/核因子-κB(nu-clear factor-kappa B,NF-κB)与丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)信号通路都涉及参与炎性反应调节.PD发病机制繁杂,目前针刺治疗PD的相关研究主要集中于单一分子或信号通路的基础实验研究,有待进一步开展多靶点、大样本、高质量的随机对照临床试验,以期为进一步研究针刺改善帕金森病的机制拓展新思路,并为临床应用针刺防治帕金森病及神经退行性疾病提供理论依据.

雷帕霉素靶蛋白(TOR)是一种存在于真核生物中进化保守的丝氨酸/苏氨酸激酶,通过调节细胞周期、蛋白质合成、细胞能量代谢等多种途径发挥重要的生理功能.作为真核生物生长发育与免疫应答中最重要且高度保守的宏观调控者之一,TOR已成为近年生物学领域一个新的研究热点.本文主要阐述了TOR在生物中高度保守和对雷帕霉素敏感的特性,及其在拟南芥(Arabidopsis thaliana)、玉米(Zea mays)、豌豆(Pisum sativum)等植物中对生长、SnRK-TOR信号通路、糖代谢及防御反应的影响.

目的 观察蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR)在高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)钙化模型中的表达及其对核心结合因子α1(Cbfα1)表达的调节.方法 体外培养的大鼠VSMC,分为正常磷组(1.3 mmol/L)和高磷组(2.6 mmol/L),培养7d后,观察细胞形态及茜素红染色细胞钙盐沉积,实时定量PCR检测Cbfα1、骨桥蛋白(OPN) mRNA水平,Western印迹检测磷酸化Akt(p-Akt)(ser473)、磷酸化mTOR(p-mTOR)(S2448)、Cbfα1和OPN蛋白的表达.检测到Akt、mTOR活化表达后,给予不同浓度的渥曼青霉素(5、10、30、50和100 nmol/L)和雷帕霉素(1、10和100 ng/ml)干预24、48 h后,检测Cbfα1、OPN、p-Akt和p-mTOR基因和蛋白表达,7d后观察VSMC钙盐沉积变化.结果 VSMC高磷干预7d后,与正常磷组相比,高磷组钙盐沉积明显,Cbfα1、OPN mRNA表达增高(均P＜0.05),p-Akt、p-mTOR、Cbfα1和OPN蛋白表达增高(均P＜0.05).渥曼青霉素、雷帕霉素干预24 h后,相对于高磷组,高磷+渥曼青霉素30、50、100 nmol/L组Cbfα1、OPNmRNA表达明显下调(均P＜0.05);高磷+雷帕霉素1、10和100 ng/ml组Cbfα1、OPN mRNA表达下调(均P＜0.05).渥曼青霉素、雷帕霉素干预48 h后,与高磷组比较,高磷+渥曼青霉素30、50、100 nmol/L)组p-Akt、Cbfα1和OPN蛋白表达明显下调(均P＜0.05);高磷+雷帕霉素1、10、100 ng/ml组,p-mTOR、Cbfα1和OPN蛋白表达呈剂量依赖性下调(均P＜0.05).VSMC培养7d后,与高磷组相比,高磷+渥曼青霉素和高磷+雷帕霉素组钙盐沉积明显减轻.结论 高磷可体外诱导大鼠VSMC钙化,Akt、mTOR参与了高磷诱导的大鼠VSMC钙化,并可能通过调控Cbfα1因子而起作用.

目的 探讨脂联素对子宫内膜癌HEC-1B细胞腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳类雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)信号通路及胰岛素增敏效应的影响.方法 实验分为4组:脂联素组(Ad组,加入20μg/ml的脂联素作用30 min);抑制剂组(加入10μmol/L的AMPK抑制剂——复合物C作用30 min);脂联素+抑制剂组(Ad+抑制剂组,10μmol/L复合物C预处理30 min后,再加入20μg/ml脂联素作用30 min);对照组(仅加入无血清DMEM培养基).(1)荧光定量PCR技术及蛋白印迹法检测HEC-1B细胞中脂联素受体(AdipoR)1、AdipoR2 mRNA和蛋白的表达水平.(2)以不同浓度(分别为2.5、5、10、20μg/ml)脂联素作用于HEC-1B细胞30 min,增敏实验时再加50 nmol/L胰岛素作用5 min;以20μg/ml脂联素作用于HEC-1B细胞不同时间(分别为15、30、45、60 min),增敏实验时再加50 nmol/L胰岛素作用5 min.蛋白印迹法检测HEC-1B细胞中AMPK、mTOR、S6K1蛋白活化水平以及胰岛素受体底物1(IRS1)酪氨酸磷酸化水平.(3)活细胞计数(CCK-8)法检测4组HEC-1B细胞的增殖能力,体外穿膜实验检测4组HEC-1B细胞的迁移能力.结果 (1)在HEC-1B细胞中,AdipoR1 mRNA及蛋白的表达水平分别为8.50±0.09、0.91±0.03,明显高于AdipoR2 mRNA及蛋白(分别为1.00±0.00、0.69±0.03;P<0.05).(2)脂联素以时间、浓度依赖方式诱导HEC-1B细胞中AMPK蛋白活化水平增高但抑制mTOR、S6K1蛋白活化水平(P<0.05),且脂联素浓度为20μg/ml、作用时间为30 min时,AMPK蛋白的活化水平均达到峰值.脂联素以浓度依赖方式诱导IRS1酪氨酸磷酸化水平增高(P<0.05).(3)Ad组HEC-1B细胞增殖的抑制率为(0.68±0.34)％,Ad+抑制剂组为(0.24±0.04)％,两组比较,差异有统计学意义(t=17.88,P<0.05).Ad组穿膜细胞数为(77±8)个,Ad+抑制剂组为(132±13)个,两组比较,差异有统计学意义(t=-7.34,P<0.05).结论 脂联素通过AMPK/mTOR/S6K1信号通路发挥抑制子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖的效应,并通过调控AMPK/S6K1/IRS1信号通路增加HEC-1B细胞对胰岛素的敏感性.

大丽轮枝菌是一种土传性植物病原真菌,可侵染多种植物并引发黄萎病.目前,人们关于大丽轮枝菌的侵染和致病机制的了解还很不深入.本文通过敲除大丽轮枝菌编码丝氨酸/苏氨酸的蛋白激酶基因VdSCH9,阐明了其在大丽轮枝菌生长发育及致病过程中的作用.SCH9基因在酵母中的表达与cAMP-PKA途径和TOR信号通路相关,对酵母的生长、压力响应和寿命等有重要作用.大丽轮枝菌VdSCH9敲除突变体的生长速率显著下降,菌落边缘菌丝更为稀疏,菌丝分枝减少,对棉花植株为害的平均病情指数为56.6,显著低于野生型和互补突变体的平均病情指数90.5和82.8,对茄子植株为害的平均病情指数为65.9,也显著低于野生型和互补突变体的平均病情指数91.1和89.8.另外,敲除突变体对于高渗透压、氧化还原压力、细胞膜和细胞壁完整性等压力条件的敏感性增强.因此,VdSCH9对于大丽轮枝菌的生长、压力响应及致病力均有重要作用.