目的:建立纹带棒状杆菌的多位点序列分型（MLST）方法，探讨临床分离纹带棒状杆菌的种群结构和遗传进化关系。方法:筛选出7个管家基因（ gyrA、 gyrB、 hsp65、 sodA、 secA1、 rpoB、16S rRNA），设计引物并进行PCR扩增和测序，测序所得序列通过SeqMan 软件进行拼接。采用DnaSP 5.10.01软件、Splits tree 4.14.2软件对管家基因的多样性及基因重组特征进行评价；采用MEGA 7.0.14软件基于序列型别（ST）采用M-L法构建系统发育树，采用BioNumerics软件基于ST特征值构建最小生成树，并用eBURST软件分析ST间遗传进化关系。 结果:所选的7个位点在所有试验菌株中均获得了预期的扩增产物；Splits tree表明所有纹带棒状杆菌的聚类一致，提示基因重组是推动纹带棒状杆菌进化的潜在动力；MLST将344株纹带棒状杆菌分成72个STs，85.7%的菌株形成克隆复合体（CC）结构，CC19形成了优势克隆复合体，但包含菌株数最多的ST为该克隆复合体中的ST16。ST具有一定的地域聚集性且与分离年份具有一定的相关性。结论:我国纹带棒状杆菌呈现高度的遗传多样性，CC19为优势克隆复合体。本研究建立的MLST分型方案可用于纹带棒状杆菌的分型，但尚需优化改进。

目的:探讨结直肠小息肉应用冷切割，以及预防性使用止血夹治疗的安全性及有效性。方法:选择2021年1月至2022年3月青海省人民医院符合纳排标准的260例结肠小息肉患者，分层随机分为冷圈套切除术（cold snare polypectomy，CSP）治疗的CSP组、CSP+预防性使用止血夹治疗的CSP+止血夹组、热圈套切除术（hot snare polypectomy，HSP）治疗的HSP组及HSP+预防性使用止血夹治疗的HSP+止血夹组，每组各65例。比较治疗情况、出血发生率及其他并发症发生率。结果:患者基本特征和息肉病变特征4组间差异无统计学意义（ P>0.05）。4组出现的并发症，术中即时出血发生率［5例（7.69%）、4例（6.15%）、3例（4.62%）、3例（4.62%）］，以及术后迟发性出血发生率［0例（0.00%）、0例（0.00%）、1例（1.54%）、0例（0.00%）］，4组间差异均无统计学意义（ χ2=0.778， P=0.855； χ2=3.012， P=0.390）；术后腹痛发生率，HSP组［7例（10.77%）］最高，与CSP组［1例（1.54%）］及CSP+止血夹组［1例（1.54%）］相比差异有统计学意义（ P<0.05）。单个息肉治疗时间，CSP组最短［（2.18±1.07）min］，HSP组次之［（2.83±0.82）min］，CSP组+止血夹组再次之［（3.15±1.16）min］，HSP组+止血夹组用时最长［（4.88±1.85）min］，4组间差异有统计学意义（ F=50.397， P<0.001）。 结论:推荐使用冷切割治疗结直肠小息肉，如术中判断无出血及穿孔风险，无须预防性使用止血夹。

目的:采用网络药理学和体内试验研究守正代茶饮对正常小鼠免疫增强的潜在作用机制.方法:通过TCMSP、Swiss Target Prediction数据库获取守正代茶饮的活性成分及对应靶标;GeneCards数据库得到免疫相关靶点并与药物靶点取交集;通过STRING和DAVID数据库,对交集靶点进行PPI网络分析和GO、KEGG富集分析,于Cytoscape 3.9.1 构建"守正代茶饮-潜在活性化合物-靶点"和"成分-靶点-通路"网络,AutoDock Tools进行分子对接验证.小鼠碳廓清试验、迟发型变态反应试验、血清溶血素试验及Western Blot对部分靶点进行验证.结果:守正代茶饮的活性成分 108 种,增强免疫力交集靶点 114 个,核心成分为槲皮素、β-谷甾醇、山柰酚、豆甾醇、木犀草素等;关键靶点为PTGS2、HSP90AB1、PRKACA、RELA、Akt1 等;主要参与药物的应答、基因表达的正调节、凋亡过程的负调控、TNF、PI3K-Akt、IL-17 等生物过程和信号通路;关键靶点和核心成分亲和力较强.动物试验结果显示,与空白组比较,守正代茶饮低、中、高剂量组增强小鼠迟发型变态反应水平;中、高剂量组改善巨噬细胞吞噬活性;中、高剂量组p-PI3K、p-Akt、p-P65 蛋白表达均上调(P<0.01).结论:守正代茶饮具有增强免疫力的功能,可能通过PI3K-Akt/NF-κB信号通路促进免疫活性物质的释放,发挥免疫调节作用.

目的 探讨成骨细胞来源的外泌体(Exo)中微小RNA(miR)-494 对骨质疏松症(OP)大鼠骨代谢与骨重建平衡的影响及其机制.方法 从MC3T3-E1 成骨细胞系中分离鉴定Exo,并将miR-494 电转至Exo,Real-time PCR测定miR-494 表达水平.40 只SD大鼠随机分为对照组、模型组、miR-494 模拟剂(miR-494)组和miR-494 抑制剂组,每组 10 只.除对照组外,其余 3 组大鼠切除卵巢构建OP模型.模型制作成功后,miR-494 组与miR-494抑制剂组分别接受含相应miRNA的Exo尾静脉注射,剂量为 3×109 个微粒.4 周后,Micro-CT检测各组大鼠的骨参数,ELISA测定血清骨标志物,HE染色观察骨组织病理变化,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)染色检测破骨细胞数量,Western blotting测定骨重建相关蛋白及Toll样受体4(TLR4)相关通路蛋白表达水平.结果 成功从MC3T3-E1 细胞中分离得到典型杯状或圆形,直径约 100 nm的Exo,其含有CD63、CD9、肿瘤易感性基因 101(TSG101)、热休克蛋白 70(HSP70)蛋白,且能被MC3T3-E1 细胞摄取.经电转处理后,miR-494 模拟剂和miR-494 抑制剂的Exo中miR-494 的相对表达量明显升高和降低(P＜0.05).与模型组相比,miR-494 组大鼠骨参数降低,血清骨标志物骨钙蛋白(BGP)、TRACP、Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)升高,骨保护蛋白(OPG)、Ⅰ型前胶原N端肽(PⅠNP)降低,骨小梁结构紊乱,破骨细胞增加,骨组织内骨形态发生蛋白 2(BMP-2)、Runt相关转录因子 2(RUNX2)下调,核因子κB受体激活剂配体(RANKL)上调,TLR4、核因子κB(NF-κB)p65 及髓样分化主要响应蛋白 88(MyD88)上调(P＜0.05).而miR-494 抑制剂组情况则相反,骨参数和OPG、PⅠNP升高,BGP、TRACP、CTX-Ⅰ降低,骨结构恢复正常,破骨细胞减少,骨组织内BMP-2、RUNX2 上调,RANKL下调,TLR4、NF-κB p65 及MyD88 下调(均P＜0.05).结论 Exo传递miR-494 可加重OP大鼠骨代谢异常,并抑制骨重建平衡,推测其作用机制可能与调控TLR4 通路有关.

目的 观察血清热休克蛋白(HSP)90A、应激诱导磷蛋白1(STIP1)和肌动蛋白凝胶蛋白2(TAGLN-2)水平在子宫腺肌病的临床诊断价值.方法 选取2020年1月—2022年6月在复旦大学附属妇产科医院诊治的子宫腺肌病患者126例,为子宫腺肌病组.选取同期在该院行健康体检妇女65例,为对照组.影响子宫腺肌病形成进行单因素和多因素分析,观察血清HSP90A、STIP1和TAGLN-2水平与子宫腺肌病严重程度和痛经的关系,及其在诊断子宫腺肌病的诊断效能.结果 子宫腺肌病组孕次、产次、血清HSP90A、STIP1和TAGLN-2水平明显高于对照组(均P＜0.01),而两组在年龄、BMI、人工流产史、分娩史、TG、TC、HDL-C和LDL-C水平差异无统计学意义(均P＞0.05).多因素分析发现孕次、产次、血清HSP90A、STIP1和TAGLN-2水平是影响子宫腺肌病的独立危险因素(均P＜0.01).血清HSP90A、STIP1和TAGLN-2水平随着子宫腺肌病的分级升高而升高(P＜0.01),有痛经组的水平明显高于无痛经组(P＜0.01).血清HSP90A、STIP1和TAGLN-2水平在诊断子宫腺肌病发生的灵敏度分别为60.3％、77.0％和77.0％,特异度分为为92.3％、89.2％和76.9％,AUC分别为0.836、0.884和0.829,联合检测的灵敏度为92.9％,特异度为 92.3％,AUC 为 0.966,明显高于单个指标的 HSP90A(z=5.269,P＜0.001)、STIP1(z=3.867,P＜0.001)和TAGLN-2(z=5.286,P＜0.001).结论 HSP90A、STIP1和TAGLN-2参与了子宫腺肌病的发病过程,是子宫腺肌病严重程度的指标,联合检测有助于提高子宫腺肌病的诊断效能.

目的 基于网络药理学和分子对接技术探讨半枝莲二萜类成分抗肝癌的作用机制.方法 根据文献调研(1987年1月至2022年7月)获得的155个半枝莲二萜类化合物,通过SwissADME平台筛选后得到符合条件的93种活性成分,并通过Swiss Target Prediction网络平台预测得到其中65个化合物可能的作用靶点;通过GeneCards、OMIM、PharmGkb、TTD、DrugBank以及GEO、TCGA数据库获取与肝癌有关的靶点,利用Cytoscape软件构建可视化"活性成分-靶点-肝癌"网络作用图,并通过度值筛选主要活性成分;使用String平台进行蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络功能富集分析,利用Cytoscape软件构建PPI可视化网络图,通过cytoHubba插件的评分规则筛选出核心靶点和关键靶点;采用R语言软件包对半枝莲二萜抗肝癌的作用靶点进行基因本体(GO)功能和京都基因和基因组数据库(KEGG)通路富集分析;使用AutoDock vina软件对主要活性成分与关键靶点进行对接分析.结果 筛选出半枝莲二萜中6种活性成分包括Scutebarbolide I、Scutebata O、Scutelinquanine D、Scutellone F、Scutellone H和Scutebarbatine J,预测得到10个抗肝癌核心靶点,其中蛋白STAT3、MAPK1、MAPK3、HSP90AA1、PIK3R1和PIK3CA为关键靶点.基因富集分析得到953个GO功能条目和137条通路(P<0.05);分子对接结果显示,半枝莲二萜活性成分与关键靶点间存在潜在结合位点;网络药理学分析表明半枝莲二萜成分可能通过肽基-丝氨酸磷酸化、肽基-丝氨酸修饰、磷酸酶结合、蛋白质丝氨酸/苏氨酸激酶活性等生物学过程,作用于STAT3、MAPK1、MAPK3、PIK3R1、PIK3CA等关键蛋白的表达,进一步调控癌症中蛋白多糖、化学致癌受体激活、催乳素信号通路、癌症程序性死亡受体配体1(PD-L1)表达和程序性死亡受体1(PD-1)检查点通路等信号通路,发挥治疗肝癌作用.结论 半枝莲二萜类化合物能够通过多分子、多靶点、多通路、多作用机制达到治疗肝癌作用.

目的 基于网络药理学及实验验证确定淫羊藿苷(icariin,ICA)干预强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)的潜在作用靶点.方法 应用网络药理学方法和分子对接预测ICA治疗AS的可能靶点和途径.招募 15 名活动期AS患者和 15 名性别、年龄匹配的健康志愿者,提取外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)进行体外实验,检测经不同浓度ICA干预后蛋白酪氨酸激酶 2/信号转导与转录激活子3(janus kinase 2/signal transducer and activator of transcription 3,JAK2/STAT3)信号通路相关分子的表达.结果 转录因子 p65(transcription factor p65,RELA)、一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase,NOS)2、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated Protein Kinase,MAPK)14、MAPK1、胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor,IGF)1、热休克70 kDa蛋白(heat shock 70 kDa protein,HSPA)1A、热休克90 kDa蛋白α(HSP90A)A1、JAK2 和蛋白激酶Cβ(protein kinase C beta,PRKCB)可能是ICA调控AS的潜在作用靶点.体外实验结果表明,活动期AS患者PBMC中JAK2 和STAT3 的磷酸化水平明显高于对照组(P<0.05),经ICA体外干预后AS患者PBMC中JAK2 和STAT3 磷酸化水平显著降低(P<0.05).特异性转录因子维甲酸相关孤儿核受体(retinoic acid related orphan receptor,ROR)γt蛋白和其编码基因RORc在活动期AS患者中的表达显著高于对照组(P<0.05),ICA可下调RORγt蛋白和RORc mRNA的表达(P<0.05).结论 ICA可能通过RELA、NOS2、MAPK14、MAPK1、IGF1、HSPA1A、HSP90AA1、JAK2 等关键靶点和JAK2/STAT3 信号通路发挥抗AS的作用.

目的 比较微阵列芯片法和多同源基因序列测序在非结核分枝杆菌(NTM)菌种鉴定中的差异,为NTM感染提供精准诊断依据.方法 采用罗氏固体培养法复苏天津市海河医院2016-2019年保存的170株NTM菌株,分别采用微阵列芯片法和同源基因序列[16SrRNA、RNA聚合酶亚基B(rpoB)、热休克蛋白65(hsp65)]测序进行鉴定.以多同源序列测序分析结果为参考,分析微阵列芯片法菌种鉴定的准确性.比较2种方法样本周转时间(TAT)的差异.结果 微阵列芯片法鉴定出8个NTM菌种,同源序列测序鉴定出14个.微阵列芯片法无法鉴定出缓慢生长群的猿分枝杆菌、慢生黄分枝杆菌、副瘰疬分枝杆菌和快速生长群的龟分枝杆菌、马德里分枝杆菌、母牛分枝杆菌等10个菌种,多同源序列测序可鉴定出全部的菌种.以多同源序列测序分析结果为参考,微阵列芯片法鉴定错误7株,鉴定到复合群的正确率为90.0％(153/170);16S rRNA、rpoB、hsp65单独和3个同源序列联合分析鉴定到复合群的正确率分别为93.5％、98.8％、99.4％和100.0％.对于微阵列芯片法无法区分的53株龟/脓肿分枝杆菌复合群(MABC),3个同源序列联合测序鉴定出6株龟分枝杆菌、25株MABC脓肿亚种、20株MABC马赛亚种和2株MABC bolletii亚种.微阵列芯片法单个样本鉴定TAT为8 h,170株NTM菌株全部鉴定需要2 d;多同源序列测序单个样本鉴定TAT为3 d,170株NTM菌株全部鉴定约需要5 d.结论 微阵列芯片技术可快速鉴定临床常见分枝杆菌.多同源基因序列测序不仅可鉴定临床常见分枝杆菌,还可鉴定微阵列芯片法无法鉴定出的菌种和可能鉴定错误的菌种及其亚种,但所需时间较微阵列芯片法长.

目的 探讨颅内压(ICP)联合血清热休克蛋白47(HSP47)检测对高血压脑出血(HICH)患者神经功能缺损及预后评估的价值.方法 选择109例HICH患者,均行急诊软通道微创颅内血肿穿刺引流术,术后监测ICP,获得波幅(AMP)和压力波幅相关性指数(RAP);术前用ELISA法检测血清HSP47;收集患者临床资料.采用美国国立卫生研究院卒中量表评分对患者神经功能缺损进行评价,并将患者分为轻型组32例(<7分)、中型组48例(7～15分)、重型组29例(>15分);出院后6个月根据格拉斯哥预后评分将患者分为预后不良组(1～3分)44例、预后良好组(4～5分)65例.单因素与多因素Logistic回归分析HICH患者预后不良的影响因素;受试者工作特征曲线分析ICP参数联合血清HSP47预测HICH患者预后的价值.结果 重型组AMP、RAP、血清HSP47水平高于中型组、轻型组(P均<0.05),中型组AMP、RAP、血清HSP47水平高于轻型组(P均<0.05).单因素分析结果显示,预后不良组入院时格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分、出血量≥50 mL比例、术后再发脑出血比例、AMP、RAP、血清HSP47水平均高于预后良好组(P均<0.05).多因素Logistic回归分析结果显示,入院时GCS评分高、AMP高、RAP高、HSP47高是HICH患者预后不良的危险因素(P均<0.05).AMP、RAP、HSP47预测HICH患者预后不良的曲线下面积分别为0.776、0.793、0.774,三者联合预测HICH患者预后不良的曲线下面积为0.920,高于单独预测(P均<0.05).结论 ICP参数AMP、RAP及血清HSP47水平升高与HICH患者神经功能缺损加重和不良预后有关,三者联合可提高对HICH患者预后的预测效能.

目的 基于HSP27-TLR4/NF-κB通路探讨芪参颗粒对大鼠心肌梗死后炎症反应的影响及潜在机制.方法 48只雄性SD大鼠分别进行左冠状动脉前降支结扎术造模或假手术,将假手术大鼠分为对照组、芪参颗粒对照组,造模大鼠分为模型组和芪参颗粒组.术后24 h予芪参颗粒(2.352 g/kg)或蒸馏水灌胃,每日1次,连续1周.超声检测大鼠心功能,免疫荧光、HE和Masson染色评估心肌结构、炎症及纤维化改变,ELISA检测血浆热休克蛋白27(HSP27)含量,Western blot检测心肌组织Toll样受体(TLR)4 和核因子-κB(NF-κB)蛋白表达.结果 与对照组比较,模型组大鼠左室舒张末期前壁厚度、左室收缩末期前壁厚度(LVAWs)、左室舒张末期后壁厚度(LVPWd)、左心室收缩末期后壁厚度、射血分数(EF)和短轴缩短率(FS)显著降低(P<0.01),左室舒张末期内径、左室收缩末期内径(LVIDs)、左室舒张末期容积、左室收缩末期容积(LVESV)显著升高(P<0.05,P<0.01);心肌细胞大量坏死,梗死边缘区心肌细胞代偿性肥大且排列紊乱,血管旁和心肌间质内大量炎性细胞浸润和胶原纤维沉积;血浆HSP27含量显著增加(P<0.01),心肌组织TLR4、NF-κB p65蛋白表达显著升高(P<0.05).与模型组比较,芪参颗粒组大鼠LVAWs、LVPWd、EF和FS显著升高,LVIDs、LVESV显著降低(P<0.05,P<0.01);心肌组织炎性细胞浸润、心肌细胞存活情况和间质纤维化情况显著改善;血浆HSP27含量显著减少(P<0.01),心肌组织TLR4、NF-κB p65蛋白表达显著降低(P<0.05).结论 芪参颗粒可能通过降低血浆HSP27含量抑制TLR4/NF-κB通路,从而减轻炎症反应,改善心肌梗死后心室重构和心功能下降.