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Sirt3通过抑制肺上皮细胞凋亡减轻重症急性胰腺炎相关肺损伤
编辑人员丨2天前
目的:探讨沉默调节蛋白3(Sirtuin3, Sirt3)在重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis, SAP)诱发急性肺损伤(acute lung injury, ALI)中对肺上皮细胞凋亡的影响及其相关分子机制。方法:野生型小鼠和基因敲除小鼠(靶向突变删除Sirt3等位基因)各35只。各取34只腹腔注射雨蛙素50 μg/kg和内毒素10 mg/kg构建SAP-ALI模型,记录野生型小鼠和基因敲除小鼠注射后12、24、36、48、72 h的生存率,采用H-E染色观察野生型小鼠和基因敲除小鼠注射后12 h肺组织炎症水平,Western blot法比较野生型小鼠和基因敲除小鼠注射前及注射后8、12、24 h肺组织胱天蛋白酶(cysteinyl aspartate specific proteinase, caspase)-3、caspase-9及X-连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(X-linked inhibitor of apoptosis-associated factor, Xaf1)蛋白水平。剩余野生型小鼠和基因敲除小鼠各1只处死取肺组织,免疫组化染色观察肺组织Xaf1表达水平。取MLE12细胞分为4组(每组1孔):空白对照1组(A组)、TNF-α 20 μg/L刺激36 h组(B组)、细胞干扰+TNF-α 20 μg/L刺激36 h组(C组)、细胞过表达+TNF-α 20 μg/L刺激36 h组(D组),流式细胞术检测4组细胞凋亡率。另取MLE12细胞分为3组(每组1孔):空白对照2组(E组)、细胞干扰Sirt3+TNF-α 20 μg/L刺激36 h组(F组)、细胞干扰Sirt3和Xaf1+TNF-α 20 μg/L刺激36 h组(G组),比较E组、F组和G组细胞Xaf1干扰后caspases-3、caspase-9蛋白水平及酶活性。结果:基因敲除小鼠注射后12、24、36、48、72 h生存率均低于野生型小鼠( P<0.05)。与野生型小鼠比较,注射后12 h基因敲除小鼠肺组织炎症细胞浸润和间质水肿更加明显。基因敲除小鼠注射后8、12、24 h肺组织caspase-3、caspase-9蛋白水平均高于野生型小鼠( P<0.05),Xaf1蛋白水平均高于野生型小鼠( P<0.05)。A组、B组、C组、D组细胞凋亡率依次为11%、21%、33%、7%。F组细胞caspase-3、caspase-9蛋白水平高于E组( P<0.05),caspase-3、caspase-9活性高于E组( P<0.05);G组细胞caspase-3蛋白水平低于F组( P<0.05),caspase-3、caspase-9活性低于F组( P<0.05)。 结论:Sirt3可通过调控Xaf1的表达,抑制SAP应激状态下的肺上皮细胞凋亡,并降低SAP-ALI的死亡率。
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编辑人员丨2天前
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信号传导及转录活化因子3和X连锁凋亡抑制蛋白在肿瘤组织的表达及其临床意义
编辑人员丨2天前
目的:探讨信号传导及转录活化因子3(STAT3)和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在子宫内膜癌组织中的表达,以及两者与子宫内膜癌临床生物学行为的关系。方法:收集惠州市中心人民医院(中山大学附属惠州医院)和广东医科大学附属医院2015年1月至2020年3月25例正常子宫内膜组织、53例子宫内膜癌组织标本,采用免疫组织化学方法检测其中的STAT3和XIAP的表达水平,计数资料各组比较采用 χ2检验。 结果:子宫内膜癌组织中的STAT3阳性表达率为79.25%(42/53),明显高于正常子宫内膜组织阳性表达率[24.00%(6/25)],差异有统计学意义( χ2=21.905, P<0.01);STAT3表达水平与子宫内膜癌组织学分化程度、FIGO分期、淋巴结转移明显相关(分别为 χ2=4.115、5.962、4.862, P<0.05)。子宫内膜癌组织中的XIAP阳性表达率为73.58%(39/53),明显高于正常子宫内膜组织阳性表达率[16.00%(4/25)],差异有统计学意义( χ2=22.772, P<0.01),XIAP表达水平与子宫内膜癌肌层浸润深度、组织学分化程度、FIGO分期、淋巴结转移明显相关(分别为 χ2=6.564、4.369、6.632、6.086, P<0.05)。 结论:STAT3和XIAP在子宫内膜癌组织呈高表达,其对子宫内膜癌的诊断及预后评估有一定指导意义。
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编辑人员丨2天前
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X-染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1通过自噬途径调控Caspase 1介导的胃肠道间质瘤细胞焦亡
编辑人员丨2024/7/6
目的:探究X-染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(XAF1)对人胃肠道间质瘤(GIST)细胞中半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase 1)介导的细胞焦亡的影响及机制.方法:实时荧光定量 PCR 和 West-ern blot检测人正常胃黏膜上皮细胞系(RGM-1)和 GIST 细胞系(GIST-T1、GIST-430、GIST-882)中XAF1 的表达水平;采用脂质体介导转染法将pcDNA3.1-XAF1 重组质粒染进GIST-882 细胞,以构建高表达XAF1 的GIST-882 细胞.GIST-882 细胞分为对照组、pcDNA3.1 组(转染 pcDNA3.1 空载体质粒)、pcDNA3.1-XAF1 组(转染pcDNA3.1-XAF1 重组质粒)、pcDNA3.1-XAF1+Rap 组(转染 pcDNA3.1-XAF1 重组质粒并给予自噬激活剂雷帕霉素处理),免疫荧光染色检测各组细胞内微管相关蛋白 1 轻链3(LC3)表达情况,Western blot 检测各组细胞中 LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值与 Beclin1 蛋白表达水平,ELISA法检测各组细胞上清中白细胞介素,IL-1β、IL-18 含量,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测各组细胞LDH释放率,Western blot检测各组细胞中Caspase-1 及其活化形式 cleaved-Caspase-1、NOD 样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、消皮素 D(GSDMD)蛋白表达水平.结果:与RGM-1 细胞比较,GIST-T1、GIST-430、GIST-882 细胞中XAF1 mRNA和蛋白相对表达量显著减少(P<0.05);细胞转染后,pcD-NA3.1-XAF1 组GIST-882 细胞中XAF1 mRNA和蛋白相对表达量均显著高于pcDNA3.1 组、对照组(P<0.05).与对照组比较,pcDNA3.1-XAF1 组 GIST-882 细胞内 LC3 荧光强度明显减弱,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin1 蛋白相对表达量显著减少(P<0.05),细胞上清液 IL-1β、IL-18 含量及 LDH 释放率显著升高(P<0.05),Caspase-1、cleaved-Caspase-1、NLRP3、GSDMD蛋白相对表达量也显著增加(P<0.05);与pcDNA3.1-XAF1 组比较,pcDNA3.1-XAF1+Rap 组 GIST-882 细胞内 LC3 荧光强度明显增强,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin1 蛋白相对表达量显著增加(P<0.05),同时,细胞上清液 IL-1β、IL-18 含量及LDH释放率显著下降(P<0.05),Caspase-1、cleaved-Caspase-1、NLRP3、GSDMD 蛋白相对表达量也显著减少(P<0.05).结论:XAF1 在 GIST 细胞中表达下降,提高 XAF1 表达能通过抑制自噬从而促进Caspase 1 介导的GIST细胞焦亡,发挥抗肿瘤作用.
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编辑人员丨2024/7/6
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加减补阳还五汤通过SIRT1途径激活自噬改善糖尿病肾病小鼠肾组织损伤
编辑人员丨2024/4/27
[目的]探讨加减补阳还五汤是否通过沉默信息调节因子 1(SIRT1)途径激活自噬改善糖尿病肾病(DKD)小鼠肾组织损伤.[方法]将DKD小鼠随机分为模型组、中药组,db/m组小鼠作为正常组.给药 8周后,检测小鼠血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HBA1c)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、尿微量白蛋白(mALB)水平;实时定量反转录聚合酶连锁反应(qRT-PCR)和免疫组化检测小鼠肾组织Wilms肿瘤基因 1(WT1)、nephrin及podocin的表达;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肾组织SIRT1、人微管相关蛋白轻链 3B(LC3B)、自噬相关蛋白 7(Agt7)、自噬受体蛋白p62(P62)、Bcl-2 同源结构域蛋白抗体(Beclin1)、B细胞淋巴瘤因子 2(Bcl-2)、BCL-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达;同时光镜观察肾脏病理形态学变化.[结果]中药干预后,小鼠肾脏病理改变轻于模型组;尿微量白蛋白(mAlb)、血脂(TC、TG)下降,肾功能(BUN、Scr)改善;同时抑制了肾组织P62、Bax、Caspase-3 表达,上调了SIRT1、Beclin-1、Agt7、Bcl-2、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ的表达,并改善了肾组织足细胞标志蛋白WT1、nephrin及podocin的表达(P<0.05或P<0.01),但对血糖水平无明显影响(P>0.05).[结论]加减补阳还五汤可通过增强DKD小鼠肾脏细胞自噬,并抑制其凋亡,保护足细胞,进而发挥肾脏保护作用.其中SIRT1 途径可能是其促进自噬的潜在途径.
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编辑人员丨2024/4/27
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miR-1229-5p对人结直肠癌细胞SW480增殖、迁移及侵袭的作用研究
编辑人员丨2023/12/30
目的:探讨miR-1229-5p对SW480 细胞生物学功能的影响和作用机制.方法:采用瞬时转染在SW480 细胞中过表达miR-1229-5p,进行细胞克隆、EdU实验、MTT、细胞划痕、Transwell小室迁移及侵袭实验,检测miR-1229-5p mimics组与对照组结直肠癌细胞SW480 生物学功能变化.转染过表达miR-1229-5p慢病毒后进行裸鼠皮下成瘤实验,观察miR-1229-5p在体内对细胞增殖能力的影响.通过预测软件TargetScan筛选出X连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(XAF1)作为miR-1229-5p的潜在下游靶基因,并检测miR-1229-5p对其蛋白表达的影响.在SW480 细胞中转染XAF1 过表达质粒,共转染miR-1229-5p后进行回复实验验证miR-1229-5p通过靶向XAF1 促进SW480 细胞增殖及侵袭.结果:miR-1229-5p mimics组较miR-NC组细胞的增殖、迁移及侵袭能力均提高(P<0.01);miR-1229-5p组瘤体体积高于miR-NC组(P<0.01);miR-1229-5p组对靶基因XAF1 表达量低于miR-NC组(P<0.01),转染XAF1 质粒后可逆转miR-1229-5p mimics对细胞增殖及侵袭的促进作用(P<0.01).结论:miR-1229-5p可通过靶向XAF1 促进结直肠癌细胞SW480 的增殖和侵袭能力.
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编辑人员丨2023/12/30
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缺氧诱导因子-1α与X染色体连锁凋亡抑制蛋白在人卵巢癌中的表达及意义
编辑人员丨2023/11/25
目的 探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)与X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在人卵巢癌中的表达及意义.方法 用免疫组织化学技术法检测人正常卵巢组织标本10 例、良性卵巢肿瘤标本10 例、交界性卵巢肿瘤标本10 例及恶性卵巢癌组织标本30 例中HIF-1α和XIAP的表达情况;培养人卵巢癌细胞系SKOV3,向细胞培养瓶中加入HIF-1α激动剂和抑制剂,提取细胞总RNA,用RT-PCR技术观察XIAP和HIF-1α 基因表达变化.结果 XIAP、HIF-1α在恶性上皮性卵巢癌组及交界性肿瘤组表达率均明显高于良性卵巢肿瘤组(P<0.05).恶性上皮性卵巢癌组织中HIF-1α与XIAP在临床分期晚期(Ⅲ期和Ⅳ期)组的阳性表达率明显高于临床分期早期(Ⅰ期和Ⅱ期)组(P<0.05),与患者年龄、病理分型和淋巴结转移无关(P>0.05).在恶性上皮性卵巢癌中HIF-1α与XIAP呈正相关(P<0.05).随缺氧时间延长,SKOV3 细胞系中HIF-1αmRNA表达量渐增;低氧24h时HIF-1αmRNA表达量达高峰,36h时HIF-1αmRNA表达量有所回落;添加HIF-1α抑制剂雷帕酶素后,HIF-1αmRNA表达量明显减少,XIAPmRNA亦减少.SKOV3 细胞系中XIAP mRNA随HIF-1αmRNA而变化.结论 HIF-1α和XIAP可能参与了恶性卵巢肿瘤的发生;HIF-1α和XIAP的高表达可能提示预后不良;HIF-1α对XIAP可能存在调控作用,两者可能协同促进卵巢癌的发生.
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编辑人员丨2023/11/25
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发状分裂增强子1对胆固醇刺激下内皮细胞的影响及机制研究
编辑人员丨2023/11/11
目的:探讨发状分裂增强子 1(HES-1)对胆固醇刺激下内皮细胞的影响及潜在机制.方法:应用Ea.hy926细胞构建HES-1过表达细胞和HES-1基因敲除细胞.将细胞分为CH组(胆固醇刺激)、GO 组(HES-1过表达+胆固醇刺激)、GD组(HES-1低表达+胆固醇刺激)和NC组(空白对照组).采用流式细胞术检测细胞凋亡情况.采用蛋白质印迹检测凋亡相关蛋白表达水平以及无翼型MMTV家族整合位点(Wnt)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/β-连锁蛋白(β-catenin)信号通路相关蛋白表达水平.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血管生成相关因子表达水平.结果:与NC组比较,所有胆固醇处理组凋亡细胞占比显著增加(均 P<0.05).与CH组比较,GO组凋亡细胞占比显著增加(P<0.05).与NC组比较,CH组和GO组B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、半胱天冬酶3(Caspase-3)、Caspase-9、p-BIM/BIM表达显著升高,Bcl-2 表达显著降低(均 P<0.05);GD组Bax、Caspase-9 表达显著升高,Bcl-2、Caspase-3 表达显著降低(均 P<0.05).与CH 组比较,GO 组Bax、Caspase-9表达显著升高,Bcl-2表达显著降低(均 P<0.05);GD组Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9、磷酸化Bcl-2相互作用细胞死亡介质(p-BIM)/BIM表达显著降低(均 P<0.05).与GO组比较,GD组Bax、Caspase-3、Caspase-9、p-BIM/BIM表达显著降低(均 P<0.05).与NC组比较,C H组和GO组转化生长因子-β(TGF-β)、胰岛素样生长因子(IGF)、血管内皮生长因子α(VEGF-α)、血小板衍生生长因子(PDGF)表达显著降低(均 P<0.05);GD组PDGF表达显著降低(P<0.05).与CH组比较,GO组TGF-β、IGF、VEGF-α、PDGF表达显著降低(均 P<0.05);GD组TGF-β、IGF、PDGF表达显著升高(均 P<0.05).与 GO 组比较,GD 组 TGF-β、IGF、VEGF-α、PDGF 表达显著升高(均 P<0.05).与 NC 组比较,CH 组 HES-1 表达显著升高,p-AKT/AKT、c-myc表达显著降低(均 P<0.05);GO组HES-1表达显著升高,Wnt、p-AKT/AKT、β-catenin、c-myc表达显著降低(均 P<0.05);GD组HES-1、Wnt、β-catenin、c-myc表达显著降低,p-AKT/AKT显著升高(均 P<0.05).与CH组比较,GO组 HES-1表达显著升高,Wnt、p-AKT/AKT、β-catenin、c-myc表达显著降低(均 P<0.05);GD组 HES-1、Wnt、β-catenin表达显著降低,p-AKT/AKT、c-myc表达显著升高(均 P<0.05).与GO 组比较,GD组 HES-1 表达显著降低,Wnt、p-AKT/AKT、β-catenin、c-myc表达显著升高(均 P<0.05).结论:HES-1 过表达可抑制Wnt/PI3K/AKT/β-catenin信号通路,促进细胞凋亡,抑制血管生成相关因子的表达.
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编辑人员丨2023/11/11
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以克罗恩病为主要临床表现的X连锁凋亡抑制因子缺陷一例并文献复习
编辑人员丨2023/8/6
目的 总结以克罗恩病为主要临床表现的X连锁凋亡抑制因子(XIAP)缺陷病例的临床特点.方法 报道2016年5月浙江大学医学院附属儿童医院消化科收治的1例XIAP缺陷患儿的缶床表现、治疗、转归和基因测序结果,并以“克罗恩病”“XIAP”为检索词,检索2006年1月至2017年6月中文数据库及PUBMED数据库进行文献复习.结果 患儿男,6岁1月龄,因反复便血2个月余,加重伴发热腹痛2周入院.既往1年余前曾有“噬血细胞综合征、癫痫”病史.入院后完善相关检查,血常规提示轻度贫血(血红蛋白108 g/L);超敏C反应蛋白(86 rg/L)及红细胞沉降率(46 mm/lh)均升高;粪常规白或脓细胞及红细胞阳性;血生化提示低白蛋白血症(25.2 g/L),转氨酶(丙氨酸转氨酶175 U/L、天冬氨酸转氨酶229 U/L)升高,甘油三酯(4.41 mmol/L)升高,铁蛋白(>1 650.0 μg/L)升高;小肠磁共振水成像:部分结肠、回肠肠壁增厚、强化.胶囊内镜:空肠黏膜多发小溃疡.肠镜提示结肠多发溃疡.肠镜病理:回肠末端及全结肠黏膜慢性活动性炎,部分伴小片坏死溃疡.骨髓细胞学检查可见少量吞噬细胞.诊断为“噬血细胞综合征、克罗恩病、败血症、癫痫、重度营养不良、低蛋白血症”,儿童克罗恩病活动指数(PCDAI)评分37.5分.基因检测发现XIAP基因存在半合子突变c.910G>TchrX:123022501 p.G304X.父母均未检测出突变.该患儿经英夫利昔单抗治疗及巯嘌呤、糖皮质激素口服,病情缓解,PCDAI评分0分.文献检索共9篇,其中中文0篇,英文9篇,共有111例患者,炎症性肠病样表现约占33.3%,可相继或同时存在噬血细胞综合征、脾肿大等临床表现,单一治疗措施效果欠佳.结论 XIAP缺陷患儿表现多样,在临床表现复杂、对治疗不敏感的男性炎症性肠病患儿中行基因检测,对指导治疗及判断预后有重要意义.
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编辑人员丨2023/8/6
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子痫前期孕妇子宫螺旋动脉超声参数与胎盘中血管新生、细胞凋亡的相关性研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨子痫前期(PE)孕妇子宫螺旋动脉超声参数与胎盘组织中血管新生、细胞凋亡分子含量的相关性,为临床治疗提供参考.方法 选择2013年5月-2016年10月期间在该医院诊断为PE的38例孕妇作为PE组,选择同期分娩的60例健康孕妇作为对照组.孕33~38周时采用彩色多普勒超声诊断仪测定子宫螺旋动脉的血流参数,分娩后收集胎盘组织并测定血管新生、细胞凋亡相关分子的含量.结果 孕33 ~ 38同时,PE组孕妇子宫螺旋动脉的搏动指数(PI)、阻力指数(RI)和收缩末期峰值流速/舒张末期流速(S/D)比值均显著高于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);分娩后,PE组胎盘组织中血管内皮生长因子A (VEGFA)、VEGFB、胎盘生长因子(PLGF)、血管内皮生长因子受体-1(VEGFR-1)、VEGFR-2、生存素(Survivin)、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Livin的含量显著低于对照组,自杀相关因子(Fas)、Fas配体(FasL)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)、Caspase-8、Caspase-9的含量显著高于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);PI、RI、S/D比值与胎盘中VEGFA、VEGFB、PLGF、VEGFR-1、VEGFR-2、Survivin、XIAP、Bcl-2、Livin的含量呈负相关关系,与胎盘中Fas、FasL、Bax、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的含量呈正相关关系(均P<0.05).结论 PE孕妇子宫螺旋动脉的阻力显著增加并且与胎盘中血管新生、细胞凋亡密切相关.
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编辑人员丨2023/8/6
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地西他滨对体外培养人子宫肌瘤细胞增殖及凋亡相关基因表达的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨地西他滨对体外培养人子宫肌瘤细胞增殖及凋亡相关基因表达的影响.方法 选取29例子宫肌瘤患者的子宫肌瘤及肌瘤旁正常组织细胞进行原代培养.将子宫肌瘤细胞分为对照组及0.1 μmol/L、0.5 μmol/L、1.0 μmol/L地西他滨组,地西他滨组给予相应浓度的地西他滨进行干预,24 h、48 h、72 h后检测各组细胞增殖及凋亡情况.提取子宫肌瘤细胞、肌瘤旁正常组织细胞及经0.1 μmol/L、0.5 μmol/L、1.0 μmol/L地西他滨干预的子宫肌瘤细胞的总RNA,检测X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、XIAP相关因子1(XAF1)、P21、P16、细胞周期蛋白D1(Cyclin-D1)mRNA表达水平.结果 0.1 μmol/L、0. 5 μmol/L、1.0 μmol/L地西他滨组子宫肌瘤细胞增殖抑制率及细胞凋亡比例依次升高(均P<0.05),3组的抑制率及细胞凋亡比例均随时间延长而升高(均P<0.05).与瘤旁子宫肌细胞比较,子宫肌瘤细胞的XIAP和Cyclin D1 mRNA表达水平升高,而XAF1、P16和P21 mRNA表达水平减低(均P<0.05);与未经地西他滨处理的子宫肌瘤细胞相比,0.5 μmol/L、1.0 μmol/L地西他滨组XIAP和Cyclin D1 mRNA表达水平下调而XAF1及P21 mRNA表达水平上调,1.0 μmol/L地西他滨组P16 mRNA表达水平上调(均P<0.05).结论 地西他滨可抑制子宫肌瘤细胞的增殖并促进其凋亡,并可抑制XIAP、Cyclin-D1等抗凋亡基因表达并上调XAF1、P16和P21等促凋亡基因表达.
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编辑人员丨2023/8/6
