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8-型磷酸二酯酶抑制剂PF-04957325对冈田酸诱导阿尔茨海默病小鼠认知障碍的改善作用及机制
编辑人员丨1周前
目的 探讨磷酸二酷酶8(phosphodiesterase 8,PDE8)抑制剂PF-04957325对冈田酸(okadaic acid,OA)诱导阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)小鼠学习记忆、焦虑、抑郁的影响,并对其机制进行初步探讨.方法 选取21只2月龄雄性C57BL/6J小鼠进行实验,随机分为对照组、AD模型组、PDE8抑制剂组(0.1 mg·kg-1).模型组和PDE8抑制剂组小鼠双侧海马定位注射OA(每侧50 ng)诱导AD模型,注射OA2 d后,PDE8抑制剂组给予0.1 mg·kg-1抑制剂,AD模型组和对照组给予等剂量溶剂,共给药21 d.给予抑制剂d 13,对小鼠学习记忆能力及焦虑抑郁行为进行相关行为学检测,HE染色观察小鼠海马DG、CA1、CA3区神经细胞形态,Western blot检测小鼠海马内不同位点磷酸化Tau蛋白水平以及PDE8/cAMP/CREB通路相关蛋白的表达.结果 与对照组相比,AD模型组Y迷宫轮替比、新物体识别指数、被动回避逃避潜伏期明显缩短(P<0.01),水迷宫穿越平台次数及在目标象限停留的时间减少(P<0.05),表现出学习记忆能力的下降,而给予PF-04957325可明显改善AD小鼠学习记忆能力;AD模型组进入旷场中央区次数及在中央区停留时间明显减少(P<0.05)、悬尾不动时间明显增加(P<0.01),提示小鼠有焦虑抑郁情况,给予PF-04957325 后小鼠焦虑行为没有得到改善,对抑郁行为有一定改善;AD模型组小鼠海马DG、CA1、CA3区表现出核仁固缩、神经元排列不整齐,给予PF-04957325可缓解小鼠海马神经细胞的损伤.与对照组相比,AD模型组小鼠海马中Tau蛋白Ser199、Ser396和Ser202位点的磷酸化水平明显升高(P<0.01)、PDE8A及PDE8B蛋白表达量明显增加(P<0.01)、p-PKA/PKA和BDNF蛋白表达量降低(P<0.05),给予PF-04957325后Tau蛋白Ser396和Ser202位点的磷酸化水平明显降低(P<0.01)、PDE8A和PDE8B蛋白表达量明显降低(P<0.01)、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB 和 BDNF蛋白表达量明显升高(P<0.01).结论 PDE8抑制剂PF-04957325 能够提高AD小鼠的学习记忆能力、降低认知功能障碍,恢复Tau蛋白功能,减轻AD小鼠海马内神经元细胞的损害,具有改善AD的作用.作用机制可能与激活PDE8/cAMP/CREB通路、抑制Tau蛋白磷酸化有关.
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编辑人员丨1周前
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PKA-CREB信号通路在七氟烷减轻CPB诱发大鼠认知功能障碍中的作用
编辑人员丨1周前
目的:评价蛋白激酶A(PKA)-环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)信号通路在七氟烷减轻CPB诱发大鼠认知功能障碍其中的作用。方法:健康雄性SD大鼠40只,4月龄,体重300~350 g,采用随机数字表法分为4组( n=10):对照组(C组)、CPB组、CPB+七氟烷组(CS组)和CPB+七氟烷+PKA抑制剂H89组(CSH组)。CSH组侧脑室注射H89 5 μl后,CS组和CSH组大鼠暴露于2.4%七氟烷中1 h,然后CPB组、CS组和CSH组建立无血预充心脏不停跳CPB模型60 min。于CPB结束后2 d时采用旷场试验评估大鼠自主运动能力。于CPB结束后3 d时采用Morris水迷宫实验检测大鼠认知功能。水迷宫结束后断头取脑,分离海马组织,采用流式细胞术检测神经元凋亡率,Western blot法检测PKA、磷酸化CREB(p-CREB)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。 结果:4组旷场试验运动速度、路程及中心停留时间比较差异无统计学意义( P>0.05)。与C组比较,其余3组逃避潜伏期延长,穿越原平台次数减少,原平台象限停留时间缩短,海马神经元凋亡率升高,PKA、p-CREB和BDNF表达下调( P<0.05);与CPB组比较,CS组逃避潜伏期缩短,穿越原平台次数增加,原平台象限停留时间延长,海马神经元凋亡率降低,PKA、p-CREB和BDNF表达上调( P<0.05),CSH组上述指标差异无统计学意义( P>0.05);与CS组比较,CSH组逃避潜伏期延长,穿越原平台次数减少,原平台象限停留时间缩短,海马神经元凋亡率升高,PKA、p-CREB和BDNF表达下调( P<0.05)。 结论:七氟烷可通过激活PKA-CREB信号通路,减轻海马神经元凋亡,从而减轻CPB诱发大鼠认知功能障碍。
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编辑人员丨1周前
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中药调控阿尔茨海默病相关信号通路研究进展
编辑人员丨1周前
近年来,中医药治疗AD得到广泛关注。中药调控AD的信号通路研究主要集中在脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸激酶B(TrkB)通路、PI3K/Akt通路、MAPK通路、蛋白激酶A(PKA)/cAMP应答元件结合蛋白(CREB)通路、NF-κB通路及Wnt通路这6条通路。
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编辑人员丨1周前
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基于环磷酸腺苷/蛋白激酶A/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白通路探究丙泊酚对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经功能改善机制
编辑人员丨2024/4/27
目的:基于环磷酸腺苷/蛋白激酶 A/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP/PKA/CREB)通路探究丙泊酚对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经功能的改善机制.方法:采用改良线栓法缺血 2h,再灌注 24h建立大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型,将造模成功大鼠随机分为模型组和丙泊酚低(1 mg/ml)、中(2.5 mg/ml)、高剂量(5 mg/ml)组,各 12 只,另设含有 12 只大鼠的假手术组.分组后即开始给药,1 次/d,共 4 周,末次给药 12h后,采用改良神经功能评分(mNSS)法进行神经缺损评分;采用TTC染色法检测脑梗死面积;HE、Nissl 染色进行神经元细胞及尼氏小体形态学观察;Tunel 法进行神经元细胞凋亡检测;Elisa法检测脑组织 cAMP、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)含量;免疫荧光法检测脑组织环磷酸腺苷(cAMP)、p-PKA、p-CREB阳性细胞数及其蛋白共表达阳性细胞数;Western blot法检测脑组织 PKA、p-PKA、CREB、p-CREB蛋白表达量.结果:模型组大鼠比较假手术组大鼠的 mNSS评分、脑梗死面积百分比显著增加(均P<0.05),HE染色和 Nissl 染色可见明显的神经元细胞损伤和尼氏小体破坏,脑组织 cAMP、BDNF、NGF含量和PKA、p-PKA、CREB、p-CREB蛋白表达量显著下降,模型组大鼠比较假手术组大鼠的 cAMP、p-PKA、p-CREB阳性细胞数和蛋白共表达阳性细胞数也明显下降(均P<0.05).与模型组比较,丙泊酚给药组大鼠 mNSS评分、脑梗死面积百分比显著降低(均P<0.05),HE染色和 Nissl 染色可见神经元细胞损伤和尼氏小体破坏有不同程度改善,脑组织 cAMP、BDNF、NGF 含量和 PKA、p-PKA、CREB、p-CREB蛋白表达量显著升高(均P<0.05),cAMP、p-PKA、p-CREB阳性细胞数及其蛋白共表达阳性细胞数均显著升高(均P<0.05).结论:丙泊酚可能通过 cAMP/PKA/CREB通路改善CIRI大鼠神经功能.
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编辑人员丨2024/4/27
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针刺调控铁死亡治疗脑卒中的信号通路研究进展
编辑人员丨2023/9/16
脑卒中的发病机制是一个动态演变过程,表现为一系列神经毒性和神经保护相互作用的反应,参与反应的蛋白质作为信号通路通常在外界刺激下激活.目前已明确针刺能通过抑制脑卒中后脑组织神经细胞铁死亡从而促进神经功能修复,近年来针刺通过调控铁死亡治疗脑卒中的相关信号通路研究取得了显著进展,主要包括以下几方面:miR-23a-3p和核转录因子红系2 样2(NFE2L2)信号通路;p62/Kelch样ECH关联蛋白 1/核因子E2 相关因子 2(p62/Keap1/Nrf2)信号通路;α7nAChR介导的Janus激酶2/信号转导及转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路;环磷酸腺苷/cAMP依赖性蛋白激酶/cAMP反应元件结合蛋白(cAMP/PKA/CREB)信号通路;磷脂酰肌醇-3 激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路;p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路;过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子 1α/线粒体转录因子A(PGC-1 α/TFAM)信号通路;Notch信号通路和脑源性神经营养因子(BDNF)介导的Nrf2 信号通路.其中有已被证实的信号通路,亦有待研究的信号通路.
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编辑人员丨2023/9/16
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爆炸冲击波致大鼠抑郁样行为及其初步机制
编辑人员丨2023/8/19
目的 观察爆炸冲击波引起的轻度脑爆震伤(mbTBI)模型大鼠抑郁样行为改变及其海马中cAMP-PKA-CREB-BDNF信号通路变化,探讨mbTBI导致神经功能障碍的相关机制.方法 44只雄性SD大鼠随机分为对照组和模型组,每组22只.模型组大鼠放入带网格的铁笼内,头部朝向爆心,呈扇形固定于距离爆心15 m的地面,同时检测大鼠布放位置的冲击波强度.爆炸结束后,每组随机选取7只大鼠分笼饲养,于暴露后7、14、28 d,分别采用旷场实验和高架十字迷宫实验评价大鼠的抑郁样行为;每组剩余大鼠分别于暴露后7、14、28 d各随机处死5只,取海马组织并提取蛋白,采用Western blotting检测环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、磷酸化CREB(p-CREB)、脑源性神经营养因子(BDNF)及原癌蛋白c-FOS的相对表达量.结果 爆炸试验后模型组大鼠全部存活,但24 h内精神萎靡、行动迟缓、食欲差,72 h后上述症状逐渐缓解;两组大鼠各时间点的体重差异均无统计学意义(P>0.05).行为学实验结果显示,与对照组比较,爆炸试验后14 d模型组大鼠的移动总距离、中央区域停留时间、进入开放臂的次数及时间占比均明显减少或降低(P<0.05);爆炸试验后28 d,两组大鼠中央区域停留时间、进入开放臂的次数占比差异无统计学意义(P>0.05).Western blotting检测结果显示,与对照组比较,爆炸试验后7、14、28 d模型组大鼠海马组织PKA、CREB、p-CREB和BDNF蛋白表达量均明显降低(P<0.05);爆炸试验后7、14 d模型组大鼠海马组织cAMP、c-FOS表达量明显降低(P<0.05),而28 d时两组差异无统计学意义(P>0.05).与爆炸试验后7、14 d比较,爆炸试验后28 d模型组大鼠海马组织PKA、CREB和BDNF表达量均明显升高(P<0.05).结论 单次爆炸冲击波暴露可引起大鼠抑郁样行为,其机制可能与海马组织cAMP-PKA-CREB-BDNF信号通路下调有关.
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编辑人员丨2023/8/19
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肉苁蓉毛蕊花糖苷对D-半乳糖诱导PC12神经细胞损伤的保护作用
编辑人员丨2023/8/6
目的 从调节环腺苷酸/环腺苷酸依赖蛋白激酶/环磷腺苷效应元件结合蛋白(cAMP/PKA/CREB)信号通路水平的角度探讨肉苁蓉毛蕊花糖苷对D-半乳糖诱导PC12神经细胞损伤的保护作用.方法 四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率以及提供毛蕊花糖苷剂量选择依据,确定D-半乳糖诱导PC12神经细胞损伤模型的剂量和作用时间,毛蕊花糖苷干预以后,Western Blotting从蛋白水平检测CREB、p-CREB蛋白的表达水平.ELISA法检测cAMP、PKA和脑源性神经营养因子(BDNF)的含量.试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)的含量.结果 ①16 g·L-1D-半乳糖暴露PC12细胞40 h后,MTT检测细胞存活率达(46.67±6.59)%,与对照组比较差异具有显著性意义(P<0.05),表明成功建立了细胞衰老模型.②与模型组比较,毛蕊花糖苷作用24 h后,p-CREB表达增加(P<0.05),并且有剂量依赖性(r=0.989,P<0.01),PKA、cAMP、BDNF和SOD水平提高(P<0.05),MDA和LDH水平下降(P<0.05)(rMDA=-0.875,P<0.05);(rLDH=-0.834,P<0.05).阻断剂H-89干预后1 h后,p-CREB表达减少,PKA、cAMP、BDNF和SOD水平显著降低(P<0.05),MDA和LDH水平升高(P<0.05).结论 肉苁蓉中毛蕊花糖苷对D-半乳糖诱导的PC12神经细胞损伤有明显的保护作用,其机制与上调cAMP/PKA/CREB信号通路有关.
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编辑人员丨2023/8/6
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芍药内酯苷和芍药苷对血虚肝郁证大鼠模型的影响及作用机制研究
编辑人员丨2023/8/6
目的:分析白芍“养血柔肝”功效物质基础与作用机制及血虚肝郁证证候实质.方法:选取健康雄性SD大鼠48只,随机数字表法将大鼠分成对照组、模型组、芍药内酯苷组及芍药苷组,每组12只,制备血虚肝郁大鼠模型,造模第1天开始给药,芍药内酯苷组灌胃30 mg/(kg·d)芍药内酯苷,芍药苷组灌胃30 mg/(kg·d)芍药苷,对照组和模型组灌胃等剂量生理盐水,共灌胃3周;观察大鼠一般活动情况,高效液相色谱-电化学检测系统检测大鼠海马内单胺类神经递质5-羟吲哚乙酸(5-hydroxyindole acetic acid,5-HIAA)、去甲肾上腺素(Norepinephrine,NE)、肾生腺素(Epinephrine,E)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)及多巴胺(Dopaminem,DA)水平,蛋白免疫印迹法检测大鼠海马内脑源性神经营养因子(Brainderived neurotrophic factor,BDNF)、磷酸化元件结合蛋白(P-cAMP-response element binding protein,P-CREB)、环磷酸腺苷(Cydic adenosine monophosp hate,cAMP)及蛋白激酶A(Protein kinase A,PKA)蛋白表达状况.结果:与对照组比较,模型组大鼠5-HIAA、NE、E、5-HT、DA、PKA、BDNF、cAMP、PKA均显著降低,P-CREB显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,芍药内酯苷组和芍药苷组大鼠5-HIAA、NE、E、5-HT、DA、PKA、BDNF及其大脑皮层内cAMP、PKA水平均升高,P-CREB蛋白显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:芍药内酯苷和芍药苷可调节血虚肝郁大鼠神经递质含量,调控大鼠机体内cAMP/PKA信号路径内相关蛋白表达,起保护神经作用,它们都是白芍养血柔肝功效物质基础.
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编辑人员丨2023/8/6
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列当中Crenatoside神经保护作用的机制研究
编辑人员丨2023/8/6
目的:从列当中苯乙醇苷类成分Crenatoside(OC4)对D-半乳糖所致急性损伤的保护作用中,探讨调节cAMP/PKA/CREB信号通路的机制.方法:(1)根据MTT法检测细胞存活率确定给药OC4的剂量,以及D-半乳糖诱导PC12神经细胞损伤模型的剂量和作用时间.OC4孵育24 h后,ELISA法检测cAMP、PKA和BDNF的含量;试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)的含量;Western Blotting免疫印迹分析检测CREB、p-CREB蛋白的表达水平.结果:给予PC12细胞16 g/L D-半乳糖40h后,MTT检测细胞存活率达(46.67±6.59)%,与对照组比较差异具有显著性意义(P<0.05),表明成功建立了细胞衰老模型.OC4作用24 h后,与D-半乳糖组相比,PKA、cAMP、BDNF和SOD水平提高(P<0.05),MDA和LDH水平下降(P<0.05)(rMDA=-0.850,P<0.05);(rLDH=-0.927,P<0.05),p-CREB表达增加(P<0.05),并且有剂量依赖性(r=0.903,P<0.01).PKA特异性抑制剂H-89作用1 h后,p-CREB表达减少,PKA、cAMP、BDNF和SOD水平显著降低(P<0.05),MDA和LDH水平升高(P<0.05).结论:列当中Crenatoside对D-半乳糖诱导的PC12神经细胞损伤有明显的保护作用,其机制与上调cAMP/PKA/CREB信号通路有关.
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编辑人员丨2023/8/6
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磷酸二酯酶4抑制剂R020-1724对反复氯胺酮麻醉后幼年大鼠学习记忆障碍的改善作用
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨磷酸二酯酶4抑制剂Ro20-1724对反复氯胺酮麻醉后幼年大鼠学习记忆障碍的作用及对环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)-cAMP应答元件结合蛋白(CREB)-脑源性神经营养因子(BDNF)信号通路的调控.方法 6周龄SD大鼠80只,随机选取20只为正常对照组,剩余60只随机分为模型组和观察组(均n=30),每日给予氯胺酮(50 mg· kg-1)麻醉30 min后,模型组腹腔注射生理盐水2 mL,观察组给予Ro20-1724腹腔注射0.5 mg·kg-1,均连续注射7d.Morris水迷宫观察各组大鼠的记忆能力.取大鼠海马组织,采用放射免疫法检测cAMP的含量,Western-blot法和荧光定量PCR来检测PKA、CREB、BDNF蛋白和mRNA的相对表达量.结果 与正常对照组比较,模型组的水迷宫逃避潜伏期和第一次穿环时间延长(P<0.05),穿环次数减少(P<0.05),cAMP含量降低(P<0.05);与模型组相比,观察组的水迷宫逃避潜伏期缩短,第一次穿环时间减少且穿环次数增多(P<0.05),与正常对照组差异不显著(P>0.05).观察组的cAMP含量高于模型组(P<0.05),但是低于正常对照组(P<0.05).观察组PKA、CREB、BDNF蛋白和mRNA相对表达量均高于模型组(P<0.05),与正常对照组差异不显著(P>0.05).结论 Ro20-1724可能通过调控cAMP/PKA-CREB-BDNF信号通路而改善由于反复氯胺酮麻醉造成的幼年大鼠学习记忆障碍.
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编辑人员丨2023/8/6
