目的:探讨β-分泌酶反义核糖核酸(BACE1-AS)对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的心肌细胞损伤的影响及其机制。方法:Ang Ⅱ处理H9c2心肌细胞(购自中国科学院上海细胞库)建立心肌细胞损伤模型，H9c2心肌细胞培养液中加入Ang Ⅱ建立心肌细胞损伤模型(Ang Ⅱ组)，同时将正常培养的心肌细胞作为对照(Con组)。分别将干扰对照序列(si-NC)、干扰BACE1-AS序列(si-BACE1-AS)、抑制剂阴性对照序列(anti-miR-NC)、Ang Ⅱ＋si-BACE1-AS与miR-137抑制剂(anti-miR-137)转染至心肌细胞，加入含有浓度为1 μmol/L Ang Ⅱ的培养液继续培养48 h，分别记作Ang Ⅱ＋si-NC、Ang Ⅱ＋si-BACE1-AS、Ang Ⅱ＋si-BACE1-AS＋anti-miR-NC、Ang Ⅱ＋si-BACE1-AS＋anti-miR-137组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测BACE1-AS、微小RNA-137(miR-137)的表达水平；检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量；流式细胞术检测细胞凋亡率；双荧光素酶报告实验检测BACE1-AS和miR-137的靶向关系；蛋白质印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)和bcl-2相关X蛋白(bax)表达。两组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK- q检验。 结果:与Ang Ⅱ＋si-NC组比较，Ang Ⅱ＋si-BACE1-AS组凋亡率显著降低[(14.83±2.28)%比(27.84±1.54)%， t＝28.137， P<0.05]，bax蛋白水平显著降低(0.64±0.10比0.97±0.02， t＝40.627， P<0.05)，bcl-2蛋白水平显著升高(0.68±0.05比0.33±0.04， t＝19.032， P<0.05)，差异均有统计学意义。双荧光素酶报告实验证实BACE1-AS可靶向结合miR-137。Ang Ⅱ＋si-BACE1-AS＋anti-miR-137组miR-137、SOD和bcl-2水平低于Ang Ⅱ＋si-BACE1-AS＋anti-miR-NC组(0.36±0.11比0.99±0.01、21.18±1.66比32.85±2.98、0.38±0.08比0.68±0.04， t＝17.111、10.263、10.062， P<0.05)，LDH、MDA、凋亡率和bax水平高于Ang Ⅱ＋si-BACE1-AS＋anti-miR-NC组(377.03±2.75比323.52±20.71、30.80±2.56比18.06±0.58、23.04±2.55比14.80±0.35、0.88±0.04比0.63±0.05， t＝7.684、14.561、9.604、11.713， P<0.05)，差异均有统计学意义。 结论:敲低BACE1-AS表达可通过上调miR-137的表达来减轻Ang Ⅱ诱导的心肌细胞损伤。

目的:探讨微小RNA-92a-3p （micro RNA-92a-3p, miR-92a-3p）靶向调控PTEN对神经母细胞瘤（neuroblastoma，NB）细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:采用miR-92a-3p mimics及其抑制基因（inhibitor）分别转染至SH-SY5Y细胞，根据实验需要分为miR-92a-3p过表达组、NC过表达组、miR-92a-3p抑制组、NC抑制组，采用实时荧光定量聚合酶链反应（real time fluorescent quantitative polymerase chain reaction，qRT-PCR）检测转染后细胞内miR-92a-3p的表达水平；采用CCK-8检测实验、细胞克隆形成实验、细胞划痕实验、细胞侵袭实验检测miR-92a-3p对细胞增殖、侵袭和迁移能力的变化；采用基因软件预测miR-92a-3p的靶基因并用双荧光素酶报告体系进行验证；最后采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测过表达miR-92a-3p和抑制miR-92a-3p后对PTEN/PI3K/AKT信号通路相关分子的表达情况。结果:qRT-PCR结果显示miR-92a-3p过表达组的表达含量（65.73±20.07）比miR-92a-3p抑制组的表达含量（0.33±0.02）显著增高，且差异有统计学意义（ t=5.64， P=0.005）。CCK-8检测实验显示，miR-92a-3p过表达组能促进SH-SY5Y细胞的增殖活性（ P均<0.001 ），miR- 92a-3p抑制组则能有效抑制SH-SY5Y细胞的增殖活性（ P=0.031， P=0.012， P<0.001， P<0.001）。细胞克隆形成实验结果显示，miR-92a-3p过表达组的细胞克隆数为（210±19）个，高于NC过表达组的细胞克隆数（144±5）个，组间比较差异有统计学意义（ P=0.005）；miR-92a-3p抑制组的细胞克隆数为（83±6）个，低于NC抑制组的细胞克隆数（137±13）个，组间比较差异有统计学意义（ P＝0.003）。细胞划痕实验及细胞侵袭实验结果显示，miR-92a-3p过表达组细胞迁移愈合率为（90.37±0.67）%，高于miR-92a-3p抑制组（41.03±0.56）%，组间比较差异有统计学意义（ P<0.001）；miR-92a-3p过表达组细胞穿膜数量为（106.80±9.28）个，高于miR-92a-3p抑制组（33.40±7.56）个，组间比较差异有统计学意义（ P<0.001）。qRT-PCR和蛋白质印迹法结果显示，与NC过表达组相比，miR-92a-3p过表达组PTEN的mRNA表达量（0.43±0.02）和蛋白水平明显降低，而PI3K mRNA表达量（2.00±0.10）、AKT mRNA表达量（1.41±0.19）和各自蛋白水平明显升高，且差异均有统计学意义（ P<0.001、 P< 0.001和 P=0.028）；miRNA-92a-3p抑制组可逆转上述作用，且差异均有统计学意义（ P＝0.043、 P= 0.046和 P<0.001）。 结论:PTEN基因是miR-92a-3p的靶基因，miR-92a-3p可能通过促进NB细胞增殖、促进NB细胞侵袭、促进NB细胞迁移和抑制PTEN mRNA表达引发PTEN蛋白水平的降低。

目的:探讨miRNA-146a（miR-146a）、miRNA-196a2（miR-196a2）和miRNA-499（miR-499）单核苷酸多态性与肝细胞癌遗传易感性的关系。方法:采用病例对照研究设计。选取扬州大学附属医院2015年4月至2019年3月收治的肝细胞癌患者175例（肝细胞癌组）及同时期门诊体检的302名健康体检者（对照组）。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法检测两组外周血中miR-146a、miR-196a2和miR-499基因分型的分布情况，采用logistic回归模型分析3个miRNA的基因型、肝炎病毒感染者基因型与肝细胞癌遗传易感性的关系，采用Spearman相关分析法研究miR-146a基因多态性与人口学因素及临床特征间的关系。结果:肝细胞癌组miR-146a单核苷酸多态性位点CC、CG、GG基因型分别为52例（29.7%）、86例（49.1%）、37例（21.1%），对照组分别为137名（45.4%）、135名（44.7%）、30名（9.9%），两组间基因型分布差异有统计学意义（ χ2=17.23， P<0.05）；两组间miR-196a2和miR-499各基因型分布差异均无统计学意义（ χ2=0.51， P=0.776； χ2=0.05， P=0.976）。单因素logistic回归分析显示，miR-146a基因型共显性模型中，与CC基因型相比，CG基因型（ OR=1.96，95% CI 1.13~3.41， P=0.017）和GG基因型（ OR=3.30，95% CI 1.85~5.89， P<0.01）发生肝细胞癌的风险升高；在显性模型中，与CC基因型相比，CG+GG基因型发生肝细胞癌的风险升高（ OR=1.97，95% CI 1.33~2.93， P=0.001）；在隐性模型中，与CG+GG基因型相比，GG基因型发生肝细胞癌的风险升高（ OR=2.43，95% CI 1.44~4.11， P=0.001）。单因素logistic回归分析显示，在miR-196a2和miR-499基因型共显性、显性及隐性模型中，各基因型间肝细胞癌发生风险差异均无统计学意义（均 P>0.05）。在乙型肝炎病毒（HBV）阳性的肝细胞癌患者中，miR-146a的CG和GG基因型发生肝细胞癌的风险分别是CC基因型的2.02倍（95% CI 1.06~5.07）和3.12倍（95% CI 1.66~10.07），CG+GG基因型是CC基因型的1.91倍（95% CI 1.85~3.38），GG基因型是CG+GG型的1.54倍（95% CI 1.15~6.08）；在丙型肝炎病毒（HCV）感染或无HBV和HCV感染的肝细胞癌患者中，未发现miR-146a基因多态性增加肝细胞癌发生的风险。Spearman相关分析显示，miR-146a多态性与患者年龄、性别、吸烟、饮酒、肿瘤家族史、丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶均无相关性（均 P>0.05）。 结论:miR-146a的GG和CG基因型增加肝细胞癌尤其HBV感染患者的遗传易感性；miR-196a2和miR-499单核苷酸多态性未增加肝细胞癌的发生风险。

目的:探讨长链非编码RNA（lncRNA）C10orf25对前列腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响及miRNA-671-5p（miR-671-5p）在其中可能的作用。方法:利用基因表达综合（GEO）数据库中数据（数据更新时间2023年1月），分析C10orf25在137例前列腺癌组织和癌旁组织中表达水平的差异。选择前列腺癌C4-2B、DU-145、22Rv1、PC-3、LNCaP细胞株和永生化前列腺上皮RWPE-1细胞株，应用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测各细胞株C10orf25的相对表达量。选取C10orf25相对表达量最低的22Rv1细胞，分为对照组（转染阴性质粒）和C10orf25组（转染载有C10orf25序列质粒）；CCK-8法检测两组22Rv1细胞第1、2、3、4、5天增殖能力（以吸光度值表示）；Transwell法检测两组22Rv1细胞的侵袭能力。利用Linc2GO软件预测miR-671-5p与C10orf25具有结合位点，双荧光素酶报告基因实验验证C10orf25与miR-671-5p的靶向关系。qRT-PCR检测两组22Rv1细胞C10orf25和miR-671-5p相对表达量。蛋白质印迹法检测两组22Rv1细胞NF-κB信号通路相关蛋白的表达。结果:GEO数据库中，C10orf25在前列腺癌组织中的相对表达量低于癌旁组织（ P<0.01）。C10orf25在永生化前列腺上皮细胞株RWPE-1和前列腺癌细胞株C4-2B、DU-145、22Rv1、PC-3、LNCaP中的相对表达量分别为1.00±0.05、0.63±0.04、0.42±0.03、0.18±0.04、0.81±0.02、0.50±0.07，差异有统计学意义（ F=43.29， P<0.05）。C10orf25组22Rv1细胞的增殖能力从第2天开始均低于对照组，差异均有统计学意义（均 P<0.05）。对照组和C10orf25组侵袭细胞数分别为（97±11）个和（36±9）个，差异有统计学意义（ t=4.15， P<0.01）。Linc2GO软件预测结果显示，C10orf25与miR-671-5p具有结合位点。双荧光素酶报告基因实验结果显示，miR-671-5p和C10orf25野生型质粒共转染22Rv1细胞的相对荧光活性低于miR-NC和C10orf25野生型质粒共转染细胞，差异有统计学意义（ P<0.01），而miR-671-5p或miR-NC与C10orf25突变型质粒共转染时，22Rv1细胞的相对荧光活性差异无统计学意义（ P>0.05）。对照组和C10orf25组22Rv1细胞miR-671-5p相对表达量分别为7.33±0.99和0.98±0.16，差异有统计学意义（ t=6.32， P<0.01）。蛋白质印迹法检测结果显示，C10orf25组22Rv1细胞中NF-κB信号通路蛋白p50、基质金属蛋白酶9、c-myc、血管内皮生长因子蛋白表达水平均低于对照组。 结论:过表达C10orf25可能通过miR-671-5p-NF-κB轴抑制前列腺癌细胞的增殖和侵袭能力。

目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)及其靶向miRNA-137在扁平苔藓(LP)中的表达及潜在作用.方法 采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测40例LP皮损组织中miRNA-137表达情况,以35例正常皮肤组织作为对照.采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测COX-2在LP组织及正常皮肤组织中的表达水平.结果 与正常皮肤组织相比,LP组织样本COX-2表达明显升高(t=2.163,P=0.034),miRNA-137表达显著下调(t=2.122,P=0.037).Spearman秩相关分析结果显示,LP组织中miRNA-137与COX-2的表达呈负相关(r=-0.244,P=0.035).结论 miRNA-137表达下调导致其靶蛋白COX-2的表达上调,这可能在LP发病机制中发挥重要作用,miRNA-137可能会成为LP分子治疗的潜在工具.

目的 探讨膀胱癌组织微RNA-212(miRNA-212)、微RNA-137(miRNA-137)、微RNA-200(miRNA-200)表达与临床病理特征的相关性及预测经尿道膀胱肿瘤切除(TURBT)术后复发的效能.方法 选取2017年6月至2021年6月河北燕达医院100例膀胱癌病人,比较癌组织和癌旁组织及不同病理特征病人miRNA-212、miRNA-137、miRNA-200表达,并根据术后复发情况分为复发组、未复发组.比较两组miRNA-212、miRNA-137、miRNA-200表达,采用受试者操作特征(ROC)曲线分析miRNA-212、miRNA-137、miRNA-200预测复发的价值,比较不同miRNA-212、miRNA-137、miRNA-200表达水平病人复发率.结果 癌组织miRNA-212为2.03±0.56低于癌旁组织4.52±1.18(P<0.05),癌组织miRNA-137、miRNA-200表达分别为2.69±0.45、24.56±7.39,高于癌旁组织的1.28±0.30、7.33±2.21(P<0.05);随着组织学分级、TNM分期递增,miRNA-212表达逐渐降低,miRNA-137、miRNA-200表达逐渐升高(P<0.05);肌层浸润性膀胱癌病人miRNA-212低于非肌层浸润性膀胱癌,miRNA-137、miRNA-200高于非肌层浸润性膀胱癌(P<0.05);复发组miRNA-212(1.73±0.39)低于未复发组(2.28±0.44)(P<0.05),复发组miRNA-137、miRNA-200分别为3.06±0.72、37.96±12.18,高于未复发组2.35±0.40、22.86±7.50(P<0.05);miRNA-212高水平病人复发率低于低水平病人,miRNA-137、miRNA-200高水平病人复发率高于低水平病人(P<0.05).结论 膀胱癌组织miRNA-212、miRNA-137、miRNA-200表达与临床病理特征相关,联合检测对TURBT后复发具有良好的预测能力,可作为预测术后复发的一种方案.

目的 探讨温阳复元方对miRNA-137/线粒体铁死亡通路的调控作用,阐明该方对脑缺血再灌注损伤(CIRI)的神经保护作用机制.方法 线栓法制备大鼠CIRI模型,将144只SD大鼠随机分为假手术(SO)组、模型(I/R)组、补阳还五汤对照(BYHW)组、温阳复元方(WYFY)组、温阳复元方+miRNA-137模拟物(WYFY+mimic)组、温阳复元方+miRNA-137抑制物(WYFY+Inhibitor)组,每组按再灌注时间点分为3个亚组.采用Zea-Longa评分法进行神经功能缺损评分(NFS);TTC染色测量脑梗死体积;qRT-PCR和Western blot法观察miRNA-137、膜铁转运蛋白(FPN)和二价金属离子转运体1(DMT1)的mRNA及其蛋白表达水平.结果 ①NFS结果:I/R组NFS较SO组显著增加(P＜0.01),与I/R组相比,BYHW组NFS仅在12 h时评分降低(P＜0.05),而WYFY组在24 h和3 d的 NFS 明 显降低(P＜0.05或P＜0.01),WYFY+mimic组NFS显著下降(P＜0.01),WYFY+Inhibitor组在3 d时NFS降低(P＜0.05);与WYFY组相比,WYFY+mimic组NFS仅在12 h时明显降低(P＜0.05).②TTC染色结果:I/R组梗死体积较SO组显著增大(P＜0.01),BYHW组和WYFY组较I/R组明显减小(P＜0.05或P＜0.01),WYFY组梗死体积较BYHW组进一步减小(P＜0.01);相较于WYFY组,WYFY+mimic组能进一步减小其梗死体积(P＜0.05),而 WYFY+Inhibitor组梗死灶明显增大(P＜0.05).③miRNA-137 mRNA表达水平:I/R组miRNA-137 mRNA的表达较SO组显著下降(P＜0.01),WYFY治疗后其表达量显著增加(P＜0.01),且WYFY组其表达水平较BYHW组进一步增高(P＜0.01);与WYFY组同期比较,WYFY+mimic组miRNA-137 mRNA表达量均进一步升高(P＜0.01),WYFY+Inhibitor组抑制该表达(P＜0.01).④FPN mRNA及蛋白表达水平:I/R组FPN mRNA和蛋白表达水平较SO组均降低(P＜0.01),WYFY组能显著增加其表达(P＜0.01),该组在12 h和3 d时的表达量较BYHW组进一步增加(P＜0.05或P＜0.01);与WYFY组同期对比,WYFY+mimic组其表达水平在24 h及3 d时增加(P＜0.01),而WYFY+Inhibitor组其表达水平均降低(P＜0.01).⑤DMT1 mRNA及蛋白表达水平:I/R组DMT1 mRNA和蛋白表达量较SO组均显著增加(P＜0.01);与I/R组比较,WYFY能降低其表达水平(P＜0.01),且WYFY组在3 d时其表达量较BYHW组进一步降低(P＜0.05);与WYFY组同期相比,WYFY+mimic组其表达水平在24 h和3d时均降低(P＜0.01),而WYFY+Inhibitor组其表达水平均显著增加(P＜0.01).结论 温阳复元方可能通过上调miRNA-137的表达,进而上调铁转运蛋白FPN的表达,下调DMT1的表达,调节铁代谢,最终抑制线粒体铁死亡,发挥其神经保护作用,其疗效优于补阳还五汤.

目的 探讨环状RNA(circRNA)分子在慢性HBV感染者不同时期的差异表达及其作用.方法 收集泰州市人民医院感染病科2014年10月至2015年10月就诊的慢性HBV感染者7例,其中慢性乙型肝炎(CHB)患者4例,慢性HBV携带者3例,3名对照来自健康体检者.采集所有研究对象外周血单个核细胞(PBMC),应用新一代circRNA表达谱芯片检测PBMC中circRNA分子的表达,并通过荧光定量PCR进行验证.采用微小RNA(miRNA)靶预测软件分析circRNA和miRNA的相互作用位点.应用基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)对其靶向miRNA及调控靶基因进行分析.采用SPSS 17.0软件对数据进行分析.结果 与健康对照者比较,CHB患者表达差异的circRNA分子有137个,其中上调89个,下调48个;慢性HBV携带者表达差异的circRNA分子有444个,其中上调130个,上调5倍以上的有34个,下调314个.CHB患者与慢性HBV携带者相比,差异表达的circRNA分子有1041个,其中上调663个,下调378个,下调超过5倍以上的有54个.差异表达的circRNA上具有miRNA应答元件,可与miRNA种子区域的碱基互补配对.靶基因预测分析显示,hsa_circ_0038646相关miRNA调控的靶基因有533个,hsa_circ_0087354分子相关miRNA调控的靶基因有249个.GO分析显示,hsa_circ_0038646分子相关miRNA调控靶基因的功能主要富集于激活素结合等,hsa_circ_0087354分子相关miRNA调控的靶标富集于犰狳重复区域结合等.KEGG分析显示,hsa_circ_0038646分子相关miRNA主要参与T细胞受体结合途径、雌激素受体信号通路等,hsa_circ_0087354分子相关miRNA主要参与粘附连接、MAPK信号途径等.结论 HBV感染不同时期患者circRNA的表达存在差异,差异表达的circRNA可能通过影响相关miRNA分子的多个靶基因及其信号途径参与慢性HBV感染者的免疫调控.

目的 研究肺腺癌相关MicroRNAs在正常人群及肺腺癌患者血清中的表达情况,分析其在肺腺癌诊断中的临床价值.方法 收集59例肺腺癌及40例正常体检人群血清,通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组miR-498、miR-21、miR-137、miR-206、miR-138、miR-32及miR-125b的表达情况.统计分析两组之间miRNA的表达差异以及单个血清miRNA在肺腺癌诊断中的价值,进一步用统计学方法分析多个miRNAs联合检测的诊断价值.结果 相比正常体检人群,肺腺癌患者血清中miR-498、miR-21和miR-137表达增加,差异有统计学意义(P<0.05);两组miR-206、miR-138、miR-32及miR-125b的表达量比较,差异无统计学意义.AUC曲线分析结果显示,miR-498的AUC为0.73(95％CI,0.63～0.81),miR-21的AUC为0.83(95％CI,0.74～0.90),miR-137的AUC为0.74(95％CI,0.64～0.82).miR-498、miR-21联合miR-137在肺腺癌诊断中AUC值为0.93(95％CI,0.85～0.97),3者联合优于单个miRNA任一检测,差异有统计学意义(P<0.05).结论 miR-498、miR-21和miR-137在肺腺癌患者血清中升高,血清中miR-498、miR-21和miR-137在肺腺癌的诊断中具有潜在的应用价值.

目的:应用生物信息学方法筛选胰腺导管腺癌的预后风险标志物.方法:从TCGA数据库下载胰腺导管腺癌患者的临床资料、miRNA和基因表达谱数据.然后应用弹性网络Cox比例风险回归(EN-Cox)模型、受试者工作特征(ROC)曲线和生存分析筛选出与胰腺导管腺癌预后风险明显相关的miRNA和基因.最后,对筛选到的预后风险基因与miRNA的潜在靶基因进行文献挖掘及功能分析.结果:经过数据预处理,共得到137例胰腺导管腺癌患者的完整临床资料及797个miRNA和19 969个基因表达谱数据.基于λ=0.107的参数值,EN-Cox分析筛选出了包括54个基因和5个miRNA在内的59个潜在的预后风险因素;根据ROC曲线确定病例分组的截断值,并绘制Kaplan-Meier曲线,最后共筛选出17个胰腺导管腺癌预后风险标志物(均P＜0.05),包括16个基因和1个miRNA(miRNA-125a).在16个预后风险基因中,谷胱甘肽S转移酶μ4(GSTM4)、可诱导T细胞共刺激分子配体(ICOSLG)、精子发生相关2(SPATA2)同时又是miRNA-125a的靶基因;只有GATA结合蛋白1(GATA1为转录因子编码基因.结论:所筛选的因子在胰腺癌中的作用还有待阐明,并有望成为判断胰腺导管腺癌预后的指标及治疗靶点.