目的:探讨miRNA-133b（miR-133b）和miRNA-150（miR-150）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达情况及临床意义。方法:选取2018年6月至2019年6月连云港市第一人民医院手术并经病理确诊的30例NSCLC患者，收集患者术前清晨空腹外周血10 ml以及术后新鲜癌组织、癌旁组织（距离癌组织≤3 cm）、正常肺组织（距离癌组织>5 cm）。以30名同期健康体检者作为健康对照组，收集清晨空腹外周血10 ml。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测两组受试者血清及NSCLC患者各组织中miR-133b、miR-150的相对表达量。分析NSCLC患者血清miR-133b、miR-150水平与临床病理特征的关系；以病理诊断为金标准，应用受试者工作特征（ROC）曲线判断miR-133b、miR-150诊断NSCLC的效能。结果:NSCLC患者中，miR-133b在癌、癌旁、正常肺组织中的相对表达量分别为0.55±0.17、0.68±0.11、0.69±0.12，癌组织中miR-133b表达水平低于癌旁组织和正常肺组织（均 P<0.01）；miR-150在癌、癌旁、正常肺组织中的相对表达量分别为1.19±0.14、1.13±0.13、1.09±0.12，癌组织与癌旁组织间miR-150表达水平差异无统计学意义（ t＝1.98， P＝0.051），癌组织中miR-150表达水平高于正常肺组织（ t＝3.06， P＝0.003）。NSCLC患者血清miR-133b相对表达量较健康对照组低（0.43±0.11比0.55±0.16， t＝3.68， P<0.05），miR-150相对表达量较健康对照组高（1.14±0.13比1.04±0.12， t＝-3.18， P<0.05）。NSCLC患者血清中miR-133b的表达水平与淋巴结转移有关（ P＝0.003），而与患者的性别、年龄、病理分型、TNM分期均不相关（均 P>0.05）。NSCLC患者血清中miR-150表达水平与各项临床病理特征均不相关（均 P>0.05）。根据ROC曲线，NSCLC患者血清中miR-133b、miR-150的曲线下面积分别为0.732、0.726，二者联合检测的曲线下面积为0.811。 结论:NSCLC患者癌组织和血清中miR-133b表达水平均降低，miR-150表达水平均升高，二者在NSCLC患者的癌组织与血清中的表达趋势一致。miR-133b可能与NSCLC的恶性程度和侵袭、转移有关。miR-133b、miR-150可能成为诊断NSCLC的分子标志物，二者联合检测的诊断效能更高。

目的:研究左归丸对去卵巢致骨质疏松症大鼠破骨细胞中miR-133b-3p、RAS同源基因家族成员A（RhoA）表达的影响，探讨其作用机制。方法:将SD雌性大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、假手术组、左归丸组，每组6只。模型组、左归丸组采用卵巢切除术构建大鼠骨质疏松症模型。左归丸组灌胃左归丸水煎液10 g/kg，连续灌胃12周。采用比色法测定大鼠血清钙、磷水平，ELISA法检测ALP水平；骨密度仪检测各组大鼠股骨骨密度。培养各组破骨细胞，采用Western blot法检测RANKL、RUNX2蛋白表达。对各组大鼠骨组织进行miRNA测序及差异表达分析。采用miR-133b-3p类似物及其对照处理破骨细胞，采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）方法检测破骨细胞增殖活力，采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测破骨细胞活性，双荧光素酶报告基因实验检测miR-133b-3p与RhoA的靶向关系，采用miR-133b-3p类似物及RhoA共表达的“挽救”实验研究左归丸影响破骨细胞活性的分子调控机制。结果:与模型组比较，左归丸组骨密度增加（ P<0.05或 P<0.01），血清钙、磷水平增加（ P<0.05），ALP水平下降（ P<0.05），RANKL蛋白表达下降（ P<0.01），RUNX2蛋白表达增加（ P<0.05）。测序结果显示，左归丸组骨质疏松大鼠破骨细胞中rno-miR-133b-3p表达下调幅度最大（ P<0.01）。左归丸组破骨细胞miR-133b-3p表达低于模型组。miR-133b-3p过表达可促进破骨细胞增殖和分化，RhoA过表达可逆转由miR-133b-3p过表达所引起的破骨细胞过度增殖和分化。 结论:RhoA是miR-133b-3p调控的靶基因，左归丸通过调控miR-133b-3p/RhoA抑制破骨细胞活性，从而缓解骨质疏松症状。

Background::Recent studies have demonstrated that microRNAs (miRNAs) in the blood circulation can serve as promising diagnostic markers for cancers. This four-stage study aimed at finding serum miRNAs as potential biomarkers for lung adenocarcinoma (LA) diagnosis.Methods::The study was carried out between 2016 and 2017. The Exiqon miRNA qPCR panel (3 LA vs. 1 normal control [NC] pooled serum samples) was used for initial screening to acquire miRNA profiles. Thirty-five dysregulated miRNAs were further evaluated in the training (24 LA vs. 24 NCs) and testing stages (110 LA vs. 110 NCs) using quantitative real-time polymerase chain reaction assays. Results::Four serum miRNAs (miR-133a-3p, miR-584-5p, miR-10b-5p, and miR-221-3p) were significantly overexpressed in LA patients compared with NCs. The diagnostic value of the four-miRNA panel was validated by an external cohort (36 LA vs. 36 NCs). The areas under the receiver operating characteristic curve of the four-miRNA panel in the training, testing, and external validation stages were 0.734, 0.803, and 0.894 respectively. Meanwhile, the expression level of miR-221-3p was much higher in LA tumor samples than that in the adjacent normal tissues (19 LA vs. 19 NCs). The expression level of miR-10b-5p was also elevated in the serum-derived exosomes samples (18 LA vs. 18 NCs). The expression of miR-133a-3p, miR-584-5p, and miR-10b-5p was significantly elevated in LA patients with epidermal growth factor receptor mutation compared with NCs. Conclusion::The study established a four-miRNA signature in serum that could improve the diagnostic capability of LA.

目的:研究微小RNA-144-3p(miRNA-144-3p)靶向调控配对盒基因8(PAX8)对甲状腺癌细胞顺铂耐药性的影响。方法:体外培养人甲状腺癌细胞株FTC-133，并构建对顺铂耐药的人甲状腺癌细胞株FTC-133，采用反转录PCR(RT-PCR)检测FTC-133细胞和顺铂耐药FTC-133细胞中miRNA-144-3p相对表达量。将顺铂耐药FTC-133细胞分为A组、B组、C组，A组不作任何处理，B组转染空质粒，C组转染pCDNA3. 1＋miRNA-144-3p质粒，采用RT-PCR检测各组miRNA-144-3p、PAX8相对表达量，采用MTT法检测各组顺铂耐药细胞的半数抑制浓度(IC 50)值；采用CCK-8法检测各组增殖率，采用流式细胞术检测各组凋亡率。 结果:顺铂耐药FTC-133细胞中miRNA-144-3p相对表达量显著高于FTC-133细胞[(0.93±0.24) vs (0.26±0.04), P<0.05]；B组顺铂耐药FTC-133细胞IC 50值、增殖率、凋亡率及miRNA-144-3p、PAX8相对表达量与A组比较差异无统计学意义( P>0.05)；C组顺铂耐药FTC-133细胞IC 50值、增殖率及miRNA-144-3p相对表达量显著高于B组( P<0.05)，细胞凋亡率、PAX8相对表达量显著低于B组( P<0.05)。 结论:miRNA-144-3p过表达可能通过下调PAX8基因表达而增加甲状腺癌细胞的顺铂耐药性，促进甲状腺癌细胞增殖并抑制其凋亡。

背景:激素性股骨头坏死多是由于长期大量使用激素所致,但具体的发病机制尚未明确,有待于进一步研究.目的:筛选出三七总皂苷干预破骨细胞来源外泌体中的差异miRNA,在此基础上构建成骨相关铁死亡调控网络,以探索激素性股骨头坏死发生的潜在机制及研究方向.方法:MTT实验检测不同浓度地塞米松和不同质量浓度三七总皂苷对Raw264.7细胞系的毒性作用;抗酒石酸酸性磷酸酶染色和TUNEL染色检测三七总皂苷对破骨细胞抑制和凋亡的影响;从三七总皂苷干预的破骨细胞中提取外泌体,对外泌体进行测序找出差异表达miRNA,通过CytoScape 3.9.1构建并可视化差异表达的miRNA与mRNA间的调控网络;通过GO分析和KEGG分析筛选候选mRNA;最后筛选出铁死亡相关的差异基因,构建铁死亡相关基因的调控网络.结果与结论:①通过MTT实验确定了适合干预Raw264.7细胞的地塞米松浓度(0.1 μmol/L)和三七总皂苷质量浓度(1 736.85 μg/mL);②三七总皂苷对破骨细胞有抑制作用并能促进其凋亡;③从破骨细胞来源外泌体样本中鉴定出20个差异miRNA,通过靶标mRNA预测出11种成骨相关的差异miRNA,并构建了4个上调的差异表达miRNA对应于155个下调的候选mRNA以及7个下调的差异表达miRNA对应于238个上调的候选mRNA的调控网络;④在差异基因中筛选出与铁死亡相关的基因24个,最终构建了12个网络(miR-98-5p/PTGS2,miR-23b-3p/PTGS2,miR-425-5p/TFRC,miR-133a-3p/TFRC,miR-185-5p/TFRC,miR-23b-3p/NFE2L2,miR-23b-3p/LAMP2,miR-98-5p/LAMP2,miR-182-5p/LAMP2,miR-182-5p/TLR4,miR-23b-3p/ZFP36,miR-182-5p/ZFP36).这些结果表明三七总皂苷可能通过调控破骨细胞外泌体来源miRNA的表达来调节成骨细胞铁死亡,为激素性股骨头坏死的机制研究提供新的思路.

目的 探讨急诊重症监护室(EICU)重症肺炎病原菌分布及其耐药性和微小核糖核酸(miRNA)表达.方法 选取2019年8月-2023年7月滨州医学院烟台附属医院和烟台市牟平区中医医院收治的107例重症肺炎(肺炎A组)和115例普通肺炎(肺炎B组)患者为研究对象,另选133名同期健康体检者为对照组.统计EICU重症肺炎的病原菌分布和耐药情况;比较三组血清miRNA-21、miRNA-146a、miRNA-127、miRNA-147a水平,受试者工作特征(ROC)曲线分析单独及联合检测对EICU重症肺炎诊断价值.结果 107例EICU重症肺炎患者共分离出病原菌113株,革兰阴性菌多,占比高的有铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌.铜绿假单胞菌对环丙沙星(89.66％)和庆大霉素(86.21％)耐药性强,肺炎克雷伯菌对头孢吡肟(79.17％)和环丙沙星(83.33％)耐药性强,均对阿米卡星和美罗培南敏感.血清miRNA-21、miRNA-146a、miRNA-127水平肺炎A组＞肺炎B组＞对照组(P＜0.05);血清 miRNA-147a 水平肺炎A组＜肺炎 B组＜对照组(P＜0.05).miRNA-21、miRNA-146a、miRNA-127、miRNA-147a联合诊断EICU重症肺炎曲线下面积(AUC)高于各项单独检测(P＜0.05).结论 EICU重症肺炎患者革兰阴性菌感染多,主要病原菌为铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌,不同病原菌耐药性存在差异,对常用抗菌药物耐药性高;EICU重症肺炎发生后miRNA-21、miRNA-146a、miRNA-127呈高表达,miRNA-147a呈低表达,四者联合检测有助于诊断EICU重症肺炎.

目的 应用生物信息学筛选食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中差异表达的microRNA(miRNA)并预测其靶基因,分析生物学功能.方法 收集西南医科大学附属医院2021年6月—2022年2月期间的20对食管鳞状细胞癌癌组织和癌旁正常配对组织标本.通过GEO数据库下载ESCC miRNA表达谱芯片数据,利用R软件limma包进行归一化,筛选差异表达miRNA;利用在线工具Kaplan-meier Plotter对差异表达miRNA进行生存分析.通过qRT-PCR验证与生存率相关的差异miRNA在ESCC组织中的表达;利用TargetScan和miRDB预测靶基因,应用DAVID对靶基因进行GO功能注释和KEGG通路富集分析;通过STRING和Cytoscape构建PPI网络鉴定核心基因并构建miRNA-mR-NA网络图;最后利用UALCAN评估核心基因在食管癌中的表达.结果 与癌旁正常组织相比,hsa-miR-93、hsa-miR-130b、hsa-miR-18a、hsa-miR-23b 在 ESCC 组织中表达上调;而 hsa-miR-1、hsa-miR-133b、hsa-miR-378a 在 ESCC 组织中表达下调.其中3种下调miRNA在ESCC组织中的表达较癌旁正常组织有显著差异(P＜0.01).核心基因HNRN-PK、HNRNPU、DHX15、MATR3、HNRNPA3在食管癌中的表达明显上调,且与hsa-miR-1密切相关.结论 ESCC癌组织中miRNA存在差异表达,miRNA可能通过作用靶基因间接参与调控相关的生物功能和通路,从而影响ESCC的发生发展.

目的 研究脑卒中患者发生肺部感染的病原学特征及外周血微小核糖核酸-193b(miR-193b)、微小核糖核酸-127(miR-127)、微小核糖核酸-133(miR-133)的诊断价值.方法 选取2020年1月-2022年12月徐州市第一人民医院收治的469例脑卒中患者,依据是否发生肺部感染分为感染组116例和未感染组353例,分析脑卒中患者发生肺部感染的现状及病原学特征,检测外周血 miR表达水平,受试者工作特征(ROC)曲线分析其对肺部感染的预测价值.结果 脑卒中患者肺部感染发生率为24.73％(116/469),感染的主要病原菌种类为肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌和白假丝酵母;感染组外周血miR-193b、miR-127、miR-133表达水平高于未感染组(P＜0.05),并随感染程度加重表达水平呈逐渐升高趋势(P＜0.05);外周血miR-193b、miR-127、miR-133联合预测脑卒中患者肺部感染的曲线下面积(AUC)值、敏感度和特异度分别为0.877、85.34％和77.05％.结论 脑卒中患者肺部感染发生率较高,肺部感染的发生可引起脑卒中患者外周血miR-193b、miR-127、miR-133表达水平升高,三者联合对脑卒中患者肺部感染的发生具有较好的预测价值.

目的 探究益景汤对早期糖尿病视网膜病变(DR)大鼠视网膜组织中微小RNA(miRNA)表达的影响,筛选出益景汤干预早期DR的靶点miRNA.方法 将20只2月龄雄性SD大鼠使用链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,随机分为模型组(MG)和益景汤组(YJG),另将常规喂养的大鼠设为对照组(CG),每组10只.YJG组大鼠每日灌胃益景汤12.50 g/kg,CG、MG组大鼠灌胃等体积0.9%氯化钠注射液,均干预16周.给药完成后记录大鼠体质量,摘除双侧眼球剥离视网膜,提取总RNA,PCR扩增构建小RNA文库,采用高通量测序技术对该文库进行测序.对差异miRNA进行靶基因预测,并对靶基因进行基因本体论(GO)、Pathway分析,选择差异倍数较大的miRNA进行PCR验证.结果 (1)已知miRNA差异:筛选出644个已知miRNA,其中差异miRNA共59个.与CG组比较,MG组35个miRNA上调、6 个miRNA下调,YJG组20个miRNA上调、4个miRNA下调;与MG组比较,YJG组6个miRNA上调、13个miRNA下调,差异均有统计学意义(均P＜0.05);其中,1个上调miRNA,11个下调miRNA为益景汤干预DM大鼠后,3组共同差异性表达miRNA.(2)新发现miRNA差异:3组筛选出242个新发现的miRNA,其中差异miRNA共105个.与CG组比较,MG组50个miRNA上调,15个miRNA下调;与CG组比较,YJG组55个miRNA上调,20个miRNA下调;与MG组比较,YJG组16个miRNA上调,6个miRNA下调,差异均有统计学意义(均P＜0.05).(3)差异miRNA生物学功能和通路:差异基因主要涉及生物学过程方面的多种蛋白的转录调节;靶基因关联的通路主要是肿瘤相关的信号通路和糖脂代谢相关通路.(4)PCR验证:MG组大鼠视网膜miR-673-3p表达低于CG组,余11个miRNA表达均高于CG组;YJG组大鼠视网膜miR-673-3p、miR-23b-5p表达均高于MG组,余10个miRNA表达均低于MG组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).除miR-23b-5p外,其余11个miRNA与上述RNA检测结果一致.结论 miR-673、miR-1、miR-133、miR-214、miR-23b、miR-31a、miR-451等可能是益景汤干预早期DR微血管损害的靶点miRNA.

目的:探讨神经肌肉电刺激对失神经诱导的肌少-骨质疏松大鼠骨血管生成及骨质疏松的影响;检测循环外泌体浓度及其miRNA的表达改变,探究循环外泌体中肌源性miRNA的表达水平与骨血管生成及骨质疏松的关系.方法:10周龄雄性SD大鼠随机分为假手术对照组(CON组,n=8)、双腿失神经组(DD组,n=8)和双腿失神经+右腿电刺激组(D+ES组,n=8).DD组及D+ES组进行双腿胫神经去除手术,D+ES组在胫神经去除术后恢复1周,进行8周的神经肌肉电刺激干预.末次干预24小时后取材,使用micro-CT检测胫骨骨小梁参数;HE染色观察胫骨的骨小梁形态;免疫组化染色鉴定血管标志物血小板-内皮细胞粘附分子(PECAM-1/CD31)和促血管生成因子-血管内皮生长因子(VEGFA).提取并纯化血浆中的外泌体,使用透射电镜、纳米颗粒跟踪分析和Western Blot对外泌体进行鉴定;利用Real-time PCR测定外泌体中肌源性miR-1、miR-133a、miR-133b以及miR-206的表达.结果:(1)与CON组相比,DD组大鼠的腓肠肌、比目鱼肌的体积和重量明显降低(P＜0.001),胫骨骨小梁参数发生病理性改变;经8周神经肌肉电刺激干预后,与DD组相比,D+ES组腓肠肌和比目鱼肌的体积和重量显著升高(P＜0.05),胫骨骨小梁参数显著改善.(2)免疫组化染色结果表明,与CON组相比,DD组大鼠胫骨CD31和VEGFA阳性染色面积百分比显著减小;与DD组大鼠相比,D+ES组大鼠的CD31和VEGFA阳性染色面积百分比显著增大.(3)纳米颗粒跟踪分析(NTA)结果表明,与CON组相比,DD组循环外泌体浓度显著降低(P＜0.001),PCR结果表明外泌体中miR-1、miR-133a、miR-133b和miR-206表达显著升高(分别为P＜0.05,P＜0.01,P＜0.05,P＜0.05);与DD组相比,D+ES组循环外泌体浓度升高(P＜0.05),且上述四种miRNA的表达都显著回落(均为P＜0.05).结论:胫骨神经去除术成功建立了肌少-骨质疏松模型;神经肌肉电刺激干预明显改善了失神经诱导的骨质疏松,并促进了胫骨内的血管生成;电刺激干预使循环外泌体浓度显著升高,其携带的肌源性miRNA的表达也发生显著改变,提示电刺激诱导的循环外泌体miRNA可能与骨血管生成及骨质疏松进展有关.