研究杞荷分清饮中12种活性成分(琥珀酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、原儿茶醛、咖啡酸、5-O-阿魏酰奎宁酸、对香豆酸、荷叶碱、槲皮素、齐墩果酸、熊果酸)在正常和糖尿病模型大鼠体内的药动学差异.采用高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,建立超高效液相色谱-三重四极杆-线性离子阱质谱(UHPLC-QTRAP-MS/MS)方法,同时测定正常大鼠和模型大鼠分别单次灌胃给予杞荷分清饮后血浆中12种成分的含量.结果显示,所建立的分析方法对12种所测定成分线性关系良好,专属性、准确度、精密度、稳定性等方法学均符合要求.采用DAS 3.2.8软件拟合计算药动学参数结果表明,模型组中除咖啡酸、5-O-阿魏酰奎宁酸、齐墩果酸外其余9种成分半衰期时间(t1/2)相对正常组延长;隐绿原酸、对香豆酸、熊果酸、齐墩果酸药时曲线下面积(AUC0-t)模型组相对正常组增加,且平均驻留时间(MRT)延迟;正常组中槲皮素、荷叶碱出现"双峰"现象,模型组未见,提示疾病状态下药物的药动学参数出现明显差异.

目的:利用LC-MS技术对金佛山雪胆药材中葫芦烷三萜类成分进行识别与表征,同时对该类型的主要化合物进行定量.方法:分别运用UHPLC-Q-Orbitrap HRMS和UFLC-Qtrap-MS/MS技术对葫芦烷三萜类成分进行定性定量分析,以ACQUITY UPLC BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)为色谱柱,乙腈-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱;正、负离子模式下进行质谱扫描,分别以Full scan MS和MRM模式采集数据.结果:共分析金佛山雪胆提取物中83 个色谱峰,其中76 个为葫芦烷三萜类成分;同时定量该植物中9 个葫芦烷三萜代表性成分,其中,活性成分雪胆甲素含量为 25.87 mg/g.结论:该研究结果为金佛山雪胆药效物质筛选、药代动力学分析和质量控制奠定基础.

比较市面上龟甲胶的质量差异,探索龟甲胶治疗骨质疏松症的潜在活性成分及靶点.我们选取市面上4个厂家共15批次的龟甲胶样品,采用UHPLC-QTRAP-MS/MS检测各龟甲胶中水解氨基酸的含量,多元统计分析各批次中水解氨基酸含量的差异性.采用网络药理学预测龟甲胶的活性成分及治疗骨质疏松症的核心靶点,通过GO与KEGG富集分析预测分子机制,并运用分子对接预测各氨基酸与Hub靶点的结合模式.结果显示,厂家A和D的样品聚类良好,其中A厂家的龟甲胶综合得分最高.17种水解氨基酸中谷氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、L-羟脯氨酸、赖氨酸、精氨酸、苏氨酸、蛋氨酸的含量差异对龟甲胶质量影响较大.筛选出17个水解氨基酸的175个潜在靶点,68个骨质疏松症核心靶点,其中甘氨酸、丙氨酸为关键成分.GO/KEGG分析核心靶点主要涉及α-氨基酸代谢过程、细胞氨基酸代谢过程、小分子分解代谢过程等生物进程,以及氨基酸合成、精氨酸和脯氨酸代谢、碳代谢等212条信号通路.分子对接则显示2个关键成分甘氨酸、丙氨酸与11个Hub靶点的活性口袋结合较好.综上,市面上不同厂家及批次间的龟甲胶水解氨基酸含量存在一定差异.龟甲胶抗骨质疏松的关键活性成分可能是甘氨酸、丙氨酸,其作用机理可能与CAT、NOS1、GATM等靶点相关,通过影响氨基酸生物合成、精氨酸和脯氨酸代谢、碳代谢等途径而起作用.

建立了超高效液相色谱-三重四极杆/线性离子阱质谱(UHPLC-QTRAP-MS/MS)同时测定金钱草中黄酮类、有机酸类、核苷类及氨基酸类共41种活性成分含量的方法,考察不同产地金钱草中多元活性成分含量的差异.采用Waters XBridge? C18(4.6 mm×100 mm,3.5 μm)色谱柱,以甲醇(A)和 0.4%甲酸水(B)进行梯度洗脱,柱温 30℃,流速 0.8 mL·min-1,多反应监测模式检测(MRM);根据 41 种目标成分的含量,依次用聚类分析(HCA)、正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)以及灰色关联度分析(GRA)对不同产地金钱草药材进行综合评价.结果显示,41 种目标成分在一定质量浓度范围内均呈良好的线性关系,相关系数(r)均大于 0.999 4;精密度、重复性和稳定性的相对标准偏差(RSD)均小于 5.0%;平均加样回收率为98.06%～101.9%,RSD为 0.62%～4.6%;HCA和OPLS-DA结果表明,48 批不同产地金钱草药材样品分为 3 类,分别为川渝产区,江苏、浙江和江西产区以及贵州产区,3 类产区样品中 41 种活性成分的含量差异显著;GRA结果显示,四川省南充市的金钱草样品综合质量较好.该研究所建立的多元活性成分同时测定结合多元统计分析评价体系准确、可靠,可用于金钱草药材内在质量的综合评价,同时为金钱草药材产地的优选提供基础资料.

目的:分析及鉴定芍药甘草汤主要成分在正常及多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠尿液和粪便中的代谢产物,探究PCOS对芍药甘草汤代谢的影响.方法:雌性SD大鼠随机分为正常组和PCOS组,利用来曲唑溶液灌胃21 d制备PCOS大鼠模型,观察动情周期;采用UHPLC-QTRAP-MS/MS技术并结合LightSight 2.3软件对芍药甘草汤主要成分在正常及PCOS大鼠尿液和粪便中的代谢产物进行分析与鉴定,流动相水-甲醇梯度洗脱,流速0.3 mL· min-1,电喷雾离子源,负离子模式.结果:药物代谢主要发生I相及Ⅱ相反应,正常组大鼠尿液中共检测到代谢物27个,PCOS组大鼠尿液中共检测到代谢物34个;正常组大鼠粪便样品中共检测到代谢物29个,PCOS组大鼠粪便样品中共检测到代谢物27个.结论:PCOS大鼠尿液中代谢产物比正常大鼠更具多样性,PCOS疾病状态可能会影响芍药甘草汤有效成分在体内的代谢途径.

使用超高效液相色谱-三重四极杆离子阱质谱联用技术(UHPLC-QTRAP-MS/MS)快速、准确、高效直接测定8种不同石斛(共9批次)中21种氨基酸和10种核苷类成分的方法,结合多元统计分析进行综合质量评价,为石斛资源综合利用提供科学依据.使用Waters XBridge Amide色谱柱(2.1 mm×100 mm,3.5 μm),以0.2％甲酸水-0.2％甲酸乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速0.2 mL·min-1,柱温30C;电喷雾离子源(ESI)正离子模式下,多反应监测(MRM)模式测定.采用主成分分析(PCA)和逼近理想点排序法(TOPSIS)对实验数据进行综合评价.21种氨基酸和10种核苷类被测成分在一定浓度范围内线性关系均良好,相关系数大于0.999,稳定性、精密度、重复性RSD均小于3.0％,加样回收率在93.31％ ～ 107.5％,RSD 1.1％～3.7％.PCA结果显示,以氨基酸为指标,评分最高为霍山石斛(S1);以核苷类成分为指标,评分最高为铁皮石斛(S6);TOPSIS法中C,最大差异达68.7％,综合评价显示霍山石斛整体品质最优.该实验方法准确、快速、高效;熵权TOPSIS分析方法将多维问题转变为一维问题,提高了决策分析的准确性与科学性.为进一步探索评价石斛品种的内在质量及控制提供依据,同时为其资源的进一步开发与利用提供借鉴.

目的 研究药用紫草高效液相色谱-质谱-多反应监测(UHPLC-QTRAP-MS/MS(MRM)特征轮廓谱与抗肿瘤活性的谱效关系,为明确紫草抗肿瘤作用物质基础提供依据.方法(2018年5月至2019年12月,数据来源于嘉应学院医学院客家药用生物资源研究所)采用UHPLC-QTRAP-MS/MS(MRM)技术建立药用紫草的特征轮廓谱,以A549细胞抑制率为药效指标,采用偏最小二乘回归法分析其谱效关系,并对部分化合物进行活性验证.结果 分析辨识了24个与紫草抗肿瘤作用具有重要影响的成分,其作用相关性由高到低依次为峰59、9、66、32、62、45、46、58、43、71、13、63、41、44、5、39、34、65、49、21、12、3、22和60.验证结果显示紫草呋喃A(19.86±0.55)μmol/L、紫草素(1.10±0.05)μmol/L、紫草呋喃E(22.60±0.92)μmol/L、乙酰紫草素(2.53±0.11)μmol/L、去氧紫草素(5.43±0.24)μmol/L、异丁酰紫草素(2.16±0.10)μmol/L、β,β-二甲基丙烯酰紫草素(3.50±0.16)μmol/L和α-甲基丁酰紫草素(0.74±0.03)μmol/L对A549细胞均有一定抑制作用,其IC50值为0.74～22.60μmol/L,而阳性药紫杉醇的半数抑制浓度(IC50值)为(3.45±0.16)μmol/L.结论 紫草的抗肿瘤药效是多种成分共同作用的结果,该研究初步明确了紫草抗肿瘤药效物质基础,为紫草后续研究和开发提供了科学依据.

目的:应用UHPLC-QTRAP-MS/MS(MRM)技术构建药用紫草的特征轮廓谱并应用该谱对不同来源药用紫草的品质进行评价.方法:应用UHPLC-QTRAP-MS/MS(MRM)技术构建药用紫草的特征轮廓谱并鉴定其化学成分;采用聚类分析、主成分分析、偏最小二乘法判别分析对22批紫草饮片进行综合分析.结果:成功构建了药用紫草的特征轮廓谱并鉴定了73个可能的化合物,其中15个为首次鉴定.聚类分析和主成分分析结果表明不同种属紫草的化学成分差异显著,偏最小二乘法判别分析发现4个差异性成分,分别为:lithospermidin F、1/4-methoxy-lithospermidin J、β,β-二甲基丙烯酰紫草素和6-(11′-deoxyalkannin)-alkannin/shikoninβ,β-dimethylacrylate.结论:基于UHPLC-QTRAP-MS/MS(MRM)技术的特征轮廓谱分析方法为揭示药用紫草的药效物质基础与资源品质评价提供了重要详实的数据基础和技术保障.

目的:建立UHPLC-QTRAP-MS/MS法同时测定尖叶假龙胆中芒果苷、异荭草素、去甲当药醇苷、异牡荆素、当药醇苷、去甲基雏菊叶龙胆酮、雏菊叶龙胆酮7个成分含量.方法:采用Shim-pack GIST C18(100 mm×2.1 mm,2μm)色谱柱;以乙腈-0.1％甲酸溶液为流动相,梯度洗脱;流速为0.3 mL/min;柱温为35℃;采用电喷雾离子源(ESI),多反应离子监测(MRM)模式进行负离子监测.结果:上述7个成分之间分离度良好,且分别在一定的浓度范围内与峰面积的线性关系良好(R2≥0.9990),平均加样回收率为98.76％～102.74％,RSD<2.50％,方法重复性、仪器精密度和供试品溶液的稳定性均良好.结论:该方法操作简便,快速,灵敏度高,可用于尖叶假龙胆中成分的含量测定,为尖叶假龙胆药材的质量控制提供了新方法.

建立超高效液相色谱-三重四极杆/线性离子阱质谱(UHPLC-QTRAP-MS/MS)同时测定桑寄生中黄酮、有机酸、核苷和氨基酸共33种活性成分含量的方法,并对其多元活性成分的动态积累进行分析与评价.采用XBridge? C18色谱柱(4.6 mm×100 mm,3.5 μm),以0.1％甲酸水-甲醇为流动相进行梯度洗脱,流速0.5 mL·min-1,柱温30℃,进样量为2 μL;质谱采用电喷雾离子源(ESI),多反应离子监测(MRM)模式测定;采用熵权TOPSIS法对各项指标成分客观赋权,根据相对贴近度(Ci)进行综合排序,构建桑寄生多指标综合评价模型.结果表明,33种目标成分的浓度和峰面积在各自线性范围内具有良好的线性关系,相关系数(r)均不小于0.999 0;精密度、重复性、稳定性RSD≤4.7％;平均加样回收率为98.03％～101.3％,RSD均小于4.0％.桑寄生中各成分的积累动态不一,2月中旬至3月初采收的桑寄生药材综合质量较好,与当地传统采收期相符.该研究为揭示桑寄生中多元活性成分的动态积累规律及确定其药材的适宜采收期提供基础资料,同时为桑寄生药材内在质量的综合评价提供新的方法参考.