目的:探讨去氧鬼臼毒素（DPPT）是否通过调控长链非编码RNA ZFPM2-AS1（LncRNA ZFPM2-AS1）/微小RNA-515-5p（miR-515-5p）分子轴而抑制结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭。方法:体外培养人结肠癌LoVo细胞，随机分为Control组、DPPT-L组、DPPT-M组、DPPT-H组。甲基噻唑基四唑（MTT）检测细胞增殖；Transwell小室实验检测迁移及侵袭；实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测ZFPM2-AS1、miR-515-5p的表达水平；LoVo细胞中转染pcDNA-ZFPM2-AS1，采用上述方法检测细胞增殖、迁移及侵袭；双荧光素酶报告实验验证ZFPM2-AS1、miR-515-5p的靶向关系；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白1（CyclinD1）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、P21的表达量。结果:与Control组比较，DPPT-L组、DPPT-M组、DPPT-H组细胞存活率降低（ P<0.05），迁移细胞数、侵袭细胞数减少（ P<0.05），CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低（ P<0.05），P21蛋白水平升高（ P<0.05），ZFPM2-AS1表达水平降低（ P<0.05），miR-515-5p表达水平升高（ P<0.05），且DPPT-L组、DPPT-M组、DPPT-H组上述指标比较，差异均有统计学意义（ P<0.05）；ZFPM2-AS1可靶向结合miR-515-5p；与DPPT-H+pcDNA组比较，DPPT-H+pcDNA-ZFPM2-AS1组细胞存活率升高（ P<0.05），迁移细胞数、侵袭细胞数增多（ P<0.05），CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平升高（ P<0.05），P21蛋白水平降低（ P<0.05）。 结论:DPPT可能通过下调ZFPM2-AS1的表达及上调miR-515-5p的表达从而抑制结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭。

小叶莲Sinopodophylli Fructus是藏族习用药材,具有调经活血功效.目前从小叶莲中分离鉴定的化学成分主要有木脂素类(15 种,如鬼臼毒素、去氧鬼臼毒素、4'-去甲鬼臼毒素等)和黄酮类(20 种,如槲皮素、山柰酚、芦丁等),具有抗肿瘤、抑菌、降血脂等药理作用;另外,还含有蛋白质、脂肪酸、多糖、维生素、氨基酸、微量元素等其他成分.该文根据国内外文献报道,总结并综述了小叶莲中化学成分和药理作用方面的研究进展,以期为小叶莲资源的开发及临床合理应用提供参考.

目的 研究八角莲Dysosma versipellis根茎的化学成分,并采用网络药理学方法对其抗癌活性进行分析.方法 运用硅胶柱层析色谱、凝胶色谱、ODS柱色谱等分离技术,现代波谱技术(NMR、MS、IR、UV)对八角莲的化学成分进行分离纯化及结构鉴定,采用GO、KEGG等方法对分离所得的化学成分可能的作用靶点、通路等信息进行富集分析.结果 分离得到了14个化合物,鉴定为:苦鬼臼脂毒酮(1)、异苦鬼臼酮(2)、苦鬼臼素-4-O-β-D-葡萄糖苷(3)、鬼臼毒酮(4)、苦鬼臼毒素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、苦鬼臼毒素(6)、4'-去甲基去氢鬼臼毒素(7)、4'-去甲去氧鬼臼毒素(8)、4'-去甲基鬼臼毒酮(9)、山荷叶素(10)、4'-去甲基鬼臼毒素(11)、山荷叶-4-O-β-D-葡萄糖苷(12)、鬼臼毒素-4-O-β-D-葡萄糖苷(13)、去氢鬼臼毒素(14).网络药理学研究结果表明上述成分可能通过对激素响应、跨膜受体蛋白酪氨酸激酶信号通路、胰岛素样生长因子受体信号通路等生物学过程,作用于AKT1、EGFR、HSP90AA1、MAPK3、MTOR等关键靶点,癌症通路、前列腺癌通路、脂质与动脉粥样硬化通路等发挥抗癌活性.结论 其中化合物1、2、5、7～9和14为首次从八角莲中分离得到;八角莲中的多种成分可以通过多个靶点、多个通路发挥抗癌作用.

目的:建立可同时测定八角莲根中6种主要毒性成分(鬼臼毒素、4’-去甲鬼臼毒素、鬼臼苦素、鬼臼毒素-4-O-葡萄糖苷、鬼臼毒酮、去氧鬼臼毒素)含量的UPLC-MS/MS法,并应用于大鼠体内药动学研究.方法:采用Waters Acquity UPLC CORTECS C18(1.6 μm,50 mm×2.1 mm)色谱柱,乙腈-5 mmol/L醋酸铵水作为色谱分离流动相,以0.4 mL/min的流速进行梯度洗脱.采用电喷雾离子源(ESI)串联Waters Xevo TQ质谱仪检测,多反应离子监测(MRM)模式进行定量分析.大鼠按0.3 g/kg给药剂量灌胃八角莲提取物后,于0、0.083、0.25、0.5、0.75、1、2、4、6、8、12、24、36、48 h后取尾尖血,运用DAS 2.2.1软件和非房室模型分析法分析大鼠体内6种分析物的药代动力学参数.结果:每克八角莲根茎干粉中含有鬼臼毒素-4-O-葡萄糖苷17.62 mg、4’-去甲鬼臼毒素14.53 mg、鬼臼苦素6.15 mg、鬼臼毒素91.39 mg、鬼臼毒酮12.30 mg、去氧鬼臼毒素0.03 mg.上述6种物质在0.1～9.7 ng/mL内线性关系良好(r＞0.99).日内和日间精密度和准确度均小于15％,提取回收率高于70.0％,均符合药代动力方法学分析要求.样品在短期、长期和3个冻融循环条件下非常稳定.大鼠灌胃八角莲提取物后,6种待测物在血液中的浓度水平迅速升高,约在0.5 h达到峰值,说明药物可直接在胃部迅速吸收,但药物的分布和代谢过程非常缓慢.结论:本研究建立的UPLC-MS/MS方法操作简便、灵敏、快速、专属性强,可成功甩于生物样品中八角莲根中的6种高毒性化合物的定量分析.

目的 研究去氧鬼臼毒素(DPPT)对人卵巢癌细胞SKOV3增殖的抑制作用.方法 将人卵巢癌细胞SKOV3分为低、中、高浓度DPPT组(2.5μmol/L、5.0μmol/L、10.0μmol/L),在培养24 h和48 h后通过噻唑蓝(MTT)法检测SKOV3增殖率;培养48 h和72 h后通过蛋白质印迹法检测SKOV3中细胞外信号调节激酶(ERK)1/2蛋白的表达情况.结果 低、中、高浓度DPPT组SKOV3细胞增殖率及48、72 h ERK1/2蛋白相对表达量均显著低于对照组(P<0.05).结论 DPPT可以有效抑制人卵巢癌细胞SKOV3的增殖,其作用机制与抑制ERK1/2蛋白的表达相关.

目的 研究小叶莲Sinopodophyllum hexandrum (Royle) Ying中木脂素类成分.方法 小叶莲95％乙醇提取物采用硅胶、Sephadex LH-20、ODS、AB-8大孔吸附树脂柱、制备型HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构.结果 从中分离得到14个化合物,分别鉴定为naphtho[2,3,d]-1,3-dioxole-6-carboxylic acid(1)、methyl podophyllotoxinate (2)、6,7-去亚甲基-去氧鬼臼毒素(3)、6,7-去亚甲基鬼臼毒素(4)、6,7-去亚甲基-4 '-去甲鬼臼毒素(5)、去氧鬼臼毒素(6)、4'-去甲-去氧鬼臼毒素(7)、4'-去甲鬼臼毒素(8)、鬼臼毒素(9)、4'-去甲异苦鬼臼毒酮(10)、α-足叶草素(11)、去氢鬼臼毒素(12)、4'-去甲-去氢鬼臼毒素(13)、(-)松脂酚(14).结论 化合物1～2、5、11、14为首次从该属植物中分离得到,化合物3～4、8、12～ 13为首次从该植物中分离得到.

该研究首次提出"量-权-证"网络毒理学的研究方法,通过将毒性成分含量及成分作用靶点的频次赋予靶点权重,将传统定性网络转为定量网络,不断提高获取数据的信度,为系统性评价中药安全性及毒理学研究提供研究思路.首先,给予大鼠灌胃八角莲50％醇提物,基于血清药物化学辨识其中成分.随后从SwissTargetPrediction、PharmMapper等数据库获取成分靶点,以成分相对含量和钓靶频次赋予靶点权重,Comparative Toxicogenomics Database (CTD)、GeneCards等数据库预测肝毒性靶点,通过STRING数据库进行蛋白质互作分析及通路富集分析.最后,构建"毒性成分-加权靶点-效应通路"定量网络.八角莲体内外成分分析共筛选得到鬼臼毒素、鬼臼毒酮、去氧鬼臼毒素、6-甲氧基鬼臼毒素等11个潜在毒性物质,涉及肝毒性作用靶点106个,加权靶点涉及Cdk2、Egfr、Cyp2c9等65个.京都基因与基因组百科全书数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析表明其可能通过作用于PI3K-AKT、MAPK、Ras等信号通路呈现炎症反应、氧化应激、细胞凋亡、介导细胞色素P450 (CYP450)酶系发挥肝毒性作用,然传统方法显示AKT1、Alb、Stat3等51个靶点可能通过介导炎症作用、细胞增殖等导致肝损伤,可知从不同层面获取的毒性机制有较大差异.综上,该研究提出并系统性应用"量-权-证网络毒理学"于八角莲致大鼠肝毒性机制研究,证实其广泛应用于中药毒理学评价的可行性,进一步完善中药安全性系统评价的思路.

去氧鬼臼毒素(deoxypodophyllotoxin,DPT)作为国家Ⅰ类抗肿瘤新药,正在进行Ⅰ期临床研究.它属于芳基萘内酯型木脂素类化合物,具有抗肿瘤、杀虫、保肝、抗炎、抗过敏、抗动脉粥样硬化、抗病毒、抗血管生成、平喘等生物活性,其中抗肿瘤作用研究比较深入,通过抑制微管蛋白的聚集而产生细胞毒活性,从而发挥抗肿瘤作用.该文通过对DPT的生物活性研究进展进行综述,以期全面揭示其可能的应用方向,为其深入开发利用提供新思路.

目的 探讨复方山慈菇对人乳腺癌MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用及其潜在的作用机制.方法 将人乳腺癌MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤模型随机分为模型组、阳性对照多柔比星(doxorubicin,DOX)组和复方山慈菇醇提物(compound cremastra appendiculata ethanol extraction,CCAEE)高剂量组(1.8 g/kg)以及低剂量组(0.9 g/kg),每组5只.按照分组连续灌胃给药21d后,处死裸鼠并计算各组裸鼠移植瘤体积、重量和抑瘤率.采用TCMSP 2.3数据库选出复方山慈菇有效成分及其对应的作用靶点,OMIM、GeneCards 5.14、DrugBank 5.1.10、TTD数据库筛选关键靶点并利用STRING 11.5数据库构建蛋白质相互作用(PPI)网络,然后筛选核心靶点,以构建"药物-成分-靶点"网络并筛选出核心有效成分.利用Metascape 3.5平台进行GO和KEGG富集分析.结果 各组荷瘤裸鼠分别给药处理21d后,与模型组比较,DOX组和CCAEE高、低剂量组裸鼠移植瘤体积、重量均明显减小(均P<0.05),抑瘤率分别为89.67%、67.39%和43.48%.通过网络药理学分析获得复方山慈菇有效成分27个,抗乳腺癌关键靶点108个,其中核心靶点23个,主要包括TP53、MAPK3、MAPK1、RELA、AKT1、FOS、ESR1、TNF、IL6、MAPK14等;核心有效成分5个,分别为槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇、2-甲氧基-9,10-二氢菲-4,5-二醇、去氧鬼臼毒素.GO和KEGG富集分析显示复方山慈菇主要通过激素调节等生物过程以及PI3K-AKT、MAPK等信号通路发挥抗乳腺癌作用.结论 复方山慈菇能抑制人乳腺癌移植瘤生长,其可能通过槲皮素、山柰酚等核心有效成分作用于TP53等核心靶点及PI3K-AKT、MAPK等信号通路而发挥抗乳腺癌作用.