目的:探究miR-377-5p对食管癌细胞TE-1放射敏感性的影响及机制。方法:TE-1细胞转染miR-377-5pmimic和miR-377-5pmimic NC构建过表达miR-377-5p细胞。对转染后的TE-1细胞照射后采用平板集落形成实验检测细胞放射生物学参数(D 0、D q、SF 2)，Transwell小室法检测细胞侵袭能力，细胞划痕实验检测细胞迁移能力，CCK8法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期，免疫印迹检测AKT1和GSK-3β磷酸化水平。 结果:2、4、6、8 Gy照射的集落形成率均显著下降( P<0.05)，且在同一剂量下miR-377-5pmimic组细胞集落形成率均显著低于miR-377-5pmimic NC组( P<0.05)。相比于miR-377-5pmimic NC组，miR-377-5pmimic组D 0、D q、SF 2均显著下降( P<0.05)，放射增敏比为1.34(D 0值比)；0 Gy照射后细胞侵袭、迁移、增殖能力显著下降，细胞凋亡水平显著上升，细胞周期被阻滞于G 1期，AKT1和GSK-3β磷酸化水平显著下降( P<0.05)；4 Gy照射后细胞侵袭、迁移、增殖能力下降，细胞凋亡水平显著上升，G 1期显著延长，AKT1和GSK-3β磷酸化水平亦显著下降(均 P<0.001)。 结论:miR-377-5p能够增加食管癌细胞TE-1的放射敏感性，其机制可能是抑制AKT1/GSK-3β信号通路。

目的:观察血清外泌体微小RNA-377(miR-377)在食管癌(EC)中的表达水平，并探讨其临床意义。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测OE33、Eca9706细胞株、5例EC癌组织中miR-377表达水平。选取2016年4月至2019年3月经山东第一医科大学附属济南人民医院确诊并住院治疗的EC患者40例作为观察组，另选取同期本院体检健康者40例作为对照组，RT-qPCR检测血清外泌体中miR-377表达水平。酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清血管内皮生长因子(VEGF)水平；采用 χ2检验分析EC患者血清外泌体中miR-377、血清VEGF水平与临床病理特征的关系；Pearson法分析EC患者血清外泌体中miR-377、血清VEGF表达相关性；受试者工作特征(ROC)曲线预测miR-377、VEGF表达水平对EC的诊断价值。 结果:与正常食管上皮细胞株HEEC细胞中miR-377表达水平(1.07±0.20)比较，OE33、Eca9706癌细胞中miR-377表达水平(0.74±0.21和0.68±0.19)显著降低( F＝6.604， P<0.05)；与癌旁组织中miR-377表达水平(1.10±0.23)比较，癌组织中miR-377表达水平(0.69±0.18)显著降低( t＝3.319， P<0.05)；观察组血清外泌体中miR-377表达水平(0.76±0.22)明显低于对照组血清外泌体中miR-377表达水平(1.04±0.25， t＝5.318， P<0.05)，血清VEGF表达水平[(22.79±4.79) pg/ml]明显高于对照组血清VEGF表达水平[(16.71±3.44) pg/ml， t＝6.521， P<0.05)；EC患者血清外泌体中miR-377及血清VEGF表达水平与TNM分期、分化程度和淋巴结转移均有关(miR-377： χ2＝6.172、8.780、13.864， P<0.05；VEGF： χ2＝6.839、5.402、6.114， P<0.05)；EC患者血清外泌体中miR-377与血清VEGF表达呈负相关( r＝-0.641， P<0.05)；血清外泌体中miR-377诊断EC的ROC曲线下面积为0.835(95% CI：0.684~0.933)，灵敏度为69.50%，特异性为88.20%；血清VEGF诊断EC的ROC曲线下面积为0.909(95% CI：0.775~0.977)，灵敏度为89.65%，特异性为76.50%；miR-377联合VEGF诊断EC的ROC曲线下面积为0.949(95% CI：0.829~0.994)，灵敏度为95.70%，特异性为88.21%。 结论:miR-377在EC患者血清外泌体中呈低表达，miR-377与VEG联合检测可有效提高EC诊断率。

[目的]采用生物信息分析学方法,筛选骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞衰老潜在生物标志物,为揭示OA的发生机制及探索新的治疗方法提供理论依据.[方法]从基因表达综合数据库(gene expression omnibus,GEO)获取OA软骨组织数据集,使用RStudio软件筛选出差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),并进行富集分析,再将DEGs与SenMayo衰老基因集取交集获得Hub基因,并进行验证,最后用miRNet在线平台及Cytoscape软件构建竞争性内源性RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)网络.[结果]数据集GSE169077和GSE114007经差异分析并取交集后共得到DEGs 272个;对DEGs行基因本体论(Gene Ontology,GO)分析,发现其主要富集在细胞外基质组织、细胞外结构组织等条目中;行京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)分析,发现其主要富集在PI3K-Akt信号通路,黏着斑信号通路等;经筛选及验证,得到了 2个Hub基因:IGF1和MMP2;构建ceRNA网络并筛选出3组RNA调控途径:KC-NQ1OT1/XIST-hsa-mir-16-5p-IGF1,KCNQ1OT1/XIST-hsa-mir-424-5p-MMP2,KCNQ1OT1/XIST-hsa-mir-377-3p-IGF1/MMP2.[结论]1GF1 和 MMP2 可作为 OA 软骨细胞衰老的 Hub 基因,KCNQ1OT1/XIST-hsa-mir-16-5p-IGF1,KCNQ1OT1/XIST-hsa-mir-424-5p-MMP2,KCNQ1OT1/XIST-hsa-mir-377-3p-IGF1/MMP2 可能是调节 OA 软骨细胞衰老的潜在 RNA 调控途径.

目的 通过筛选尿道下裂、术前经HCG治疗的尿道下裂以及正常包皮组织中miRNA差异表达,探究其与尿道下裂的发生以及术前HCG治疗影响预后的可能途径,为探究尿道下裂病因提供新思路.方法 选取9例尿道下裂(其中3例术前进行HCG治疗)以及3例包茎患儿(对照组)为研究对象,分别取包皮组织抽提总RNA,利用芯片技术筛选各组差异性表达的miRNAs,并用RT-PCR技术对筛选结果进行验证.结果 芯片筛选结果:与对照组比较,尿道下裂患儿的包皮组织里差异性表达的miRNAs中上调的19个,下调的15个.与术前行HCG治疗组的患儿相比,术前未行HCG治疗的尿道下裂患儿包皮组织里差异性表达的miRNA中上调的19个,下调的25个;RT-PCR验证结果:在差异性表达的miRNA中选择10个miRNA进行验证,其中5个miRNA与芯片结果相符,分别是let-7b-3p、miR-145-5p、miR-376a-3p、miR-377-3p和miR-1-3p.其中let-7b-3p、miR-145-5p、miR-376a-3p、miR-377-3p在尿道下裂组中低表达,在对照组和术前HCG治疗的尿道下裂组中高表达;miR-1-3p在术前HCG治疗的尿道下裂患儿中较未用药组中高表达.结论 首次建立尿道下裂患儿miRNAs的基因表达谱,并筛选出在术前行HCG治疗尿道下裂、术前未行HCG治疗尿道下裂与包茎之间存在差异表达的miR-NAs.根据筛选出的差异性表达的miRNAs,推测其与尿道下裂的关系,为今后疾病的预防以及提高治疗效果提供新的线索.

目的 探讨环状RNA-VANGL1(circ_VANGL1)对胃癌细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨其中的分子机制.方法 采用qRT-PCR检测circ_VANGL1在胃癌组织和细胞中的表达水平,并分析circ_VANGL1与患者临床病理因素如年龄、性别、肿瘤体积、病理分型、分期、淋巴结转移之间的相关性.构建携带circ_VANGL1全长序列的慢病毒(Lenti-circ_VANGL1)和携带circ_VANGL1 shRNA的慢病毒(Lenti-circ_VANGL1-shRNA)分别转染胃癌细胞株(NCI-N87和HGC-27).CCK-8实验检测circ VANGL1表达上调或下调后NCI-N87和HGC-27细胞的增殖变化.Annexin V/PI实验检测circ_VANGL1表达上调或下调后NCI-N87和HGC-27细胞凋亡的变化.JC-1法检测circ VANGL1表达上调或下调后NCI-N87和HGC-27细胞线粒体势能变化.Western印迹法检测Fas、FADD、bax、bcl-2、细胞色素C以及Caspase-3活性片段的蛋白表达变化.结果 circ_VANGL1在胃癌组织中表达显著高于癌旁组织,且其表达水平与肿瘤体积、分期和淋巴结转移显著正相关.Lenti-circ_VANGL1可以上调NCI-N87和HGC-27细胞内circ VANGL1表达并促进细胞增殖;Lenti-circ_VANGL1-shRNA可以下调circ_VANGL1表达并诱导细胞凋亡.Lenti-circ_VANGL1-shRNA可以导致细胞线粒体膜势能降低.Lenti-circ_VANGL1-shRNA可以促进Fas细胞表面死亡受体(Fas cell surface death receptor,Fas)、Fas相关蛋白死亡结构域(Fas associated via death domain,FADD)、bax(BCL2 associated X)、胞质细胞色素C(cytoplasmic cytochrome C)以及Caspase-3活性片段表达增高,降低bcl-2和线粒体细胞色素C蛋白表达.miRDB软件显示circ_ VANGL1存在12个潜在的靶miRNAs,其中miR-605-3p、miR-377-5p、miR-4468以及miR-5008-5p等4个miRNAs的表达在circ_VANGL1表达下调后显著增高.结论 circ_VANGL1在胃癌中表达异常增高,参与调控胃癌细胞的增值和凋亡,在胃癌发生发展过程中发挥重要作用.

目的 探究干扰长链非编码RNA MALAT1对血管瘤EOMA细胞的生长、运动及小鼠体内肿瘤形成的影响.方法 体外培养血管瘤EOMA细胞, 并分为空白对照组、阴性对照组、目的基因组, 利用干扰RNA敲除MALAT1在血管瘤EOMA细胞中的表达, 使用RT-PCR方法检测MALAT1在血管瘤EOMA细胞中的表达; 使用Edu染色检测缺失RNA MALAT1后对细胞生长的影响, 使用流式法检测血管瘤EOMA细胞凋亡情况, 使用transwell检测血管瘤EOMA细胞侵袭情况; Western印迹检测血管瘤EOMA细胞中Ki67、 PC-NA、 caspase-3、 caspase-9、 E-cadherin、 N-cadherin蛋白表达情况; 小鼠皮下注射EOMA细胞建立移植瘤模型, 使用RT-PCR检测长链RNA的表达, 检测shRNA敲除Lnc对肿瘤重量的影响, 统计分析小鼠生存期,使用免疫组化检测Ki67和N-cadherin的表达情况.结果 与空白对照组比较, 阴性对照组MALAT1、 Ki67、PCNA、 caspase-3、 caspase-9、 E-cadherin和N-cadherin蛋白的表达、细胞生长、运动情况均无显著差异 (P>0.05), 与阴性对照组比较, 目的基因组大鼠血管瘤EOMA细胞中MALAT1表达、 EOMA细胞侵袭百分比、Ki67、 PCNA和N-cadherin蛋白表达水平显著降低; EOMA细胞凋亡百分比、 caspase-3、 caspase-9和E-cad-herin蛋白表达水平显著升高, 差异有统计学意义 (P<0.05); 小鼠体内实验发现, 与阴性对照组比较, 目的基因组小鼠体内肿瘤质量、 Ki67和N-cadherin阳性表达率显著降低, 小鼠miR-377-5p表达水平、生存期显著增加, 差异有统计学意义 ( P<0.05).结论 干扰长链非编码RNA MALAT1可以有效地抑制血管瘤EOMA细胞的生长、运动, 促进其凋亡.

环状RNA(circular RNA,circRNA)是一类新型内源性非编码RNA,与多种疾病的发生、发展密切相关,但在胚胎着床的过程中罕见报道.该文旨在探讨环状RNA circCapzb在早孕小鼠围植入期子宫内膜中的表达.采用Real-time PCR检测正常妊娠小鼠孕第5天(d5)至第7天(d7)胚胎着床点及胚胎着床旁组织中circCapzb的表达水平;分别构建小鼠体内人工诱导蜕膜化模型和原代小鼠子宫内膜基质细胞体外人工诱导蜕膜化模型,采用Real-time PCR分别检测circCapzb在组织及细胞蜕膜化诱导模型中的表达;通过生物信息学预测circCapzb下游靶miRNA:miR-377-3p和miR-7005-5p,并采用Real-time PCR检测其在蜕膜化诱导模型中的表达.结果 表明,circCapzb在小鼠孕第5天至第7天胚胎着床点的表达明显高于着床旁;circCapzb在组织及体内外细胞蜕膜化诱导模型中诱导组的表达明显高于未诱导组(对照组);circCapzb下游靶miR-377-3p和miR-7005-5p在组织及体内外细胞蜕膜化诱导模型中诱导组的表达明显低于未诱导组.该研究初步表明,circCapzb在小鼠早孕期胚胎着床点高表达,在组织及体内外细胞蜕膜化诱导模型中高表达,在小鼠妊娠早期子宫内膜蜕膜化过程中可能发挥作用,但具体机制有待进一步研究.

目的 运用microRNA芯片方法检测黄芪多糖对脂多糖(LPS)刺激下人内皮祖细胞(EPCs)细胞功能损伤的诱导作用及相关的miRNA表达变化,分析其分子机制.方法 将EPCs分为3组:对照组、LPS处理组(LPS组)和黄芪多糖预处理组(APS组),进行miRNA表达谱分析与验证,并利用生物信息方法分析miRNA调控的靶基因功能与信号通路.结果 有15个miRNA与LPS诱导的细胞功能损伤相关.1 9个miRNA在黄芪多糖预处理后表达发生了改变.7个miRNA分子即hsa-miR-146a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-7977、hsa-miR-19a-3p、hsa-miR-377-3p、hsa-miR-7114-5p及hsa-miR-424-5p在LPS组与APS组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).其中3个miRNA经RT-PCR验证结果与芯片结果相符.7个miRNA的靶基因主要参与蛋白泛素化调节等基因本体(GO)功能分类以及PI3K-Akt等信号通路.结论 APS对LPS诱导的EPCs功能损伤有保护修复作用,该作用可能与miRNA分子的表达改变相关.

目的:探讨miR-377-5p与缺氧诱导因子-1 α(hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)的靶向关系以及通过控血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)信号通路对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞增殖、侵袭和EMT的调控作用.方法:qPCR检测35例人HCC组织及癌旁组织标本中miR-377-5p的表达水平.将HepG2细胞分为对照组、mimic NC组、miR-377-5pmimic组,qPCR检测转染效率;EdU染色、Transwell和Western blotting (WB)检测miR-377-5p过表达对HepG2细胞增殖、侵袭及其增殖相关蛋白Ki-67、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志蛋白E-cadherin、N-cadherin表达的影响;qPCR、WB检测miR-377-5p过表达对HepG2细胞中,缺氧诱导因子-1 α(hypoxia inducible factor-1 α,HIF-1α)表达的影响.荧光素酶报告基因实验验证miR-377-5p与HIF-1 α基因的靶向关系.结果:HCC组织中miR-377-5p表达水平较癌旁组织降低(P＜0.01).与对照组相比,miR-377-5p mimic组HepG2细胞中miR-377-5p水平明显升高,细胞的增殖、侵袭能力降低(均P＜0.01),EMT、N-cadherin表达水平降低(均P＜0.01)而E-cadherin表达水平显著升高(P＜0.01);miR-377-5p mimic组中HIF-1 αmRNA和蛋白表达水平均降低(P＜0.01或P＜0.05).miR-377-5p靶向抑制HIF-1α基因表达,并抑制VEGF通路的激活(均P＜0.05).结论:miR-377-5p通过靶向抑制HIF-1α基因表达和下调VEGF信号通路从而抑制HepG2细胞的增殖、侵袭和EMT.

目的 研究长链非编码RNA肝癌高表达基因(LncRNA HULC)靶向miR-377-5p对肝癌细胞HepG2生长、侵袭和上皮间质转化及体内肿瘤形成的影响.方法 qRT-PCR检测HULC和miR-377-5p在正常细胞系L-02及3种肝癌细胞HB611、HepG2、H22中的相对表达量;数据库预测HULC和miR-377-5p的靶向关系,并利用双荧光素酶报告实验证实HULC和miR-377-5p的靶向关系;敲除HUCL和添加miR-377-5p抑制剂验证HULC对HepG2细胞生长、侵袭及上皮间质转化的影响;通过皮下注射HepG2细胞构建移植瘤模型,验证HULC对裸鼠肿瘤重量、存活率、miR-377-5p相对表达量、Ki67和N-cadherin蛋白阳性表达率的影响.结果 与正常细胞系比,肝癌细胞系中HULC表达量显著升高(P＜0.05),miR-377-5p表达量显著降低(P＜0.05),且在HepG2细胞中表达变化最显著(P＜0.01);与control组比,sh-HULC组HepG2细胞的增殖率、侵袭率、N-cadherin蛋白表达显著降低,E-cadherin蛋白表达显著升高(P＜0.05),miR-377-5p inhibitor组HepG2细胞的增殖率、侵袭率、N-cadherin蛋白显著升高,E-cadherin蛋白表达显著降低(P＜0.05),与miR-377-5p inhibitor组相比,sh-HULC+miR-377-5p inhibitor组HepG2细胞的增殖率、侵袭率、N-cadherin蛋白表达显著降低,E-cadherin蛋白表达显著升高(P＜0.05);与control组裸鼠相比,sh-HULC组裸鼠瘤体重量、存活率、Ki67和N-cadherin蛋白阳性表达均显著降低.结论 HULC可能通过靶向抑制miR-377-5p表达,促进肝癌细胞HepG2的增殖、侵袭及上皮间质转化,促进裸鼠瘤体生长,降低其生存率.