目的:探讨微小RNA(miR)-1246靶向CXC趋化因子受体4(CXCR4)非小细胞肺癌转移特性的分子机制。方法:选取2019年7月到2021年7月河南省人民医院收集的72例非小细胞肺癌和对应癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法分析肿瘤组织和癌旁组织中miR-1246的表达水平。人非小细胞肺癌H1299细胞系随机分为miRNA对照组和miR-1246组，采用miRNA对照和miR-1246慢病毒感染，建立稳定细胞系。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、划痕实验、Transwell和上皮间质转化分析miR-1246对非小细胞肺癌增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化的影响。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-1246的靶基因。采用蛋白质免疫印迹(Western blot)分析靶蛋白表达水平。组间比较采用 t检验。 结果:癌旁组织中miR-1246表达水平(1.07±0.19)明显高于miR-1246组(0.66±0.13)，差异有统计学意义( t＝15.860， P<0.05)。miRNA对照组吸光度值(1.95±0.06)明显高于miR-1246组(1.58±0.07)，差异有统计学意义( t＝10.090， P<0.05)。miRNA对照组划痕愈合率[(90.20±6.57)%]明显高于miR-1246组[(74.56±9.36)%]，差异有统计学意义( t＝3.351， P<0.05)。miRNA对照组细胞侵袭数量[(131.00±16.37)个]明显高于miR-1246组[(94.17±5.19)个]，差异有统计学意义( t＝5.177， P<0.05)。miRNA对照组细胞上皮细胞标志物E-钙黏素(E-cadherin)和细胞角蛋白(cytokeratins)表达水平(0.87±0.06、0.71±0.06)明显低于miR-1246组(1.27±0.04、1.23±0.15)，差异有统计学意义( t＝14.240、7.839， P<0.05)。miRNA对照组细胞间质细胞标志物N-钙黏素(N-cadherin)和TWIST1表达水平(1.14±0.14、1.25±0.05)明显高于miR-1246组(0.81±0.05、0.92±0.03)，差异有统计学意义( t＝5.574、14.270， P<0.05)。CXCR4是miR-1246的靶基因。癌旁组织CXCR4蛋白表达水平(1.03±0.13)明显低于非小细胞肺癌组织(2.12±0.17)，差异有统计学意义( t＝15.860， P<0.05)。miRNA对照组细胞CXCR4蛋白表达水平(1.17±0.11)明显低于miR-1246组(0.80±0.07)，差异有统计学意义( t＝6.789， P<0.05)。 结论:miR-1246通过靶向调节CXCR4蛋白表达水平，进而参与非小细胞肺癌的迁移、侵袭和上皮间质转化过程。

目的:探讨长波紫外线（UVA）诱导人成纤维细胞（HSF）光老化中miRNA-1246的表达及上调miR-1246表达对靶基因MAPK14及细胞老化的影响。方法:HSF分离自苏州大学附属儿童医院收集的健康儿童包皮环切术后皮肤标本，每日以10 J/cm 2 UVA照射HSF，在初次照射及照射3、7、14 d采用实时定量PCR检测miR-1246的表达。将HSF细胞分为空白对照组、UVA组、miR-1246组、UVA + miR-1246组，通过慢病毒转染上调miR-1246的表达和照射UVA 14 d后，收集各组细胞，采用MTT检测细胞增殖活性，β半乳糖苷酶染色检测细胞老化，RT-PCR和Western印迹检测MAPK14、基质金属蛋白酶1（MMP-1）的表达。多组间均数的比较用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD- t检验。 结果:在照射7 d、14 d时，UVA组HSF的miR-1246相对表达水平（4.69 ± 0.85、3.59 ± 0.45）均低于空白对照组（8.42 ± 0.75、7.61 ± 0.49），差异均有统计学意义（ t = 29.84、31.93，均 P < 0.01）。上调miR-1246的表达和照射UVA后，MTT结果显示，空白对照组、UVA组、miR-1246组、UVA + miR-1246组细胞增殖活性（0.82 ± 0.03、0.23 ± 0.02、0.81 ± 0.02、0.61 ± 0.02）差异有统计学意义（ F = 34.90， P < 0.05），UVA组低于空白对照组（ t = 28.14， P < 0.01），UVA + miR-1246组低于miR-1246组（ t = 10.61， P < 0.01），高于UVA组（ t = 20.30， P < 0.01）。β半乳糖苷酶染色检测显示，4组老化细胞阳性率（3.93% ± 1.11%、81.29% ± 2.53%、5.50% ± 1.15%、54.13% ± 2.09%）差异有统计学意义（ F = 16.14， P < 0.05），其中UVA组高于空白对照组（ t = 48.46， P < 0.01），而UVA + miR-1246组高于miR-1246组（ t = 35.31， P < 0.01），低于UVA组（ t = 14.32， P < 0.01）。RT-PCR和Western印迹均显示，4组细胞MAPK14、MMP-1的mRNA、蛋白相对水平差异均有统计学意义（均 P < 0.05），其中UVA组高于空白对照组（ P < 0.05），UVA + miR-1246组高于miR-1246组（ P < 0.05），低于UVA组（ P < 0.05）。 结论:UVA照射诱导的HSF光老化中，miR-1246的表达受到抑制，上调miR-1246的表达可抑制其靶基因MAPK14及老化相关蛋白MMP-1的表达，起到抗细胞光老化的作用。

目的:探讨微小RNA(miR)-1246靶向糖原合成酶激酶3β(GSK3β)对前列腺癌(PCa)细胞迁移、侵袭和增殖的作用及分子机制。方法:采用miRNA-Seq技术检测PCa组织及癌旁组织中差异表达的miRNA；采用实时荧光定量聚合酶连反应(qRT-PCR)技术检测PCa患者癌组织和血清中miR-1246的表达水平；采用生物信息学分析、荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR、蛋白质印迹法分析miR-1246对GSK3β的靶向调控关系。人PCa细胞DU145和LNCaP分别转染miR-1246类似物(mimics)/阴性对照(NC mimics)或miR-1246抑制剂(inhibitor)/阴性对照(NC inhibitor)，通过细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞的增殖能力，通过划痕实验和Transwell迁移实验检测细胞的迁移侵袭能力。两组间比较采用独立样本 t检验。 结果:miRNA-Seq结果显示，与癌旁组织比较，PCa组织中有15个miRNA表达显著升高，51个miRNA表达显著降低，其中miR-1246在PCa患者组织及血清中表达显著升高(组织：7.93±2.39比1.00±0.16， t＝10.070， P<0.01；血清：15.23±2.77比1.01±0.09， t＝17.770， P<0.01)。生物信息分析结果显示，miR-1246与GSK3β有互补的核苷酸序列，miR-1246 mimics＋WT-GSK3β组细胞荧光素酶活性显著低于NC mimics＋WT-GSK3β组(0.58±0.09比1.00±0.14， t＝8.128， P<0.01)。蛋白质免疫印迹结果显示，miR-1246 inhibitor组GSK3β的表达明显高于NC inhibitor组(2.43±0.29比1.00±0.09， t＝10.180， P<0.01)，miR-1246 mimics组GSK3β的表达明显低于NC mimics组(0.51±0.07比1.01±0.12， t＝5.120， P<0.05)。在DU145和LNCaP细胞中，miR-1246 mimics组细胞增殖能力、细胞迁移率和细胞侵袭数显著高于NC mimics组，miR-1246 inhibitor组细胞增殖能力、细胞迁移率和细胞侵袭数显著低于NC inhibitor组。蛋白质免疫印迹实验结果显示，miR-1246 inhibitor组Wnt3a和β-catenin的表达低于NC inhibitor组(Wnt3a：0.39±0.05比1.00±0.12， t＝6.620， P<0.01；β-catenin：0.54±0.09比0.98±0.10， t＝6.032， P<0.01)。 结论:miR-1246通过抑制GSK3β，激活Wnt/β-catenin信号通路，促进PCa细胞的迁移、侵袭和增殖。

目的:筛选肝癌干细胞来源外泌体中差异表达的miRNA并分析其对肝癌细胞恶性生物学特征的影响。方法:采用miRNA表达谱芯片分析肝癌干细胞来源外泌体中差异表达的miRNA并鉴定miRNA对肝癌干细胞恶性表型的作用。采用不同浓度(0、150、300 μmol/L)多柔比星处理细胞，采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-196a表达水平的变化；分别采用肝癌干细胞来源外泌体(Exo-NC组)、转染miR-196a抑制剂处理后的外泌体(Exo-Inhibitor组)培养肝癌细胞，检测肝癌细胞的凋亡情况以及caspase3/7的活性。按照随机数字表法将裸鼠分为Do-PBS组、Do-Exo-Inhibitor组、Do-Exo-NC组，每组各5只，采用裸鼠移植瘤实验分析miR-196a对肝癌细胞裸鼠移植瘤模型的作用。结果:本研究分离纯化了CD133 ＋ Huh7干细胞培养上清中的外泌体，发现miR-7162-3p、miR-1910-5p、miR-3613-3p、miR-196a、miR-155-5p表达上调，miR-1246和miR-3613-5p表达下调。外泌体中miR-7162-3p、miR-196a和miR-155-5p对肝癌干细胞的自我更新能力具有重要影响；miR-1910-5p、miR-196a和miR-155-5p对肝癌干细胞的侵袭能力具有重要影响，其中miR-196a的抑制效果最显著。在反应24 h时，多柔比星浓度在0、150、300 μmol/L时miR-196a的表达量分别为0.96±0.05、1.23±0.05和2.33±0.03，差异具有统计学意义( F＝996.90， P<0.001)；48 h时，多柔比星浓度在0、150、300 μmol/L时miR-196a的表达量分别为1.02±0.07、2.35±0.05和2.89±0.55，差异具有统计学意义( F＝303.00， P<0.001)。Exo-NC组肝癌细胞在多柔比星浓度为0和300 μmol/L时的细胞凋亡率分别为9.37%±0.19%和11.64%±0.27%，Exo-Inhibitor组分别为18.80%±1.91%和22.79%±1.57%，差异均具有统计学意义( t＝4.41， P＝0.048； t＝4.96， P＝0.038)。未使用多柔比星处理时，Exo-NC组在24 h和48 h的caspase3/7比值分别为0.94±0.08和0.97±0.09，Exo-Inhibitor组分别为1.56±0.01和1.58±0.01，差异均具有统计学意义( t＝11.41， P＝0.008； t＝6.07， P＝0.026)。使用300 μmol/L多柔比星处理细胞后，Exo-NC组在24 h和48 h的caspase3/7比值分别为0.95±0.07、1.36±0.08，Exo-Inhibitor组分别为2.84±0.08、3.20±0.14，差异均具有统计学意义( t＝24.20， P＝0.002； t＝15.78， P＝0.004)。Do-PBS组、Do-Exo-Inhibitor组和Do-Exo-NC组3组裸鼠的移植瘤体积依次增大，分别为(1 051.86±89.90)mm 3、(1 310.91±86.66)mm 3和(2 185.14±352.34)mm 3，差异具有统计学意义( F＝30.28， P<0.001)；3组移植瘤重量依次增加，分别为(0.36±0.10)g、(0.39±0.12)g和(0.76±0.16)g，差异具有统计学意义( F＝11.81， P＝0.002)；转染miR-196a抑制剂后裸鼠移植瘤肿瘤内miR-196a的表达显著降低，3组表达量分别为1.05±0.16、0.38±0.08和2.17±0.26，差异具有统计学意义( F＝48.93， P<0.001)。 结论:肝癌干细胞分泌的外泌体可通过其中的miR-196a增强肝癌细胞对多柔比星的耐药性。

目的:检测隐丹参酮、丹参酮ⅡA对人肺腺癌A549细胞分泌的外泌体中内源性非编码小RNA(microRNA,miRNA)的差异表达情况.观察外泌体对HUVEC细胞的作用,并初步探索其作用机制.方法:取对数生长期的A549细胞,分别以隐丹参酮6 μg/mL及丹参酮ⅡA 4 μg/mL给药,用无血清的培养基培养24小时后,细胞上清液按照说明书提取外泌体.采用高通量测序技术,检测各组A549细胞中miRNA的表达情况,对外泌体中hsa-miR-1246进行验证,对获得的差异基因进行GO和KEGG分析.以各组外泌体加入HUVEC细胞中,并采用CCK-8实验和划痕实验,分别检测各组外泌体对HUVEC细胞的抑制作用和迁移作用,检测HUVEC细胞中CD31的基因和蛋白表达.结果:高通筛选结果发现隐丹参酮能够上调109个miRNA,下调78个miRNA;丹参酮ⅡA能够上调35个miRNA,下调40个miRNA.将有差异的miRNA进行功能与通路的富集分析,显示隐丹参酮、丹参酮ⅡA差异表达基因主要与内吞作用、癌症通路、MAPK信号通路、hippo信号通路、Wnt信号通路、癌症中的microRNAs、Rap1信号通路、肌动蛋白细胞骨架的调节等相关.细胞增殖实验发现,空白外泌体和隐丹参酮外泌体对HUVEC细胞的增殖均具有显著的抑制作用,且隐丹参酮外泌体的抑制作用明显高于空白外泌体.细胞划痕实验发现,外泌体给药后,迁移率均有显著下降,外泌体作用48 h后,隐丹参酮外泌体和丹参酮ⅡA外泌体作用后HUVEC的迁移率均显著低于空白外泌体.隐丹参酮处理后的A549细胞外泌体中hsa-miR-1246显著升高,而隐丹参酮外泌体作用后的HUVEC细胞中CD31的基因和蛋白的表达显著降低.结论:隐丹参酮、丹参酮ⅡA对A549细胞外泌体中miRNA有一定的调控作用,且富集分析与多个癌症有关信号通路相关.隐丹参酮、丹参酮ⅡA处理下的A549细胞外泌体对HUVEC有抑制作用,进一步从外泌体角度探析隐丹参酮及丹参酮ⅡA抑制血管内皮细胞增殖可能的作用机制,旨在为肺癌的治疗策略提供新的思路.

目的:探讨LncRNA-TNFRSF13C调控miR-1246 对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的牙髓细胞低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)及生物活性的影响机制.方法:将人牙髓细胞(human dental pulp cells,HDPCs)经LPS处理后,分为HDPCs组、TNFRSF13C NC-siRNA组、TNFRSF13C-siRNA组、sno-TNFRSF13C组、miR-NC组、miR-1246 mimics组、miR-1246 siRNA组、TNFRSF13C-siRNA+miR-1246 siRNA组.qRT-PCR检测各组细胞LncRNA-TNFRSF13C、miR-1246 相对表达;免疫印迹检测各组细胞HIF-1α蛋白表达;CCK-8 检测各组细胞活性;流式细胞仪检测细胞凋亡率;茜素红染色观察细胞矿化情况.结果:与HDPCs组、TNFRSF13C NC-siRNA组相比,TNFRSF13C-siRNA组HIF-1α表达量、细胞凋亡率、LncRNA-TNFRSF13C表达降低,细胞增殖率升高(P<0.05).与miR-NC组相比,miR-1246 siRNA组 HIF-1α 表达量、细胞凋亡率、miR-1246 表达水平降低,细胞增殖率升高(P<0.05).与TNFRSF13C-siRNA组、miR-1246 siRNA组相比,TNFRSF13C-siRNA+miR-1246 siRNA组HIF-1α表达量、细胞凋亡率降低,细胞增殖率升高(P<0.05).TNFRSF13C-siRNA组、miR-1246 siRNA组存在更多的矿化结节及不透光致密影;TNFRSF13C-siRNA+miR-1246 siRNA组存在大量矿化结节,致密深染.结论:抑制LncRNA-TNFRSF13C对LPS处理的HDPCs具有促进活性,降低凋亡的作用,促进HDPCs矿化,同时也可抑制HIF-1α,研究机制与调控miR-1246 活性相关.

目的 探究血清肿瘤标志物联合微RNA1246(miR-1246)检测对局部晚期非小细胞肺癌(NSCLC)同步放化疗(CCRT)敏感性的评估价值.方法 收集 2019 年 3 月至 2022 年 3 月如皋市人民医院收治的 110 例NSCLC患者基本资料,所有患者均进行CCRT,根据治疗结束 1 个月后的疗效将患者分为敏感组 47 例(疾病完全或部分缓解)及不敏感组 63 例(疾病稳定或进展).收集 2 组患者入院时的临床资料,比较 2 组患者入院时和治疗后血清肿瘤标志物及miR-1246 表达水平,采用Logistic回归分析影响NSCLC患者CCRT敏感性的因素,并根据受试者操作特征(ROC)曲线分析血清肿瘤标志物联合miR-1246 检测对NSCLC患者CCRT敏感性的预测价值.结果 治疗结束 1 个月后,110 例NSCLC患者中,47 例患者疗效为完全或部分缓解(敏感组),63 例患者疗效为疾病稳定或进展(不敏感组);不敏感组血清神经元烯醇化酶(NSE)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原 125(CA125)及miR-1246 水平均高于敏感组(P<0.05);Logistic回归分析显示,NSE、CEA、CA125 及miR-1246 是CCRT敏感性的独立危险因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,NSE、CEA、CA125 及miR-1246 评估CCRT敏感性的曲线下面积(AUC)分别为 0.790,0.816,0.800 及 0.795,95%CI为分别 0.702～0.862,0.731～0.884,0.713～0.870 及 0.711～0.869,四者联合评估的AUC为 0.923,95%CI为 0.857～0.965.结论 血清肿瘤标志物及miR-1246 水平对评估NSCLC患者CCRT敏感性均有一定的参考价值,联合评估的价值更高.

目的 探讨外泌体来源的miR-1246对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)转移和自噬的影响.方法 用外泌体提取试剂盒提取ESCC细胞外泌体,电镜观察形态,纳米粒径分析仪检测粒径,Western blot法检测外泌体标志物TSG101和Calnexin的表达情况.对ESCC细胞与正常食管上皮细胞外泌体进行RNA测序,分析差异表达微小核糖核酸(microRNA,miRNA),并对差异表达miRNA进行KEGG Pathway富集分析.通过转录组测序评价155例ESCC患者的癌组织和癌旁组织中miR-1246的表达水平.Transwell小室试验检测miR-1246对ESCC细胞迁移能力的影响;Western blot法检测miR-1246对ESCC细胞自噬的影响.结果 ESCC细胞来源的外泌体形状完整,近似球形囊泡样结构;粒径为50～80nm;外泌体标志物TSG101蛋白呈阳性,Calnexin蛋白呈阴性.ESCC细胞与正常食管上皮细胞外泌体有59个共同差异表达miRNA,外泌体miR-1246在ESCC细胞中呈高表达,差异表达miRNA主要富集在自噬代谢通路上.外泌体miR-1246在ESCC患者的癌组织中呈高表达.过表达miR-1246可显著促进ESCC细胞的迁移和自噬(t分别为4.119和48.150,P分别＜0.05和＜0.001),抑制表达miR-1246可抑制ESCC细胞的迁移和自噬(t分别为9.067和51.270,P分别＜0.01和＜0.001).结论 外泌体来源的miR-1246可显著影响ESCC细胞的转移和自噬.

目的 阐明长基因间非蛋白质编码RNA 1089(LINC01089)调控微小RNA-1246(miR-1246)在胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用.方法 采用实时定量PCR(qPCR)检测LINC01089 和miR-1246 在人胰腺癌细胞(CFPAC-1、PANC-1、AsPC-1、SW1990、BxPC-3)的表达.选择 BxPC-3 细胞并分为对照组、pcDNA3.1 组、LINC01089 过表达组(转染 pcDNA3.1-LINC01089)和LINC01089+miR-1246 过表达组(转染pcDNA3.1-LINC01089 和miR-1246 模拟物mimics).活细胞计数试剂盒-8、划痕和 Transwell 小室实验评价细胞增殖、迁移和侵袭能力.双荧光素酶报告基因实验和 qPCR 验证 miR-1246 与LINC01089 和囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)的靶向关系,qPCR和Western blot检测基质金属蛋白酶(MMP)3、Snail和CFTR的表达情况.结果 与人正常胰腺导管细胞 HPDE相比,胰腺癌细胞的 LINC01089 低表达而 miR-1246 高表达(P＜0.05).与对照组相比,LINC01089 过表达组细胞的增殖、迁移和侵袭能力均受到抑制,且MMP3 和Snail表达水平降低(P＜0.05).与LINC01089 过表达组相比,LINC01089+miR-1246 过表达组细胞的增殖、迁移和侵袭能力增强,且MMP3 和Snail表达水平升高(P＜0.05).LINC01089 可靶向调控miR-1246 的表达而CFTR为miR-1246 的靶基因.结论 LINC01089 可能通过miR-1246 介导CFTR表达下调来抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,LINC01089/miR-1246 轴有望成为胰腺癌防治的靶点.

目的 探讨M2巨噬细胞来源的外泌体miR-1246 对胃癌AGS细胞增殖,凋亡和侵袭的影响.方法 采用IL-4 和IL-13 诱导M2巨噬细胞后,分离其外泌体,并通过透射电镜和免疫印迹法进行鉴定.M2巨噬细胞分别转染NC inhibitor和miR-1246 inhibitor后,分离对应外泌体与AGS细胞共培养,并采用CCK-8,Annexin V-FITC/PI和Transwell分别检测AGS细胞增殖,凋亡和侵袭.TargetScan数据库预测miR-1246 下游靶标,并通过双荧光素酶报告基因实验对miR-1246 和GSK3B的靶向关系进行验证.结果 M2 巨噬细胞中分离的外泌体大小为 50～150 nm,且表达ALIX,CD63 和TSG101.M2 巨噬细胞来源外泌体增加AGS细胞活力(P<0.05)和侵袭细胞数(P<0.01),并降低其凋亡比例(P<0.01).敲低外泌体中miR-1246 的表达,AGS细胞的表型变化得到回复(P<0.01).外泌体miR-1246 靶向GSK3B,并调控β-catenin和c-Myc的表达,M2 巨噬细胞来源外泌体miR-1246 靶向GSK3B促进胃癌细胞增殖和侵袭、并抑制其凋亡(P<0.001).结论 M2 巨噬细胞来源外泌体miR-1246 靶向GSK3B介导Wnt通路激活促进胃癌细胞增殖和侵袭,并抑制其凋亡.