目的:观察长链非编码RNA(lncRNA)H19靶向微小RNA(miRNA，miR)-675/EHZ2对结肠癌细胞增殖的影响。方法:收集2013年7月到2018年7月郑州大学附属肿瘤医院结肠癌组织及其对应的癌旁组织各150例，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析LINC00052和miR-330-3p表达水平。待细胞完全贴壁后，采用lncRNAH19 shRNA、lncRNA control shRNA、miRNA Control和miR-675慢病毒感染SW480细胞，感染12 h更换含嘌呤霉素(1 mg/L)的杜尔伯科改良伊格尔(DMEM)培养基处理24 h，存活的细胞即为稳定细胞株，分别命名为Lnc Control组、lncRNAH19 KD组、miR-Control组和miR-675组。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析lncRNAH19和miR-675关系以及miR-675的靶基因。在结肠癌细胞株SW480建立lncRNAH19沉默细胞株和miR-765过表达细胞株，采用5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法和细胞计数试剂盒(CCK-8)法测定不同处理结肠癌细胞的增殖能力。体内异体移植瘤实验分析不同处理对成瘤的影响。采用 t检验分析两组数据的统计学意义。 结果:与癌旁组织lncRNAH19和miR-675[(1.12±0.18)、(1.09±0.17)]比较，结肠癌组织中lncRNAH19表达水平(3.49±0.27)显著增加，miR-675表达水平(0.32±0.11)显著下调，差异均有统计学意义( t＝3.109、2.981， P<0.05)。与Lnc-Contrtol组和miR-Control组结肠癌细胞EdU阳性率[(89.44±10.25)%、(85.41±12.33)%]比较，lncRNAH19 KD组和miR-675组结肠癌细胞EdU阳性率[(30.14±6.89)%、(41.72±8.32)%]显著下调，差异有统计学意义( t＝2.981、2.981， P<0.05)。CCK-8实验显示，与Lnc-Contrtol组和miR-Control组结肠癌细胞增殖能力比较，lncRNAH19 KD组和miR-675组结肠癌细胞能力显著下调，差异有统计学意义( F＝2.441、2.592， P<0.05)。与Lnc-Contrtol组和miR-Control组结肠癌细胞体内增殖能力比较，lncRNAH19 KD组和miR-675组结肠癌细胞能力显著下调，差异有统计学意义( F＝1.980、2.019， P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶分析显示lncRNAH19能与miR-675互补结合，EHZ2是miR-675的靶蛋白。与Lnc-Contrtol组和miR-Control组结肠癌细胞EHZ2蛋白表达水平[(1.19±0.13)、(1.04±0.14)]比较，lncRNAH19 KD组和miR-675组结肠癌细胞EHZ2蛋白表达水平[(0.32±0.13)、(0.47±0.13)]显著下调，差异有统计学意义( t＝3.109、3.011， P<0.05)。 结论:lncRNAH19通过靶向miR-675/EHZ2调控结肠癌细胞的增殖。

目的 探讨粪便miRNA675-5 p联合 qFIT在结直肠癌筛查中的诊断价值.方法 纳入 2016 年 1 月至 2021年 12 月于武汉科技大学附属天佑医院和十堰市太和医院就诊的 173 例患者,收集其临床资料及粪便标本,包括 48 例结直肠癌组、46 例腺瘤组、42 例息肉组、37 例正常对照组.采用 qRT-PCR法检测粪便 miRNA675-5p,定量粪便免疫化学检测(qFIT)检测粪便潜血.采用 ROC曲线评估 qFIT及miRNA675-5 p联合 qFIT检测对结直肠癌及腺瘤的诊断价值.结果 结直肠癌组的 qFIT值[259.94(36.25,758.55)]明显高于腺瘤组[0(0,13.42)]、息肉组[0(0,0)]、正常对照组[0(0,0)],差异有统计学意义(均P＜0.01);腺瘤组高于息肉组和正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结直肠癌组 qFIT敏感度为 85.4%,特异度为 100%;腺瘤组 qFIT敏感度为 28.3%,特异度为 97.3%.联合检测(miR-NA675-5p联合 qFIT)结直肠癌组敏感度 100%,特异度 89.2%;腺瘤组敏感度 71.7%,特异度 86.5%.结直肠癌组、腺瘤组联合检测优于 qFIT单独检测,差异有统计学意义(均P＜0.01).结论 miRNA675-5 p联合 qFIT检测能够提高早期结直肠癌筛查诊断效能.

目的 探讨低硒大鼠microRNA表达谱的变化.方法 将30只SD大鼠随机分为对照组、低硒组及补硒组,每组各10只,对照组喂养标准饲料,低硒组喂养低硒饲料,补硒组喂养低硒饲料14周后再给予亚硒酸钠补硒3周.各组喂养17周后,检测大鼠的血硒水平.提取各组大鼠心肌组织RNA进行microRNA基因芯片检测,寻找低硒大鼠与正常大鼠microRNA的表达差异.采用GO分析等生物学方法对差异性表达的microRNA基因进行深度的分析,并通过RT-qPCR进行验证.结果 成功构建了SD大鼠低硒模型(血硒含量0.026 ng/L),低硒组大鼠血硒水平与对照组相比明显降低(P＜0.05),补硒后又明显增加(P＜0.05).通过microRNA基因芯片检测低硒组筛选出显著差异性表达基因共30个,上调基因中表达最显著的为:miR-374,miR-16,miR-199a-5p,miR-195和miR-30e*,下调基因中表达最显著的为:miR-3571,miR-675和miR-450a*.其中miR-374表达量最高,与低硒密切相关.结论 低硒大鼠中miR-374,miR-16,miR-199a-5p,miR-195,miR-30e*,miR-3571,miR-675,miR-450a*表达显著异常,其中miR-374与低硒关系最为密切.为MicroRNA在克山病的诊断及治疗方面研究提供实验依据.

H19印记基因编码的长链非编码RNA H19在细胞内发挥重要的调控作用.在缺氧细胞中,H19基因表达发生变化,其涉及的转录因子以及蛋白表达相应发生变化.在特异性蛋白1的参与下,低氧诱导因子-1a(hypoxiainducible factor-1α,HIF-1α)直接与H19启动子结合,诱导缺氧条件下H19表达上调.在缺氧情况下,肿瘤抑制蛋白p53也可能通过干扰HIF-1a活性来介导H19基因的表达.H19外显子1编码的miR675-5p,通过促进细胞核内HIF-1a的积累和降低HIF-1a的生物抑制剂VHL基因表达来促进缺氧反应.另外,缺氧条件下细胞膜表面转运蛋白表达发生变化,细胞内糖代谢途径从有氧氧化向无氧糖酵解的转变也与H19的参与有关.H19可能是维持缺氧条件下细胞内代谢平衡,促进细胞在缺氧条件下进行适应性生存的一个关键基因.

目的 研究清肠温中方调控DSS诱导溃疡性结肠炎(UC)大鼠Th17/Treg免疫平衡及肠黏膜屏障的作用机制.方法 24只SPF级雄性SD大鼠,按体质量依照随机数字表将其随机分为空白组、模型组、清肠温中方组.空白组自由饮用去离子水,同时予去离子水灌胃;模型组和清肠温中方组自由饮用4.5％ DSS溶液制备UC模型,同时模型组给予去离子水,清肠温中方组予清肠温中方灌胃.7d后麻醉大鼠后取血及结肠组织,应用Real time-PCR法检测结肠miR-675-5p、VDR mRNA、RORγt mRNA、Foxp3 mRNA的表达,ELISA法检测血清IL-10、IL-17的表达,免疫组织化学法检测ZO-1、Occludin的蛋白表达及分布.结果 与空白组比较,DSS诱导的UC大鼠结肠miR-675-5p、RORγt mRNA及血清IL-17的表达较空白组明显升高(P＜ 0.05或P＜0.01),VDR mRNA、Foxp3 mRNA、ZO-1、Occludin、血清IL-10的表达较空白组明显降低(P＜ 0.05或P＜0.01);清肠温中方干预后,大鼠结肠miR-675-5p、RORγt mRNA、血清IL-17的表达较模型组明显降低(P＜0.05),VDR mRNA、Foxp3 mRNA、ZO-1、Occludin、血清IL-10的表达较模型组明显升高(P＜ 0.05或P＜0.01).结论 清肠温中方可能通过降低miR-675-5p的表达,靶向调控VDR信号通路,从而调控溃疡性结肠炎Th17/Treg免疫平衡、修复肠黏膜屏障损伤,达到治疗UC的目的.

目的:通过过表达或抑制microRNA-675-5p (miR-675-5p), 观察miR-675-5p对小鼠成牙骨质细胞OCCM-30分化的影响.方法:用矿化诱导培养基诱导OCCM-30细胞分化, 检测各矿化指标及miR-675-5p的含量变化.而后利用Lipofectamine 3000脂质体分别将miR-675-5p的mimic和inhibitor及对应的negative control转染进OCCM-30细胞, 采用real-time PCR技术验证转染是否成功, 继而采用real-time PCR和Western Blot的方法检测矿化相关指标ALP, OSX, RUNX2, BSP的含量变化, 利用ALP活性试剂盒检测碱性磷酸酶活性变化.结果:Real-time PCR结果显示在OCCM-30细胞分化过程中miR-675-5p表达下调, 在mimic组miR-675-5p表达上调明显, 同时ALP, OSX, RUNX2表达下降, Western Blot证明OSX, RUNX2与BSP在蛋白水平上表达同样明显降低, ALP活性试剂盒检测提示ALP活性被抑制.Inhibitor组结果与mimic组恰好相反.结论:miR-675-5p抑制OCCM-30细胞的分化能力.

目的 观察胃癌正常组织与癌组织中微小RNA(miRNA,miR)-675的表达及其对患者预后的影响,检测miR-675对胃腺癌细胞株(SGC-7901)生物学行为的影响,探讨miR-675在胃癌发生发展中的作用.方法 下载肿瘤基因图谱(TCGA)胃癌数据库中miRNA数据并分析miR-675在胃癌的癌及癌旁组织中的表达水平及对患者预后的影响.采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测30对胃癌组织与癌旁组织miR-675的表达水平.采用细胞计数试剂盒(CCK-8)试剂盒检测miR-675抑制剂(inhibitor)对SGC-7901细胞增殖能力的影响.采用流式细胞术检测miR-675抑制剂对SGC-7901细胞凋亡的影响.应用SPSS 17.0统计软件分析,计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示.生存分析采用Kaplan-Meier方法.采用单因素方差分析呈正态分布且方差齐的多组间差异比较样本,两组独立样本均值比较采用t检验.结果 TCGA数据库中及收集的胃癌患者miR-675在癌组织中的表达水平显著高于癌旁正常组织(3.78±0.10比2.66±0.23,t=3.236,P＜0.01),差异有统计学意义.miR-675高表达患者其中位生存期显著低于miR-675低表达患者(675 d比1 294 d,x2 =7.711,P＜0.01),差异有统计学意义.CCK-8实验显示与空白对照及转染miRNA无关序列(miR-scramble)组比较,miR-675抑制剂组SGC-7901细胞增殖能力受到抑制(￡=3.875,P＜0.01),差异有统计学意义.流式细胞术结果显示miR-675抑制剂组显著增加SGC-7901细胞的凋亡(18.13±3.39)％.结论 miR-675在胃癌的发生、发展中发挥重要作用.

目的 观察miRNAs在肝内胆管细胞癌(ICC)组织中的表达情况,探讨其在患者生存预后中的价值.方法 本研究组织标本来源于2000年4月至2014年9月中山大学肿瘤防治中心行手术切除的134例ICC和混合型肝癌(cHCC-CC)患者.收集5例正常胆管组织作为对照.采用qRT-PCR检测miR-221、miR-675、miR-1248和miR-1292在肿瘤组织中的表达水平,并分析其临床病理特征.患者均签署知情同意书,符合医学伦理学规定.相关性分析采用 χ2检验.生存分析采用Kaplan-Meier法和Log-rank检验.对可能影响预后的因素进行单因素及多因素Cox分析.结果 134例患者中ICC占63.4％(85/134),cHCC-CC占36.6％(49/134).肿瘤组织miR-221、miR-675、miR-1248和miR-1292高表达患者分别为43.3％、44.0％、77.6％ 和59.7％,其中miR-221表达水平与肿瘤淋巴结转移相关,且高表达患者淋巴转移率高(χ2=7.65,P<0.05).Cox多因素分析显示,miR-221高表达是患者总体生存的独立危险因素(HR=1.878,95％CI:1.135～3.106;P<0.05).miR-221高表达患者中位总体生存时间为14.5个月,低表达者34.0个月,高表达患者预后更差(χ2=8.87,P<0.05).结论 miR-221高表达为ICC患者预后独立危险因素,提示患者生存预后较差.

目的 探讨miRNA-675-5p表达水平与食管鳞癌(ESCC)上皮间质转化(EMT)的相关性.方法 采用实时定量PCR技术检测miRNA-675-5p在ESCC组织及配对癌旁正常组织中的表达差异,并分析其表达水平与患者临床分期的相关性.脂质体转染ECA109细胞,分为miR-675-recursor组、miR-675-5p-inhibition组和NC组,上调及抑制miRNA-675-5p表达水平,分析改变目的基因表达后对ECA109细胞株迁移侵袭能力的影响,蛋白印迹实验检测干扰表达每组细胞中EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表达水平,评估其对ECA 109株EMT过程的影响.结果 与癌旁正常组织比较,miRNA-675-5p在ESCC组织中表达显著升高(P＜0.05),不同分期患者miRNA-675-5p表达比较,差异有统计学意义(P＜0.05).与NC组比较,miR-675-recursor组细胞迁移侵袭能力明显增强,miR-675-5p-inhibition组细胞迁移侵袭能力受到显著抑制(P＜0.05).此外,与NC组比较,miR-675-recursor组E-cadherin蛋白表达降低,N-cadherin、Vimentin蛋白表达升高;miR-675-5p-inhibition组E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低(P＜0.05).结论 miRNA-675-5p表达与ESCC患者TNM分期相关,miR-675-5p能促进ESCC细胞间质转化从而增强侵袭能力;下调表达能逆转ESCC细胞EMT过程,降低迁移侵袭能力.

目的 从miRNA水平探讨电针不同干预时间抗抑郁的可能作用机制.方法 50只Wistar大鼠采用随机数字表法分为正常组10只、模型组10只、氟西汀组10只和电针组20只.除正常组外,其他各组大鼠采用慢性不可预知温和应激28天方法构建慢性应激抑郁大鼠模型.在造模同时,氟西汀组大鼠予氟西汀片20mg/(kg.d)灌胃;电针组大鼠电针"印堂"和"百会",均干预4周.应激前与干预2、4周后各组大鼠进行糖水偏好实验、强迫游泳实验.电针组分别于干预2周、4周后选取10只大鼠取海马,正常组、模型组于干预4周后取大鼠海马,采用基因芯片微阵列分析和定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)检测海马组织miRNA(miR-383-5p,miR-764-5p,miR-675-3p)表达差异,采用生物信息学检测方法发现其调控的靶基因和富集的信号通路.结果 干预2、4周后,模型组大鼠糖水偏好度显著低于正常组,强迫游泳不动时间显著长于正常组(P＜0.01).氟西汀组干预4周后与电针组干预2、4周后,大鼠糖水偏好度与强迫游泳不动时间均较模型组改善(P ＜0.05或P＜0.01).经基因芯片分析与qRT-PCR检测,与模型组比较,干预2周后电针组大鼠海马miR-675-3p表达上调(P＜0.01),调控的靶基因多涉及GABA能突触、多巴胺能突触及PI3K-Akt信号通路等;干预4周后miR-383-5p、miR-764-5p表达下调(P ＜0.05或P ＜0.01),涉及MAPK信号通路、神经营养素信号通路等多条信号通路.结论 电针对抑郁症的治疗可能在不同时程分别刺激调节抑郁躯体症状和心理障碍相关的不同的miRNA及靶基因相关.