目的:探讨miRNA-628-3p（miR-628-3p）对非小细胞肺癌H1299细胞增殖、凋亡及侵袭的影响及其与胰岛素样生长因子1受体（IGF-1R）的靶向关系。方法:设立空白对照组（未经处理的H1299细胞）、miR-NC组（转染空载质粒的H1299细胞）、miR-628-3p-M组（转染含miR-628-3p模拟物序列质粒的H1299细胞）、miR-628-3p-I组（转染含miR-628-3p抑制序列质粒的H1299细胞）。各组细胞培养72 h后，采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖能力，结晶紫染色测定细胞单克隆形成数，流式细胞术测定细胞凋亡水平，Transwell法测定细胞侵袭能力，反转录、实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）法测定细胞中miR-628-3p、IGF-1R mRNA水平，蛋白质印迹法测定细胞中IGF-1R蛋白水平。结果:与空白对照组和miR-NC组比较，miR-628-3p-M组细胞存活率[（42±7）%比（78±6）%、（76±7）%]、单克隆形成数[（235±35）个比（614±89）个、（618±75）个]、侵袭细胞数[（265±85）个比（693±185）个、（703±119）个]、IGF-1R mRNA相对表达量（2.17±0.14比3.38±0.15、3.37±0.13）和IGF-1R蛋白相对表达量（0.34±0.13比0.89±0.19、0.88±0.18）均低（均 P<0.05），细胞凋亡率[（9.30±3.51）%比（3.30±1.54）%、（3.10±1.94）%]、miR-628-3p相对表达量（6.93±0.17比3.29±0.15、3.30±0.16）均高（均 P<0.05）；而miR-628-3p-I组细胞存活率[（90±6）%]、单克隆形成数[（1 063±102）个]、侵袭细胞数[（1 985±426）个]、IGF-1R mRNA相对表达量（4.30±0.18）和IGF-1R蛋白相对表达量（1.47±0.17）均高（均 P<0.05），细胞凋亡率[（0.90±0.20）%]、miR-628-3p相对表达量（1.93±0.18）均低（均 P<0.05）。与miR-628-3p-M组比较，miR-628-3p-I组细胞存活率、单克隆形成数、侵袭细胞数、IGF-1R mRNA及蛋白相对表达量均高（均 P<0.05），细胞凋亡率、miR-628-3p相对表达量均低（均 P<0.05）。 结论:调节miR-628-3p水平对H1299细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡有影响；miR-628-3p与IGF-1R可能有靶向关系。

目的:应用生物信息学技术筛选结直肠癌(CRC)关键长链非编码RNA(lncRNA)，并对筛选出的LINC00174在CRC中的作用机制进行初步分析。方法:对癌症基因组图谱(TCGA)数据库中638例CRC和51例癌旁组织的RNA数据分析，应用Wilcoxon检验识别筛选差异表达明显的RNA；Pearson相关性检验确定lncRNA-mRNA关系对；在Starbase v3.0数据库中确定与lncRNA-mRNA关系对中RNA分子存在互作关系的微小RNA(miRNA，miR)。对TCGA数据库中CRC临床数据使用R软件包的"survival"和"survminer"方法进行生存分析，探讨lncRNA-mRNA关系对预测预后的价值。用STRING数据库及metascape平台对mRNA编码蛋白(ZNF692)的功能进行分析。收集40例新鲜的CRC及癌旁组织，应用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)对筛选出的RNA检测，验证生物信息学结果。符合正态分布的计量资料采用均数±标准差( ± s)表示，各指标间关系采用 t检验及Person相关分析。 结果:与癌旁组织比较，CRC组织中上调的LncRNA为820，下调的为951；上调的mRNA为1 628，下调为3127。分析后确定2775对候选lncRNA-mRNA，其中501对与患者生存有关。进一步通过功能分析发现LINC00174-ZNF692对可能在CRC进展中有重要作用。结果显示，LINC00174、ZNF692在CRC组织中表达水平(14.52±0.97、17.12±0.72)高于癌旁组织(13.50±0.60、15.53±0.44， W＝26 747、31 438， P<0.01)；LINC00174与ZNF692呈正相关( r＝0.58， P<0.01)。生存分析结果显示，LINC00174-ZNF692对高表达是CRC患者预后差的标志( χ2＝5.52， P<0.05)，其风险比( HR)为1.51(1.05～2.20)( P<0.05)。对Starbase v3.0数据库分析显示，ZNF692通过海绵吸附miR-200b-3p与LINC00174形成内源性竞争RNA(ceRNA)机制发挥作用。富集分析显示，ZNF692蛋白在泛素介导的蛋白降解、mRNA监控、核苷酸切除修复等过程。组织验证结果显示，LINC00174、ZNF692在CRC水平(2.65±1.23、1.19±0.33)明显高于癌旁组织(0.83±0.39、0.42±0.17， t＝8.92、13.12， P<0.01)；miR-200b-3p在CRC水平(0.35±0.13)明显低于癌旁组织(0.82±0.22， t＝－11.63， P<0.01)。Pearson分析显示，CRC组织中LINC00174与ZNF692呈正相关( r＝0.81， P<0.01)；LINC00174与miR-200b-3p、ZNF692与miR-200b-3p均呈负相关( r＝－0.75、－0.53， P<0.01)。 结论:LINC00174可能通过海绵吸附机制调控miR-200b-3p/ZNF692轴在CRC进展中发挥重要作用。

目的:探讨长链非编码核糖核酸长基因非编码核糖核酸-p53诱导转录本(lncRNA LINC-PINT)对膝骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡及炎性因子分泌的影响及其机制。方法:根据处理方法将人膝关节软骨细胞随机分为对照组(NC组)、白细胞介素(IL)-1β处理组(IL-1β组)、IL-1β+pcDNA-lncRNA LINC-PINT组、IL-1β+pcDNA组、IL-1β+anti-微小核糖核酸(miR)-628-5p组、IL-1β+anti-miR-NC组、IL-1β+pcDNA-lncRNA LINC-PINT+miR-NC组和IL-1β+pcDNA-lncRNA LINC-PINT+miR-628-5p组。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测lncRNA LINC-PINT和miR-628-5p表达；流式细胞仪检测细胞凋亡率；蛋白质印迹法检测B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(bax)和裂解的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)蛋白表达；酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-6水平；双荧光素酶报告实验检测lncRNA LINC-PINT和miR-628-5p的靶向关系。两组间比较行 t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD- t检验。 结果:IL-1β组lncRNA LINC-PINT表达低于NC组(0.35±0.03比1.00±0.11)，miR-628-5p表达高于NC组(2.13±0.15比0.97±0.06)，差异有统计学意义( t＝17.103、18.804， P<0.05)。IL-1β+pcDNA-lncRNA LINC-PINT组细胞活性高于IL-1β+pcDNA(1.08±0.07比0.57±0.04)，bax(0.41±0.04比0.82±0.07)、cleaved Caspase-3(0.46±0.03比0.91±0.06)、细胞凋亡率[(9.72±0.72)%比(25.38±2.31)%]、TNF-α[(93.51±8.36) pg/ml比(218.76±18.03) pg/ml]和IL-6[(102.18±8.72) pg/ml比(263.91±22.56) pg/ml]水平低于IL-1β+pcDNA组，差异有统计学意义( t＝29.122、15.356、10.422、11.753、6.755、16.023， P<0.05)。IL-1β+pcDNA-lncRNA LINC-PINT+miR-628-5p组miR-628-5p(1.95±0.16比1.00±0.10)、bax(0.91±0.06比0.42±0.03)、cleaved Caspase-3(0.82±0.08比0.46±0.05)、细胞凋亡率[(26.38±2.15)%比(9.61±0.78)%]、TNF-α[(197.53±18.35) pg/ml比(91.35±8.26) pg/ml]和IL-6水平[(228.67±19.84) pg/ml比(101.54±8.39) pg/ml]高于IL-1β+pcDNA-lncRNA LINC-PINT+miR-NC组，细胞活性低于IL-1β+pcDNA-lncRNA LINC-PINT+miR-NC组，差异有统计学意义( t＝15.105、16.771、12.746、12.414、21.997、15.8002、17.705， P<0.05)。 结论:lncRNA LINC-PINT可通过靶向下调miR-628-5p抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡及炎性因子分泌，促进细胞增殖。

目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-628-3p调控的DNA解螺旋酶对骨肉瘤细胞增殖的影响。方法:首先收集2013年1月至2017年12月郑州大学第二附属医院骨科收治的股骨骨肉瘤患者60例，同期收集股骨创伤性骨折患者60例作为对照组，采用定量聚合酶链反应(qPCR)检测和比较外周血循环miR-628-3p的表达水平差异，并根据随访结果进行生存分析。以人骨肉瘤细胞U2OS和HOS为研究对象，过表达miR-628-3p，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和集落形成实验检测其增殖活性，采用流式细胞术检测其凋亡率。根据Starbase预测miR-628-3p可与Bloom综合征解螺旋酶(BLM)结合，故进一步采用蛋白质印迹法(Western blot)、qPCR和荧光素酶报告基因实验进行检测。两组间计量资料比较采用独立样本 t检验，计数资料比较采用 χ2检验。 结果:骨肉瘤患者外周血和肿瘤组织中miR-628-3p的表达水平(相对表达量分别为0.203±0.047、0.217±0.054)均明显低于正常对照组(相对表达量分别为0.951±0.106、1.013±0.072， P<0.01)，差异有统计学意义，受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-628-3p在骨肉瘤患者中的表达，曲线下面积(AUC)＝0.707( P<0.01)，K-M生存分析显示miR-628-3p低表达患者生存时间明显短于高表达患者。CCK-8和集落形成实验检测显示miR-628-3p过表达后可抑制骨肉瘤细胞U2OS和NOS的增殖；流式细胞术检测显示miR-628-3p过表达后可促进骨肉瘤细胞的凋亡；qPCR和Western blot检测显示miR-628-3p过表达后，BLM的表达水平明显低于miR-628-3p nc组( P<0.01)，差异有统计学意义。荧光素酶报告基因实验显示miR-628-3p mimc与BLM-mt共转染骨肉瘤细胞U2OS和NOS后，其荧光值明显低于其他转染组(U2OS：0.208±0.017比1.082±0.046， t＝4.698， P<0.01；HOS：0.224±0.047比0.966±0.053， t＝5.548， P<0.01)，差异有统计学意义。裸鼠成瘤证实miR-628-3p过表达后肿瘤大小和重量明显低于miR-628-3p nc组[(1.419±0.274) g比(2.825±0.148) g， t＝3.717， P<0.01]，差异有统计学意义。 结论:miR-628-3p在骨肉瘤患者中存在低表达现象，与患者的不良预后和生存时间相关，miR-628-3p过表达可下调DNA解螺旋酶BLM，抑制骨肉瘤细胞的增殖。

目的 基于miR-628-3p-ERRa通路探讨双酚A对骨肉瘤细胞株MG-63增殖、凋亡、侵袭的影响.方法 体外建立骨肉瘤细胞株MG-63模型,经0(对照)、50、100、200 μmol/L双酚A处理72 h后,分别采用MTT法、结晶紫染色、流式细胞仪、Transwell小室、划痕实验测定细胞活性、单克隆形成数目、凋亡水平、细胞侵袭、迁移水平距;分别采用RT-PCR法以及免疫印迹法测定细胞miR-628-3p、ERRa的基因和蛋白的表达水平.结果 不同浓度双酚A染毒组MG-63细胞的存活率、单克隆形成数目均高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01);且随着双酚A染毒浓度的升高,MG-63细胞的存活率、单克隆形成数目呈上升趋势.不同浓度双酚A染毒组MG-63细胞的侵袭数目、迁移距离均高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01);且随着双酚A染毒浓度的升高,MG-63细胞的侵袭数目、迁移距离呈上升趋势.不同浓度双酚A染毒组MG-63细胞的凋亡率均低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01);且随着双酚A染毒浓度的升高,MG-63细胞的凋亡率呈下降趋势.不同浓度双酚A染毒组MG-63细胞的miR-628-3p mRNA表达水平均低于对照组,ERRa mRNA和蛋白表达水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01);且随着双酚A染毒浓度的升高,MG-63细胞的miR-628-3p mRNA的表达水平呈下降趋势,ERRa mRNA和蛋白的表达水平呈上升趋势.结论 双酚A暴露后能抑制骨肉瘤癌细胞miR-628-3p水平表达并靶向促进ERRa高表达,进而促进骨肉瘤癌细胞增殖、侵袭迁移,抑制其凋亡.

MicroRNA是一类20-24 nt核苷酸长度的参与基因转录后水平调控的非编码小分子RNA.利用高通量测序技术获得鳜(Siniperca chuatsi)孵化后第3天、第17天和第28天全鱼miRNA转录组,共鉴定出1 084个miRNAs,其中432个已知、624个保守、28个新发现.第17天时鉴定出的miRNA个数最多,为926个.在3个发育时期都表达的有628个miRNAs,只在各时期中特异表达的分别有71、104和70个miRNAs.一些与鳜发育相关的miRNAs在上述3个时期呈现持续上调或下调的表达特点.进一步的实验表明,miR-199-5p和miR-203可能与鳜生长发育相关,相应的靶基因分别是WnT和MyoD.

目的 探究祛痰逐瘀方(QZD)经特异性miRNA调控酒精性股骨头坏死(AIONFH)内骨稳态代谢机制的作用及对坏死骨修复的影响.方法 采集34例AIONFH患者(AIONFH组)和34例相对健康组的血清样本,应用miRCURY LNATM Universal RT microRNA PCR Panels提取获得高差异表达miRNA,并进行生物信息学分析;采集服用QZD的AIONFH患者(中药治疗组,n=8)、未服用药物患者及相对健康人群血清样本进行RT-qPCR验证,获得特异性miRNA表达.SPF级雄性大鼠随机均分为正常对照组(正常组)、酒精组(模型组)、酒精+QZD组(实验组);分别对股骨近端松质骨进行Micro-CT检查;组织进行HE染色、甲苯蓝染色和Trap染色检测;RT-qPCR测定特异性miRNA、Runx2、Pten表达.结果(1)microRNA PCR Panels结果提示miR-628在AIONFH组中低表达,并经预测与骨稳态靶基因Pten和Runx2相关;(2)经QZD干预后中药治疗组血清内miR-628较未干预的AIONFH组升高;(3)经HE染色中,实验组可见骨小梁密度较模型组高、骨小梁形态改善;甲苯胺蓝染色提示,实验组形成的成骨细胞密度均显著高于模型组;Trap染色提示与模型组相比,QZD对破骨细胞分化有抑制作用;(4)在Micro-CT中实验组与模型组相比,前者BV/TV、Tb.Th、Tb/N等值升高(P＜0.05);(5)RT-qPCR检测提示实验组miR-628、Pten和Runx2表达量均较模型组升高.结论 QZD经特异性miR-628/Pten/Runx2调控AIONFH内骨稳态代谢机制的作用,从而促进坏死修复.

目的 探讨miRNA-628-3p对乳腺癌细胞增殖的影响及其可能的机制.方法 以反转录PCR(RT-PCR)方法检测人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)与乳腺癌细胞(MCF-7、MDA-MB-231)中miR-628-3p的表达水平,检测miRNA-628-3p在MCF-7细胞中的转染效率;噻唑蓝(MTT)法检测miRNA-628-3p对MCF-7细胞增殖的影响;生物信息学对miRNA-628-3p进行靶基因预测,并通过荧光素酶报告基因实验验证,Western blot检测过表达miRNA-628-3p对靶基因多聚腺苷酸结合蛋白互作蛋白1(PAIP1)蛋白表达水平的影响;M T T法检测抑制靶基因PAIP1表达后对MCF-7细胞增殖的影响.结果 乳腺癌细胞中miRNA-628-3p的表达水平明显低于人正常乳腺上皮细胞;与空载体阴性对照组(NC)比较,miRNA-628-3p过表达组细胞增殖能力明显降低;生物信息学分析表明PAIP1是miRNA-628-3p直接作用的靶基因,荧光素酶报告基因验证了该结果,并且过表达miRNA-628-3p可以明显下调PAIP1的蛋白表达水平;抑制靶基因PAIP1的表达能抑制MCF-7细胞的增殖.结论 miRNA-628-3p在乳腺癌细胞中低表达,可以通过靶向调控PAIP1的表达进而抑制乳腺癌细胞的增殖.

目的 探讨miR-628-3p调控皮肤癌细胞SK-MEL-5的分子机制.方法 使用实时荧光定量PCR检测人皮肤癌细胞SK-MEL-5、A2058、A-431和人正常皮肤细胞TE 353.Sk中的miR-628-3p表达量.miRDB在线分析miR-628-3p的潜在底物,并使用荧光素酶报告系统检测miR-628-3p与底物的结合.过表达或者敲低miR-628-3p后,通过AnnexinV染色检测人皮肤癌细胞SK-MEL-5的凋亡水平.结果 miR-628-3p在人皮肤癌细胞SK-MEL-5、A2058、A-431中的表达量均高于人正常皮肤细胞TE 353.Sk(P＜ 0.05).miR-628-3p靶向XPC的3端非编码区的708位置(P＜0.05).过表达miR-628-3p后,XPC的表达量下降,皮肤癌细胞SK-MEL-5的凋亡水平下降(P＜0.05);敲低miR-628-3p后,XPC的表达量上升,皮肤癌细胞SK-MEL-5的凋亡水平上升(P＜0.05).结论 miR-628-3p通过靶向XPC的3端非编码区来抑制皮肤癌细胞SK-MEL-5的凋亡.

目的 探讨lncRNA RAB11B-AS1对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和顺铂敏感性的影响及分子机制.方法 建立顺铂耐药胃癌细胞系(HGC-27/DDP),将其分为对照组、si-NC组和si-RAB11B-AS1组;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞存活率;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测RAB11B-AS1和miR-628-3p的表达;流式细胞仪检测细胞周期;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告实验检测RAB11B-AS1和miR-628-3p的靶向关系.结果 0.2、0.4 mg/L顺铂处理后HGC-27细胞存活率显著降低(P<0.05),而0～0.4 mg/L的顺铂处理后HGC-27/DDP细胞存活率无统计学意义.HGC-27和HGC-27/DDP细胞中RAB11B-AS1表达水平显著升高(P<0.05),且HGC-27/DDP细胞中RAB11B-AS1表达水平显著高于HGC-27细胞(P<0.05).lncRNA RAB11B-AS1干扰表达,G0-G1期细胞所占比例显著升高,S期细胞所占比例显著降低(P<0.05);细胞存活率显著降低,迁移、侵袭细胞数显著降低(P<0.05).RAB11B-AS1靶向调控miR-628-3p.结论 LncRNA RAB11B-AS1可通过上调miR-628-3p表达抑制胃癌细胞增殖、迁移、侵袭,并提高癌细胞对顺铂的敏感性.