目的:了解穿心莲内酯磺化物(ADS)雾化吸入对需要有创机械通气的儿童中重度急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的治疗效果。方法:前瞻性随机对照单盲研究，收集2018年11月1日至2019年12月31日入住首都医科大学附属北京儿童医院PICU，年龄29 d~18岁，且需要有创机械通气治疗的中重度ARDS患儿。试验组患儿吸入ADS，对照组吸入生理盐水。试验前后分别留取支气管肺泡灌洗液行细胞因子检测。分析组间人口统计学、细胞因子水平及临床诊疗的差异。结果:共纳入患儿20例，男15(75.00%)例，中位年龄2.15(1.48，8.01)岁，中位第2代儿童死亡风险评分为12.25(4.53，16.30)分。两组患儿的人口统计学、基础临床资料及预后比较差异无统计学意义( P>0.05)。试验组患儿的单核细胞趋化蛋白-1降低，对照组上升，差异有统计学意义[967.50(119.25，5 206.00)pg/mL比-945.00(-3 935.50，495.09)pg/mL， P＝0.041]。试验组白细胞介素(IL)-8下降、对照组升高[303.22(-452.00，1 172.38)pg/mL比-490.14(-780.25，240.52)pg/mL， P＝0.151]；试验组IL-6升高幅度低于对照组[-24.53(-501.76，135.27) pg/mL比-325.85(-633.22，133.75)pg/mL， P＝0.364]；差异均无统计学意义( P>0.05)。试验组患儿研究结束时氧合指数优于对照组[11.35(6.00，15.83)比20.65(6.23，38.35)， P＝0.374]，ARDS好转率较高(80%比60%， P＝0.628)，但差异均无统计学意义( P>0.05)。两组患儿病死率及机械通气时间差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:ADS雾化吸入或可降低中重度ARDS患儿支气管肺泡灌洗液内IL-6升高幅度，并降低单核细胞趋化蛋白-1、IL-8浓度，且可能改善肺部氧合功能。尚需进一步研究验证上述结论。

目的:明确穿心莲内酯（AD）对脂多糖（LPS）刺激下大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞（AECⅡ）表达促凝和纤溶抑制相关因子的影响。方法:将对数生长期的大鼠AECⅡ细胞RLE-6TN分为正常对照（NC）组、LPS组及6.25、12.5、25 mg/L AD组（AD 6.25组、AD 12.5组、AD 25组）5组。NC组用RPMI 1640常规培养基培养；LPS组在RPMI 1640常规培养基中加入5 mg/L的LPS进行刺激；不同剂量AD组细胞分别用6.25、12.5、25 mg/L的AD处理1 h后给予LPS刺激培养。于LPS刺激细胞24 h后收集细胞及细胞培养上清液，用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）、实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）分别检测细胞中组织因子（TF）、组织因子途径抑制剂（TFPI）、纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）的蛋白及mRNA表达；用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清液中Ⅲ型前胶原肽（PⅢP）、凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）、抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）、活化蛋白C（APC）水平。结果:与NC组相比，LPS组TF、PAI-1的蛋白及mRNA表达显著升高，TFPI蛋白及mRNA表达显著降低；同时细胞上清液中PⅢP、TAT水平明显升高，AT-Ⅲ、APC水平明显降低。与LPS组相比，AD 6.25组、AD 12.5组、AD 25组TF、PAI-1的蛋白及mRNA表达均明显降低〔TF/GAPDH：0.86±0.08、0.45±0.04、0.44±0.04比1.32±0.10，TF mRNA（2 -ΔΔCt）：2.59±0.25、2.27±0.05、1.95±0.04比4.60±0.26，PAI-1/GAPDH：2.11±0.07、1.45±0.04、0.86±0.09比2.56±0.09，PAI-1 mRNA（2 -ΔΔCt）：3.50±0.22、2.23±0.29、1.84±0.09比6.60±0.27，均 P<0.05〕，TFPI蛋白及mRNA表达明显升高〔TFPI/GAPDH：0.78±0.05、0.81±0.03、0.84±0.07比0.36±0.02，TFPI mRNA（2 -ΔΔCt）：0.46±0.09、0.69±0.07、0.91±0.08比0.44±0.06，均 P<0.05〕，细胞上清液中PⅢP、TAT水平明显降低，AT-Ⅲ、APC水平明显增加〔PⅢP（μg/L）：13.59±0.23、12.66±0.23、10.59±0.30比15.82±0.29，TAT（ng/L）：211.57±6.41、205.69±4.04、200.56±9.85比288.67±9.84，AT-Ⅲ（μg/L）：102.95±3.86、123.92±2.63、128.67±1.67比92.93±3.36，APC（μg/L）：1 188.95±14.99、1 366.12±39.93、1 451.15±29.69比1 145.55±21.07，均 P<0.05〕；随着AD剂量的增加，上述促进及抑制作用越加明显，AD 25组TF、PAI-1的蛋白及mRNA表达降低、TFPI mRNA表达升高、上清液中PⅢP水平降低和AT-Ⅲ、APC水平增加与AD 6.25组比较差异具有统计学意义，且PAI-1蛋白表达降低及上清液中PⅢP水平降低与AD 12.5组比较差异也具有统计学意义。 结论:AD在6.25～25 mg/L的剂量范围内，能剂量依赖性地抑制LPS刺激下AECⅡ细胞RLE-6TN表达及分泌促凝和纤溶抑制相关因子，促进抗凝因子的分泌，以25 mg/L作用最明显。

目的:探讨穿心莲内酯(AG)对AP相关肾损伤的影响及其可能机制。方法:将32只C57BL/6小鼠随机分为对照组、AP组、AG治疗组和AG对照组。AP组采用腹腔注射左旋精氨酸联合脂多糖的方法制备AP模型，AG治疗组在制模前8 h静脉注射AG注射液，对照组腹腔注射等体积生理盐水，AG对照组在腹腔注射生理盐水前8 h静脉注射AG注射液。采集小鼠眼内眦静脉血，检测血清淀粉酶、肌酐、尿素氮水平；取胰腺和双肾组织，应用比色法检测胰腺组织髓过氧化物酶(MPO)活性，光镜下观察小鼠胰腺及肾组织病理变化并进行病理评分；采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱系统进行肾组织代谢组学分析。结果:与对照组比较，AP组血清淀粉酶、肌酐、尿素氮水平和胰腺组织MPO活性明显升高[(13.78±6.01)U/L比(0.23±0.04)U/L、(79.81±24.03)μmol/L比(9.02±2.87)μmol/L、(34.76±14.53)mmol/L比(8.52±2.55)mmol/L、(16.55±4.23)U/g pro比(2.32±0.55)U/g pro]，胰腺、肾组织病理评分亦显著升高[(2.70±0.26)分比(0.20±0.12)分、(3.00±0.35)分比(0.30±0.12)分]，差异均有统计学意义( P值均<0.05)；而AG治疗组血清淀粉酶、肌酐、尿素氮和胰腺组织MPO活性较AP组显著降低[(8.26±3.87)U/L比(13.78±6.01)U/L、(55.42±17.25)μmol/L比(79.81±24.03)μmol/L、(20.66±10.30)mmol/L比(34.76±14.53)mmol/L、(11.51±3.29)U/g pro比(16.55±4.23)U/g pro]，胰腺、肾组织病理评分亦显著下降[(1.40±0.19)分比(2.70±0.26)分、(1.70±0.26)分比(3.00±0.35)分]，差异均有统计学意义( P值均<0.05)。代谢组学分析共获得31个差异代谢物，这些代谢物主要参与氨基酸代谢和脂肪酸代谢，少部分还参与糖代谢、核苷酸代谢、维生素代谢以及胆汁酸代谢。 结论:AG可能通过改变AP相关肾损伤过程中差异代谢物的水平对肾损伤起到保护作用。

目的:探讨穿心莲内酯（andrographolide，AND）对腹泻型肠易激综合征（irritable bowel syndrome，IBS-D）大鼠肠道炎症的影响及对NLRP3/caspase-1信号通路的调节机制。方法:利用低浓度乙酸联合束缚应激建立IBS-D大鼠模型后，将大鼠分为对照组、模型组、阳性药物组、AND低剂量（AND-L）组、AND中剂量（AND-M）组、AND高剂量（AND-H）组，每组10只。检测各组大鼠粪便性状评分及粪便含水量；对各组大鼠的腹部收缩反射（abdominal withdrawal reflex，AWR）进行评分；酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测各组大鼠结肠组织中肿瘤坏死因子- α（tumor necrosis factor- α，TNF- α）、白介素-6（interleukin 6，IL-6）、白介素-1 β（interleukin 1 β，IL-1 β）、白介素-18（interleukin 18，IL-18）水平；Western blot检测各组大鼠结肠组织中NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达水平。 结果:对照组大鼠粪便评分为2.43±0.19、粪便含水量为31.76±2.81、AWR评分为0.43±0.02、TNF- α为123.49±12.35、IL-6为76.45±6.23、IL-1 β为195.76±15.14、IL-18为167.31±13.92，蛋白表达水平NLRP3为0.96±0.06、ASC为1.01±0.08、caspase-1为0.94±0.06。模型组大鼠粪便性状评分为6.12±0.58、粪便含水量为65.24±4.13、AWR评分为2.42±0.18，与对照组相比均升高（ P<0.05）；模型组大鼠TNF- α为315.73±19.47、IL-6为231.97±14.65、IL-1 β为435.83±28.67、IL-18为382.56±26.84，蛋白表达水平NLRP3为2.41±0.18、ASC为2.23±0.15、caspase-1为2.15±0.16，与对照组相比均升高（ P<0.05）。AND低、中、高剂量组大鼠的粪便性状评分分别为5.38±0.46、4.57±0.38、3.31±0.27，粪便含水量分别为54.68±3.67、46.87±3.75、38.11±3.10，AWR评分分别为1.79±0.16、1.35±0.10、0.69±0.04，与模型组相比均降低（ P<0.05）；AND低、中、高剂量组大鼠TNF- α分别为268.65±17.23、224.91±16.36、178.16±14.65，IL-6分别为187.74±14.57、159.64±11.39、124.18±8.62，IL-1 β分别为369.51±21.96、314.72±23.64、263.93±16.82，IL-18分别为334.72±25.17、280.16±21.43、235.67±19.32，蛋白表达水平NLRP3分别为1.94±0.15、1.56±0.12、1.25±0.09，ASC分别为1.89±0.14、1.61±0.13、1.28±0.10，caspase-1分别为1.76±0.14、1.49±0.11、1.20±0.09，与模型组相比均降低（ P<0.05）。 结论:AND可能通过抑制NLRP3/caspase-1信号通路减轻IBS-D大鼠的肠道炎症。

穿心莲为我国重要的南药之一,用于清热解毒、凉血消肿,其主要活性成分穿心莲内酯具有抗癌、抗HIV病毒、抗炎、保肝等功效.然而,穿心莲内酯人工合成难度较大,主要从人工栽培的植物原料中提取,栽培植物原料的质量因受土壤、气候、水肥管理等各种因素的影响而参差不齐,穿心莲生长周期长且占用土地资源.植物离体培养技术在种苗快繁及活性成分积累等方面都具有显著优势,是实现穿心莲活性成分快速、高效生产的重要途径之一.穿心莲组织离体再生技术体系日益完善,从外植体到完整植株的组织离体再生技术日渐成熟,已在种苗繁育、倍性育种等方面有了一定的应用.同时,在穿心莲愈伤组织培养、细胞悬浮培养、不定根培养、毛状根培养过程中,通过优化培养条件和使用适宜的诱导子可大幅增加培养物中穿心莲内酯等活性成分的积累.该文分别从穿心莲组织、细胞、不定根及毛状根培养等方面,全面系统地综述了近年来国内外关于穿心莲离体培养技术以及其生产穿心莲内酯的研究进展,以期促进穿心莲离体培养技术的发展与应用,为离体生产穿心莲内酯的研究提供参考.此外,还提出了未来在穿心莲离体培养技术及通过该技术生产穿心莲内酯的研究中需重点关注的 3 个方面:(1)熟化完善穿心莲组织离体再生技术体系,建立全面系统的评价体系;(2)优化培养条件和高效诱导子联用,进一步提高穿心莲内酯等重要活性成分产量;(3)开展通过细胞悬浮培养技术生产穿心莲内酯的生物反应器培养研究.

目的 探讨穿心莲内酯对DM大鼠IR、菌群失调及Notch/锌指蛋白转录因子1(Snail1)信号通路的影响.方法 选取70 只SPF级Wistar雄性大鼠,其中30 只进行穿心莲内酯LD50 试验,确定致死量后选取50 mg/kg进行给药及观察,其余40 只中10 只作为空白对照组(NC),30 只建立DM模型,共28 只建模成功,分为T2DM组(n=9)、二甲双胍灌胃组(Met,n=9)及穿心莲内酯灌胃组(And,n=10).NC、T2DM组不做处理,干预 14 d后观察各组变化.结果 与NC组比较,T2DM、Met、And组胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、拟杆菌门、厚壁菌门丰度水平、Notch、Snail1 mRNA及蛋白表达、阳性表达率升高(P<0.05),乳酸杆菌、双歧杆菌丰度水平降低(P<0.05).与T2DM组比较,Met、And组乳酸杆菌、双歧杆菌丰度水平升高(P<0.05),HOMA-IR、拟杆菌门、厚壁菌门丰度水平、Notch、Snail1 mRNA及蛋白表达、阳性表达率降低(P<0.05).结论 DM大鼠经穿心莲内酯干预后IR缓解,菌群失调改善,Notch/Snail1信号通路受抑制.

目的 探讨中药有效成分穿心莲内酯对角膜镰刀菌生物膜形成及其黏附能力的影响.方法 采用结晶紫染色法评估不同浓度穿心莲内酯作用下临床多重耐药角膜镰刀菌株的初始黏附及生物膜形成能力.结果 与未加药对照组相比,培养2 h、4 h,抑制50％的镰刀菌孢子黏附的穿心莲内酯浓度分别为64、512 μg/mL;培养24 h,角膜镰刀菌表现出强生物膜形成能力,穿心莲内酯在2 048 μg/mL下可抑制其50％的生物膜形成.结论 穿心莲内酯可显著抑制角膜镰刀菌的初始黏附,并对其生物膜形成有一定的抑制作用.

目的:克隆穿心莲转录因子ApbHLH80基因,并对其进行生物信息学分析和表达分析.方法:根据穿心莲转录组数据库设计引物,采用PCR扩增等方法克隆ApbHLH80全长序列,使用生物信息学在线分析工具,分析和预测该基因编码蛋白的理化性质,采用实时荧光定量PCR分析该基因在茉莉酸甲酯处理下的表达模式,并采用高效液相色谱法测定穿心莲内酯含量.结果:生物信息学分析表明,该基因开放阅读框长度包含1095 bp,共编码364个氨基酸;该基因的氨基酸序列分子量约为39.96 ku,理论等电点为5.73,无信号肽和无跨膜结构,属亲水性核蛋白;该蛋白与苏麻、丹参、一串红和芡欧鼠尾草等物种亲缘关系较为接近,都具有bHLH_AtbHLH_like保守结构域.实时荧光定量PCR分析结果表明,ApbHLH80的表达量在叶片中最高,并且响应茉莉酸甲酯的诱导,其表达模式与穿心莲内酯合成存在密切联系.结论:成功克隆得到的ApbHLH80基因可能参与调控穿心莲内酯合成,为进一步探讨其潜在的调控作用提供理论支撑.

目的 探讨喜炎平注射液对脂多糖(lipopolysaccha-ride,LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的防治作用及机制.方法 在LPS诱导的ALI小鼠模型中,通过观察肺组织病理学指标评价喜炎平注射液的防治作用;网络药理学和分子对接方法探讨其作用机制;Western blot方法验证预测的靶蛋白.结果 喜炎平注射液能改善ALI小鼠肺组织病理损伤,减轻炎症反应.喜炎平注射液主要活性成分 4 个:14-deoxy-11-oxo-andrographolide、14-deoxyandrogra-pholide、14-deoxy-12-methoxyandrographolide、andrographolide-19-β-D-glucoside,获得药物靶点288个,ALI相关靶点4 960个,交集基因192个.喜炎平的10个核心靶点为STAT3、EGFR、PIK3R1、MAPK1、PIK3CA、NFKB1、ESR1、MAPK8、JAK2、FYN.GO 富集获得 BP 310 个、CC 65 个、MF 80 个.KEGG通路富集发现ALI相关通路141条,排名前20的有MAPK、TNF-α、VEGF、cAMP、mTOR、AMPK、NOD、JAK-STAT、IL-17、NF-κB 等.分子对接发现 MAPK1、MAPK8、NFKB1 与活性成分 14-deoxy-12-methoxyandrographolide、14-deoxyan-drographolide结合作用较强.Western blot发现喜炎平注射液可明显下调ALI小鼠肺部p38、JNK、ERKl/2、NF-κB p65蛋白表达.结论 喜炎平注射液对ALI有一定防治作用,机制与调节MAPK和NF-κB信号通路有关.

目的 基于多准则决策分析综合评估喜炎平注射液治疗社区获得性肺炎的临床价值.方法 采用定性与定量相结合的评价方式,基于循证医学、流行病学、临床医学、临床药学、循证药学、药物经济学、卫生技术评估等方法学,结合调查问卷与数据库资料,利用多准则层决策分析模型(multi-criteria level decision analysis model,MCDA),围绕喜炎平注射液治疗社区获得性肺炎,从安全性、有效性、经济性、创新性、适宜性、可及性、中医药特色"6+1"个维度综合评估其临床价值.结果 安全性方面:根据药品说明书、国家药品不良反应监测中心自发呈报系统(spontaneous reporting system,SRS)、登记注册研究、临床文献报道、真实世界研究、官方网站通知公告、药物警戒与风险管理等,现有研究证据充分;喜炎平注射液不良反应主要表现为皮疹、瘙痒、恶心、呕吐、发热寒战等,临床安全性风险较可控,评价为B级,表明基于现有临床研究安全性良好.有效性方面:选取Meta分析作为有效性证据,喜炎平注射液联合抗生素(氟喹诺酮类、头孢菌素类、大环内酯类、β-内酰胺类)治疗成人社区获得性肺炎的临床总有效率、咳嗽消失时间、退热时间及住院治疗时间、相关理化指标改善优于单用抗生素治疗;采用GRADE体系评价证据质量,根据PICO原则衡量证据价值,评价为B级,表明基于现有临床研究有效性较好.经济性方面:以住院时间作为指标,喜炎平注射液联合头孢菌素类、抗病毒药物更具成本-效果优势;对证据质量和经济价值进行评价,评为B级,表明经济性较好.创新性方面:喜炎平注射液联合抗生素可显著提高临床疗效,药材及原料安全充足,可扩展性较好;分子结构中引入亲水基团以增强水溶性,改善穿心莲内酯生物利用度;工艺及药学已拥有国内授权发明专利20余项,评价为B级,表明创新性较好.适宜性方面:配备及给药方便,配伍禁忌及注意事项明确,用药疗程合适,但需关注用药反应,可基本满足临床用药需求,评价为B级,表明适宜性较好.可及性方面:疗程费用占城镇/农村居民人均可支配年收入比低,药品销售范围广,药材资源充足,接受治疗人数多,评为B级,表明可及性较好.中医药特色方面:喜炎平注射液为源于穿心莲的中药注射剂,辨证使用疗效更佳,人用经验丰富.综合喜炎平注射液治疗社区获得性肺炎"6+1"维度的证据结果,评价为B类.结论 喜炎平注射液治疗社区获得性肺炎具有较好的临床综合价值,中医药特色较突出,建议可按程序有条件转化为基本临床用药管理的相关政策结果.