目的:探讨AP患者血清miR-148a-3p和miR-551b-5p的表达水平及其临床价值。方法:选取2017年1月至2020年9月间儋州市人民医院收治的152例AP患者的临床资料，根据病情严重程度将患者分为MAP组(70例)、MSAP组(40例)和SAP组(42例)，SAP组又根据患者预后情况分成生存组(25例)和死亡组(17例)。另选取50例体检健康者作为对照组。于患者发病当天采集空腹静脉血，采用实时定量PCR法检测各组血清miR-148a-3p和miR-551b-5p表达水平。绘制受试者工作特征曲线(ROC)，计算曲线下面积(AUC)，分析血清miR-148a-3p和miR-551b-5p表达水平对SAP预后判断的价值。采用Pearson法分析SAP患者血清miR-148a-3p与miR-551b-5p表达水平的相关性。结果:AP组患者血清miR-148a-3p和miR-551b-5p表达水平均明显高于对照组(3.18±1.27比0.96±0.28，1.94±0.85比0.51±0.12， P值均<0.001)。SAP组血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平均明显高于MSAP组、MAP组(4.36±1.70比2.84±1.10、2.50±0.92，2.80±1.04比1.68±0.53、1.42±0.45， P值均<0.001)。死亡组血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平均明显高于生存组(5.30±1.95比3.47±1.40，3.62±1.37比2.08±0.91， P值均<0.001)。ROC曲线分析显示，miR-148a-3p与miR-551b-5联合判断SAP预后的AUC值明显高于miR-148a-3p、miR-551b-5p单项指标[0.943(95% CI0.886～0.997)比0.860(95% CI0.797～0.924)、0.822(95% CI0.765～0.880)]，其灵敏度为98.3%，特异度为84.6%。相关分析显示，SAP患者血清miR-148a-3p与miR-551b-5p表达水平呈正相关( r＝0.835， P<0.001)。 结论:AP患者血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平明显升高，两者联合检测对判断SAP患者预后具有较好的价值。

目的 探讨环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)与大鼠小胶质(RM)细胞活化的关系.方法 体外培养RM细胞,并随机分为正常组和氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)组,RT-qPCR检测各组细胞内circHIPK3表达水平.构建具有嘌呤霉素抗性的circHIPK3慢病毒载体,设置过表达(OE)组和阴性对照(NC)组,根据荧光表达强度选择RM细胞最佳感染复数(MOI),采用嘌呤霉素筛选稳定表达circHIPK3的RM细胞.将OE组和NC组细胞置于OGD/R条件下培养,Western blot检测各组细胞中小胶质细胞活化标志蛋白钙结合衔接分子1(Iba-1)、肿瘤坏死因子受体超家族成员5(CD40)表达水平.通过circRNAdb数据库分析circHIPK3翻译蛋白潜能,利用circBank和Starbase数据库预测circHIPK3潜在结合的微小RNA(miRNA).结果 与正常组相比,OGD/R组RM细胞中circHIPK3的表达水平显著下调(P<0.0001).测序比对结果正确,成功构建cir-cHIPK3过表达慢病毒载体.感染RM细胞最佳MOI=80,以2μg/ml嘌呤霉素筛选得到稳定过表达circHIPK3的RM细胞.RT-qPCR结果显示,OE组细胞中circHIPK3表达水平较NC组显著增高(P<0.01).Western blot结果显示,在OGD/R培养条件下,OE组细胞中Iba-1和CD40蛋白表达水平较NC组显著降低(P<0.05).蛋白翻译分析显示,cir-cHIPK3具有2个内部核糖体进入位点(IRES)和1个开放阅读框(ORF),可编码由404个氨基酸组成的多肽.miRNA结合分析显示,circHIPK3可能与8个靶向miRNAs结合:hsa-miR-3529-5p、hsa-miR-379-5p、hsa-miR-506-3p、hsa-miR-33、hsa-miR-450b-5p、hsa-miR-551b-3p、hsa-miR-193、hsa-miR-508-3p.结论 过表达circHIPK3显著抑制OGD/R诱导的RM细胞活化、circHIPK3有编码多肽潜能,可能通过海绵miRNA发挥功能.

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)鸟苷酸环化酶1(GC1)对食管癌的影响,并探讨其靶向微小RNA-551b-3p(miR-551b-3p)的分子机制.方法 建立食管癌荷瘤裸小鼠模型,随机分为GC1、miR-551b-3p上、下调组及其对应对照组与模型组共9组,每组8只.末次给药次日处死裸小鼠,称取瘤体质量,计算抑瘤率;取肿瘤组织检测LncRNA GC1、miR-551b-3p基因表达水平和细胞周期因子(CyclinD1)、p21、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关x(Bax)基因与蛋白表达水平;观察肿瘤组织病理改变;采用流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡率;采用双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA GC1与miR-551b-3p的调控关系.另取人食管癌细胞株Eca109分为9组,每组3个复孔,其中基因干扰组命名同上,另设置空白组,培养48h后观察细胞LncRNA GC1、miR-551b-3p基因表达水平、形态学改变、凋亡率、CyclinD1、p21、Bcl-2、Bax基因与蛋白表达水平.结果 动物实验:与模型组和相应对照组比较,GC1上调组与miR-551b-3p下调组瘤体质量、CyclinD1和Bcl-2基因与蛋白表达水平均上升,抑瘤率、细胞凋亡率、miR-551b-3p基因、p21和Bax基因与蛋白表达水平均下降;GC1下调组与miR-551b-3p上调组瘤体质量、CyclinD1和Bcl-2基因与蛋白表达水平均下降,抑瘤率和细胞凋亡率、miR-551b-3p基因、p21和Bax基因与蛋白表达水平均上升;GC1上调组LncRNA GC1基因表达水平上升,GC1下调组LncRNA GC1基因表达水平下降(P＜0.05).与转染野生型GC1的腺病毒载体相比,转染突变型GC1的腺病毒载体的miR-551b-3p荧光素酶相对活性上升(P＜0.05).细胞实验:LncRNA GC1和miR-551b-3p基因表达水平、细胞形态学改变与凋亡率、CyclinD1、p21、Bcl-2、Bax基因与蛋白表达水平变化趋势均与动物实验相同.结论 下调LncRNA GC1、上调miR-551b-3p表达水平均可抑制食管癌进展,且下调LncRNA GC1可靶向上调miR-551b-3p,并降低CyclinD1和Bcl-2活性、上升p21和Bax活性.

目的 探讨叔丁基对苯二酚(tert-Butylhydroquinone,tBHQ)对糖尿病大鼠视网膜的保护作用及其机制,为DR防治提供新靶点.方法 18只雄性SD大鼠随机分成3组:正常组、糖尿病组(高脂高糖饮食)和tBHQ干预组(高脂高糖饮食中加入质量分数1％ tBHQ),后两组饮食干预4周后建立糖尿病大鼠模型,饮食干预3个月后处死各组大鼠.采集大鼠空腹血用于测定生化和胰岛素相关指标,HE染色观察大鼠视网膜各层组织变化,使用miRNA表达谱芯片测量大鼠视网膜差异性miRNA,实时定量PCR验证特定miRNA在3组大鼠视网膜的表达水平,分析差异性miRNA的相关通路.结果 tBHQ干预组[(15.073±7.079) mmol·L-]较正常组[(7.635±1.421) mmol·L-1]空腹血糖升高(P＜0.05),较糖尿病组[(22.331±1.824) mmol·L-1]降低(P＜0.05).tBHQ干预组[(47.961±15.256) μU·L-1]血清胰岛素较正常组[(78.090±20.974)μU·L-1]减少,而较糖尿病组[(17.533±3.959)μU·L-1]增多(均为P＜0.01).HE染色结果示,糖尿病组大鼠视网膜出现严重水肿,各层结构不清,tBHQ干预组视网膜改变相对轻微.与糖尿病组大鼠相比,tBHQ干预组视网膜中miR-325-3p(＞2.0倍)和miR651b-3p(＞1.5倍)上调,miR-652-3p(＞2.0倍)下调.实时定量PCR验证miR-325-3p和miR-551 b-3p为差异性miRNA,靶基因预测分析示miR-325-3p可介导21条信号通路.结论 tBHQ可能通过miR-325-3p介导的信号通路对2型糖尿病大鼠视网膜起保护作用.

目的 检测和分析男性不育症患者精浆miR-551b水平变化,探讨其作为男性不育症辅助分子标志物的可能性.方法 选取2008年11月～2015年3月在南京总医院生殖医学中心和江苏省中医院男科门诊确诊的92例男性不育症患者及同期招募的34例年龄匹配正常生育男性精液标本,记录患者及对照临床资料,测定患者及对照精液参数包括精子密度、精子活率、a级精子比例、a+b级精子比例及部分精浆生化指标α-糖苷、酸性磷酸酶、肉毒碱、果糖水平.实时荧光定量PCR技术(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测和比较弱精症、非梗阻性无精症患者及正常生育男性精浆中miR-551b含量变化,统计分析精浆miR-551b临床价值及与精液参数、精浆生化指标相关性.结果 qRT-PCR结果显示,正常生育组精浆miR-551b水平为20.63(9.59,37.83)fmol/L,弱精症患者为62.29(25.22,101.43)fmol/L,较正常生育组显著升高(U=297.00);无精症患者精浆miR-551b水平为4.70(2.41,13.71)fmol/L,较正常生育组明显降低(U=356.00),差异均具有统计学意义(P<0.001).受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析显示,精浆miR-551b区分弱精症、无精症患者与正常生育组的ROC曲线下面积(AUC ROC)分别为0.810(95％CI 0.718～0.902)和0.772(95％CI 0.667～0.878);鉴别弱精症和无精症患者的AUC ROC为0.932(95％CI 0.885～0.979).Spearman秩相关性分析显示,男性不育患者精浆miR-551b水平与精子密度(r=0.735)、精子活率(r=0.643)、a级精子比例(r=0.672)、a+b级精子比例(r=0.682)及α-糖苷(r=0.375)呈正相关,差异均具有统计学意义(均P<0.05).逐步多元线性回归结果显示,男性不育症患者精浆miR-551b水平与精子密度呈显著独立相关(β=0.618,P<0.001,校正r 2=0.368).逻辑回归分析显示,精浆miR-551b是弱精症[OR=24.889(95％CI 5.302～116.843),P<0.001]和无精症[OR=6.303(95％CI 1.316～30.179),P=0.021]的潜在危险因素.结论 男性不育症患者精浆miR-551b水平与正常生育男性存在明显差异,且与精子密度和活力密切相关,有潜力成为男性不育患者辅助诊断和鉴别诊断的新型分子标志物.

目的:分析胰腺癌组织和正常组织差异表达的miRNA,筛选与胰腺癌预后相关的生物标志.方法:下载并整理基因芯片表达汇编数据库(GEO)中GSE32678和GSE71533芯片数据集原始数据,应用R语言筛选差异表达miRNA,结合GSE24279数据集,获得差异表达的miRNA并取交集.应用生物信息学分析工具对交集miRNA进行靶基因预测,进而对靶基因进行功能分析,构建蛋白互作网络(PPI)、miRNA-mRNA调控网络、miRNA-mRNA-pathway调控网络,结合肿瘤基因组图谱数据库(TCGA)中胰腺癌样本的miRNA表达及预后数据,筛选出胰腺癌预后相关标志物.结果:共筛选出胰腺癌组织和正常组织22个交集miRNA,其中hsa-miR-30a-5p、hsa-miR-551a、hsa-miR-375与胰腺癌患者的生存预后密切相关.hsa-miR-125b-5p、hsa-miR-221-3p、hsa-miR-31-5p、hsa-miR-222-3p、hsa-miR-10a-5p是miRNA-mRNA调控网络中的核心miRNA.结论:通过对GEO和TCGA数据库胰腺癌相关数据的分析发现hsa-miR-30a-5p、hsa-miR-551a、hsa-miR-375显著影响胰腺癌患者的预后,可以作为判断预后的标志.

目的 探讨结肠腺癌患者血清miR-551b-3p和miR-143的表达水平及临床意义.方法 选取2018年1月～2019年4月解放军第四五四医院手术活检病理确诊的87例结肠腺癌患者作为病例组,选取同期结肠息肉患者106例作为对照组,记录患者基本信息并使用qPCR方法对两组患者循环血中miR-551b-3p和miR-143表达水平进行检测,并与结肠腺癌的分期和分级的关系进行分析.结果 病例组患者循环血中miR-551b-3p和miR-143水平明显低于对照组患者(P均＜0.05);结肠腺癌分化差、TNM分期晚、有淋巴结转移和远处转移的患者循环血中miR-551b-3p和miR-143水平下降更加明显(P均＜0.05).结论 miR-551b-3p和miR-143可能参与了结肠腺癌肿瘤的增殖、分化及转移过程,循环血中miR-551b-3p和miR-143有望成为诊断和预测结肠腺癌预后的指标,但仍需扩大样本量进一步研究证实.

目的 利用生物信息学分析甲状腺髓样癌和乳头状癌的差异表达miRNA,并分析与患者预后相关的差异miRNA.方法 利用GEOquery分析甲状腺髓样癌数据集GSF40807和GSE97070,乳头状癌数据集GSE73182和GSE113629的差异表达miRNA,分别利用韦恩图寻找共同差异miRNA,分析甲状腺髓样癌和乳头状癌差异表达miRNA的差别.利用on-comiR网站分析甲状腺乳头状癌差异表达miRNA患者生存情况.明确与甲状腺乳头状癌患者生存相关的miRNA,应用miRDB,miRTarBase和TargetScanHuman 7.2预测差异表达miRNA的靶基因,利用韦恩图寻找共同差异靶基因,进行富集分析.结果 通过分析发现甲状腺乳头状癌的共同差异miRNA分别是下调的hsa-miR-144-3p、hsa-miR-204-5p、hsa-miR-451a、hsa-miR-7-5p和上调的hsa-miR-146b-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-181a-5p、hsa-miR-21-5p、hsa-miR-221-3p、hsa-miR-222-3p、hsa-miR-34a-5p、hsa-miR-551b-3p;甲状腺髓样癌的共同差异miRNA分别是下调的hsa-miR-630和上调的hsa-miR-375、hsa-miR-429、hsa-miR-127-3p、hsa-miR-487b、hsa-miR-410.oncomiR网站分析hsa-miR-146b-5p与甲状腺乳头状癌患者生存相关.通过miRDB,miRTarBase and TargetScanHuman 7.2分析共发现11个差异靶基因,GO功能分析发现PPP1R11/TRAF6/ZNRF3聚集在泛素蛋白连接酶活性和泛素样蛋白连接酶活性等分子功能上.KEGG通路分析差异靶基因主要集中在MAPK信号通路上.结论 Hsa-miR-146b-5p可能通过靶向IRAK1/ERBB4/TRAF6调控MAPK信号通路,影响甲状腺乳头状癌患者的长期生存,hsa-miR-146b-5p可能成为甲状腺乳头状癌预后的预测靶标之一.

[目的]研究胃癌(gastric cancer,GC)患者血清miR-551b-3p的表达,探讨其作为GC潜在诊断生物标志物的可能性.[方法]收集40例GC患者术前、40例正常健康者血清标本,通过实时定量q-PCR检测miR-551 b-3p的表达情况,绘制受试者工作曲线(receiver operating characteristic curve,ROC),确定诊断cut-off值.[结果]GC患者、正常健康者血清miR-551 b-3p表达水平分别为0.045±0.004、0.19±0.38,与正常健康者比较,GC患者的miR-551b-3p水平显著下调(P=0.001).血清miR-551b-3p的表达与GC的临床病理特征之间的相关性分析结果表明,血清miR-551b-3p表达与年龄、性别无相关性,但与肿瘤大小、侵袭深度和TNM阶段有明显相关性.使用miR-551b-3p诊断GC时,ROC下面积(area under the ROC,AUC)为0.857(95％CI:0.77～0.939,P=0.000),预测阈值cut-off值为0.0152,对应的灵敏度、特异度分别为87.5％、70.0％.[结论]血清循环miR-551b-3p可能是诊断GC的新型生物学标志物,但仍需进一步扩大样本量进临床研究验证其诊断价值.

目的:探讨miR-551b-3p对肺癌A549细胞凋亡和放射敏感性的影响及分子机制.方法:将miR-NC,miR-551b-3p,anti-miR-NC,anti-miR-551b-3p,si-NC,si-USP9X分别转染至A549中,记为miR-NC组、miR-551b-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-551b-3p组、si-NC组、si-USP9X组;将miR-551b-3p分别与pcDNA和pcDNA-USP9X共转染至A549中,记为miR-551b-3p+pcDNA组、miR-551b-3p+pcDNA-USP9X组.采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-551b-3p和USP9X的表达水平;蛋白质印迹法检测X染色体连锁的泛素特定蛋白水解酶9(ubiquitin-specific peptidase 9 X-linked,USP9X)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 related X protein,Bax)的表达;荧光素酶报告实验检测miR-551b-3p和USP9X的靶向关系;流式细胞术检测细胞凋亡;细胞克隆集落形成实验检测放射敏感性.结果:肺癌组织和肺癌细胞A549中miR-551b-3p表达水平显著降低,USP9X mRNA和蛋白质表达水平显著升高(均P<0.001).miR-551b-3p靶向调控USP9X,过表达miR-551b-3p和抑制USP9X表达,细胞凋亡率显著升高,Bcl-2表达水平显著降低,Bax表达水平显著升高,细胞的存活曲线明显下移(均P<0.001).USP9X过表达逆转了miR-551b-3p过表达对肺癌A549细胞凋亡和放射敏感性的作用.结论:过表达miR-551b-3p促进肺癌A549细胞凋亡,增强肺癌细胞放射敏感性,其机制可能与USP9X有关.