目的 探讨下咽鳞状细胞癌(hypopharyngeal squamous cell carcinoma,HSCC)组织微小核糖核酸204(mi-croRNA-204,miR-204)、miR-504表达与临床病理特征和预后的关系.方法 选取2018-04/2020-04月作者医院收治的122例HSCC患者为研究对象.收集所有患者术中癌组织及癌旁组织标本(距肿瘤切缘≥2 cm),采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction.RT-PCR)检测癌组织及癌旁组织中 miR-204、miR-504 相对表达量.分析miR-204、miR-504表达与HSCC患者临床病理特征的关系.对HSCC患者进行3年随访.采用单因素和多因素Cox比例风险回归模型分析HSCC患者预后的影响因素.绘制Kaplan-Meier生存曲线,分析miR-204、miR-504低表达和高表达HSCC患者3年总生存情况.结果 与癌旁组织比较,HSCC癌组织miR-204、miR-504表达显著降低(P均＜0.05).不同性别、年龄、吸烟史、饮酒史、T分期、发病部位、淋巴结个数、结外侵犯、术后同步放化疗的HSCC患者miR-204、miR-504表达差异无统计学意义(P＞0.05),N1～N3期、低分化程度HSCC患者的miR-204、miR-504表达显著低于N0期、中高分化程度HSCC患者(P均＜0.05).Cox回归分析结果显示,T分期和N分期升高、阳性淋巴结个数＞2个、伴结外侵犯、低分化程度、miR-204表达降低、miR-504表达降低是HSCC患者预后不良的危险因素(P＜0.05).122例HSCC患者随访3年期间失访5例,最终获得随访117例.Kplan-Meier生存曲线分析显示,miR-204、miR-504 低表达组 3 年总生存率低于高表达组[54.29％(38/70)vs.70.21％(33/47),P＜0.05;50.68％(37/73)vs.77.27％(34/44,P＜0.05].结论 HSCC组织中miR-204、miR-504均呈低表达,二者低表达与HSCC患者的T分期和N分期升高、低分化程度及预后不良有关.

目的 研究微小RNA-503-5p (miR-503-5p)对膀胱癌T24细胞和EJ细胞生长的影响和机制.方法 T24细胞和EJ细胞转染miR-503-5p模拟物或阴性对照微小RNA (miR-NC)并验证转染效率,生物信息学软件预测miR-503-5p的靶基因.通过荧光实时定量PCR检测miR-503-5p靶基因E2F转录因子3(E2F3)及下游基因mRNA的表达水平,Western blot法检测视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)/E2F信号通路蛋白E2F3、细胞周期蛋白E(cyclin E)、细胞周期蛋白依赖激酶2(CDK2)、Rb和磷酸化的Rb(p-Rb)蛋白水平,流式细胞术检测膀胱癌细胞周期的变化,MTT法和平板克隆形成实验检测膀胱癌细胞的增殖能力.结果 转染miR-503-5p模拟物后,膀胱癌细胞中miR-503-5p的水平显著增加.过表达miR-503-5p可明显降低膀胱癌细胞中E2F3mRNA及Rb/E2F信号通路基因的表达水平,将膀胱癌细胞周期阻滞于G0/G1期,膀胱癌细胞的增殖能力明显降低.结论 过表达miR-503-5p通过干扰Rb/E2F信号通路的转导,抑制膀胱癌细胞的增殖.

目的:探讨微小RNA-504(microRNA-504,miR-504)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖及凋亡的影响及其机制.方法:以定量PCR检测3种NSCLC细胞株A549,H1299,HCC827及对照人支气管上皮细胞株BEAS-2B中miR-504的表达.选取miR-504变化最明显的细胞株(HCC827)用于后续实验.用Lipofectamine RNAiMAX分别将miR-504类似物(miR-504mimic)、miR-504抑制物(miR-504 inhibitor)及非靶向miRNA对照(miR-control)转染至HCC827细胞中.以CCK-8试剂盒检测上述3组细胞增殖情况.用Annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒检测3组细胞凋亡情况.以Western印迹法检测3组细胞P53表达.结果:与对照组BEAS-2B细胞相比,miR-504在3种NSCLC细胞株中表达水平均显著增加,其中以HCC827细胞增加幅度最大.与miR-control组相比,过表达miR-504(miR-504 mimic)后HCC827细胞增殖加快、凋亡减少,而抑制miR-504表达(miR-504 inhibitor)后HCC827增殖减慢、凋亡增加.Western印迹检测结果显示:与miR-control组相比,P53在miR-504 mimic组表达水平降低,而在miR-504 inhibitor组表达水平增加.结论:miR-504具有促进NSCLC细胞增殖、抑制凋亡的作用,其机制可能与下调P53表达有关.

目的 研究长链非编码RNA(lncRNA)Dancr在肝脏中的时空表达规律,探索其与糖异生的可能调控关系与分子机制.方法 建立小鼠饥饿-再喂养模型、高脂饮食诱导的肥胖(high-fat diet,HFD)模型,并以磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶、葡萄糖-6-磷酸酶为阳性对照,检测Dancr在两组模型小鼠肝脏中的表达;分离小鼠主要脏器组织,检测不同组织中Dancr的表达量;运用NCBI、UCSC、RegRNA、TargetScan等数据库,分析Dancr的序列特征,预测与其相互作用的miRNA,并对miRNA下游靶基因进行基因本体和京都基因与基因组百科全书分析.采用Student-t检验分析各组之间差异的显著性,采用单因素方差分析比较多组间差异.结果 Dancr的表达量随饥饿进程持续升高,并在16 h达到最高,再进食后迅速恢复正常水平(4.20±0.27比1.00±0.23,t=22.10,P<0.01).在HFD小鼠肝脏中Dancr表达量同样显著升高(1.69±0.30比1.00±0.25,t=4.33,P<0.01).Dancr在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、骨骼肌、小肠、胃、白色脂肪组织、棕色脂肪组织和脑组织中表达差异有统计学意义(F=180.32,均P<0.01),Dancr在肝脏中的表达量显著高于除脾、肺外的其余组织(t=6.03～36.19,均P<0.01).在线分析Dancr位于chr5:74,093,083-74,090,355,全长1060 bp,由2个外显子构成,可能存在9个与之相互作用的miRNAs(mmu-let-7i-5p、mmu-miR-134-5p、mmu-miR-326-5p、mmu-miR-433-5p、mmu-miR-497-5p、mmu-miR-504-3p、mmu-miR-1906、mmu-miR-432、mmu-miR-5620-5p),调节下游2124个靶基因,其中多条基因与糖异生调控相关.结论 Dancr的表达受生理及病理性糖异生信号影响,可能介导肝脏糖异生的调控,且生物信息学分析为后续实验提供了一定的数据支持,有助于我们进一步了解Dancr在糖异生调控中的分子机制.

目的 探讨miR-504靶向染色质解旋酶DNA结合蛋白(chromodomain helicase/ATPase DNA binding protein 1-like gene,CHD1L)抑制乳腺癌细胞侵袭的分子机制.方法 qRT-PCR检测人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)与乳腺癌细胞(MDA-MB-231、MCF-7)中miR-504的表达量,同时检测miR-504在MDA-MB-231细胞中的转染效率;双荧光素酶实验检测miR-504与CHD1L是否存在结合靶点;qRT-PCR及Western blot法检测CHD1L mRNA和蛋白的表达水平;Transwell侵袭实验检测MDA-MB-231细胞的侵袭能力;Western blot法检测p-Akt、MMP-2和MMP-9的表达情况.结果 乳腺癌细胞中miR-504的表达量明显低于人正常乳腺上皮细胞(P＜0.05);miR-504在MDA-MB-231/miR-504组中的表达水平明显增高(P＜0.05);双荧光素酶实验检测显示miR-504能与CHD1L mRNA的3'-UTR结合;此外,过表达miR-504后CHD1L mRNA的表达水平无显著变化,但CHD1L蛋白表达水平显著降低(P＜0.05);与MDA-MB-231/NC组相比,MDA-MB-231/miR-504组侵袭能力明显降低,而MDA-MB-231/miR-504+ CHD1L组侵袭能力比MDA-MB-231/miR-504+ Con组明显增加;用表皮生长因子分别刺激转染不同质粒的MDA-MB-231细胞,与MDA-MB-231/NC组相比,MDA-MB-231/miR-504组中p-Akt、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显降低(P＜0.05),而MDA-MB-231/miR-504+ CHD1L组中p-Akt、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平与MDA-MB-231/miR-504+Con组相比明显增加(P＜0.05).结论 miR-504靶向CHD1L通过PI3K/Akt/MMP信号通路抑制乳腺癌细胞的侵袭.

目的:分析微小RNA-631(miR-631)的表达量与卵巢上皮性癌(EOC)患者临床病理特征和预后的关系,并探讨miR-631对EOC细胞迁移的作用及对成瘤体积的影响.方法:从癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)数据库中提取570例EOC患者的临床病理特征及相应的miR-631的相对表达量,由X-tile软件计算出miR-631相对表达量的最佳截断值,根据此最佳截断值将患者分为miR-631高表达组和miR-631低表达组,再用Kaplan-Meier曲线和COX比例风险模型来评估miR-631表达量在EOC患者中的预后价值.挑选miR-631低表达的EOC细胞株A2780、COV504和miR-631高表达的细胞株ES2和SKOV3,分别上调和下调miR-631表达量,观察细胞迁移能力.建立裸鼠EOC模型,分为对照组和miR-631类似物组,观察2组肿瘤体积.结果:Kaplan-Meier分析显示,miR-631低表达组(miR-631相对表达量<4.78)的EOC患者的总体生存期(OS)较miR-631高表达组(miR-631相对表达量≥4.78)差(HR=0.65,95％CI=0.47～0.89,P=0.008).单因素和多因素COX回归分析发现miR-631的表达可能是影响EOC患者预后的独立因素(HR=0.72,95％CI=0.54～0.97,P=0.029).上调miR-631的表达会抑制EOC细胞的迁移,下调miR-631的表达会促进EOC细胞的迁移.在EOC裸鼠模型中,上调miR-631会减小EOC体积.结论:miR-631的低表达可能预示着EOC患者预后较差,上调miR-631可以抑制EOC细胞的迁移,并且可以显著地减小肿瘤体积,可能对EOC有治疗意义.

目的 探讨食管鳞状细胞癌组织中miR-504和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路相关分子的表达及其与患者临床病理学特征的关系.方法 选择2016年1月至2018年12月于邯郸市中心医院就诊并进行手术治疗的食管鳞状细胞癌患者67例为研究对象,取术中切除的新鲜食管鳞状细胞癌组织和距离癌组织5 cm以上正常食管鳞状上皮组织(癌旁组织),采用反转录-聚合酶链反应检测食管鳞状细胞癌组织和癌旁组织中miR-504表达,免疫组织化学法检测食管鳞状细胞癌组织及癌旁组织中PI3K、磷酸化Akt(p-Akt)表达;分析食管鳞状细胞癌组织中miR-504、PI3K、p-Akt表达与患者临床病理学特征的关系及miR-504与PI3K、p-Akt表达的相关性.结果 miR-504在癌组织中的表达量显著低于癌旁组织(P<0.05),miR-504在不同分化程度癌组织中的表达量两两比较差异均有统计学意义(P<0.05),miR-504在Ⅰ期患者癌组织中表达量显著高于Ⅱ、Ⅲ期患者(P<0.05).PI3K、p-Akt在癌组织中表达评分显著高于癌旁组织(P<0.05).PI3K、p-Akt在不同分化程度癌组织中的表达量两两比较差异均有统计学意义(P<0.05).PI3K、p-Akt在Ⅱ、Ⅲ期患者癌组织中表达量显著高于Ⅰ期患者(P<0.05).食管鳞状细胞癌组织中miR-504、PI3K、p-Akt的表达与患者年龄、性别无关(P>0.05),与癌组织的分化程度、TNM分期和淋巴结转移相关(P<0.05).食管鳞状细胞癌组织中miR-504表达与PI3K、p-Akt表达呈明显负相关(r=-0.354、-0.519,P<0.05).结论 miR-504在食管鳞状细胞癌组织中的表达与肿瘤的分化程度、TNM分期和淋巴结转移有关,其在食管鳞状细胞癌中可能作为抑癌基因发挥作用,且这种抑制作用可能与抑制肿瘤细胞内PI3K/Akt信号通路的活性有关.

该文筛选了靶向抑制FTO的miRNA并探究其乳腺癌细胞生物学行为的影响.通过生物信息学的方法筛选出了影响乳腺癌患者生存的m6A去甲基化酶FTO后,再通过CCK-8实验验证了FTO的下调能够抑制乳腺癌细胞的增殖,随后预测出靶向FTO的miRNA——miR-504-5p,RT-qPCR和Western blot实验检测了乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231中miRNA-504-5p对FTO表达水平的影响,双荧光素酶报告基因实验验证了miRNA-504-5p与FTO的结合关系,采用CCK-8、Transwell小室实验、流式细胞术等探究了miRNA-504-5p mimic(类似物)通过调控FTO对乳腺癌细胞增殖、迁移、凋亡和细胞周期的影响.实验结果表明,低表达FTO的乳腺癌患者相较于高表达FTO的乳腺癌患者具有更高的生存概率,miRNA-504-5p作为潜在的靶向FTO的miRNA,能够在mRNA与蛋白水平抑制FTO的表达,并且miR-504-5p在FTO3'-UTR的5 927-5 933位点处与FTO靶向结合,miR-504-5p能通过下调FTO抑制乳腺癌细胞的增殖与迁移并促进乳腺癌细胞的凋亡,使细胞阻滞在G0/G1期.综上所述,该研究发现了miR-504-5p能下调FTO的表达,抑制乳腺癌细胞的增殖与迁移,促进乳腺癌细胞的凋亡,使乳腺癌细胞的细胞周期阻滞.这可以为乳腺癌的分子机制探究与治疗提供潜在的参考价值.

目的 探讨长链非编码RNA FAM83D?3(lnc?FAM83D?3)在三阴性乳腺癌(TNBC)中的表达及其对HCC1937、MDA?MB?231生物学行为的影响及作用机制.方法 通过TCGA数据库分析lnc?FAM83D?3在乳腺癌中的表达情况及病理相关性.RT?qPCR检测lnc?FAM83D?3和微小RNA?504?3p(miR?504?3p)在组织标本和乳腺癌细胞系中的表达;慢病毒转染干扰lnc?FAM83D?3表达,利用MTT、细胞划痕实验、侵袭实验和流式细胞术检测实验组与对照组细胞功能改变.使用生物信息学软件和双荧光素酶报告基因实验分析lnc?FAM83D?3和miR?504?3p及FAM83D之间的关系.FISH实验证实lnc?FAM83D?3在胞浆内的表达,Western bolt检测下游蛋白变化情况.结果 在乳腺癌组织、癌细胞HCC1937和MDA?MB?231中lnc?FAM83D?3的表达增加(P<0.01).与对照组相比,干扰lnc?FAM83D?3表达后,TNBC细胞株增殖、迁移和侵袭能力降低,凋亡比例增加;miR?504?3p表达上升,FAM83D表达下降;双荧光素酶报告基因实验结果显示lnc?FAM83D?3靶向调控miR?504?3p表达,miR?504?3p进一步负向调控FAM83D的水平.结论 Lnc?FAM83D?3在TNBC细胞株中表达增加且通过抑制miR?504?3p促进FAM83D表达,影响乳腺癌恶性生物学行为.

目的:明确牙周炎中TLR2的表达变化,及对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)增殖和成骨分化的影响.筛选调控人牙周膜干细胞Toll样受体2表达的miRNA.方法:收集阻生第三磨牙正常牙周组织和牙周炎患者炎性牙周组织,RT-qPCR检测TLR2表达水平.TLR2小干扰RNA(si-TLR2)和阴性对照(si-NC)分别转染hPDLSCs,CCK-8测定和克隆形成实验检测hPDLSCs增殖能力;茜素红染色和蛋白免疫印迹测定OCN蛋白表达水平,评价hPDLSCs成骨分化能力.TargetScan预测靶向TLR2的miRNA,基因表达综合数据库鉴定健康牙周膜干细胞和炎症牙周膜干细胞之间差异表达miRNA.将数据进行交集处理,筛选出交集miRNA.RT-qPCR检测正常牙周组织和炎性牙周组织之间交集miRNA表达水平,获得表达量最具显著性差异的miRNA.分析TLR2与此miRNA表达的相关性.结果:与正常牙周组织相比,炎性牙周组织中TLR2表达显著上调(P<0.05).与si-NC组比较,si-TLR2组细胞增殖能力显著增强(P<0.05),细胞克隆形成率显著增高(P<0.05).同时si-TLR2组细胞矿化结节形成数量显著多于si-NC组(P<0.05),OCN蛋白表达水平亦显著高于si-NC组(P<0.05).生物信息学分析获得3种miRNA,分别为miR-548d-5p、miR-548am-5p和miR-504-3p.RT-qPCR结果显示,miR-548d-5p表达在正常牙周组织和炎性牙周组织之间差异最为显著.相关性分析显示TLR2的表达与miR-548d-5p表达呈负相关.结论:TLR2在牙周炎组织中表达上调.下调TLR2可促进hPDLSCs的细胞增殖和成骨分化.miR-548d-5p是TLR2的负性上游调节因子.