目的:研究河弧菌群体感应调控子AphA对Ⅵ型分泌系统VflT6SS2功能活性的调控机制。方法:采用Western Blot检测河弧菌野生株、 aphA缺失株（Δ aphA）和 aphA回补株中VflT6SS2标志性组件溶血素共调节蛋白（Hcp）的表达和分泌。采用实时荧光定量PCR和启动子- lux 融合冷光系统检测野生株和Δ aphA中VflT6SS2核心基因簇和附属基因簇代表基因 tssB2 、hcp（ tssD2）和 vgrG（ tssI2）以及群体感应调控子HapR的mRNA 相对表达量和启动子活性。采用定点突变实验结合启动子活性测定确定AphA在 tssD2b启动子区的调控结合位点；采用电泳迁移率位移测定（EMSA）确定AphA与 hapR启动子的结合。 结果:Δ aphA中 tssB2 、hcp（ tssD2）、 vgrG（ tssI2）和 hapR的mRNA相对表达量及Hcp蛋白的表达分泌明显高于野生株。VflT6SS2核心基因簇 、tssD2a 、tssI2a和 hapR的启动子活性在Δ aphA中均高于野生株，而 tssD2b启动子活性则低于野生株。 tssD2a和 tssD2b的启动子序列分析显示-335 bp~-229 bp区差异较大，在 tssD2b中该区域存在2个潜在AphA结合位点，将其中的保守位点ATG替换为CGA， tssD2b启动子活性明显降低。EMSA结果显示，AphA与 hapR启动子直接结合。 结论:AphA在转录水平直接抑制 hapR的表达，间接参与对VflT6SS2核心基因簇和附属基因簇的调控。AphA对 tssD2a和 tssD2b呈现相反的调控模式，AphA可直接与 tssD2b启动子区（-335 bp~-229 bp）结合正向调控 tssD2b的表达。

目的 了解临床分离的纹带棒状杆菌对抗菌药物的敏感性及其感染或定植患者的临床特征.方法 收集福建医科大学附属泉州第一医院2020年7月—2022年9月临床分离纹带棒状杆菌72株,采用肉汤微量稀释法检测细菌对18种抗菌药物的敏感性.PCR扩增检测喹诺酮类耐药决定区相关基因gyrA并进行测序以分析氨基酸突变位点,PCR扩增核糖体甲基化酶基因ermX和氨基糖苷修饰酶基因aphA1并进行测序分析.病史资料分析纹带棒状杆菌感染或定植患者的临床特征.结果 药敏试验结果显示,所有菌株对万古霉素、利奈唑胺和达托霉素均100％敏感,对头孢曲松、环丙沙星及莫西沙星均100％耐药,对青霉素(87.5％)、头孢吡肟(95.8％)、美罗培南(95.8％)、甲氧苄啶-磺胺甲唑(90.3％)、红霉素(98.6％)和克林霉素(98.6％)的耐药率较高,对庆大霉素(25.0％)、四环素(30.6％)和利福平(23.6％)耐药率较低.PCR及DNA测序结果显示,3株纹带棒状杆菌发生gyrA基因单点突变(Ser87Val),67株发生双突变(Ser87Phe、Asp91Ala或Ser87Tyr、Asp91Ala),2株发生三位点突变(Ser87Phe、Ala88Pro和Asp91Ala),其中三位点突变是本研究首次发现的突变模式.所有的纹带棒状杆菌均检出ermX基因,aphA1基因检出率为43.1％.病史资料结果显示,72株纹带棒状杆菌主要分离自ICU(占65.2％),标本来源以下呼吸道标本为主(占91.6％),患者平均年龄(68.0±15.3)岁,感染和定植患者比例分别占72.2％(52/72)和27.8％(20/72),两组患者在住院时长≥28 d、合并脑出血、意识障碍及病情恶化方面差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 该院临床分离的纹带棒状杆菌均为多重耐药菌,感染患者预后相对较差.

目的 比较主概念分析和看图叙事评估在失语症语篇评估中的应用,探讨二者的临床适用性.方法 招募失语症患者8例和健康对照组22例,使用本土组图材料诱发语言样本,分别用主概念分析法和看图叙事法评估两组受试者的语言表现,比较组间差异,分析两种方法评估结果的一致性、评估者间信度和评估者内部信度.结果 主概念分析结果为失语症组准确且完整(accurate and complete,AC)主概念数(P＜0.01)、每分钟准确且完整(AC/min)主概念数(P＜0.05)和主概念分数(main concept,MC scores)(P＜0.05)均显著低于对照组,未提及(absent,AB)主概念数均显著高于对照组(P＜0.05);看图叙事评估结果为失语症组分图讲述内容评分(P＜0.05)、分图讲述总分(P＜0.05)和整体讲述总分(P＜0.05)均显著低于对照组.两种评估方法的标准分无显著差异,评估者间信度和评估者内部信度良好.结论 两种方法的临床适用性良好,评估结果一致.主概念分析在量化评估语篇信息的质与量方面有优势,看图叙事评估考查句法和语篇宏观结构,能反映整体语言表现.

目的:探讨分析单固位体悬臂式粘接桥在个别前牙缺失修复中的临床修复效果.方法:20 例个别前牙缺失的患者用单固位体悬臂式粘接桥进行修复,分别在修复后 6、12、24、36 个月用美国公共健康协会(APHA)制定的修复临床评价标准对修复体进行评价,同时记录修复前及修复后各个时间点基牙及其邻牙的牙周指标,观察修复体临床修复效果,分析修复体对基牙牙周状况的影响,并对患者满意度视觉模拟评分法(VAS)量化分析.结果:20 例单固位体悬臂式粘接桥在修复后 36 个月期间未发生脱粘接及折裂现象,修复后 24 个月,1 例修复体边缘着色达到B级,其余均为A级;修复体完成 36 个月,3 例修复体边缘着色达到B级,其余为A级;患者对修复效果满意度为 100%,患者对缺牙区状态的满意度在修复前后差异有统计学意义(P＜0.05).修复后基牙各时间点牙周指标较修复前均无显著性差异(P＞0.05).结论:个别前牙缺失的患者,用单固位体悬臂式粘接桥进行修复,可获得较为稳定的临床修复效果.

在美国、加拿大、澳大利亚等发达国家,药师除提供药事服务外,在免疫接种及疫苗管理中也发挥着重要作用.美国药师协会从1994年开始对药师进行疫苗管理培训,2003年美国医院药师协会制定了《药师在免疫接种中的作用指南》,药师开始参与疫苗的采购、分发、处方,并可以直接实施接种.近年,法国、澳大利亚、加拿大等国家相继开展了药师参与免疫接种和疫苗管理的工作,药师在疫苗管理的各个方面(采购、储存、处方与分配、疫苗咨询、免疫接种、疫苗不良事件报告、公共卫生教育等)都发挥了重要作用.国外药师参与预防免疫的经验值得我国借鉴.

目的 了解江苏某肉鸡屠宰加工厂不同环节弯曲菌的污染状况及耐药现状.方法 采集屠宰前肉鸡泄殖腔、不同环节鸡酮体以及环境等样品,运用无血弯曲杆菌选择性培养基(modified charcoal-cefoperazone-deoxycholate agar,CCDA)平板法进行分离纯化,PCR鉴定后,采用K-B法测定6大类14种抗生素耐药情况.PCR检测弯曲菌Ⅰ型整合子、四环素耐药基因tet(O)、氨基糖苷类耐药基因簇aadE-sat 4-aphA-3以及弯曲菌gyrA基因第257位碱基的突变情况.结果 细菌分离结果显示170份样品分离到124株弯曲菌(72.95％o).分离株对链霉素、妥布霉素、卡那霉素、环丙沙星、氧氟沙星、萘啶酸、红霉素和四环素耐药率为100％,多重耐药现象普遍,多重耐药率高达100％,其优势耐药谱主要为CTX-CRO-cDA-K-NOR-S-AZM-CIP-TE-NA-E-LEV-ENR-TOB.分离株经PCR扩增未检测到Ⅰ型整合子,所有菌株在gyrA喹诺酮类耐药决定区发生了C-257-T点突变,tet (O)基因和aadE-sat 4-aphA-3检出率分别为100％和90.23％.结论 江苏某肉鸡屠宰加工生产链中弯曲菌污染及耐药情况比较严重,gyrA基因突变、tet (O)基因及aadE-sat 4-a phA-3耐药基因簇的携带,与弯曲菌对喹诺酮类、四环素类和氨基糖苷类耐药密切相关.

目的 研究副溶血弧菌密度感应系统核心调控子AphA和OpaR对exsA和exsD的调控机制.方法 提取野生株(WT)和调控子基因突变株(ΔaphA或ΔopaR)总RNA,采用引物延伸实验确定exsA和exsD的转录起始位点,并根据WT和突变株中引物延伸产物的丰度,判定AphA和OpaR对exsA和exsD的调控关系;将exsA和exsD的启动子区DNA序列克隆入pHRP309质粒无启动子区的β-半乳糖苷酶基因的上游,构建重组质粒,并将其分别转入WT、ΔaphA和ΔopaR中得到LacZ菌株,用β-半乳糖苷酶检测试剂盒检测并比较各LacZ菌株中β-半乳糖苷酶活性的差异来判断AphA和OpaR对exsA和exsD的调控关系;PCR扩增exsA和exsD的上游调控序列,并表达纯化His-AphA和His-OpaR重组蛋白,利用凝胶阻滞实验(EMSA)探究重组蛋白是否可结合到exsA和exsD的上游调控序列上,并采用DNase I足迹实验鉴定具体的结合位点.结果 引物延伸实验结果显示,exsA和exsD各有一个转录起始位点,分别为C(-440)和C(-105)(翻译起始位点为+1),且在低密度生长条件下,AphA可激活它们的转录活性,而在高密度生长条件下,OpaR抑制它们的转录活性,随后的LacZ报告基因融合实验进一步确证了这种调控关系.体外的EMSA和DNaseⅠ足迹实验结果表明,His-AphA和His-OpaR均不能与exsA和exsD启动子DNA序列结合.结论 低密度生长时,AphA间接激活exsA和exsD的转录;高密度生长时,OpaR间接抑制exsA和exsD的转录.

[背景]弯曲菌(Campylobacter)是重要的人畜共患肠道病原菌,可通过食物链传播,引起人类腹泻性肠炎.[目的]了解猪源弯曲菌耐药特征和分子遗传特征,对江苏省10个规模化猪场进行弯曲菌分离和耐药性检测,并研究分离株的分子分型.[方法]采用琼脂平板稀释法进行最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)测定,PCR方法扩增耐药基因,以弯曲菌7个管家基因(aspA、glnA、gltA、glyA、pgm、tkt和uncA)为目的基因进行多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)研究.[结果]100份样品共分离出结肠弯曲菌22株,分离率为22％,弯曲菌检出情况与养殖规模和日龄无关(P＞0.05).耐药性试验结果显示,20株分离株为多重耐药菌株(81.82％,20/22),猪源结肠弯曲菌分离株对10种抗生素耐药程度不一,分别为:庆大霉素36.36％,链霉素50％,克林霉素27.27％,氯霉素13.64％,四环素40.91％,环丙沙星18.18％,萘啶酸63.63％,泰利霉素59.09％,红霉素100％,阿奇霉素81.82％;共检出了4种耐药基因[cfr、adE-Sat4-aphA、ermB和Tet(o)],检出率分别为4.5％、59.1％、9.1％和100％;多位点序列分型结果显示共获得11个ST型,主要流行CC-828克隆系(100％);进化树结果显示,所有分离株聚集归为2个大群,分别为2个分支和9个分支.x2检验和Logistic回归模型表明共有3个序列型(sequence type,ST)与其相对应的抗菌药物有相关性.[结论]猪源结肠弯曲菌对大环内酯类抗生素具有较高的耐药性,Tet(O)基因检出率最高,分离株的序列型呈多样性.

目的 探讨地黄饮子对肾虚证帕金森病小鼠肠道菌群的影响.方法 采用C57BL/6雄性小鼠,灌胃鱼藤酮结合劳倦过度、房事不节制造肾虚证帕金森病病证结合模型;将小鼠分为对照组(D)、肾虚证帕金森病模型组(F)、地黄饮子治疗组(E),给予地黄饮子干预4周;观察小鼠一般状态指标,测定胸腺、睾丸指数,行为学指标,采用Western Blot、RT-PCR测定其海马、纹状体、中脑黑质中α-syn的相对含量及其mRNA的含量,于超净台上收集无污染粪便进行16S rRNA测序分析.结果 与模型组比较,干预组小鼠毛色有光泽,活动量增加,胸腺指数显著性升高(P＜0.01),转圈圈数减少(P＜0.01),纹状体和中脑黑质中o-syn相对含量及其mRNA的含量均降低(P＜0.05);肠道菌群分析结果显示Bacte-roidetes,Firmicutes,Proteobacteria为门水平的优势菌群,地黄饮子干预组主要对Firmicutes下各属水平的菌群影响较大.结论 地黄饮子治疗肾虚证帕金森病可能是通过调节小鼠的α-syn的表达,改善其运动障碍,同时对肠道菌群组成结构具有一定影响.

目的 观察IPS e.max单端全瓷粘接桥在修复单个前牙缺失中的临床应用.方法 选择35例单个前牙缺失患者,制作IPS e.max全瓷粘接桥进行单端全瓷粘接桥修复,采用美国公共健康协会(APHA)制定的评价标准对全瓷粘接桥修复后3个月、6个月、1年、2年进行临床应用观察.结果 35例单端全瓷粘接桥在修复完成后3个月、6个月和1年内APHA的6项评价指标为A级;修复完成后2年,1例修复体修复体边缘着色及龈缘密合度为B级,其余均为A级.结论 对于单个前牙缺失,IPS e.max单端全瓷粘接桥可以取得良好的临床效果.