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2型糖尿病足溃疡患者外周血miRNA-144表达及与病程发生发展的相关性
编辑人员丨5天前
目的:探讨miRNA-144在2型糖尿病足溃疡(DFU)患者外周血中的表达及与病程发生发展的相关性。方法:回顾性选取2020年3月至2022年6月中国人民解放军西部战区总医院收治的106例DFU患者作为观察组,另选取同期本院收治的未患有DFU的106例2型糖尿病(T2DM)患者作为对照组。根据DFU患者外周血miRNA-144表达水平的中位数作为分割点,将观察组的106例患者分为低表达组和高表达组。比较观察组和对照组的临床资料,分析不同miRNA-144表达水平与DFU患者临床特征的关系;对DFU患者病程发生发展的相关因素进行多因素分析并构建列线图模型进行模型验证。结果:观察组糖尿病病程、空腹血糖(FPG)、红细胞沉降率(ESR)、糖化血红蛋白(HbA 1c)、白细胞计数(WBC)、C反应蛋白(CRP)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、白细胞介素-6(IL-6)、肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)、皮质醇(Cor)以及miRNA-144表达水平显著高于对照组,而经皮氧分压(TcPO 2)、踝肱指数(ABI)、甘油三酯(TG)和血红蛋白(Hb)则显著低于对照组,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。miRNA-144高表达组DFU患者8周后溃疡愈合率、Wagner分级、溃疡病程与低表达组比较差异有统计学意义(均 P<0.05)。多因素回归分析结果显示,糖尿病病程>5年、HbA 1c>8.5%、TcPO 2<60 mmHg、CRP>10 mg/L、Cor>190 μg/L以及miRNA-144表达水平>35是T2DM患者发生DFU的独立危险因素,以上因素构建列线图预测模型后总分315分,对应DFU发生发展概率为72.56%。 结论:DFU患者外周血中miRNA-144表达水平与病程发生发展有显著相关性,且糖尿病病程以及HbA 1c、TcPO 2、CRP、Cor水平变化均为DFU发生发展的独立危险因素,临床应重点关注。
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编辑人员丨5天前
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miR-92a-3p靶向调控PTEN对神经母细胞瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响
编辑人员丨5天前
目的:探讨微小RNA-92a-3p (micro RNA-92a-3p, miR-92a-3p)靶向调控PTEN对神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:采用miR-92a-3p mimics及其抑制基因(inhibitor)分别转染至SH-SY5Y细胞,根据实验需要分为miR-92a-3p过表达组、NC过表达组、miR-92a-3p抑制组、NC抑制组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测转染后细胞内miR-92a-3p的表达水平;采用CCK-8检测实验、细胞克隆形成实验、细胞划痕实验、细胞侵袭实验检测miR-92a-3p对细胞增殖、侵袭和迁移能力的变化;采用基因软件预测miR-92a-3p的靶基因并用双荧光素酶报告体系进行验证;最后采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测过表达miR-92a-3p和抑制miR-92a-3p后对PTEN/PI3K/AKT信号通路相关分子的表达情况。结果:qRT-PCR结果显示miR-92a-3p过表达组的表达含量(65.73±20.07)比miR-92a-3p抑制组的表达含量(0.33±0.02)显著增高,且差异有统计学意义( t=5.64, P=0.005)。CCK-8检测实验显示,miR-92a-3p过表达组能促进SH-SY5Y细胞的增殖活性( P均<0.001 ),miR- 92a-3p抑制组则能有效抑制SH-SY5Y细胞的增殖活性( P=0.031, P=0.012, P<0.001, P<0.001)。细胞克隆形成实验结果显示,miR-92a-3p过表达组的细胞克隆数为(210±19)个,高于NC过表达组的细胞克隆数(144±5)个,组间比较差异有统计学意义( P=0.005);miR-92a-3p抑制组的细胞克隆数为(83±6)个,低于NC抑制组的细胞克隆数(137±13)个,组间比较差异有统计学意义( P=0.003)。细胞划痕实验及细胞侵袭实验结果显示,miR-92a-3p过表达组细胞迁移愈合率为(90.37±0.67)%,高于miR-92a-3p抑制组(41.03±0.56)%,组间比较差异有统计学意义( P<0.001);miR-92a-3p过表达组细胞穿膜数量为(106.80±9.28)个,高于miR-92a-3p抑制组(33.40±7.56)个,组间比较差异有统计学意义( P<0.001)。qRT-PCR和蛋白质印迹法结果显示,与NC过表达组相比,miR-92a-3p过表达组PTEN的mRNA表达量(0.43±0.02)和蛋白水平明显降低,而PI3K mRNA表达量(2.00±0.10)、AKT mRNA表达量(1.41±0.19)和各自蛋白水平明显升高,且差异均有统计学意义( P<0.001、 P< 0.001和 P=0.028);miRNA-92a-3p抑制组可逆转上述作用,且差异均有统计学意义( P=0.043、 P= 0.046和 P<0.001)。 结论:PTEN基因是miR-92a-3p的靶基因,miR-92a-3p可能通过促进NB细胞增殖、促进NB细胞侵袭、促进NB细胞迁移和抑制PTEN mRNA表达引发PTEN蛋白水平的降低。
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编辑人员丨5天前
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血清microRNA-144水平与结核病关系的meta分析
编辑人员丨5天前
目的:探讨血清微小RNA-144(miRNA-144)在结核病(TB)中的临床意义。方法:通过计算机检索中国知网、PubMed、维普、万方、Web of science等数据库,查找建库至今国内外关于TB患者血清miRNA-144水平的病例对照研究文献。由2名作者独立检索并根据纳入及排除标准仔细阅读全文后进行选取剔除、提取数据,采用软件Stata 12.0和RevMan5.3进行统计分析。结果:本研究共纳入9篇文献,包括TB患者431例(病例组),健康者354例(健康组)。荟萃分析结果显示总体人群中病例组血清miRNA-144水平较健康组升高(SMD=3.08,95% CI:1.26~4.90, P<0.05)。根据TB的不同类型进行亚组分析显示,病例组血清miRNA-144水平较健康组升高(SMD=2.26,95% CI:0.62~3.90, P<0.05)。根据人种差异进行分析,黄种人病例组血清miRNA-144水平较健康组升高(SMD=3.46,95% CI:1.34~5.58, P<0.05)。根据不同年龄进行亚组分析,以12岁为分界,≥12岁病例组血清miRNA-144水平较健康组升高(SMD=2.78,95% CI:0.88~4.68, P<0.05)。 结论:血清miRNA-144水平可能与TB具有一定相关性,尤其在黄种人TB中水平较高。但由于纳入研究中样本量较少,需更多标准化、样本量大、同质性好的研究进一步验证。
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编辑人员丨5天前
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miRNA-144-3p靶向调控PAX8基因对甲状腺癌细胞耐药敏感性的影响
编辑人员丨5天前
目的:研究微小RNA-144-3p(miRNA-144-3p)靶向调控配对盒基因8(PAX8)对甲状腺癌细胞顺铂耐药性的影响。方法:体外培养人甲状腺癌细胞株FTC-133,并构建对顺铂耐药的人甲状腺癌细胞株FTC-133,采用反转录PCR(RT-PCR)检测FTC-133细胞和顺铂耐药FTC-133细胞中miRNA-144-3p相对表达量。将顺铂耐药FTC-133细胞分为A组、B组、C组,A组不作任何处理,B组转染空质粒,C组转染pCDNA3. 1+miRNA-144-3p质粒,采用RT-PCR检测各组miRNA-144-3p、PAX8相对表达量,采用MTT法检测各组顺铂耐药细胞的半数抑制浓度(IC 50)值;采用CCK-8法检测各组增殖率,采用流式细胞术检测各组凋亡率。 结果:顺铂耐药FTC-133细胞中miRNA-144-3p相对表达量显著高于FTC-133细胞[(0.93±0.24) vs (0.26±0.04), P<0.05];B组顺铂耐药FTC-133细胞IC 50值、增殖率、凋亡率及miRNA-144-3p、PAX8相对表达量与A组比较差异无统计学意义( P>0.05);C组顺铂耐药FTC-133细胞IC 50值、增殖率及miRNA-144-3p相对表达量显著高于B组( P<0.05),细胞凋亡率、PAX8相对表达量显著低于B组( P<0.05)。 结论:miRNA-144-3p过表达可能通过下调PAX8基因表达而增加甲状腺癌细胞的顺铂耐药性,促进甲状腺癌细胞增殖并抑制其凋亡。
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编辑人员丨5天前
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补肾宁心汤通过microRNA144/AKT/mTOR轴抑制过度自噬改善早发性卵巢功能不全大鼠卵巢功能的研究
编辑人员丨2周前
目的 观察补肾宁心汤对早发性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)大鼠的疗效,并探讨作用机制.方法 21日龄大鼠随机分为对照组,模型组,补肾宁心汤低、中、高剂量组.对照组给予腹腔注射芝麻油,其余各组给予腹腔注射VCD溶液造模,造模同时,中药组分别给予低、中、高剂量的中药,对照组及模型组给予等体积的0.9%氯化钠溶液,持续45 d后,大鼠处死取材,测定相应指标.采用高通量测序结合公共数据库挖掘POI中miRNA和mRNA表达谱的变化,并预测microRNA-144的靶基因和潜在功能.结果 随时间延长,模型组大鼠动情周期逐渐紊乱,表现为动情期缩短,动情间期延长,中药治疗后有改善.卵巢HE染色发现,模型组大鼠卵泡及黄体数均明显减少,中药干预后,卵泡和黄体数增加,中剂量组和高剂量组较为明显.子宫HE染色发现,模型组子宫内膜变薄,管壁子宫腺体数量明显减少,中药治疗后,内膜增厚,腺体数量明显增加.数据库分析提示microRNA144在POI中显著下调,与该实验结果一致.同时测序发现Beclin-1、LC3 Ⅰ、ULK1在POI大鼠中显著上调.靶基因预测和功能富集分析显示:microRNA144与Beclin-1、LC3 Ⅰ、ULK1存在相互作用且其靶基因显著富集在自噬、AKT/mTOR通路中.PCR测定大鼠卵巢中microR-NA-144表达,发现模型组中该表达显著下降,中药治疗后显著升高.WB测定AKT/mTOR、自噬相关蛋白,结果发现以上指标在模型组中的表达分别受到抑制和促进作用,中药治疗后,均有改善.结论 补肾宁心汤对POI大鼠的卵巢功能有保护作用,可改善大鼠内分泌和减缓卵泡闭锁,起效的机制可能与上调microRNA144/AKT/mTOR通路抑制过度自噬有关.
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编辑人员丨2周前
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基于外泌体miRNA探讨针刺"内迎香"穴治疗变应性鼻炎的作用机制
编辑人员丨2024/6/1
目的:筛选针刺内迎香穴治疗变应性鼻炎(AR)大鼠血浆外泌体中差异表达的miRNA,并对其进行生物信息学分析,探讨针刺内迎香穴治疗AR的可能作用机制.方法:将30只SPF级SD大鼠随机分为空白组(Ko组)、模型组(Mu组)和针刺组(Zh组),每组各10只.模型组和针刺组采用卵清蛋白腹腔注射及鼻黏膜刺激法建立变应性鼻炎大鼠模型,造模后对针刺组大鼠予针刺内迎香穴进行干预,每周2次,连续3周.HE染色观察鼻黏膜病理形态改变;超速离心法提取大鼠血浆外泌体,透射电镜(TEM)和粒径分析(NTA)检测外泌体形态和粒径浓度;高通量测序以P<0.05的标准筛选大鼠血浆外泌体中显著差异表达的miRNA;利用miRanda和Targetscan得出差异表达miRNA靶基因,进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析.结果:针刺作用关键miRNA共有10个,其中5个上调,5个下调,共得出7 408个靶基因,涉及1 130个生物过程、158个细胞组分、166个分子功能,KEGG信号通路有31条(P<0.05).结论:针刺内迎香穴可明显改善AR大鼠鼻黏膜组织炎性细胞浸润情况,其机制可能与通过调节 rno-miR-92a-3p、rno-let-7d-3p、rno-miR-328a-3p、rno-miR-223-3p、rno-miR-23a-3p、rno-miR-451-5p、novel_314、rno-miR-144-5p、rno-miR-23b-3p及rno-miR-144-3p的表达,进而调控MAPK信号通路有关.
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编辑人员丨2024/6/1
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环状RNA circ_0120051通过miR-144-3p/IDH2轴抑制心肌成纤维细胞的纤维化表型研究
编辑人员丨2024/5/11
[目的]研究环形 RNA circ_0120051对心肌成纤维细胞的纤维化表型的调控作用和机制.[方法]通过实时萤光定量PCR(RT-qPCR)检测健康器官捐献者(n=24)与心力衰竭(HF)病人(n=21)心肌标本中 circ_0120051及其宿主基因溶质载体家族8成员A1(SLC8A1)的表达水平.核糖核酸外切酶(RNase R)消化实验鉴定circ_0120051的RNA稳定性.RT-qPCR检测circ_0120051在人心肌细胞AC16中的核质分布情况.利用腺病毒在C57BL/6乳小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)中过表达circ_0120051,通过RT-qPCR和Western blot检测过表达circ_0120051对mCFs中纤维化相关基因表达的影响,利用细胞划痕实验检测对mCFs迁移能力的影响.通过RNA免疫共沉淀技术(RIP)验证circ_0120051与miR-144-3p间的结合作用,利用双萤光素酶报告基因实验鉴定miR-144-3p与靶基因异柠檬酸脱氢酶2(Idh2)3'-UTR的结合位点.[结果]Circ_0120051在心衰病人心肌中表达显著增加,而其宿主基因SLC8A1表达无显著差异.Circ_0120051主要定位于人心肌细胞的胞质中.RNase R消化实验证实circ_0120051相对于线性SLC8A1 mRNA具有典型的环状RNA稳定性.过表达circ_0120051可抑制mCFs中纤维化相关基因表达和mCFs的迁移能力.RIP实验证实circ_0120051与miR-144-3p之间具有明显结合作用.在mCFs中转染miR-144-3p可促进纤维化相关基因的表达,并有效逆转circ_0120051对mCFs纤维化表型的抑制作用.双萤光素酶报告基因实验证实miR-144-3p与Idh2的3'-UTR存在结合作用.miR-144-3p可在转录水平抑制mCFs中Idh2表达,而过表达circ_0120051可增加mCFs中IDH2表达.在mCFs中转染miR-144-3p和Idh2的小干扰RNA(siRNA),可一致性地逆转circ_0120051对纤维化相关基因表达和mCFs迁移的抑制作用.[结论]Circ_0120051通过特异结合miR-144-3p并增加其靶基因IDH2表达来发挥抑制mCFs纤维化表型的作用.
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编辑人员丨2024/5/11
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温阳复元方通过调控miRNA-137/线粒体铁死亡通路保护大鼠脑缺血再灌注损伤机制研究
编辑人员丨2024/3/23
目的 探讨温阳复元方对miRNA-137/线粒体铁死亡通路的调控作用,阐明该方对脑缺血再灌注损伤(CIRI)的神经保护作用机制.方法 线栓法制备大鼠CIRI模型,将144只SD大鼠随机分为假手术(SO)组、模型(I/R)组、补阳还五汤对照(BYHW)组、温阳复元方(WYFY)组、温阳复元方+miRNA-137模拟物(WYFY+mimic)组、温阳复元方+miRNA-137抑制物(WYFY+Inhibitor)组,每组按再灌注时间点分为3个亚组.采用Zea-Longa评分法进行神经功能缺损评分(NFS);TTC染色测量脑梗死体积;qRT-PCR和Western blot法观察miRNA-137、膜铁转运蛋白(FPN)和二价金属离子转运体1(DMT1)的mRNA及其蛋白表达水平.结果 ①NFS结果:I/R组NFS较SO组显著增加(P<0.01),与I/R组相比,BYHW组NFS仅在12 h时评分降低(P<0.05),而WYFY组在24 h和3 d的 NFS 明 显降低(P<0.05或P<0.01),WYFY+mimic组NFS显著下降(P<0.01),WYFY+Inhibitor组在3 d时NFS降低(P<0.05);与WYFY组相比,WYFY+mimic组NFS仅在12 h时明显降低(P<0.05).②TTC染色结果:I/R组梗死体积较SO组显著增大(P<0.01),BYHW组和WYFY组较I/R组明显减小(P<0.05或P<0.01),WYFY组梗死体积较BYHW组进一步减小(P<0.01);相较于WYFY组,WYFY+mimic组能进一步减小其梗死体积(P<0.05),而 WYFY+Inhibitor组梗死灶明显增大(P<0.05).③miRNA-137 mRNA表达水平:I/R组miRNA-137 mRNA的表达较SO组显著下降(P<0.01),WYFY治疗后其表达量显著增加(P<0.01),且WYFY组其表达水平较BYHW组进一步增高(P<0.01);与WYFY组同期比较,WYFY+mimic组miRNA-137 mRNA表达量均进一步升高(P<0.01),WYFY+Inhibitor组抑制该表达(P<0.01).④FPN mRNA及蛋白表达水平:I/R组FPN mRNA和蛋白表达水平较SO组均降低(P<0.01),WYFY组能显著增加其表达(P<0.01),该组在12 h和3 d时的表达量较BYHW组进一步增加(P<0.05或P<0.01);与WYFY组同期对比,WYFY+mimic组其表达水平在24 h及3 d时增加(P<0.01),而WYFY+Inhibitor组其表达水平均降低(P<0.01).⑤DMT1 mRNA及蛋白表达水平:I/R组DMT1 mRNA和蛋白表达量较SO组均显著增加(P<0.01);与I/R组比较,WYFY能降低其表达水平(P<0.01),且WYFY组在3 d时其表达量较BYHW组进一步降低(P<0.05);与WYFY组同期相比,WYFY+mimic组其表达水平在24 h和3d时均降低(P<0.01),而WYFY+Inhibitor组其表达水平均显著增加(P<0.01).结论 温阳复元方可能通过上调miRNA-137的表达,进而上调铁转运蛋白FPN的表达,下调DMT1的表达,调节铁代谢,最终抑制线粒体铁死亡,发挥其神经保护作用,其疗效优于补阳还五汤.
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编辑人员丨2024/3/23
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五虎汤抑制miRNA以改善病毒诱发的哮喘气道炎症
编辑人员丨2024/3/16
目的 探讨微小核糖核酸-144(microRNA-144,miRNA-144)对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)引起哮喘的模型小鼠出现气道炎症反应过程中的免疫调节和五虎汤的治疗干预作用.方法 将 40 只SPF级雄性C57 小鼠随机分为空白组、模型组、五虎汤组、西药组,每组 10 只,除空白组外,其余各组小鼠用RSV鼻腔滴入,复合鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)腹腔注射诱发哮喘小鼠模型;五虎汤组灌胃五虎汤,西药组灌胃利巴韦林+生理盐水,模型组灌胃等容积生理盐水,空白组灌胃等容积生理盐水,每天1次,连续1周.实验结束后,比较各组小鼠一般情况;使用DSI Buxco PFT肺功能检测系统检测小鼠肺功能残气量与肺总量比(RV/TLC)以检测小鼠气流受限的程度;分别用HE、Masson、PAS染色方法染色观察各组肺组织病理学改变;ELISA法检测肺泡灌洗液(BALF)中白介素(IL)-10、IL-17、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和TGF-β的含量;qPCR 法检测miRNA-144 表达.结果 与空白组比较,模型组小鼠呼吸道症状明显,肺功能RV/TLC升高,提示气流受限,肺组织炎症损伤加重,BALF中炎症因子IL-10、IL-17、TNF-α和TGF-β改变,miRNA-144 表达上调(P<0.05);与模型组比较,五虎汤组、西药组均可缓解哮喘小鼠呼吸道症状、肺功能通气受限及肺组织炎症浸润等,同时miRNA-144下降,BALF中IL-10、IL-17、TNF-α和TGF-β的含量改变(P<0.05).结论 五虎汤可能通过降低miRNA-144 的表达,调节Th1/Th2 介导的炎症反应,达到改善RSV诱发哮喘模型小鼠的气道炎症的效果.
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编辑人员丨2024/3/16
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DNA损伤激活的长链非编码RNA促进多发性骨髓瘤细胞增殖及耐药研究
编辑人员丨2024/2/3
目的:探讨DNA损伤激活的长链非编码RNA(NORAD)对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖及对硼替佐米(BTZ)化疗耐药性的影响.方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测健康人和骨髓瘤患者、不同MM细胞系中NORAD表达差异,并分析其与MM患者生存率关系;运用慢病毒转染技术,干扰细胞系中NORAD的表达,检测其表达差异;定量PCR(qPCR)检测骨髓瘤细胞系中人类非编码RNA-144a-3p(hsa-miR-144a-3p)的表达;采用双荧光酶素报告验证NORAD和hsa-miR-144a-3p的结合;通过RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验进一步验证LncRNA和miRNA的结合;细胞计数试剂8(CCK8)法检测各细胞处理后细胞活性.细胞克隆试验检测细胞增殖能力.结果:MM患者细胞系中NORAD常高表达,提示预后差,生存期短;敲除NORAD基因后,MM耐药细胞系对BTZ药物敏感性增加.MM患者hsa-miR-144a-3p高表达,在骨髓瘤细胞系中加用miR-144a-3p类似物时细胞增殖能力下降;NORAD低表达可显著抑制细胞增殖,细胞对药物敏感性增强.细胞克隆形成实验也证实NORAD低表达可抑制癌细胞增殖.结论:NORAD高表达可增强MM对BTZ化疗耐药性,NORAD可直接与hsa-miR-144a-3p结合,上调其在MM细胞中的表达,进一步调控癌细胞增殖,同时调控患者对BTZ药物敏感性.
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编辑人员丨2024/2/3
