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D-半乳糖对小鼠睾丸TM4支持细胞连接功能损伤及淫羊藿素的改善作用研究
编辑人员丨6天前
目的 研究D-半乳糖(D-galactose,D-gal)对小鼠睾丸TM4支持细胞连接功能损伤以及淫羊藿素(icaritin,ICT)的改善作用机制.方法 首先将TM4细胞分为正常对照组、不同浓度D-gal处理组,Western blot检测TM4细胞连接功能相关蛋白(ZO-1、Occludin、β-catenin 和 Cx43)以及 ERα/FAK信号通路相关蛋白(ERα、FAK和pY397-FAK)表达水平的变化;随后MTT筛选ICT药物浓度,并将TM4细胞分为正常对照组、D-gal处理组、D-gal处理+不同浓度ICT组,Western blot检测上述蛋白表达水平变化;分子对接研究ERα与ICT之间的相互作用,并预测两者之间的亲和力;最后将TM4细胞分为正常对照组、D-gal处理组、ERα抑制剂组、D-gal+ICT组、ERα抑制剂+ICT组,Western blot检测上述蛋白表达水平的变化.结果 D-gal可浓度依赖性下调连接功能相关蛋白(ZO-1、Occludin、β-catenin 和 Cx43)以及 ERα/FAK信号通路相关蛋白(ERα、FAK和pY397-FAK)表达水平;给予ICT药物后,上述蛋白表达水平均明显上调;ERα和ICT分子对接结果显示,ERα的Asp351氨基酸残基与ICT之间形成2个距离为3.4 ?和2.4 ?的氢键,且两者之间的对接结合能小于-7 kcal·mol-1;ERα抑制剂处理TM4细胞后,上述蛋白表达水平均明显下调,给予ICT后,上述蛋白表达水平未有明显变化.结论 D-gal可导致TM4细胞连接功能损伤,而ICT可改善其损伤,机制可能与上调ERα/FAK信号通路相关.
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编辑人员丨6天前
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血浆 SCUBE-1、ADAMTS-9 及 ANG-2 水平预测急性肺栓塞严重程度及预后的价值
编辑人员丨6天前
目的 探讨血浆信号肽-CUB-表皮生长因子结构域包含蛋白1(SCUBE-1)、A解聚素和金属蛋白酶及血小板反应蛋白基序-9(ADAMTS-9)及血管生成素-2(ANG-2)水平预测急性肺栓塞(APE)严重程度及预后的价值.方法 选取收治的APE患者121例,依据CT肺动脉栓塞指数(PAOI)分为轻度组34例(PAOI<30%)、中度组45例(30%≤PAOI≤50%)和重度组42例(PAOI>50%),根据APE患者预后情况分为预后良好组86例和预后不良组35例.采用酶联免疫吸附法测定血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平.应用多元logistic回归分析影响APE预后不良的危险因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平对APE预后不良的预测价值.采用Pearson相关分析血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平与心功能指标的相关性.结果 预后不良组血浆SCUBE-1[(24.63±11.70)ng/mL vs.(10.17±5.12)ng/mL]、ADAMTS-9[(47.50±13.25)ng/mL vs.(24.28±7.63)ng/mL]及 ANG-2[(15.38±6.27)ng/mL vs.(4.15±1.52)ng/mL]水平均明显高于预后良好组(P<0.001).APE患者病情越重,血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平越高,重度组>中度组>轻度组(P<0.001).多元 logistic 回归分析显示,PAOI、CRP、cTnⅠ、BNP、D-二聚体、SCUBE-1、ADAMTS-9 及 ANG-2水平升高是影响APE预后不良的危险因素(均P<0.05).ROC曲线分析显示,SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2三项联合预测APE预后不良的曲线下面积最大(0.931,95%CI:0.868~0.996),其准确度为88.4%.相关分析显示,APE 患者血浆 SCUBE-1、ADAMTS-9 及 ANG-2 水平与 CRP、cTnⅠ、BNP、D-二聚体及PAOI均呈正相关(P<0.05).结论 血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平升高与APE严重程度和预后不良有关,是APE预后不良的危险因素,三项联合对APE预后不良有较好的预测价值.
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编辑人员丨6天前
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督脉隔药灸联合水凝胶多功能复合敷料对压力性损伤大鼠Nrf2/HO-1/NQO1信号通路的影响
编辑人员丨6天前
目的 观察督脉隔药灸联合水凝胶多功能复合敷料对压力性损伤大鼠创面修复及核因子E2 相关因子 2(nuclear fac-tor-erythroid 2 related factor 2,Nrf2)/血红素氧合酶 1(heme oxygenase-1,HO-1)/NADPH醌氧化还原酶 1(NADPH quinone oxi-doreductase 1,NQO1)信号通路的影响.方法 选取 50 只SPF级SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、水凝胶敷料组、督脉隔药灸组、联合干预组,每组 10只.除假手术组外,其余 4组借助压力装置构建压力性损伤大鼠模型.分组干预并记录各组大鼠的压力性损伤修复情况及创面组织病理变化;借助ELISA检测各组大鼠的血清炎性因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6 以及氧化应激因子丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)水平;Western blot与RT-PCR检测各组大鼠创面肉芽组织Nrf2、HO-1、NQO1、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白及mRNA的表达水平.结果 HE染色结果显示:假手术组皮肤结构未被破坏;模型组创面肉芽组织可见明显的细胞坏死、变性及炎性细胞浸润;干预各组可见创面修复,表现为散在炎性细胞浸润,"气球样"坏死变性明显减少.Masson染色结果显示:假手术组创面皮肤组织胶原纤维较为整齐;模型组创面肉芽组织可见大面积的胶原纤维沉积、紊乱;干预各组可见不同程度的创面修复.与假手术组对比,模型组大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA水平和创面肉芽组织Nrf2、HO-1、NQO1、MMP-9蛋白及mRNA的表达水平均升高(P<0.05),而创面修复率、血清SOD、GSH-Px水平均下降(P<0.05);与模型组比较,水凝胶敷料组、督脉隔药灸组、联合干预组的血清TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA水平均下降(P<0.05),而创面修复率、血清SOD、GSH-Px水平和创面肉芽组织Nrf2、HO-1、NQO1、MMP-9蛋白及mRNA的表达水平均升高(P<0.05),且联合干预组较其他干预组更优(P<0.05).结论 督脉隔药灸可有效促进压力性损伤的创面修复,与水凝胶多功能复合敷料联合使用效果更佳,其机制可能与督脉隔药灸抑制创面炎性反应及氧化应激,并激活Nrf2/HO-1/NQO1信号通路相关.
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编辑人员丨6天前
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石榴皮多酚对大鼠耳廓痤疮模型mTOR/HIF-1α/RORγt信号通路的影响
编辑人员丨6天前
目的:探究石榴皮多酚对大鼠耳廓痤疮模型的抗炎作用及机制。方法:将36只SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组、石榴皮多酚低、中、高浓度组和阳性组,除空白组外,其余各组于大鼠双耳内侧面耳导管开口处均匀涂抹100%油酸,0.5 ml/次,1次/d,并于涂抹油酸的第21天开始在大鼠耳廓同一部位皮下注射痤疮丙酸杆菌液50 μl,1次/d,连续3 d,构建大鼠耳廓痤疮模型。肉眼观察提示造模成功后外用药物,石榴皮多酚组给予不同浓度(质量分数分别为1.4%、2.8%、5.6%)石榴皮多酚软膏0.5 mg,阳性组给予盐酸克林霉素凝胶0.5 mg,空白组及模型组予等量蒸馏水,2次/d,连续用药2周。末次用药24 h后,取腹主动脉血,ELISA法检测大鼠血清中白细胞介素17(IL-17)水平;剪取大鼠耳廓模型处组织,HE染色观察各组皮肤组织病理学变化,免疫组化法检测局部组织中mTOR/HIF-1α/RORγt表达水平。对满足方差齐性的数据,采用单因素方差分析;对不满足的数据,采用Kruskal-Wallis H检验;两两比较采用LSD- t检验。 结果:与模型组相比,石榴皮多酚组及阳性组大鼠耳廓造模处囊肿脱屑及痂皮明显改善,表皮角化改善,真皮层炎症因子浸润减少。IL-17水平在石榴皮多酚低浓度组(61.03 ± 5.99)ng/L、中浓度组(55.35 ± 2.24)ng/L、高浓度组(54.35 ± 4.29)ng/L、阳性组(48.11 ± 4.07)ng/L及空白组(42.10 ± 5.62)ng/L均明显低于模型组(70.24 ± 3.30)ng/L, t = 3.12、5.34、5.70、8.29、10.54,均 P<0.05。免疫组化显示,HIF-1α表达水平在石榴皮多酚低浓度组(0.29 ± 0.05)、中浓度组(0.29 ± 0.03)、高浓度组(0.33 ± 0.02)及阳性组(0.30 ± 0.01)均明显低于模型组(0.41 ± 0.04), t值分别为4.89、5.50、3.62、5.21,均 P<0.05;RORγt表达水平在石榴皮多酚低浓度组(0.28 ± 0.02)、高浓度组(0.31 ± 0.04)均低于模型组(0.35 ± 0.02), t值分别为3.68、2.18,均 P<0.05;各组间mTOR表达差异无统计学意义( P = 0.119)。 结论:石榴皮多酚可以改善大鼠痤疮模型炎症反应,其机制可能与下调HIF-1α/RORγt信号通路有关。
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编辑人员丨6天前
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miRNA-4686通过靶向PDIA4影响食管癌细胞增殖和迁移
编辑人员丨6天前
目的:探讨miRNA-4686(miR-4686)和蛋白质二硫键异构酶A4(PDIA4)在食管癌组织和细胞中的表达,以及miR-4686体外对食管癌细胞增殖和迁移能力的影响及可能机制。方法:采用miRWalk version 3在线网站预测到miR-4686与PDIA4 mRNA互补结合。利用从加州大学圣克鲁兹分校基因组(UCSC)数据库获得的miR-4686和PDIA4 mRNA的表达谱,分析食管癌组织和癌旁组织中miR-4686和PDIA4 mRNA相对表达量。从UCSC数据库获得miR-4686在人体细胞中的定位。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测食管癌细胞Eca109、TE-13、EC9706、KYSE-510与正常食管上皮细胞HET-1A中miR-4686和PDIA4 mRNA的相对表达量。选择miR-4686相对表达量最低的Eca109细胞进行后续研究。将Eca109细胞分为miR-4686组(转染miR-4686模拟物)和miR-NC组(转染miR-4686阴性对照序列模拟物)。通过克隆形成实验检测两组Eca109细胞增殖能力,划痕愈合实验检测Eca109细胞迁移能力,双萤光素酶报告基因实验验证miR-4686与PDIA4 mRNA的靶向关系;蛋白质印迹法检测PDIA4蛋白和PI3K-AKT-mTOR信号通路相关蛋白的表达。结果:与癌旁组织比较,食管癌组织中miR-4686呈低表达、PDIA4 mRNA呈高表达(均 P<0.01)。与正常食管上皮细胞HET-1A(0.98±0.15)比较,食管癌细胞Eca109(0.11±0.04)、TE-13(0.58±0.10)、EC9706(0.34±0.05)、KYSE-510(0.69±0.06)中miR-4686相对表达量均降低(均 P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-4686组Eca109细胞miR-4686相对表达量升高(9.4±2.1比1.0±0.4, t=3.88, P=0.008),克隆形成数减少[(38±9)个比(114±18)个, t=3.78, P=0.009],划痕愈合率降低[(27.13±0.91)%比(45.05±3.89)%, t=4.48, P=0.004],PDIA4 mRNA相对表达量降低[1.0±0.5比6.3±0.9, t=5.04, P=0.002]。与野生型(WT)-PDIA4+miR-NC组比较,WT-PDIA4+miR-4686组Eca109细胞相对荧光素酶活性下降(0.31±0.08比0.99±0.08, t=5.96, P<0.001)。与miR-NC组比较,miR-4686组Eca109细胞中PDIA4、p-PI3K、p-AKT、p-m-TOR蛋白表达均降低。 结论:食管癌组织中miR-4686呈低表达,PDIA4 mRNA呈高表达。miR-4686可能通过靶向调控PDIA4表达而抑制食管癌Eca109细胞增殖和迁移。
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编辑人员丨6天前
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PI3K/Akt/mTOR信号通路在依达拉奉减轻老龄大鼠术后认知功能障碍中的作用
编辑人员丨6天前
目的:评价磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路在依达拉奉减轻老龄大鼠术后认知功能障碍中的作用。方法:健康雄性SD大鼠60只,20月龄,体质量600~700 g,采用随机数字表法分为4组( n=15):对照组(C组)、手术组(O组)、依达拉奉组(E组)和PI3K抑制剂LY294002组(LY组)。O组、E组和LY组于3%七氟烷麻醉下行剖腹探查术。E组和LY组术前30 min时腹腔注射依达拉奉3 mg/kg,同时LY组尾静脉注射LY294002 0.3 mg/kg。术后3 d时行旷场实验评估大鼠自发活动能力,然后行Morris水迷宫实验评估大鼠认知功能。行为学实验结束后处死大鼠分离海马组织,采用Western blot法测定磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、突触素(SYP)和突触后致密蛋白95(PSD-95)的表达水平,行高尔基染色记录海马CA1区神经元树突长度,计算树突棘密度。 结果:4组运动速度、路程及旷场中心停留时间比较差异无统计学意义( P>0.05)。与C组比较,O组逃避潜伏期延长,穿越原平台位置次数减少,海马p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、SYP和PSD-95表达下调,海马CA1区神经元树突长度缩短,树突棘密度降低( P<0.05);与O组比较,E组逃避潜伏期缩短,穿越原平台位置次数增加,海马p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、SYP和PSD-95表达上调,海马CA1区神经元树突长度增加,树突棘密度升高( P<0.05);与E组比较,LY组逃避潜伏期延长,穿越原平台位置次数减少,海马p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、SYP和PSD-95表达下调,海马CA1区神经元树突长度缩短,树突棘密度降低( P<0.05)。 结论:依达拉奉减轻老龄大鼠术后认知功能障碍的机制与激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,改善海马突触可塑性有关。
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编辑人员丨6天前
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法舒地尔促进平滑肌细胞自噬和凋亡的机制研究
编辑人员丨6天前
目的:探讨法舒地尔对主动脉平滑肌细胞(VSMC)自噬及凋亡的影响以及与磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的关系。方法:用10%胎牛血清+DMEM培养液培养SD大鼠VSMC,并利用免疫细胞化学染色法检测传代细胞α平滑肌肌动蛋白(a-SMA)的表达情况鉴定VSMC。采用血小板源性生长因子(PDGF)诱导VSMC,并将PDGF诱导的VSMC分为空白组、对照组、法舒地尔组(30 μmol/L法舒地尔)、法舒地尔+LY294002组(30 μmol/L法舒地尔+25 μmol/L LY294002)。采用MTT法检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率和凋亡周期,GFP-mRFP-LC3双荧光检测细胞自噬水平。采用蛋白免疫印迹法(WB)检测各组细胞Bax、Bcl-2、LC3、Beclin-1及PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR的蛋白表达情况并比较分析。结果:镜下观察培养细胞呈长梭形、放射性生长,出现典型的"峰-谷"样结构,a-SMA阳性表达率为99%,确认所培养细胞为高纯度主动脉VSMC。法舒地尔组细胞增殖能力低于对照组( P<0.05),法舒地尔+LY294002组高于法舒地尔组( P<0.05)。与对照组比较,法舒地尔组凋亡率及G 0-G 1期细胞比例升高(均 P<0.05);与法舒地尔组相比,法舒地尔+LY294002组凋亡率及G 0-G 1期细胞比例回降(均 P<0.05)。与对照组比较,法舒地尔组自噬增强( P<0.05),而法舒地尔+LY294002组的自噬则较法舒地尔组有所减弱( P<0.05)。与对照组比较,Bax、Bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin1水平以及PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平升高(均 P<0.05);法舒地尔+LY294002组Bax、Bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin 1水平以及PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平较法舒地尔组有所回降(均 P<0.05)。 结论:法舒地尔通过激活PI3K-AKT-mTOR信号通路抑制VSMC增殖,促进自噬及凋亡,改善血管功能。
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编辑人员丨6天前
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mTOR信号通路在肿瘤中的研究进展
编辑人员丨6天前
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对肿瘤的发生、发展及肿瘤治疗发挥着重要作用。既往研究对mTOR信号通路异常导致多种恶性肿瘤的发生以及多种mTOR抑制剂的抗肿瘤疗效进行了相关报道。然而,近年多个关于化疗或程序性死亡受体1抑制剂在肿瘤治疗中产生耐药或抵抗机制的研究关注到mTOR信号的抑制可能与肿瘤抵抗治疗有关。文章对mTOR信号通路的生理功能及其在肿瘤发生中的调控机制进行总结,并针对其在肿瘤治疗敏感性中的作用机制进行综述。
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编辑人员丨6天前
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慢性肾衰竭维持性血液透析肺部感染病原菌及其影响因素
编辑人员丨1周前
目的 分析慢性肾衰竭维持性血液透析(MHD)患者肺部感染病原菌特点、影响因素及Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路变化.方法 前瞻性纳入2018年1月—2022年7月南阳医专第一附属医院收治的慢性肾衰竭MHD患者350例,以研究对象肺部感染为依据,分为研究组(合并肺部感染,n=120)、对照组(未合并肺部感染,n=230);分析慢性肾衰竭MHD患者肺部感染的病原菌特点、两组临床资料(包括外周血单核细胞TLR4、NF-κB表达水平),通过Logistic回归分析法分析其影响因素.结果 120例慢性肾衰竭MHD患者并发肺部感染共分离出病原菌155株,革兰阴性菌为主96株(61.94%);年龄升高、合并糖尿病、血清C-反应蛋白(CRP)水平升高、外周血单核细胞TLR-4表达水平升高、外周血单核细胞NF-κB表达水平升高为慢性肾衰竭MHD患者肺部感染的危险因素(P<0.05);血清血红蛋白(Hb)水平升高为慢性肾衰竭MHD患者肺部感染的保护因素(P<0.05).结论 慢性肾衰竭MHD患者肺部感染的病原菌分布以革兰阴性菌为主,TLR4/NF-κB信号通路参与肺部感染的发生,其危险因素较多,可据此采取干预措施.
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编辑人员丨1周前
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圣草次苷调节Nrf2/NQO-1/HO-1/NF-κB信号通路对颈动脉粥样硬化的影响
编辑人员丨1周前
目的 探究圣草次苷对颈动脉粥样硬化(CAS)大鼠氧化应激和炎症反应的影响,并探讨其作用机制.方法 将大鼠随机分为对照组、模型组、圣草次苷低剂量组、圣草次苷中剂量组、圣草次苷高剂量组、圣草次苷高剂量+Brusatol组,每组10只.构建CAS大鼠模型,检测各组大鼠血脂指标三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),苏木精-伊红(HE)染色观察颈动脉组织病理变化,油红O染色观察颈动脉组织脂质堆积情况,试剂盒检测氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT),酶联免疫吸附试验检测活性氧(ROS)及炎性细胞因子白细胞介素(IL)-1β、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,蛋白质免疫印迹法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)/醌氧化还原酶1(NQO1)/血红素加氧酶1(HO-1)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路蛋白表达.结果 与对照组相比,模型组大鼠颈动脉组织内膜增厚,动脉粥样硬化斑块和脂质沉积增加,TG、TC、LDL-C、脂质堆积比例、IL-1β、TNF-α、MDA、ROS、p-NF-κB、p65/NF-κB p65 水平上升,HDL-C、IL-10、SOD、CAT、p-Nrf2/Nrf2、NQO-1、HO-1 下降(P<0.05);与模型组相比,圣草次苷低、中、高剂量组颈动脉组织内膜相对完整,动脉粥样硬化斑块和脂质沉积减少,TG、TC、LDL-C、脂质堆积比例、IL-1β、TNF-α、MDA、ROS、p-NF-κB p65/NF-κB p65 水平下降,HDL-C、IL-10、SOD、CAT、p-Nrf2/Nrf2、NQO-1、HO-1 上升(P<0.05);Brusatol 逆转圣草次苷对 CAS 大鼠氧化应激和炎症反应的改善(P<0.05).结论 圣草次苷能调节CAS大鼠的血脂水平,抑制炎症反应和氧化应激,其作用机制可能与调节Nrf2/NQO-1/HO-1/NF-KB信号通路有关.
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编辑人员丨1周前
